Jurnal Internasional MIT Ilmu Farmasi, Vol. 2, No. 1, Januari 2016, hlm.

12–14 12
ISSN 2394-5338 (Cetak); 2394-5346 (Online) © Publikasi MIT

Artikel asli

Estimasi kuantitatif Eflornithine dengan titrasi Nitrit (Diazotisasi) Amit Kumar Sebuah,*, Vijender
Singh b, Praveen Kumar c

Sebuah Teerthankar Mahaveer University, (TMU), Fakultas Farmasi Teerthanker Mahaveer, Moradabad, Uttar Pradesh, India.

b Institut BBS Ilmu Farmasi & Sekutu, Greater Noida, India.

c Grup Lembaga Pendidikan Kepercayaan Moradabad Fakultas Farmasi, Moradabad, Uttar Pradesh, India.

* Penulis yang sesuai. Tel .: +9897144639, Alamat email: amit81ak@gmail.com

INFO PASAL ABSTRAK

Menerima 27 Nov 2015 Eflornithine hidroklorida (DFMO) yang menjadi amina alifatik primer bereaksi dengan asam nitrat
Revisi 17 Des 2015 Diterima (pembebasan in situ dengan reaksi natrium nitrit es dingin dan asam klorida) dan dikonversi menjadi
21 Des 2015 garam diazonium. Pada titik akhir, setetes titran natrium nitrit berlebihan dari buret membebaskan
asam nitrat; asam bebas ini ditentukan oleh kertas lendir pati, yang digunakan sebagai indikator
Kata kunci: eksternal. Asam nitrat bebas bereaksi dengan kalium iodida dan mengurangi iodida menjadi iodin
• Eflornithine hidroklorida bebas, yang menghasilkan warna biru pekat dengan bagian alfa-amilosa dari pati yang
• Titrasi Nitrit mengindikasikan titik akhir. Eflornithine hidroklorida (DFMO, Difluoromethylornithine) ditentukan oleh
• Garam diazonium Titrasi Diazotisasi (DAT M-01). Di sini gugus amino Eflornithine diazotisasi dengan larutan natrium
• Indikator nitrit dalam larutan asam dingin. Asam nitrat yang terbentuk diazotizes senyawa. Yodium yang
• Titik akhir terbentuk bereaksi dengan lendir pati untuk memberikan warna biru. Titik akhir dapat ditentukan
dengan menggunakan kertas pati iodida sebagai indikator eksternal. Persentase kemurnian dalam
DFMO ditemukan 99,74%.

1. PERKENALAN proses DFMO pada penyakit ini saat ini pada tahap yang relatif dini dan oleh
karena itu karakterisasi farmakokinetik penuh pada pasien, dalam
Eflornithine, DL-alpha-difluoromethylornithine (DFMO; Ornidyl) adalah
inhibitor selektif, ireversibel enzim ornithine decarboxylase dan salah satu hubungannya dengan farmakodinamik (efikasi / keamanan klinis) sangat

enzim kunci dalam jalur biosintetik polyamine [1,2]. Obat ini awalnya penting untuk optimalisasi terapi obat. Sejumlah metode analitik telah

dikembangkan untuk digunakan pada kanker dan dalam uji klinis fase III
untuk mencegah terulangnya kanker kandung kemih superfisial. Telah
digunakan sebagai agen antiprotozoal dalam pengobatan tahap
meningoensefalika trypanosomiasis yang disebabkan oleh
Trypanosoma brucei gambienze ( Trypanosomiasis Afrika) [3, 4, 5]. Ini sekarang
dilisensikan untuk digunakan dalam penyakit tidur di Amerika Serikat, Eropa dan dua
belas negara Afrika [6,7]. Dalam trypanosomiasis Afrika, DFMO telah disetujui oleh
FDA, AS untuk pengobatan tahap meningoensefalik [8, 9]. DFMO saat ini digunakan
dalam pengembangan dan pengujian untuk aktivitas anti-inflamasi [10]. Krim DFMO
13,9% digunakan untuk menghambat pertumbuhan dan mengurangi jumlah rambut
wajah pada wanita [11, 12]. Perkembangan obat
dilaporkan untuk mengukur DFMO dalam cairan biologis dan ekstrak
jaringan. Metode ini melibatkan teknik HPLC [13,14,15]. Teknik HPLC saat ini
tersedia untuk kuantifikasi DFMO dalam cairan biologis melibatkan
derivatisasi pra atau pasca kolom dengan deteksi UV atau fluoresensi [16]
dan LC dilakukan dengan deteksi hamburan cahaya evaporatif.
Metode HPLC terbalik yang menggunakan dansilasi pra-kolom dijelaskan untuk
analisis DFMO dalam serum. Derivatisasi diperlukan setidaknya 04 jam
diperlukan untuk pembentukan turunan maksimum. Semua metode yang
disebutkan di atas adalah prosedur panjang atau memerlukan persiapan
sampel yang canggih atau prosedur kromatografi [13,14,15,17,18].
 Jurnal Internasional MIT Ilmu Farmasi, Vol. 2, No. 1, Januari 2016, hlm. 12–14 13
ISSN 2394-5338 (Cetak); 2394-5346 (Online) © Publikasi MIT

