Determinación del contenido de proteína soluble por método

espectrofotométrico de la semilla del aguacate y frijol rojo de la

clase calima.

Determination of soluble protein content by spectrophotometric

method of avocado and red bean seeds of the calima class.

Brito M.C a, Montes A.S a , Bocanegra C a Botia D.E b Páez J. P* c .

a Fundación Universitaria Agraria de Colombia, Estudiante, Ingeniería de Agroindustrial.
b Fundación Universitaria Agraria de Colombia, Estudiante, Ingeniería de Alimentos.
c Fundación Universitaria Agraria de Colombia, Estudiante, Ingeniería de Alimentos. correo.
Paez.jenny@uniagraria.edu.co, botia.david@uniagraria.edu.co

En esta práctica se determinó la cantidad de proteína mediante el método de

espectrofotometría utilizando la semilla de frijol calima y semilla de aguacate, se les retiro la
cubierta exterior de las semillas y se troceo en un tamaño pequeño, posteriormente se les
realizaron varios tratamientos con dos reactivos (buffer salino y reactivo de Biuret) con
diferentes tratamientos térmicos entre ellos para así al final determinar la cantidad de
absorbancia y transmitancia de las muestras en el espectrofotómetro y asi hallar la cantidad de
proteína presente en cada muestra; Por decisión del grupo al ver una gran diferencia en los dos
primeros datos se realizó nuevamente la prueba con esto obteniendo un triplicado por cada
muestra dejando claro que se descartó el resultado más distante de la media.

1. Introducción

La práctica de ESPECTROFOTOMETRIA Y LEY DE BEER-LAMBERT busca medir

trasmitancia y la absorbancia en cuanto a estos procesos tienen cada uno su explicación y
ejecución gracias a la ley de Lambert este proceso se hizo con una serie de pruebas de
laboratorio con un espectro fotómetro y unas pruebas base donde dieron diferentes resultados
midiéndose también una muestra problema donde se determinó su curvaturas y balance para
poder entender las pruebas debemos saber que hoy podemos encontrar longitudes optimas En
los átomos los electrones se hallan preparados en torno al núcleo en orbitas de distintas
energías mientras los electrones se quedan en sus orbitas particulares la energía se mantiene en
constante, pero si un electro se cambia de orbita, la energía del átomo también cambia. La
energía de un átomo también cambiara si absorbe o emite radiación. En temperaturas normales
las temperaturas de un gas monoatómico se encuentran mayormente en el estado de mínima
energía. Si se calienta fuertemente el gas o si se produce una un salto de descarga eléctrica
atreves del gas, puede excitarse electrones y desplazarse a orbitas de mayor energía. Aquellos
átomos átomos excitados no tienen estabilidad y fundamentalmente retoman al estado
emitiendo energía en forma de radiación electromagnética Conceder información cualitativa y
cuantitativa en cuanto a moléculas orgánicas inorgánicas y bioquímicas. Se clasificarían en:
Absorción en compuestos orgánicos: la absorción de radiación se da debido a dos tipos de
electrones: electrones compartidos por varios átomos y que actúan directo en los enlaces y
electrones externos no compartidos, que la localización inicialmente en los átomos de oxigeno
halogenuros, azufre, y el nitrógeno. La longitud de de onda en que absorbe una molécula
orgánica va a depender de la fuerza con la que se sujeten los electrones. La transmitancia T de
una solución es la fracción de la radiación incidente que a determinada longitud de onda es
transmitida hacia la solución, dicha relación esta expresada por la ecuación. Encontrar la
longitud de onda óptima para la cuantificación de una proteína, elaborar curva de calibración
con diferentes diluciones y por medio de la ley de Beer-Lambert son los motivos por los
cuales se ejecutó este laboratorio tienes unas ecuaciones con las cuales se puede determinar los
resultados

2. Metodología

Se realizó una revisión detallada del protocolo experimental dado por el profesor Deivis
Suarez, el cual se proporcionó por medio del aula virtual, esta práctica se realizó en el
laboratorio de química de la universidad agraria de Colombia, donde se otorgó los materiales,
equipos y reactivos, para la realización de la práctica.

2.1 Preparación

Se realiza la disección de las semillas de aguacate y de frijol rojo calima, separando la cascara
de la semilla y se troza la semilla pesando un gramo de cada semilla y colocando las muestras
en un vaso de precipitado en hielo, por cinco minutos, luego se adicionan 5 mL de buffer
salino y se colocan nuevamente las muestras en un vaso precipitado en hielo por 5 minutos;
posteriormente se centrifuga el homogenado a 3000 rpm por 5 minutos y se separa el
sobrenadante. Por triplicado se mezcla 0,2 mL del sobrenadante por tejido con 0.8 mL de agua
destilada, adicionar 4.5 mL de reactivo de Biuret y agitar; por último, se calienta la solución
en baño de agua a 37 °C por 10 minutos.
2.2 Medición

Atemperada la muestra se lee la absorbencia a 540 nm; de cada tejido y se determina el

contenido de proteína soluble a partir de los valores de absorbencia y la ecuación de la curva
de calibración de albumina calculada anteriormente.

