REVIEW JURNAL RADIOLABELED

99m
Judul Tc-radiolabeled GE11-modified Peptide for
Ovarian Tumor Targeting
Nama jurnal Journal of Pharmaceutical Science
Volume & Halaman 25 & 13
Tahun 2017
Penulis Najmeh Rahmanian, Seyed Jalal Hosseinimehr, Ali
Khalaj, Zohreh Noaparast, Seyed Mohammad
Abedi and Omid Sabzevari
Reviewer Kelompok 5

A. Tujuan Penelitian
Adapun tujuan penelitian dalam jurnal ini yaitu meneliti SSS-GE11 ((Seryl-Seryl-
Serine) – (dodecapeptide YHWYGYTPQNVI)) yang dikonjugasi dengan
hydrazinenicotinamide (HYNIC) dan diberi label dengan 99mTc menggunakan tricine
sebagai coligand. Spesifitas in vitro dari peptida radiolabelled untuk mengikat EGFR
(Epidermal Growth Factor Receptors) ditentukan pada garis sel SKOV3 , A549, dan MCF-
7, dimana sel karsinoma ovarium SKOV3 mengumpulkan jumlah peptida radiolabel yang
lebih tinggi dan digunakan untuk tumor in vivo yang menargetkan pada tikus tanpa bulu.
Selain itu, biodistribusi peptida radiolabeled juga dianalisis pada tikus normal dan tanpa
bulu untuk menentukan efek dari Seryl-Seryl-Serine (SSS) dan urutannya sebagai spacer
pada akumulasi hati dan pembersihan ginjal dari peptida radiolabel.
B. Metode Penelitian
1. Instrumentasi dan Material
YNIC-SSS-GE11 dibeli dari ProteoGenix (Schiltigheim, Prancis). 99mTc
diperoleh dari generator radionuklida 99Mo / 99mTc (Pars Isotope, Iran). Ammonium
asetat, natrium sitrat, asetonitril (HPLC grade), dan metil etil keton (MEK) diperoleh
dari perusahaan Merck (Darmstadt, Jerman). Trifluoroacetic acid (TFA), timah (II) –
klorida anhidrat dan tricine berasal dari perusahaan Sigma-Aldrich (St. Louis, MO,
USA). Air deionisasi penyulingan ganda digunakan untuk pembuatan larutan berair.
Scan TLC lablogic mini scanner (Sheffield, UK) digunakan untuk kuantifikasi
distribusi radioaktivitas yang ditentukan oleh Kromatografi Lapisan Tipis Instan pada
Silica Gel (ITLCSG) strip dan data yang dihasilkan dianalisis oleh perangkat lunak
analisis gambar Laura. Radioaktivitas dalam sampel diukur menggunakan alat
pencacah gamma dengan detektor gama NaI (Tl) (Delshid, Teheran, Iran). Sistem
Knauer HPLC (Berlin, Jerman) digunakan untuk analisis kromatografi cair kinerja
tinggi - fase terbalik (RP-HPLC) dan analisis HPLC peptida radiolabeled dilakukan
pada detektor gamma radioaktivitas Lablogic dengan kolom Eurospher 100-5 C18,
4,6 × 250 mm (Knauer, Berlin, Jerman). Elusi RP-HPLC dilakukan dengan sistem
pelarut yang terdiri dari: 0,1% TFA dalam asetonitril (pelarut A) dan 0,1% TFA dalam
air (pelarut B). Kanker ovarium manusia (SKOV3), Non-Small Cell Kanker Paru
(NSCLC) (A549) dan baris sel kanker payudara manusia (MCF-7) diperoleh dari
 Pasture Institute of Iran dan Iran Genetic and Biological Resource Center dan
dibudidayakan pada suhu 37°C di hadapan 5% CO2 di Dulbecco's Modified Eagle's
Medium (DMEM) (Gibco, Paisley, Inggris) dilengkapi dengan 10% Fetal Bovine
Serum (FBS) dan 100 μg / mL penicillin-streptomisin (Gibco, Inggris). Antibodi
spesifik HER2 (trastuzumab), antibodi spesifik EGFR (cetuximab), dan antibodi
spesifik CD20 (rituximab) berasal dari Roche (Swiss). Semua penelitian hewan
dilakukan sesuai dengan peraturan perlindungan hewan nasional dan disetujui oleh
Komite Penelitian Universitas Ilmu Kedokteran Tehran dengan kode persetujuan
9112080151-1331701.
