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INFORME DE LABORATORIO 04

RECONOCIMIENTO
DE LÍPIDOS Y
PROTEÍNAS
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5/30/2013
INTRODUCCION

Las proteínas son macromoléculas constituidas por 1-alfa-aminoácidos


unidos entre sí por enlaces covalentes amino-carboxílicos parcialmente ionizados
que también se conocen como enlaces peptídicos y son particularmente adecuados
para formar a su vez enlaces por puente de Hidrógeno.

Los aminoácidos tiene tres tipos de reacciones químicas importantes: (1)


reacciones debido a la presencia del grupo carboxilo (COO- ), (2) reacciones
debidas al grupo amino (NH2), y (3) reacciones debido al grupo R. Las
reacciones debidas al grupo carboxilo y al grupo amino son generales y se dan para
todos los aminoácidos. Las reacciones del radical R son reacciones
específicas; por ejemplo, cisteína da una reacción para azufre, triptofano da
ciertas reacciones de color debido a que su molécula contiene el grupo indol,
tirosina da otras reacciones de color debido a su grupo fenólico, etc. Ya que la
mayoría de las proteínas contienen uno o más de estos aminoácidos en sus
moléculas, algunas de las reacciones de color que son específicas para
aminoácidos individuales se usan como reacciones de color generales para
proteínas. Sin embargo, también se debe tener cuidado porque pueden existir
compuesto que contengan ciertos grupos químicos y pueden dar falsos
negativos. Por ejemplo, en la prueba de Hopkins-Cole, el color es debido a la
presencia del grupo triptofano, aunque el triptofano puro no da la prueba excepto en
presencia de trazas de iones férricos o cúpricos. Los nitratos, cloratos, nitritos o el
exceso de cloruro impiden la reacción, y trazas de sulfato de cobre aumenta su
sensibilidad. La gelatina no responde a esta prueba, Otra prueba es la
reacción de Millon, la cual es debida a la presencia del grupo hidroxifenilo,( -
C6H4OH) en la molécula de proteína. Cualquier compuesto fenólico no sustituido en
posición 3,5 como la tirosina, el fenol y el timol dan la reacción. En el caso de las
sales de metales pesados, su adición a soluciones de proteínas débilmente
alcalinas, produce la precipitación de la proteína, debido a que las proteínas
en forma aniónica se neutralizan por los iones de los metales pesado y precipitan.

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Un exceso de álcali ocasiona la precipitación y un exceso de reactivo puede
solubilizar el precipitado, por lo que se debe efectuar cuidadosamente el ensayo.

Por otro lado, las proteínas se caracterizan por el hecho de que contienen
nitrógeno, además de carbono, hidrógeno y oxígeno. Una prueba negativa para
nitrógeno definitivamente elimina la posibilidad de una proteína. También se
caracterizan por la naturaleza coloidal de sus soluciones y por una serie de
reacciones de precipitación y de color. Aunque todas las proteínas están
compuestas de aminoácidos unidos entre sí por enlaces peptídicos, no todas
las proteínas contienen los mismos aminoácidos y por esta razón las
diferentes pruebas de color producen reacciones que varían en la intensidad del
color de acuerdo a la naturaleza y cantidad de los grupos contenidos en la
proteína particular.

La existencia del enlace peptídico, de aminoácidos azufrados, puede ponerse de


manifiesto en el laboratorio mediante una serie de reacciones coloreadas
específicas, que sirven para la identificación de proteínas.

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MATERIALES Y METODOS
Materiales

Material de Otros materiales Reactivos y Productos


vidrio disolventes
Tubos de Mechero Hidróxido de sodio Solución de
ensayo Gradilla Sulfato cúprico albúmina
Pipetas Acetato de plomo Bilis
Bencina Aceite
Agua destilada

Procedimiento experimental

A) Lípidos

Insolubilidad

Colocar 2ml de bilis en un tubo


de ensayo, adicionar:
o 2ml de aceite
o 5ml de H2O destilada

Solubilidad

En un tubo de ensayo agregar


2ml de NaOH, luego adicionar:
o 3ml de aceite
o 3ml de bencina

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A) Proteínas

Reacción del biuret

En un tubo de ensayo
añadir 3ml de solución de
albúmina (fuente patrón), a
ello sumarle:
o 3ml de NaOH (al 40%)
o 4 gotas de CuSO4.

Reacción de aminoácidos azufrados


En un tubo de ensayo
añadir 2ml de solución
de albúmina,
adicionar:
o 10 gotas de
acetato de
plomo
o 3ml de NaOH
(al 20%)
o Someter a calor
hasta ebullición.

Desnaturalización de la catalasa

Cortar dos trozos de manzana


y colocarlos en distintos tubos
de ensayo.

Al primer tubo:
o Adicionar Al segundo tubo:
2ml de o Adicionar
H2O 2ml de
destilada H2O
o Hervir destilada
o Agregar o Agregar
H2O2 H2O2

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RESULTADOS
B) Lípidos

Insolubilidad

o Las tres sustancias


demostraron ser
insolubles entre sí.

