1.

Fluorometria
Técnica espectrofotométrica que se basa en la absorción de radiación por parte del analito
a medir en una muestra y su posterior emisión. Su fundamento es la fluorescencia
molecular que se basa en que la emisión de radiación por electrones excitados que vuelven
al estado fundamental se realiza en varias etapas, de manera que se emite una radiación
de una longitud de onda distinta a la absorbida. En el fenómeno de fluorescencia, una
molécula absorbe radiación electromagnética y debido a ello los electrones pasan de un
estado basal a otra fase de excitación. Al ser la longitud de onda de la radiación emitida
diferente de la longitud de onda de absorción, puede utilizarse ésta tanto para identificar
como para cuantificar sustancias. (Douglas A. Skoog, 2008)

Figura 1 Manera en la que funciona la fluorometria

2. Fluorescencia
La fluorescencia se emite en todas direcciones, lo que puede aprovecharse al diseñar los
aparatos de medida que, en principio, son similares a los usados en espectroscopía de
absorción, con la diferencia de que, para evitar las interferencias que pueda causar la
transmisión de la radiación incidente sobre la muestra, se sitúa el sistema de detección en
ángulo recto respecto a la luz incidente. De esta manera, sólo se detecta radiación
fluorescente. Si no se hiciera así, no se podría discriminar la radiación fluorescente, al ser
ésta de menor magnitud que la radiación no absorbida procedente de la fuente de
radiación (al situar el detector en un ángulo de 90º con respecto a ella, la radiación no
absorbida procedente de la fuente de radiación no será detectada).

Figura 2 Explicación de la manera en cómo funciona la fluorescencia

 3. Fosforescencia
Las substancias absorben la energía, almacenándola para emitirla posteriormente
en forma de luz o de otro tipo de radiación electromagnética. Éste fenómeno se
aprovecha en las manecillas de los relojes o de determinados juguetes que brillan
en la oscuridad. (RUBINSON., 2001)

Figura 3 Fosforescencia

La principal ventaja de las técnicas fluorimétricas es su sensibilidad, que permiten

detectar cantidades de sustancias del orden de nanogramos. Las causas de esta mayor
sensibilidad de la fluorimetría con respecto a la espectrofotometría de absorción radican
en que las medidas de fluorescencia utilizan como blanco un compuesto no fluorescente,
que da una señal cero o muy próxima a cero en el detector. En cambio, en el caso de las
medidas de absorción, el blanco transmite la mayor parte de la radiación incidente y
provoca una gran respuesta en el detector. Por lo tanto, en los métodos fluorimétricos es
posible aumentar significativamente la sensibilidad del detector, permitiendo medir con
precisión cantidades muy pequeñas de radiación

Bibliografía
Douglas A. Skoog, s. R. (2008). Principios de analisis instrumental. Cengace learning.

RUBINSON., K. A. (2001). Analisis instrumental. Madrid: Pearson education.