2. Radiolabeling konjugat HYNIC-SSS-GE11 dengan 99mTc
Radiolabeling peptida dilakukan dengan mengambil 10 μg HYNIC-SSS-GE11
dilarutkan dalam 100 μL buffer 0,5 M amonium asetat pH 6. Larutan tricine (10 mg
dalam 0,5 M buffer amonium asetat pH 6) sebagai coligand untuk HYNIC
ditambahkan ke HYNIC-SSS-GE11 dan dicampur dengan 100–1480 MBq larutan
99m
Tc-pertecnetate segar dan 40 µg SnCl2. 2H2O (1 mg / mL dalam 0,1 N HCl).
Campuran diinkubasi pada suhu kamar selama 30 menit.
3. Evaluasi Quality Control
Hasil pelabelan dan kemurnian radiokimia dinilai dengan analisis HPLC dan
Kromatografi Lapis Tipis Instan pada Silika Gel (ITLC-SG). Untuk analisis HPLC,
elusi gradien 0,1% TFA dalam asetonitril (A) dan 0,1% TFA dalam air (B) digunakan
sebagai berikut: 0-10 menit: (10-25% A dan 90-75% B); 10–15 mnt: (25–50% A dan
75–50% B); 15–20 menit: (50–90% A dan 50–10% B) untuk total waktu 20 menit dan
laju aliran 1,0 mL menit − 1. Semua pelarut disaring dan di-reduksi sebelum melewati
kolom. ITLC-SG dijalankan bersamaan dengan menggunakan fase gerak yang
berbeda seperti methyl ethyl keton untuk pertechnetate gratis (Rf = 1), asetonitril 50%
untuk mengurangi hidrolyzed technetium (Rf = 0) dan 0,1 M buffer natrium sitrat pH
5,5 bebas 99mTc-coligand (Rf = 1).
4. Evaluasi Stabilitas
Stabilitas 99mTc-tricine-HYNIC-SSS-GE11 peptida dalam larutan pada
interval waktu yang berbeda (umur simpan) dievaluasi dengan pengenceran campuran
reaksi hingga 1 ml dengan buffer amonium asetat pH 6 dan inkubasi pada suhu kamar
hingga 24 jam. Kemurnian radiokimia campuran reaksi encer dianalisis dengan ITLC.
Semua percobaan dilakukan dalam rangkap tiga. Stabilitas serum peptida juga
ditentukan setelah penambahan 100 µl serum manusia segar hingga 20 μl campuran
reaksi dan inkubasi selama 1 dan 4 jam pada suhu 37°C. Sampel plasma kemudian
diobati dengan 500 μl campuran asetonitril dan etanol (1: 1), disentrifugasi (14.000
rpm, 6 menit), disaring (0,22 μm) dan degradasi peptida radiolabeled dinilai dalam
supernatan oleh RP-HPLC.
5. Spesifitas Ikatan Seluler
Spesifitas in vitro 99mTc-tricine-HYNIC-SSS-GE11 untuk pengikatan pada
EGFR ditentukan dengan menggunakan tiga jalur sel di SKOV3, A549, dan MCF-7.
Secara singkat, baris sel dibudidayakan dalam glukosa DMEM-tinggi Dulbecco yang
dilengkapi dengan 10% (v / v) FBS pada suhu 37°C dalam inkubator yang
dilembabkan di hadapan 5% CO2. Sel-sel trypsinised menggunakan larutan tripsin-
 EDTA dan unggulan pada 12 plat dengan kepadatan sel 5 × 105 sel per plat dan
diinkubasi selama 24 jam. Pada hari percobaan, sel-sel dicuci dengan medium bebas
serum dingin atau PBS dan diinkubasi dengan peptida radiolabel pada suhu 37°C
selama 2 jam. Inkubasi terputus oleh penghilangan medium yang dicuci dua kali
dengan 1 ml media dingin yang tidak lengkap. Sel-sel kemudian tertrypsinisasi dan
diencerkan sampai 1 mL dengan medium lengkap. Supernatan dikumpulkan dan
radioaktivitas diukur oleh counter gamma. Untuk penentuan pengikatan spesifik
99m
Tc-tricine- HYNIC-SSS-GE11, sel SKOV3 diinkubasi terlebih dahulu dengan
kelebihan 500 kali lipat peptida yang tidak berlabel pada suhu 37°C selama 30 menit
sebelum penambahan peptida radiolabel. Percobaan pemblokiran juga dilakukan
dengan penambahan trastuzumab, cetuximab dan rituximab yang masing-masing
merupakan antibodi spesifik HER2, EGFR dan CD20.