2. PERCOBAAN untuk membebaskan yodium, yang menghasilkan warna biru pekat dengan bagian
alfa- amilosa dari pati yang menunjukkan titik akhir. Reaksi uji titrasi nitrit ditunjukkan
2.1 Bahan dan Metode pada Gambar. 2.

Semua pelarut dan bahan kimia dari kelas reagen analitis dan dipasok CHF 2

oleh bahan kimia baik Sigma-Aldrich dan Qualigens, India. Eflornithine CHF 2

hidroklorida dipasarkan dengan nama dagang Ornidyl. Setiap sampel 0-5 0 C

ClN N (CH 2) 3 C-COOH
(Ornidyl) vial (SVP) mengandung 200 mg / ml. Obat murni (DFMO) ini NH 2 ( CH 2) 3 C COOH + NaNO 2 + HCl
Ice
diberikan oleh Wintac Limited, Bangalore, India. Air suling digunakan
Sodiun
melalui penelitian ini. Nitrite N NCl
NH 2

Eflornithine (DFMO) Garam diazonium

2.2 Persiapan dan standardisasi larutan Sodium Nitrite 0,1 M

7,5 gram natrium nitrit dilarutkan dalam air yang cukup untuk menghasilkan 1000 KI + HCl KCl + HI
ml dan distandarisasi. Sekitar 0,5 gram sulphanilamide, yang sebelumnya Pati
dikeringkan pada suhu 105 ° C selama tiga jam dipindahkan ke gelas kimia yang 2HI + 2 HNO 2 saya 2 + 2NO + 2H 2 HAI
sesuai. 50 ml air dan 20 ml asam klorida ditambahkan, diaduk sampai larut dan lendir (Warna biru)
didinginkan hingga 5 ° C. Isi gelas dititrasi terhadap larutan natrium nitrit 0,1M [19].
Reaksi standardisasi titrasi nitrit ditunjukkan pada Gambar. 1.
Fig. 2. Uji reaksi titrasi nitrit.

3. HASIL DAN PEMBAHASAN Mekanisme reaksi

titrasi diazotisasi
Titran: NaNO 0,1N standar 2
Kerucut Kerucut: larutan DFMO yang diasamkan
HNO 2 NaCl
NaNO 2 + HCl

+H H 2 HAI TIDAK TIDAK 2 HAI

HO TIDAK

Fig. 1. Reaksi standardisasi titrasi nitrit H2 N (CH 2) 3 C CHF 2NH 2 TIDAK

COOH
Eflornithine (DFMO)
2.3 Estimasi% kemurnian Eflornithine (DFMO)
CHF 2
Timbang dengan akurat 0,5234 g DFMO dan ditransfer ke dalam labu
H2 N (CH 2) 3 C H2 N TIDAK
berbentuk kerucut, dilarutkan dalam sekitar 25 ml air dan 15 ml asam klorida 2
COOH
M dan didinginkan hingga sekitar 5 ° C. Campuran dititrasi terhadap larutan
-H
natrium nitrit 0,1M dengan menggunakan indikator eksternal sebagai larutan Cepat

iodida pati sampai muncul warna biru. Setiap ml larutan natrium nitrit 0,1M
setara dengan 0,021865 g DFMO. Volume larutan natrium nitrit 0,1M
H2 N (CH 2) 3 C HN CHF 2 TIDAK

