1. INTRODUCCION
2. ASPECTOS TEORICOS
3. CONTENIDO
3.5. AGAR SS
4. CONCLUSION
5. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
6. ANEXOS
INTRODUCCION
Los medios de cultivo son una parte muy importante en el estudio de microorganismos ya que nos
permiten sembrarlos y aislarlos, otorgándoles un medio apto para tu desarrollo y nutrición. Con los
cultivos obtenidos se puede inferir de que microorganismo se trata por el olor, color y morfología de la
colonia y con esto incluso si es patógeno o micro biota normal.
El medio solido es el principal utilizado, el cual está compuesto por agar-agar, extractos de carne, y
demás sustancias que asemejan a las presentes en el cuerpo humano. Al momento de hacer un cultivo
elegir el tipo de agar en el que vas a sembrar es un paso importante ya que todos son diferentes en su
contenido (nutrientes, colorantes, inhibidores, etc.) y el de tu elección debe ser apto para el
microorganismo que vas a sembrar o que estás buscando identificar, ya que este puede quedar inhibido
si el tipo de agar que elegiste no es el correcto.
Por estas razones poseer información relevante respecto a los diferentes tipos de agares utilizados con
frecuencia en el área de microbiología, nos ayuda al momento de elegir el tipo adecuado de agar en el
cual sembrar nuestra muestra.
Esta información engloba: los componentes que contiene el agar (ver si estos favorecen o inhiben al MO
que buscamos cultivar), las condiciones de uso (su temperatura, presión y tiempo de incubación
adecuados, es primordial usarlo como se debe ya que una alteración en sus condiciones o preparación
nos puede llevar a resultados incorrectos), y los tipos de microorganismos a los que va dirigido, ya sea
por su género, o en el caso de bacterias si va dirigido a gram negativas o positivas (esto nos permite
identificar el microorganismo que crece en el cultivo).
Así como identificar las características de los agares a investigar, se podrá descubrir cuales son
selectivos (inhiben el crecimiento de unos y no de otras), no selectivos (se puede cultivar una amplia
variedad de Mo’s) y especializados (para grupos específicos).
ASPECTOS TEORICOS
El material alimenticio en el que crecen los microorganismos es el Medio de Cultivo y el crecimiento de
los microorganismos es el Cultivo. Este es uno de los sistemas más importantes para la identificación de
microorganismos es observar su crecimiento.
Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe reunir una serie de
condiciones como son: temperatura, grado de humedad y presión de oxígeno adecuado, así como un pH
específico. Un medio de cultivo debe contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y estar
exento de todo microorganismo contaminante.
La base de muchos medios de cultivo es una infusión de extractos de carne y Peptona a la que se
añadirán otros ingredientes ya que mayoría de las bacterias patógenas requieren nutrientes complejos
similares a líquidos del cuerpo humano.
El agar es un elemento solidificante muy empleado para la preparación de medios de cultivo. Con
mínimas excepciones no tiene efecto sobre el crecimiento de las bacterias y no es atacado por aquellas
que crecen en él. En los diferentes medios de cultivo se encuentran numerosos materiales de
enriquecimiento como hidratos de carbono, suero, sangre completa, bilis, etc.
Los carbohidratos se adicionan para incrementar el valor nutritivo del medio y para detectar reacciones de
fermentación. El suero y la sangre completa se añaden para promover el crecimiento de los
microorganismos menos resistentes. También se añaden colorantes que actúan como indicadores para
detectar, por ejemplo, la formación de ácido o como inhibidores del crecimiento de unas bacterias y no de
otras.
CONTENIDO
1. AGAR NUTRITIVO
1.1 COMPOSICION DEL AGAR
Pluripetona 5.0
Extracto de carne 3.0
Cloruro de sodio 8.0
Agar 15.0
El Agar nutritivo es un medio de cultivo usado normalmente como rutina para todo tipo de bacteria. Es
muy útil porque permanece sólido incluso a relativas altas temperaturas. Además, el crecimiento
bacteriano en este agar lo hace en la superficie, por lo que se distinguen mejor las colonias pequeñas. No
selectiva. Crecimiento entre moderado y denso, pigmentación de color verde. (gram negativo, aerobio
estricto). (Fig. 1).
Bacterias exigentes en sus requerimientos nutricionales: en atmósfera con 5-10 % de C02 a 35-37 ºC
durante 24-48 horas.
Escherichia coli: Colonias grandes, crema, brillante y lisas (gram negativo, anaerobio facultativo) (fig.
2).