6. Internalisasi Seluler
Sel SKOV3 yang diunggulkan di plat-plat sumur tunggal (1 × 106 per sumur)
dan diinkubasi dengan 80 nM peptida radiokonjugasi pada suhu 37°C selama 5 menit
dan 0,5, 1, 2 dan 4 jam. Semua percobaan dilakukan dalam rangkap tiga. Inkubasi
terputus oleh penghilangan medium yang dicuci dua kali dengan media yang tidak
sedingin es. Sel-sel kemudian diobati dua kali dengan 0,5 ml buffer urea pH 2,5
selama 5 menit di atas es untuk menghilangkan fraksi reseptor-terikat pada
permukaan. Kemudian, sel-sel diinkubasi dengan 0,5 mL 1 M NaOH pada suhu 37°C
selama 10 menit.Pecahan sel lalu dikumpulkan, dan plat dicuci dengan 0,5 mL larutan
NaOH dan radioaktivitas semua supernatan yang dikumpulkan diukur dengan
penghitung gamma otomatis.
7. Konstanta Disosiasi
Afinitas 99mTc-tricine-HYNIC – SSS-GE11 dievaluasi menggunakan uji
pengikatan saturasi. Untuk tujuan ini sel SKOV3 disemai di 24 sumur plat (25x104 sel
/ baik), dilakukan peningkatan konsentrasi 99mTc-tricine-HYNIC – SSS-GE11 (5, 10,
30, 65, 100, 150, 225 dan 300 nM) dan diinkubasi pada suhu 37°C di hadapan (untuk
pengikatan non-spesifik) atau tidak ada (untuk pengikatan total) peptida yang tidak
berlabel. Tiga plat digunakan untuk total pengikatan dan satu plat yang mengandung
500 kali lipat dari konsentrasi tertinggi peptida radiolabel digunakan untuk pengikatan
non-spesifik. Setelah 60 menit inkubasi, sel-sel dibilas dengan medium bebas serum
dingin dan diambil dengan menggunakan larutan trypsin-EDTA. Radioaktivitas
terikat ditentukan dengan penghitung gamma dan data pengikatan dianalisis dengan
regresi non-linier menggunakan GraphPad Software Prism versi 5.04 untuk windows
(GraphPad Software Inc., California, dan USA). Konstanta kesetimbangan disosiasi
(Kd) dan kapasitas pengikatan maksimum (Bmax) dari reseptor diperoleh dengan
analisis saturasi.
8. Studi Biodistribusi pada Tikus Normal
Tikus NMRI betina normal (20–30 g, lembaga pusat hewan Mazandaran, Sari,
Iran) digunakan dalam penelitian ini dan secara acak dibagi menjadi 3 kelompok berisi
4 hewan. 100 μL larutan yang mengandung 1 µg peptida radiolabeled yang
disuntikkan secara intravena ke vena ekor setiap tikus. Tikus di-eutanasia melalui
injeksi intraperitoneal ketamin dan xylazine pada 1, 4 dan 24 jam setelah injeksi.
 Darah dikumpulkan dari jantung setelah anestesi panjang oleh jarum suntik yang telah
dicuci dengan heparin. Setelah itu, sampel organ termasuk; paru-paru, perut, hati,
ginjal, tulang, otot, kelenjar ludah, jantung, limpa dan usus dihilangkan, ditimbang
dan radioaktivitas setiap sampel diukur. Pengambilan jaringan semua organ kecuali
usus dihitung sebagai persen dari dosis yang disuntikkan per jaringan gram (% ID / g)
dan untuk usus dihitung sebagai% ID dari seluruh sampel.
