Bahan-bahan dan metode-metode

Bahan tanaman
rimpang temulawak caesia dibudidayakan di rumah kaca untuk memungkinkan tumbuhnya tunas
vegetatif yang berfungsi sebagai eksplan.
tunas tumbuh dari 3 - 4 cm yang dibersihkan di bawah air keran selama satu jam dan kemudian
dicuci dengan deterjen laboratorium komersial
(Decon 5%, v / v) sebelum dibilas bersih dengan air. Tunas direndam dalam 1% (v / v) larutan
fungisida selama satu jam sebelum dibilas
secara menyeluruh di bawah air keran selama 5 menit. Selanjutnya, eksplan permukaan
disterilkan dengan 10% - 20% Clorox ® dan beberapa
tetes Tween-20 dalam kondisi steril. Mereka kemudian dibilas beberapa kali dengan air suling
steril sebelum inocu- Lating ke Woody Tanaman
Medium (WPM) ditambah dengan 3% sukrosa dan 5,0 mg / L benzil aminopurine (BAP) untuk
menghasilkan planlet in vitro.
2.2. kalus Induksi
Basal bagian dari batang temulawak caesia planlet digunakan sebagai eksplan. Akar dan daun
pertama kali dijauhkan dari segmen tanaman
tersebut ( Gambar 1 (a) ). medium kultur yang digunakan adalah dipadatkan dengan 0,3%
gelrite agar dan terkandung WPM medium basal, 3%
sukrosa dan 0,5-5 mg / L 2,4-Dichlorophenoxyacetic asam (2,4-D) sendiri atau dalam kombinasi
dengan 0,5-5 mg / L BAP. Rekaman dari
induksi kalus dilakukan pada interval mingguan dan hasilnya dinyatakan sebagai persentase dari
induksi kalus setelah 4 bulan budaya. Untuk
menguji dan mengoptimalkan proliferasi kalus, kalus dari media induksi kalus terbaik adalah
sub-kultur ke media segar dengan konsentrasi
yang berbeda dari BAP dan 2,4-D. bobot segar dan kering kalus dicatat setelah 45 hari.
Morfologi kalus yang dikembangkan diamati dan
diperiksa.
2.3. tanaman Regenerasi
kalus gembur diproduksi pada medium induksi kalus yang mengandung 5 mg / L BAP dan 2 mg
/ L 2,4-D (medium menghasilkan induksi kalus
optimal) digunakan untuk membangun media yang tepat untuk pembentukan tunas. potongan-
potongan kecil kalus (sekitar 200 mg) dipindahkan
ke budaya cahaya pada kombinasi media yang berbeda con- taining BAP (0, 2 dan 5 mg / L),
2,4-D (0,2, 1 dan 2 mg / L) dan agar (3.0, 4.5, 6.0,
dan 9.0 g / L) seperti yang tercantum dalam Tabel 1 . Efisiensi dimana kalus dikembangkan
embrio somatik hijau tercatat. Embrio yang dihasilkan
kemudian sub-kultur ke media yang sama untuk pengembangan lebih lanjut. Jumlah planlet
regenerasi per cal- lus tercatat after4 minggu
budaya. tunas regenerasi kemudian dipindahkan ke WPM medium basal mengandung 5 mg / L
BAP untuk multiplikasi tunas, dan akhirnya ke MS media yang bebas dari pertumbuhan
tanaman lators Ikutan untuk pemanjangan daun dan akar induksi.
2.4. Kondisi budaya
Itu media dasar WPM dengan berbagai PGR dalam stoples budaya yang mengandung sukrosa
disesuaikan dengan pH 5,8 sebelum mereka
dipadatkan dengan gelrite agar, diautoklaf pada 121˚C dan 104 kPa selama 15 menit. Kultur
diinkubasi di ruang kultur di bawah lampu neon putih
dengan intensitas cahaya 3000 lux dan penyinaran dari 16 jam pada 25˚C ± 2 ° C. Untuk
induksi kalus, guci budaya juga disimpan di dalam terang. eksplan berakar dengan tunas
sekitar 4- 5 panjang Cmin dikeluarkan dari botol kultur dan akar dicuci di bawah air
keran untuk menghapus agar-agar. Planlet secara individual ditransplantasikan di tanah
yang terkandung dalam polybag dan disimpan di bawah con- dikendalikan kondisi di
sebuah rumah bersih dengan 75% shading. Untuk menjaga kelembaban, tanaman disiram
secara berkala dua kali sehari. Tingkat kelangsungan hidup planlet tercatat setelah 6
minggu.
2.5. Analisis statistik
Data (25 ulangan per perawatan) menjadi sasaran Analisis Varian Satu Arah (ANOVA) untuk
menilai perbedaan perlakuan dan interaksi
menggunakan SPSS versi 11.0. Signifikansi perbedaan antara sarana diuji dengan DMRT Test (p
≤ 0,05).
Hasil dan Pembahasan
kalus Induksi
Dalam rangka membangun konsentrasi yang paling cocok dari regulator pertumbuhan tanaman
untuk regenerasi plantlet melalui begitu- matic
embriogenesis, kami mencoba berbagai konsentrasi dan kombinasi dari hormon tanaman BAP
(0,5-5,0 mg / L) dan 2,4-D (0,5-5 mg / L) di bawah
sinar (1200 lux) kondisi. Meja 2 menunjukkan persentase kalus tion induc- pada permukaan
eksplan setelah 4 bulan dalam budaya. Kalus dimulai
pada medium yang mengandung 1 – 5 mg / L 2,4-D dalam kombinasi dengan 1 - 5 mg / L
BAP. media MS dengan 2 mg / L 2,4-D dikombinasikan dengan 5 mg / L BAP adalah yang
paling efektif dalam mendorong kalus (20%). Pertumbuhan kalus lambat dan seluler
tiation dedifferen- bisa mengambil lebih dari 70 hari, dengan produksi kalus maksimum
sampai dengan 95 hari.