Preparación medio Verduyn

1. Vitamin solution

Preparation:

Tabla 1. Compuestos para preparar la solución de vitaminas

Chemicals Formula Molar mass (g/mol) Conc. [g/L]

D-(+)-Biotin (store at 4°C) 𝐶10 𝐻16 𝑁2 𝑂3 𝑆 244.3 0.05
D-Pantothenic acid Calcium salt 𝐶9 𝐻16 𝑁𝑂5 . 𝐶𝑎0.5 238.27 1
Nicotinic acid 𝐶6 𝐻5 𝑁𝑂2 123.12 1
Myo-Inositol 𝐶6 𝐻12 𝑂6 180.16 25
Thiamine chloride hydrochloride 𝐶12 𝐻17 𝐶𝐼𝑁4 𝑂𝑆. 𝐻𝐶𝑙 337.27 1
Pyridoxol hydrochloride 𝐶8 𝐻12 𝐶𝐼𝑁𝑂3 205.6 1
4-Aminobenzoic acid 𝐶7 𝐻7 𝑁𝑂2 137.14 0.2

 Test the pH meter using pH 4 and 7 buffers. Calibrate the pH probe if neccessary.
 Take a 250 mL Erlenmeyer flask. Fill the flask with demi wáter and mark the 250
mL level
 Fill the Erlenmeyer flask with 187.5 mL of demi water
 Write down the weight of the bottles with 1M NaOH and 1M HCl
 Dissolve the Biotin in 2.5 mL 0.1M NaOH. When it has disolved, add the Biotin
solution to the Erlenmeyer flask, and set the pH to 6.5 with 1M HCl
Note: La biotina es inestable a un pH alto, así que sea rápido pero preciso
 Add the other compounds one by one in the specifies order and correct the pH to
6.5 after each addition. Wait until each compound has completely disolved before
adding the next compound.
 When all components have disolved, againd adjust the pH to 6.5 (with 1M HCl)
and add demi water to adjust the volume
 Filtre la solución de vitaminas en una cabina de flujo laminar e implemente un
filtro de 0.2 µm.
 Divida en alícuotas de 1 ml para su posterior uso. Guarde la solución de vitaminas
a 4°C y pueden ser implementadas por un periodo de 3 meses
Tabla 2 Cantidad de cada compuesto para realizar la solución de vitaminas

Chemicals Weigh (g)

D-(+)-Biotin (store at 4°C) 0.0125
D-Panthothenic acid Calcium salt 0.2500
Nicotinic acid 0.2500
Myo-Inositol 6.2500
Thiamine chloride hydrochloride 0.2500
Pyridoxol hydrochloride 0.2500
4-Aminobenzoic acid 0.0500
 2. Trace element solution

Tabla 3. Compuestos necesarios para preparar el trace element solution

Chemicals Formula MW Weigh

(g)
EDTA 𝐶10 𝐻14 𝑁2 𝑁𝑎2 𝑂8 . 2𝐻2 𝑂 372.24 3.000
Zinc sulphate heptahydrate 𝑍𝑛𝑆𝑂4 . 7𝐻2 𝑂 287.54 0.900
Manganese chloride dihydrate 𝑀𝑛𝐶𝑙2 . 2𝐻2 𝑂 161.88 0.168
Cobalt(II)chloride hexahydrate 𝐶𝑜𝐶𝑙2 . 6𝐻2 𝑂 237.93 0.060
Copper(II)sulphate pentahydrate 𝐶𝑢𝑆𝑂4 . 5𝐻2 𝑂 249.68 0.060
Di-sodium molybdenum dihydrate 𝑁𝑎2 𝑀𝑜𝑂4 . 2𝐻2 𝑂 241.95 0.080
Calcium chloride dihydrate 𝐶𝑎𝐶𝑙2 . 2𝐻2 𝑂 147.02 0.900
Iron sulphate heptahydrate 𝐹𝑒𝑆𝑂4 . 7𝐻2 𝑂 278.02 0.600
Boric acid 𝐻3 𝐵𝑂3 61.83 0.200
Potassium iodide 𝐾𝐼 166.01 0.020

 Disolver el EDTA y el 𝑍𝑛𝑆𝑂4 . 7𝐻2 𝑂 en 150 mL de agua desmineralizada y ajuste el

pH a 6.0 con NaOH
 Mientras que el pH está en 6.0 disuelve cada uno de los componentes uno por
uno. Cuando esté listo, ajuste el pH a 4.0 con HCL 1M y termine de aforar el
volumen a 200 mL.
 Esterilice la solución en autoclave por 20 min a 120°C. Almacene las botellas en la
oscuridad a temperatura ambiente, las botellas abiertas deben almacenarse a 4°C,
pueden ser implementadas por un periodo de 2 meses

3. Verduyn medium

 Para preparar 1L de medio Verduyn, pese los siguientes compuestos

g/L
Ammonium sulphate 5.0
Potassium dihydrogenphosphate 3.0
(CAS: 7778-77-0)
Magnesium sulphate. 7 𝐻2 𝑂 0.5

 Adicione 800 ml de agua desmineralizada y disuelva las sales

 Adicione los siguientes compuestos

mL/L
Trace element solution* 1.0
(*) El stock trace element solution debe ser preparado y guardado a -20°C.
 Si su cepa cuenta con alguna auxotrofia debe poner las cantidades recomendadas
por el proveedor
 Ajuste el PH con 2.0M 𝐻3 𝑃𝑂4 (para pH menores que 4.5) o 4.0M KOH (para pH
mayores a 4.5). Asegúrese que su pH este bien calibrado
 Agregue agua desmineralizada a un volumen final de 949 mL, usando un cilindro
de medición graduado
Note: Adicione 15g de agar para platos sólidos. Recuerde que el agar no se
solidifica a pH 4.5 o más bajos.
 Esterilice la solución en un autoclave (121°C; 15 min)
 Cuando la solución ya este fría, adicione los siguientes compuestos en condiciones
estériles

mL/L
Vitamin solution* 1.0
Glucose 40% 50
(*) El stock de la solución de vitaminas debe ser preparado y guardado a -20°C.