9. Studi Biodistribusi pada Tikus Tanpa Bulu Bearing SKOV3 Xenografts Kanker
Ovarium Manusia
Penargetan tumor in vivo dari peptida radiolabeled dipelajari pada tikus betina
tanpa bulu dengan bearing xenografts kanker SKOV3. Untuk induksi tumor, 10 × 106
SKOV3 sel secara subkutan disuntikkan ke kaki belakang kanan tikus tanpa bulu dan
tumor dibiarkan tumbuh selama sekitar 4 minggu. Pada hari percobaan, ukuran tumor
rata-rata adalah 0,63 ± 0,2 g dan tikus secara acak dibagi menjadi tiga kelompok
masing-masing 4 tikus. Tikus-tikus itu disuntikkan intravena 1 μg peptida
radiolabelled. Pada 1 jam dan 4 jam setelah injeksi, tikus dikorbankan dan tumor dan
jaringan lain dibedah. Percobaan pemblokiran juga dilakukan menggunakan tiga tikus
tanpa bulu yang mengalami injeksi jumlah kelebihan (500 μg / 50 μl) peptida tidak
berlabel 30 menit sebelum injeksi peptida radiokonjugat.
C. Hasil
1. Radiolabeling dari HYNIC-SSS-GE11 dengan 99mTc
HYNIC-SSS-GE11 diberi label dengan 99mTc menggunakan tricine sebagai
coligand dan SnCl2 sebagai reduktor (Gambar 1). Berbagai faktor seperti pH dan jenis
buffer, jumlah SnCl2, suhu dan waktu inkubasi memiliki pengaruh pada kemurnian
radiokimia 99mTc-HYNIC-SSS-GE11. Hasil radiokimia tidak lebih besar dari 80%
dalam air, normal saline, salin fosfat-buffered pH 7 dan amonium asetat pH 5,2 tetapi
lebih tinggi dari 98% dalam buffer amonium asetat dari pH 6 mengandung tricine (10
mg), SnCl2 (40 μg) dan 99mTcO4 −Na (5–40 mCi). Kemurnian radiokimia (RCP) yang
ditentukan setelah 1, 2 dan 4 jam oleh ITLC masing-masing ditemukan 97, 96 dan
95%. Juga RCP dinilai oleh radio HPLC ditemukan 97 dan 95% masing-masing pada
1 dan 4 jam, mengingat 1-2% mengurangi hidrolisis technetium (Gambar 2a). Hasil
eksperimen menunjukkan kemurnian radiokimia yang dapat diterima atas dasar
kehadiran puncak radioaktivitas tunggal yang sesuai dengan 99mTc-HYNIC-SSS-
GE11 dengan waktu retensi 18-20 menit.
2. Uji Stabilitas pada Larutan dan Serum
Larutan konjugasi radiolabel menunjukkan stabilitas sekitar 93%, dalam waktu
4 jam, dalam larutan (Gambar 3). Juga, stabilitas konjugat radiolabel dievaluasi dalam
serum manusia selama 1 dan 4 jam oleh radio HPLC (Gambar 2b). 99mTc-HYNIC-
SSS-GE11 dilarutkan dalam serum manusia menunjukkan stabilitas sekitar 96%
selama 4 jam. Berdasarkan hasil, dapat disimpulkan bahwa konjugat radiolabel
menunjukkan stabilitas yang dapat diterima dalam larutan dan serum manusia selama
4 jam.

