INSTITUTO POLITECNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIA BIOLOGICAS

DEPARTAMENTO DE BIOQUÍMICA
DETERMINACIÓN DEL GRUPO AMINO TERMINAL DE LA HEMOGLOBINA.
Dorantes Molina Alba Paloma.
Bartolo García Paulina. 3IM2 Sección 3 (29/Sep/2015)
Muñoz Hernández Perla Alejandra.
INTRODUCCIÓN.
La hemoglobina es uno de los derivados la mancha 3 presenta un valor aproximado con el
nitrogenados de la ferroprotoporfirina; es una Rf obtenido de la Valina. Pero la muestra problema
proteína conjugada, que contiene las proteínas presento 3 manchas, la 2𝑎 mancha tiene un Rf
básicas incoloras, las globinas y las aproximado al obtenido en el DNFB,
ferroprotoporfirina o hem (el cual consta de una correspondiendo así a la presencia de DNFB en la
parte orgánica y un átomo de hierro). Esta proteína muestra problema. El Rf de la mancha 1 no
es la encargada de trasportar el oxígeno en la coincide con ninguno de los valores obtenidos en la
sangre. Frederick Sanger comenzó a trabajar en la cromatografía, desconocemos el dinitrofenil
secuencia de proteínas en 1943. Sanger utilizo un derivado al cual corresponde; su presencia puede
reactivo llamado 2-4 dinitrofluorobenceno, que deberse a que el frasco de hemoglobina para
forma un derivado dinitrofenilo (DNP) de preparar la solución utilizada es bastante viejo, con
coloración amarilla con los grupos amino el paso de los años y la exposición al cambio de
terminales sin cortar ningún enlace peptídico. clima, este pudo haberse hidrolizado de forma
Cuando la proteína se hidroliza empleando HCl natural y cortar así la cadena de aminoácidos que
concentrado, para cortar los enlaces peptídicos, la constituyen a la hemoglobina, y ese Rf pertenece al
unión entre el dinitrofenilo y el grupo amino grupo amino terminal donde se haya dado dicha
permanece estable, estos derivados pueden ruptura.
extraerse del hidrolizado con éter y posteriormente
CROMATOGRAMA ESC: 1:2
identificarse por medio de cromatografía en papel.
OBJETIVO.
 Identificar el aminoácido alfa-amino terminal
de las cadenas de la molécula de hemoglobina
mediante el método de Sanger.
RESULTADOS.
Muestra ds. Solvente ds. Rf
[cm] Muestra. 𝑑𝑠 𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎
[cm] [ ]
𝑑𝑠 𝑠𝑜𝑙𝑣𝑒𝑛𝑡𝑒
DNP-Phe 33.6 19.5 0.58
DNP- 33.8 21.9 0.65
Asp
DNP-Val 33.7 23.3 0.70
DNFB 33 17.1 0.52
Problema 14.7 17.8 24 33.1 0.44 0.53 0.72

DISCUSIÓN DE RESULTADOS.
La Valina es el aminoácido terminal de las 4
cadenas de aminoácidos que posee la hemoglobina,
teóricamente el aminoácido problema que debimos
observar en la cromatografía, debió de haber sido
la Valina al comparar los Rf obtenidos por las
manchas de la muestra problema observamos que
CONCLUSIÓN.
Identificamos el aminoácido alfa amino-terminal
de las cadenas de la molécula de hemoglobina,
obteniendo como resultado experimental que dicho
aminoácido era la Valina, coincidiendo con la
bibliografía consultado, puesto que el alfa amino
terminal de la hemoglobina es efectivamente la
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DETERMINACIÓN DEL GRUPO AMINO TERMINAL DE LA HEMOGLOBINA.
Dorantes Molina Alba Paloma.
Bartolo García Paulina.
Muñoz Hernández Perla Alejandra.
Valina. Siendo así el método de Sanger un método
confiable para dichas determinaciones.
CIBERGRAFÍA.
 Tiejón J.M y Armando G. Fundamentos de
Bioquímica Estructural. 2006. Madrid España.
Tebar. Segunda edición. Pp: 66-70
https://books.google.com.mx/books?id=NI2qF
wNNYX4C&printsec=frontcover&dq=%EF%
83%98%09Teij%C3%B3n+J.M+y+Armando
+G.+Fundamentos+de+Bioqu%C3%ADmica+
Estructural&hl=es-
419&sa=X&ved=0CCIQ6AEwAWoVChMIn
N3cpNCWyAIViFeSCh1buQVl#v=onepage&
q&f=false
 Coon y Stumpf. Bioquímica Fundamental.
1976. Limusa. México. Tercera edición.
pp:602-610.
https://books.google.com.mx/books?id=Br1SAAA
ACAAJ&dq=%EF%83%98%09Conn+y+Stumpf.
+Bioqu%C3%ADmica+Fundamental.+1976.+Lim
usa.&hl=es-
419&sa=X&ved=0CBoQ6AEwAGoVChMI_Mjh
v9CWyAIVw3uSCh2wUAPw
PREGUNTAS EXTRA.
1.- Investigar el amino N-terminal de
hemoblobina humana y de bovino.
La molécula de la hemoglobina humana de un
adulto normal o hemoglobina A, esta formada por
cuatro polipéptidos o cadenas polipéptidicas, dos
cadenas alfa y dos cadenas beta. Cada cadena alfa
esta constituida por 141 aminoácidos, y la valina es
el aminoácido con el grupo amínico terminal, es
decir, que posee el único grupo alfa amino libre.
3IM2 Sección 3 (29/Sep/2015)
2.- Tabla comparativa de los métodos de Edman y
Sanger
Método de Edman
Permite la secuencia de aminoácidos
adicionales desde le N-terminal hacia
adentro. Usando este método es posible
obtener la secuencia entera de péptidos.
Este método utiliza fenilisotiocianato
para reaccionar con el residuo del N-
terminal bajo condiciones alcalinas. El
aminoácido derivado feniltiocarbamil
resultante se hidroliza en acido anhidro.
La reacción de hidrólisis da lugar a un
cambio del residuo N-terminal a un
derivado feniltiohidantoina.
La secuencia entera de reacciones se
puede repetir una y otra vez para obtener
las secuencias del péptido. Este proceso
ha sido automatizado para permitir
secuenciar rápida y eficientemente hasta
cantidades extremadamente pequeñas del
péptido.
Método de Sanger
Esta técnica de secuenciamiento utiliza el
compuesto, 2,4-dinitrofluorobenzeno
(DNF) que reacciona con el residuo del
N-terminal bajo condiciones alcalinas. El
aminoácido derivado se puede hidrolizar
la y será etiquetado con un grupo
dinitrobenzeno que imparte un color
amarillo al aminoácido. La separación de
los aminoácidos modificados (DNP-
derivado) por electroforesis y la
comparación con la migración de los
estándares del DNP-derivado permite la
identificación del aminoácido N-terminal.