Solubilidad

o De las tres sustancias


aceite y bencina
solvieron, quedando el
NaOH en suspensión.

C) Proteínas

Reacción del biuret

o El resultado es la
precipitación de
proteínas, de
coloración azulina.

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Reacción de aminoácidos azufrados

o Las sustancias
resultantes toman un
color oscuro.

Desnaturalización de la catalasa

o En el primer tubo no se
observan cambios físicos en
el trozo de manzana

o En el segundo tubo, se
observan burbujas
alrededor del trozo de
manzana

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DISCUSION

 La insolubilidad de lípidos: en esta reacción el aceite (uno de los tres grupos


principales de lípidos) no puede ser disuelto por el agua (disolvente
inorgánico), debido a que en sus regiones no polares los lípidos son
hidrofóbicos, según con respecto a la bilis esta contiene un 97% de agua en
su composición y una alta densidad, por lo que, a pesar de ser un disolvente
orgánico no pudo atacar al aceite. (AUDESIRK, AUDESIRK, BAYERS.
Biología. 8va edición, pp. 44)

 Solubilidad de lípidos: El aceite de cocina es un lípido insaturado, al cual si se


le añade un hidrocarburo (ej. benceno) en relación 50%/50% se obtiene una
solución transparente, sin separación de fases a temperatura ambiente.
(Herrera V. Juan José, Dr. en Química farmacéutica)

 Reacción del biuret: el Reactivo de Biuret es aquel que detecta la presencia


de proteínas, péptidos cortos y otros compuestos con dos o más enlaces
peptídicos en sustancias de composición desconocida. La producen los
péptidos y las proteínas, pero no los aminoácidos, ya que se debe a la
presencia del enlace peptídico (- CO- NH -) que se destruye al liberarse los
aminoácidos. Debido a dicha reacción fue que observamos que al agregar el
reactivo de sulfato de cobre mas solución de proteína precipito una coloración
violeta. Quedando en el fondo del tubo una tonalidad azul cielo reacción
positiva. (Apuntes de cátedra, Universidad Nacional de la Plata)

 Reacción de aminoácidos azufrados: se forma un precipitado de color


negruzco lo que nos indica que se ha formado sulfuro de plomo,
utilizándose el azufre de los aminoácidos, lo que nos sirve para
identificar proteínas que tienen en su composición aminoácidos con
azufre. (AGUIRRE OBANDO Oscar Alexander, MORALES ÁLVAREZ Edwin
David. WebQuest de la Universidad del Quindio)

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 Desnaturalización de la catalasa: los peroxisomas son un tipo de vesícula
relativamente grande presente en la mayoría de las células eucarióticas;
contienen enzimas oxidativas que remueven el hidrógeno de pequeñas
moléculas orgánicas y lo unen a átomos de oxígeno formando peróxido de
hidrógeno (H2O2), un compuesto que es extremadamente tóxico para las
células vivas. Otra de las enzimas, la catalasa, escinde inmediatamente el
peróxido de hidrógeno en agua e hidrógeno, evitando cualquier daño a las
células. (CURTIS, BARNIS, SCHNEK, MASSARINI. Biología. 7ma edición pp.
100) La catalasa se encuentra en las células de los tejidos animales y
vegetales. Ya que la catalasa químicamente es una proteína, podemos
desnaturalizarla al someterla cambios de pH o a altas temperaturas. Al perder
la estructura terciaria, perderá también la función y como consecuencia su
función catalítica, por lo que no podrá descomponer el agua oxigenada y no
se observará ningún tipo de reacción en tejidos hervidos. (Blog informático:
jose-canel.blogspot.com)

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CONCLUSIONES

 Se puso en manifiesto la insolubilidad de los lípidos en disolventes


inorgánicos, y la solubilidad de éstos en disolventes orgánicos.

 Dada la coloración en la prueba de biuret se determinó la presencia de


enlaces peptídicos en la albúmina.

 Logramos identificar la presencia de proteínas como la cisteína en la reacción


de los aminoácidos azufrados.

 Logramos comprobar la función de la enzima catalasa sobre el peróxido de


hidrógeno.

BIBLIOGRAFIA

AUDESIRK, AUDESIRK, BAYERS. Biología. 8va edición, pp. 44


CURTIS, BARNIS, SCHNEK, MASSARINI. Biología. 7ma edición pp. 100
http://www.catedras.quimica.unlp.edu.ar/qo3/Apuntes/Biuret.pdf
http://www.uniquindio.edu.co/uniquindio/ntic/trabajos/10/davidyoscar/paginas/
recprot.htm
http://jose-canel.blogspot.com/p/presencia-y-desnaturalizacion-de-la.html
http://espanol.answers.yahoo.com/question/index?qid=20070118174538AA0z
xsg