3. Spesifitas Ikatan Seluler

Untuk mengkonfirmasi kekhususan pengikatan peptida radiolabel ke reseptor
EGFR, digunakan tiga jalur sel dengan tingkat ekspresi EGFR yang berbeda (A549:
EGFR tinggi, HER2 rendah; SKOV3: HER2 tinggi; MCF-7: EGFR dan ekspresi
HER2 yang sangat rendah). Hasil penelitian menunjukkan bahwa ada perbedaan yang
signifikan dalam kecenderungan in vitro sel yang berbeda untuk mengikat peptida
 radiolabel. Berdasarkan hasil, 99mTc-tricine-HYNIC-SSS-GE11 memiliki
kecenderungan lebih tinggi untuk mengikat SKOV3 daripada A549 yang pada
gilirannya memiliki kecenderungan lebih tinggi daripada sel MCF-7. Akumulasi
peptida radiolabel pada jalur sel SKOV3 dibandingkan dengan baris sel MCF-7 adalah
5 kali lebih tinggi dan dibandingkan dengan sel A549 adalah 4,4 kali lebih tinggi
(Gambar 4a). Di sisi lain, tes spesifisitas pengikatan menunjukkan bahwa pengikatan
99m
Tc-HYNIC-SSS-GE11 adalah reseptor yang dimediasi karena pra-saturasi sel
SKOV3 dengan molar berlebih 500 kali lipat dari peptida dingin menurunkan
pengikatan spesifik hingga 25% (Gambar 4a). Hasil ini juga mengungkapkan bahwa
sel SKOV3 mengumpulkan jumlah radioaktivitas yang lebih tinggi yang dihasilkan
dari pengikatan reseptor ke peptida radiolabel. Selain itu, ketika sel SKOV3 pra-
inkubasi dengan kelebihan molar antibodi seperti cetuximab, trastuzumab dan
rituximab, pengikatan spesifik menurun secara signifikan oleh trastuzumab sebagai
antibodi spesifik HER2 (Gambar 4b).

4. Internalisasi Seluler
Hasil percobaan internalisasi seluler dirangkum dalam Gambar. 5. Sumber
utama dari radioaktivitas intraseluler adalah dari radioaktivitas sel-terikat.
Internalisasi peptida radiolabeled oleh SKOV3 sel dievaluasi pada suhu 37°C hingga
4 jam. Hasil penelitian menunjukkan bahwa fraksi internalisasi radioaktif meningkat
seiring dengan waktu. Total sekitar 52% dari peptida radiolabel dari konjugasi
membranebound menginternalisasi sel hingga 4 jam.
5. Konstanta Disosiasi
Afinitas pengikatan 99mTc-tricine-HYNIC-SSS-GE11 ke SKOV3 sel ditentukan
dengan memperlakukan sel dengan peningkatan konsentrasi peptida radiolabel.
Pengikatan spesifik dihitung dengan mengurangkan radioaktivitas nonspesifik yang
mengikat dari total aktivitas pengikatan. Kurva pengikatan saturasi dari 99mTc-tricine-
HYNICSSS-GE11 ke SKOV3 sel ditunjukkan pada Gambar. 6. Analisis data
mengungkapkan peptida radiolabeled terikat pada reseptor dengan konstanta disosiasi
73 ± 17 nM dan Bmax (9 ± 0,1) × 105.

6. Biodistribusi pada Tikus Normal

Biodistribusi 99mTc-tricine-HYNIC-SSS-GE11 pada tikus betina normal
diwakili pada Tabel 1. Akumulasi rendah peptida radiolabel ini diamati di jantung,
paru-paru, kelenjar ludah, perut, otot dan tulang. Jumlah akumulasi radioaktivitas
dalam kelenjar lambung, tiroid dan saliva yang dapat diabaikan menunjukkan
stabilitas in vivo yang tinggi dari peptida radiolabeled dengan pelepasan rendah 99mTc
bebas. Juga persen dari dosis yang disuntikkan peptida radiolabel yang terakumulasi
dalam hati adalah 2,88, 2,05 dan 0,33% masing-masing pada 1, 4 dan 24 jam. Selain
itu, nilai% ID / g untuk peptida radiolabel di ginjal pada 1, 4 dan 24 jam masing-
masing adalah 24,5, 17,5 dan 3,5%. Temuan ini menunjukkan bahwa peptida
radiolabel memiliki kecenderungan rendah untuk akumulasi dalam hati dan ekskresi
oleh sistem hepatobiliary dan sebagai hasilnya ginjal adalah jalur ekskresi utama
untuk peptida radiolabel. Juga, tingkat radioaktivitas darah kurang dari 1% ID / g pada
1 dan 4 jam karena konjugat radiolabeled dibersihkan dengan cepat dari darah.
7. Biodistribusi Pada Tikus Tanpa Bulu Bearing SKOV3 Xenografts Kanker Ovarium
Manusia
Untuk mengevaluasi serapan peptida radiolabeled oleh tumor ovarium, studi
biodistribusi tambahan dilakukan pada tikus tanpa bulu dengan bearing SKOV3
xenografts (Tabel 2). Hasil dibandingkan dengan tikus normal menunjukkan pola
yang sama dari hati rendah dan uptakes ginjal tinggi dan izin cepat dari darah.