26,53 ml (volume rata-rata tiga bacaan) dikonsumsi oleh COOH

0,5234 g DFMO (Berat rata-rata tiga penimbangan). % Purity of

Eflornithine ditemukan 99,74%, menunjukkan kekuatan metode ini.
CHF 2

H2 N (CH 2) 3 C NN OH

COOH
2.4 Reaksi Uji Titrasi Nitrit
H
DFMO menjadi amina alifatik primer bereaksi dengan asam nitrat (pembebasan
Cepat

in situ dengan reaksi natrium nitrit es dingin dan asam klorida) dan dikonversi CHF 2
CHF 2
menjadi garam diazonium. Pada titik akhir, setetes titran natrium nitrit + Cl H2 N (CH 2) 3 C N N.Cl
H2 N (CH 2) 3 C NN OH 2
berlebihan dari buret membebaskan asam nitrat; asam bebas ini ditentukan - H 2 HAI
COOH
COOH
oleh kertas lendir pati, yang digunakan sebagai indikator eksternal. Asam nitrat Eflornithine perklorat

bebas bereaksi dengan kalium iodida dan mengurangi iodida

Fig. 3. Mekanisme reaksi pengujian Eflornithine.
 Jurnal Internasional MIT Ilmu Farmasi, Vol. 2, No. 1, Januari 2016, hlm. 12–14
ISSN 2394-5338 (Cetak); 2394-5346 (Online) © Publikasi MIT
Sodium nitrat bereaksi dengan asam klorida untuk menghasilkan asam nitrat (in
situ), yang pada gilirannya menghasilkan ion nitrosil. Ion nitrosil ini menjadi
elektrofil, ia melekat pada gugus amino primer kaya elektron dari DFMO (nitrogen
dari gugus amino primer mengandung elektron pasangan bebas) untuk
membentuk turunan N-nitrosil, yang menyusun kembali membentuk garam
diazonium yang distabilkan setelah resonansi. penghapusan molekul air. (Efek
induktif digabungkan dengan elektro-negatif dari kedua oksigen dari gugus asam
karboksilat dan fluor dari gugus methyne difluoro mempengaruhi serangan gugus
nitrosil dengan gugus amino, sehingga gugus karbon dari karbon yang
mengandung baik amino maupun karboksilat gugus asam lebih disukai terserang).
Pada titik akhir, setetes natrium nitrit yang berlebihan menghasilkan asam nitrat;
ini akan bereaksi dengan kalium iodida untuk menghasilkan yodium yang
dideteksi oleh kertas lendir pati yang digunakan sebagai indikator eksternal.
Mekanisme reaksi pengujian Eflornithine (DFMO) ditunjukkan pada Gambar. 3.
4. KESIMPULAN
Dalam penelitian ini, kami telah berhasil mengembangkan metode nitrit
novel baru untuk penentuan DFMO dalam bentuk sediaannya. Metode ini
sensitif, selektif, cepat dan ekonomis untuk analisis rutin. Selain itu, seluruh
reagen analitik tidak mahal, memiliki daya simpan yang sangat baik, dan
tersedia di setiap laboratorium analitik. Metode ini praktis dan berharga
untuk aplikasi rutin di laboratorium kendali mutu untuk analisis DFMO.
Ucapan Terima Kasih
Penulis pertama sangat berterima kasih kepada Universitas IFTM, Moradabad, India untuk gelar
Ph.D. pendaftaran dan fasilitas. Kami berterima kasih kepada Wintac Pvt. Ltd. Bangalore, India,
karena menyediakan sampel DFMO sebagai hadiah.
REFERENSI
[1] Bacchi, CJ; Goldberg, B .; Garofalo-Hannan, J .; Rattendi,
D .; Lyte, P .; Yarlett, N. Nasib metionin terlarut dalam trypanosomes
Afrika: efek inhibitor metabolik. Biokem. J. 1995, 309 (3), 737-43.
[2] Bitonti, AJ; Bacchi, CJ; McCann, PP; Sjoerdsma, A. Catalytic
penghambatan irreversibel Trypanosoma brucei brucei ornithine decarboxylase
[17] Yang, S .; Peng, KW Wang, MZ A sederhana dan sensitif
oleh substrat dan analog produk dan efeknya pada murine trypanosomiasis. Biokem.