Staphylococcus aureus: Colonias grandes ligeramente amarillas/ doradas, brillantes y lisas. (Gram
positiva, anaerobio facultativo, coagulasa positiva)
Enterococcus faecalis: Colonias pequeñas, crema, opacas y lisas. (Gram positivas, anaerobios
facultativos)
Shigella flexneri: crecimiento moderado a denso. (Gram negativa, aerobio).
Pseudomona aeruginosa: Crecimiento entre moderado y denso, pigmentación de color verde. (gram
negativo, aerobio estricto)
2. AGAR SANGRE
Los organismos que fermentan lactosa producen ácido que, en presencia del indicador rojo neutro,
propicia la formación de colonias de color rojo. Los organismos no fermentadores de lactosa forman
colonias incoloras. El tiosulfato sódico y el citrato férrico permiten la detección de producción de ácido
sulfhídrico, como lo demuestran las colonias con centros de color negro.
Incubación: protegidas de la luz, condiciones aerobias a una temperatura entre 35 y 37 °C, por un
período de 18 a 24 horas.
Tipos de muestras: muestras fecales o torundas rectales de pacientes en los que hay sospecha de una
infección entérica bacteriana
6. AGAR MUELLER-HINTON
6.1 COMPOSICION DEL AGAR
Ha sido uno de los primeros medios utilizados en microbiología, tiene utilidad en el mantenimiento y
transporte de cultivos puros. Es el medio recomendado para la realización de pruebas de sensibilidad a
antibióticos. Es un medio estándar utilizado para la prueba de sensibilidad de bacterias aerobias de
rápido crecimiento o anaerobias facultativas, como estafilococos, enterococos, miembros de la especie
Enterobacteriaceae y bacilos gram negativos aerobios.
Utilizado en forma rutinaria en la realización del antibiograma (fig. 8) (cálculo de la Concentración Mínima
Inhibitoria de antibióticos para la cepa problema) la mayoría de los patógenos microbianos crece
satisfactoriamente. Cuando se suplementa con sangre de carnero al 5%, permite realizar las pruebas de
sensibilidad a los antimicrobianos en especies de estreptococos. También, con el agregado de
sangre puede utilizarse para el cultivo y aislamiento de microorganismos nutricionalmente exigentes.
6.3 CONDICIONES PARA SU USO
La reducción excesiva de este medio debido a la deshidratación puede causar resultados de sensibilidad
falsos.
Tipos de muestras: análisis de sensibilidad de cultivos puros que se han aislado a partir de muestras
clínicas.
La fórmula de Mueller Hinton fue desarrollada originalmente como un medio de agar sencillo y
transparente para el cultivo de la Neisseria patógena.
Escherichia coli
Enterococcus faecalis
Staphylococcus aureus
Pseudomonas aeruginosa
Se han desarrollado diferentes procedimientos y otros medios y condiciones para analizar las especies
exigentes: Haemophilus spp., Neisseria spp. y Streptococcus pneumoniae, y estreptococos.
7. AGAR LOWENSTEIN-JENSEN
7.1 COMPOSICION DEL AGAR
Los nutrientes de este medio de cultivo constituyen un rico soporte para el crecimiento de una gran
variedad de micobacterias excepto Mycobacterium leprae. El verde de malaquita inhibe el desarrollo de la
flora acompañante Gram positiva y de algunas bacterias Gram negativas. La glicerina estimula el
crecimiento de Mycobacterium tuberculosis, aunque gran parte de Mycobacterium bovis es inhibido.
La mezcla de glicerol y huevo proporcionan los ácidos grasos y proteína necesarios para el metabolismo
de las micobacterias. La coagulación de la albumina de huevo durante la tindalización proporciona un
medio sólido para la inoculación. Se añade asparragina para favorecer el inicio del crecimiento y el
aumento de la velocidad del mismo. La inhibición del resto de bacterias se logra mediante la presencia
del colorante Verde Malaquita.
Incubación: En aerobiosis, a 35-37°C , No exponer a la luz directa (artificial o natural). Observar los
cultivos dos veces por semana. Si no se observa desarrollo, incubar hasta 8 semanas. Importante:
incubar los tubos con las tapas flojas, inclinados 5º aproximadamente. Esta posición evita que el inóculo
contacte con la parte superior del tubo.
8. CHROMAGAR CANDIDA
8.1 COMPOSICION DEL AGAR
Cromopeptona 10,0 g
Glucosa 20,0
Mezcla cromógena 2,0
Cloranfenicol 0,5
Agar 15,0
La mezcla cromógena patentada está formada por sustratos artificiales, que liberan compuestos de
colores diferentes al ser degradados por enzimas específicas. De esta manera es posible diferenciar
determinadas especies o detectar ciertos grupos de organismos con sólo un mínimo de pruebas de
confirmación. El cloranfenicol inhibe la mayoría de los contaminantes bacterianos.