Penyerapan tumor konjugat radiolabel adalah 2.33 dan 1.66% pada 1 dan 4 jam,
masing-masing. Rasio tumor / otot masing-masing 2,4 dan 3,4 pada 1 dan 4 jam. Juga,
ambilan tumor berkurang secara signifikan dari 1,66% pada 4 jam menjadi 0,93%
dalam studi pemblokiran sedangkan 500 kali lipat kelebihan molar peptida dingin
disuntikkan 30 menit sebelum penyuntikan peptida radiokonjugasi terkait.
D. Pembahasan
Strategi diagnostik radionuklida melalui pemanfaatan riset penargetan berbasis
molekuler adalah metode sederhana dan non-invasif untuk diagnosis serta pengobatan
kanker. EGFR telah dilaporkan memiliki peran penting dalam inisiasi, perkembangan dan
invasi berbagai keganasan manusia dengan asal epitel. GE11 adalah peptida kecil yang
diperkenalkan oleh Li et al. selama penyelidikan tentang teknik display fage. Telah
terbukti bahwa GE11 mampu mengikat EGFR secara efisien dengan KD 22nM tanpa
mitogencity. Dalam penelitian ini GE11 diberi label dengan 99mTc untuk memperkenalkan
peptida radiolabel potensial untuk in vivo penargetan tumor yang memiliki overekspresi
EGFR. Hasil dari penelitian ini menunjukkan bahwa peptida GE11 yang memiliki
radiolabel menunjukkan serapan tumor sedang, pembersihan darah yang cepat dan
ekskresi hepatobiliari ginjal yang tinggi dan rendah. Beberapa chelators seperti
diaminedithiol (N2S2), triamidethiol (N3S), PnAO (N4) dan HYNC telah digunakan untuk
pelabelan peptida dengan 99mTc. Dalam penelitian ini HYNIC digunakan sebagai chelator
karena pelabelan hasil yang sederhana dan tinggi dan sifat biologis yang tepat. Tricine
dipilih sebagai coligand karena memberikan efek radiolabeling yang dapat diterima. Untuk
meningkatkan sifat farmakokinetik dan ekskresi ginjal dari peptida berlabel, penghubung
SSS disisipkan di antara chelator dan N-terminus peptida GE11. Pendekatan ini
menghasilkan generasi peptida radiolabeled dengan hasil radiokimia tinggi (> 98%) dan
stabilitas yang dapat diterima dalam larutan seperti yang diverifikasi oleh ITLC.
Ketidakstabilan dari 99mTc-tricine-complex karena beberapa koordinasi isomerism telah
dijelaskan sebelumnya. Penilaian stabilitas peptida radiolabeled penyelidikan ini dalam
serum manusia menunjukkan hasil yang menjanjikan. Kemurnian radiokimia adalah 95%
dalam waktu inkubasi 4 jam dan tidak ada pengotor yang signifikan termasuk 99mTcO4-,
RHT dan pelepasan 99mTc-coligand.
 Telah dilaporkan sebelumnya bahwa GE11 mampu mengikat EGFR terutama sel-sel
garis hepatoma manusia SMMC-7721, sel non-sel kanker paru-paru sel kecil manusia
H1299, glioblastoma astrocytoma manusia U87-MG, kanker paru-paru sel non-small
A549, adenokarsinoma ovarium manusia SKOV3 dan sel kanker payudara HCC70. Dalam
penelitian ini kecenderungan 99mTc-tricine-GE11 kompleks dalam mengikat ke SKOV3,
A549 dan MCF-7 sel garis dibandingkan. Baris sel ini memiliki tingkat ekspresi HER1
dan HER2 yang berbeda. Beberapa penelitian telah menunjukkan bahwa kedua faktor
pertumbuhan epitermal 1 dan 2 terkait dan diekspresikan pada tingkat tinggi dalam baris
sel kanker ovarium manusia SKOV3 dan kanker garis sel manusia non-small A549 tetapi
memiliki ekspresi yang lebih rendah dari HER1 dan HER2, berturut-turut. HER2 memiliki
peran penting dalam proliferasi dan perkembangan berbagai kanker seperti payudara,
ovarium, paru-paru sel non-kecil dan hepatoma. Oleh karena itu, beberapa penelitian telah
menggunakan berbagai jenis biomolekul penargetan seperti antibodi, afibody, aptamer dan
peptide untuk mendiagnosis dan menindaklanjuti perawatan kanker dengan tingkat
ekspresi HER2 yang tinggi. Biomolekul penargetan ini memiliki beberapa kerugian seperti
berat molekul tinggi, biaya tinggi, umur paruh panjang dalam sirkulasi darah,
imunogenisitas tinggi dan stabilitas rendah. Studi terbaru menunjukkan bahwa
penggunaan GE11 sebagai biomolekul target EGFR meningkatkan pengiriman agen
kemoterapi untuk sel kanker ovarium.