Farmakol 1985, 34 (10), 1773-1777. uji untuk kuantifikasi eflornithine di otak tikus menggunakan erivatization
[3] McCann, PP; Bacchi, CJ; Clarkson, AB; Jr Seed, JR; Nathan,
HC; Amole, BO; Hutner, SH; Sjoerdsma, A. Studi lebih lanjut tentang
difluoromethylornithine di trypanosoma Afrika. Med. Biol. 1981, 59 (5-6), 434-40.
[4] Sjoerdsma, A. Pengobatan penyakit tidur gambiense di RS
Sudan dengan DFMO oral (DL-α-difluoromethylornithine), penghambat
ornithine decarboxylase. Clin. Farmakol Ada 1981,
30, 3-8.
14
[5] Sjoerdsma, A.; Schechter, P. Difiuoromethylornithine hearts
Pengobatan trypanosomiasis Afrika. Clin. Farmakol Ada
1984, 35, 287-90.
[6] Eperon, G.; Balasegaram, M.; Potet, J.; Mowbray, C.; Valverde, O.;
Chappuis, F. PRATAMA DUTA Pengobatan untuk review trypanosomiasis Afrika Manusia
gambiense Tahap Kedua. Ahli. Pdt. Anti. Menulari. Ada 2014, 12 (11), 1407-1417.
[7] Doua, F.; Yapo, FB Trypanosomiasis Manusia di Pantai Gading:
terapi dan masalah. Acta. Trop. 1993, 54 (3-4), 163-8.
[8] McCann, PP; Pegg, AE Ornithine decarboxylase sebagai enzim
target untuk terapi. Farmakol Ada 1992, 54 (2), 195-215.
[9] Pepin, J. ; Tuanku, F.; Guern, C.; Schecht er, P. J.
Difluoromethylornithine untuk penyakit tidur Trypanosoma brucei gambiense yang
tahan-arsen. Lanset. 1987, 2 (8573), 1431-3.
[10] Sjoerdsma, A.; Schechter, PJ Eflornithine untuk review Tidur di Afrika
penyakit. Lanset. 1999, 354 (9174), 254.
[11] Wolf, JE; Jr. Shander, D .; Huber, F .; Jackson, J.; Lin, CS; Matematika,
BM; Schrode, K. Eflornithine HCl Study Group. Evaluasi klinis acak-tersamar
ganda tentang kemanjuran dan keamanan krim eflornithine HCl 13,9% topikal
dalam perawatan wanita dengan rambut wajah. Int. J. Dermatol. 2007, 46 (1),
94-8.
[12] Pépin, J .; Mpia, B .; Iloasebe, M. Trypanosoma brucei gambiense
Tripanosomiasis Afrika: perbedaan antara pria dan wanita dalam keparahan penyakit
dan respons terhadap pengobatan. Trans. R. Soc. Trop. Med. Hyg. 2002, 96 (4), 421-6.
[13] Cohen, JL; Ko, RJ; Lo, AT; Shields, MD; Gilman, TM
Analisis kromatografi cair tekanan tinggi dari Eflornithine dalam serum. J. Pharm.
Sci. 1989, 78 (2), 114-6.
[14] Huebert, ND; Schwartz, JJ; Haegele, Analisis KD dari
2-difluoromethyl-DL-ornithine dalam plasma manusia, cairan serebrospinal dan urin
dengan kromatografi cair berperforma tinggi dengan pertukaran kation. J. Chromatogr.
SEBUAH. 1997, 762 (1-2), 293-8.
[15] Kilkenny, ML; Slavik, M .; Riley, CM; Stobaugh, JF
Analisis plasma α-difluoromethylornithine menggunakan derivatisasi pra-kolom
dengan naphthalene-2,3-dicarboxaldehyde / CN dan kromatografi multidimensi. J.
Pharm. Biomed. Anal 1998, 17 (6-7), 1205-1213.
[16] Jansson-Löfmark, R .; Römsing, S .; Albers, E .; Ashton, M.
Penentuan enantiomer eflornithine dalam plasma dengan derivatisasi
pra-kolom dengan o-phthalaldehyde-N-acetyl-L-sistein dan kromatografi
cair dengan deteksi UV. Biomed. Chromatogr. 2010, 24 (7), 768-73.
pra-kolom dan deteksi UPLC-MS / MS. Biomed. Chromatogr. 2015, 29 (6),
918-24.
[18] Hanpitakpong, W .; Kamanikom, B .; Banmairuroi, V .; Na
Bangchang, K. Metode kromatografi cair kinerja tinggi untuk penentuan
2-difluoromethyl-DL-ornithine dalam plasma dan cairan serebrospinal. J.
Chromatogr. B. Analitik. Technol. Biomed. Kehidupan. Sci. 2003, 788 (2), 221-31.
[19] Sankar, RS. Buku teks analisis farmasi, 3 ed. Tirunelveli:
Publikasi Rx 2001, 21-3.