Incubar las placas en atmósfera aerobia durante 20 – 48 h a 35 ± 2 °C. Tener en cuenta que se requiere
una incubación de 42 h para que las colonias desarrollen por completo el color. Evitar exposición a luz.
Tipo de muestra: Piel, esputo, orina, muestras vaginales
Se investigó sobre los diferentes tipos de agares que se utilizan como medio de cultivo de
microorganismos se abarcaron los puntos de composición de estos, características, condiciones para su
uso y los microorganismos a los que va dirigido dicha preparación de agar.
Gracias a esta información ahora puedo identificar para que sirven específicamente algunos tipos de agar
así como que tipo de microorganismos crecen en él, dicho conocimiento me puede ser de utilidad en
futuras prácticas de laboratorio en esta materia o en otras.
Un ejemplo de donde poder hacer uso de esta información es en una situación en la que tengo que
sembrar una microorganismo desconocido, como no sé cuál es, no puedo saber cuáles son los nutrientes
que necesita o en que medio se desarrolló e identifica fácilmente, por lo cual ahora sé que el medio que
puedo utilizar es el agar nutritivo ya que este no es selectivo y puede albergar diferentes mo’s.
Un segundo caso es en el que tengo una sospecha o sé a qué género pertenece el mo’s, entonces lo
sembraría en un medio especifico o selectivo (como agar ss, lowenstein Jensen,chromagar candida) en
donde pueda crecer solo el mo’s que estoy buscando.
REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
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https://www.seimc.org/contenidos/documentoscientificos/procedimientosmicrobiologia/seimc-
procedimientomicrobiologia9a.pdf
Sin embargo este sistema no era adecuado para las bacterias y no fue hasta el año 1878 cuando Lister
popularizó un método enfocado al cultivo puro basado en diluciones seriadas en un medio líquido.
Koch realizó sus investigaciones utilizando en un primer momento rodajas de patata como soporte
nutritivo sólido, pero no tardó en recurrir al caldo de carne líquido, diseñado por Loeffler, al que, en 1881,
añadió gelatina, logrando un medio sólido transparente ideal para la observación de la morfología
macroscópica de las colonias microbianas.
En el año 1882 tiene lugar uno de los grandes avances de la microbiología en relación con los medios de
cultivo: el médico alemán Walter Hesse introduce el agar-agar (polisacárido extraído de algas rojas) como
solidificante.
En 1887 un ayudante de Koch llamado Petri, comienza a utilizar placas de cristal planas, que se llaman
desde entonces placas de Petri, para sustituir a las clásicas bandejas de vidrio cubiertas con campanas
que se usaban hasta entonces.
Beijerinck y Winogradsky, que desde de 1888 realizaron sus investigaciones sobre las bacterias
quimioautótrofas (utilización de nitrógeno y azufre sobre todo) tuvieron gran importancia en el desarrollo
de los medios selectivos y de enriquecimiento. Diseñaron este tipo de medios de tal forma que su
especial composición química favorecía el crecimiento de ciertos tipos de microorganismos que, en
función de sus procesos metabólicos, eran los únicos capaces de utilizar para su desarrollo ciertos
nutrientes del medio.
Agar sangre: Suspender 40 g del polvo en 1 litro de agua purificada. Dejar reposar 5 minutos y mezclar
perfectamente hasta obtener una suspensión homogénea. Calentar con agitación frecuente y hervir 1
minuto para disolución total. Esterilizar a 121 ºC durante 20 minutos. Preparación de Agar Sangre:
Agregar 5-10 % de sangre ovina desfibrinada estéril al medio esterilizado, fundido y enfriado a 45-50 ºC.
Homogeneizar y distribuir en placas de Petri estériles.
Agar macConkey: Suspender 50 g del polvo en 1 litro de agua purificada. Reposar 5 minutos. Calentar
con agitación frecuente y llevar a ebullición 1 a 2 minutos hasta disolver completamente. Distribuir en
recipientes apropiados y esterilizar en autoclave a 121°C durante 15 minutos.
Agar Mueller Hinton: Suspender 37 g del polvo en 1 litro de agua purificada. Dejar embeber de 10 a 15
minutos. Calentar con agitación frecuente y hervir durante 1 minuto para disolución total. Esterilizar a
121°C durante 15 minutos. Enfriar a 45°-50°C y distribuir en placas de Petri estériles, en volumen
apropiado para que el espesor sea de 4 mm sobre una superficie horizontal (25-30 ml en placas de 9 cm
de diámetro).