3. Resultados

En la tabla 1 se registran los resultados obtenidos para la obtención de los valores de

Absorbancia de la semilla de aguacate, este análisis fue en duplicado los dos resultados fueron
muy cercanos uno con el otro, lo que nos lleva a inducir que la realizar el análisis por
espectrofotometría es muy veraz y preciso. Al analizar el coeficiente de relación este es muy
cercano a 1.

TABLA #1 Valores de Absorbancia de la semilla de aguacate (persea americana)

Concentración Absorbancia contenido % de

del de proteína proteína
sobrenadante mg/g
(ml)
muestra 1 0,2 0,31 1,41838488 0,7%
muestra 2 0,2 0,32 1,328178694 0,66%
muestra 3 0,2 0,3 1,508591065 0,75%

En relación a la proteína de las soluciones homogéneas se observa que los datos triplicados
son directamente proporcionales a la absorbancia dada por el equipo. En relación al contenido
de proteína de la semilla del aguacate, el aguacate es un fruto de gran valor para la obtención
de productos alimenticios, farmacéuticos, grasas, colorantes, fibra, proteínas, minerales, por su
alto contenido de vitaminas A y B y ciertas vitaminas liposolubles poco frecuentes en otros
frutos. La composición, la formación de metabolitos secundarios y las cualidades nutricionales
de las frutas son muy variables y se ven influenciadas por factores como el clima, el suelo, la
temperatura, la humedad, la cantidad de lluvia durante el desarrollo del fruto, diferencias
genotípicas entre variedades. (Ceballos, 2013)la variedad de nuestro aguacate es booth 8
donde el porcentaje de proteína bruta es de 3,75% en madurez de consumo, al pasar nuestros
resultados a porcentaje no arroja un resultado de 0,70% en promedio lo que nos indica que
durante el proceso se perdió gran cantidad de proteína o se tuvo falla en el equipo a la hora de
su medición.

Con las absorbancias se obtuvieron las concentraciones de las tres soluciones, con estos datos
se procedió a realizar los cálculos necesarios para determinar el porcentaje de proteínas en la
en la semilla de aguacate y el frijol variedad calima
TABLA #2 Valores de Absorbancia del frijol variedad calima.

concentración(ml) absorbancia contenido % de

de proteína proteína
mg/g
muestra 1 0,2 0,29 1,598797251 0,79%
muestra 2 0,2 0,28 1,689003436 0,66%
muestra 3 0,2 0,3 1,508591065 0,75%

En la tabla #2 se observa que el contenido de proteína es más alto con relación a la tabla #1
lo que nos indica que en nuestro análisis el frijol tiene resultados más altos que la semilla del
aguacate .Basándonos en la teoría la semilla de aguacate presenta porcentajes de proteína más
bajos que el frijol de esta variedad debido a que este su composición fisiológica. El fríjol es
una leguminosa cuyo grano es una fuente de alimentación proteica de gran importancia en la
dieta alimenticia de la población de bajos recursos económicos, este grano contiene 22% de
proteínas de alta digestibilidad, es un alimento de alto valor energético, contiene alrededor de
70% de carbohidratos totales y además aporta cantidades importantes de minerales. (Sossa,
2015)

Se analiza los datos con un gráfico de dispersión que se relacione con la misma longitud de
onda de 580 nm, que presentó regresión lineal que fueron los resultados del informe anterior.

0,8
absorvancia

0,6

0,4
λ580 nm
0,2

0
0 1 2 3 4
concentración (ml)

Grafica 1 Curva de calibración utilizada para la determinación de concentración de proteína

soluble en semilla de aguacate y frijol variedad calima.
7. Conclusiones

Se pudo determinar por el método de espectrofotométrico el porcentaje proteico de la semilla

de aguacate booth 8 y del frijol variedad calima. Obteniéndose así un porcentaje proteico en
la semilla de aguacate igual a 0,70% en promedio y un porcentaje de 0,73% en el frijol.
En comparación a la teoría dada en libros bioquímicos y análisis bromatológicos nuestros
resultados fueron inferiores a los esperados, es de vital importancia evaluar la forma en que
realizamos el método y verificar en qué punto del proceso se perdió proteína soluble.
E l análisis de concentraciones por método espectrofotométrico, en un análisis preciso, en las
tres muestras analizadas hubo reproducibilidad de los resultados y no fueron distantes de uno
al otro, Pero para que un resultado sea optimo es de vital importancia evaluar si nuestro
procedimiento cumple con la práctica enviada y tener en cuenta la exactitud del equipo.

Referencias

Ceballos, M. (2013). EVALUACIÓN QUIMICA DE LA FIBRA EN SEMILLA, PULPA Y

CÁSCARA DE TRES VARIEDADES DE AGUACATE. Scielo, 12-13.
Sossa, J. (19 de Septiembre de 2015). Frijol calima. Recuperado el 12 de 03 de 2019, de
https://es.slideshare.net/yenypsossa/frijol-calima
Barard, J.A y Chayen, R métodos modernos de análisis químicos, cap. 3 (pág.57,
62,68.69,70,75) España. 1970, ediciones urmo.