Dalam karya ini oleh kompetisi dan memblokir eksperimen dan menggunakan antibodi
yang disetujui FDA, ditunjukkan bahwa GE11 radioconjugate memiliki kecenderungan
tinggi untuk mengikat HER2 di jalur sel SKOV3. Percobaan yang mengikat jenuh
menunjukkan bahwa kompleks 99mTc-tricine-HYNIC-SSS-GE11 mampu mengikat
SKOV3 dengan KD 73 nM. Stabilitas tinggi in vivo ditunjukkan oleh percobaan
biodistribusi pada tikus betina normal di mana tidak ada pelepasan 99mTc bebas yang
bermakna pada kelenjar ludah dan lambung. Nilai% ID / g dari serapan darah dari 99mTc-
tricine-HYNIC-SSS-GE11 kompleks adalah 0,83, 0,39 dan 0,18 pada 1, 4 dan 24 jam
masing-masing, menunjukkan pembersihan cepat radioconjugate dari darah. Secara
umum, aktivitas tinggi di gastrointestinal sangat bermasalah dan dapat menutupi lesi
metastasis dari organ target lain. Beberapa laporan telah menunjukkan pentingnya
penghubung dalam modifikasi farmakokinetik dengan mengurangi pengambilan non-
target dan meningkatkan visualisasi tumor. Berbeda dengan hasil laporan pertama tentang
biodistribusi GE11 yang dilabeli dengan 125I yang menunjukkan pengambilan hati yang
tinggi, ginjal adalah rute utama ekskresi peptida GE11 radiolabel dari penelitian ini karena
adanya seryl-seryl-serine sebagai penghubung pengubah farmakokinetik. Hasil dari
biodistribusi in vivo pada tikus tanpa bulu yang mengandung xenografts kanker SKOV3,
menunjukkan bahwa peptida radiokonjugasi memiliki serapan tumor sedang dengan
nilai% ID / g 2,33 dan 1,66 pada 1 dan 4 jam setelah injeksi. Ada perbedaan statistik yang
signifikan antara konsentrasi peptida radiolabel pada tumor dan otot dengan cara rasio
tumorto-otot pada 1 dan 4 jam pasca-injeksi adalah 2,3 dan 3,42, sementara rasio tumor-
ke-darah pada periode ini waktu masing-masing adalah 0,92 dan 1,17. Hasil penyelidikan
ini menunjukkan bahwa optimasi lebih lanjut mungkin diperlukan untuk meningkatkan
tingkat clearance dari peptida radiokonjugasi disiapkan tanpa mengurangi konsentrasi
radioaktivitas tumor.
E. Kesimpulan
Dalam penelitian ini 99mTc-tricine-HYNIC-SSS-GE11 disiapkan dengan kemurnian
radiokimia yang sangat tinggi dan stabilitas yang baik. Peptida radiokonjugasi
menunjukkan pengikatan spesifik yang dimediasi oleh HER2 pada permukaan sel.
Biodistribusi peptida radio terkonjugasi disiapkan pada model tikus xenograft normal dan
SKOV3 menunjukkan bahwa sistem ginjal adalah rute utama untuk ekskresi radioaktivitas
karena kehadiran penghubung SSS yang digunakan untuk modifikasi farmakokinetik.
Rasio tumor-tomuscle dari 3,4 diperoleh dengan peptida berlabel 99mTc yang menunjukkan
penargetan HER2 pada tumor SKOV3.