Investigación en nanobiotecnología y

sus potenciales aplicaciones en

agricultura
Pedro J. Rocha S.
Biólogo, Ph.D.
Coordinador Área de Biotecnología y Bioseguridad
Programa para la Productividad y Competitividad

Foro Técnico: “CONVERGENCIAS TECNOLÓGICAS COMO NUEVAS OPORTUNIDADES PARA LA INNOVACIÓN EN LA AGRICULTURA”
IICA, Coronado, septiembre 21 de 2012
 Contenido

• Definiciones
• Avances
• Bioseguridad y Nanobiotecnología
• Educación y Comunicación
• Consideraciones Finales

2
 Contenido

• Definiciones
• Avances
• Bioseguridad y Nanobiotecnología
• Educación y Comunicación
• Consideraciones Finales

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 Nanotecnología

• Procesos para manipular, controlar y utilizar

racionalmente la nanoescala.
– Según SI de Unidades, “nano” significa una milmillonésima o
10-9; así 1 nm es una milmillonésima parte de 1m.

• Emplea nanopartículas (NP) que son partículas con

dimensiones entre 10 y 1000 nm (Nakache et al., 1999; Auffan et
al., 2009).
– Óxidos metálicos, cerámicas, silicatos, materiales magnéticos,
carbón, lípidos, puntos cuánticos semiconductores
(semiconductor quantum dots), polímeros, dendrímeros y
emulsiones.

Ghormade V. et al. 2011. Perspectives for nano-biotechnology enables protection and nutrition
of plants. Biotechnology Advances 29: 792-803
(fuente: 4
http://nano.gov
Nanopartículas: Escala y Equivalencias

– El grosor de una hoja de papel es de cerca de 100

mil nm.
– Un cabello humano tiene entre 80 mil y 100 mil
nm de diámetro.
– En 1 cm hay diez millones de nm.
– 1nm es lo que las uñas de las manos crecen en un
segundo.
– Una hebra del ADN humano tiene 2,5 nm de
diámetro.
– El diámetro de un átomo de oro es de 1/3 de nm.
– Si el diámetro de una canica fuera 1 nm, entonces
el diámetro de la tierra sería de cerca de 1m.

5
(según http://nano.gov/nanotech-101/what/nano-size)
 Mecanismos para la utilización de NP

Fijación con
Adsorción ligandos Encapsulación Atrapamiento
Ligando

núcleo

6
 Biotecnología

“Toda aplicación tecnológica que utilice sistemas

biológicos y organismos vivos o sus derivados
para la creación o modificación de productos
o procesos para usos específicos” (CDB, 1992).

7
(Biotecnología Agrícola ) Biofertilización
(compost)
Control
Fermentación biológico
Crioconservación
Bioreactores
Biocontrol
(productos
naturales)
Biocombustibles
Generación Cultivo Regeneración
de haploides in vitro

Transgénesis Metabolómica

Clonación /
Inducción Limpieza
Micro-
de variación biológica
propagación Proteómica
somaclonal
Transcriptómica

Hibridación
-Fitomejoramiento-
Genómica “Ómicas”
Inducción de
mutaciones

Marcadores
Radioisótopos Moleculares
y Radiación Tipo I: isoenzimas, RFLP,
Tipo II: Basados en PCR (RAPD,
AFLP, SSR) Bioinformática
Tipo III. Basados en secuenciación
(SNP, SSCP)
Técnica de
insecto Estéril 8
 Nanobiotecnología es …

- La convergencia de la biotecnología con la nanotecnología.

- La aplicación de la biotecnología en la nanoescala, a través de diversas disciplinas,
técnicas y materiales con el fin de generar nuevos productos y servicios que potencien la
eficiencia de los actuales.

N Técnicas Biotecnológicas
A
N Cultivo Control Transgénesis Genómica Etc…
O de tejidos biológico
B
I

Disciplinas (Química, Ingeniería)

O

Técnicas, Materiales
T
E
C
N
O
L
O
G
Í
A Nano-Escala
9
 Aplicaciones de la nanobiotecnología en agricultura

Tomado de : Ghormade V. et al. 2011. Perspectives for nao-biotechnology enables protection and nutrition of plants. Biotechnology Advances 29: 792-803

10
 Aplicaciones de la nano-biotecnología en agricultura

Detección de: Químicos Biopesticidas

Residuos de biocidas Vegetales (metabolitos)
Enfermedades Microorganismos
Enzimas/inhibidores
Antibióticos/toxinas
Nano- Entrega de
sensores biocidas Químicos
Nanorevestimientos

Biofertilizantes
Reducción catalítica Degradación Entrega de
Microorganismos
Reducción fotocatalítica de pesticidas fertilizantes Micronutrientes
Reguladores de
Entrega de crecimiento
Estructura ácidos
del suelo nucléicos

Remediación ADN
Unión de suelo ARNi
Nanoarcillas naturales

11
Adaptado en: : Ghormade V. et al. 2011. Biotechnology Advances 29: 792-803
 Contenido

• Definiciones
• Avances
• Bioseguridad y Nanobiotecnología
• Educación y Comunicación
• Consideraciones Finales

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 Sistemas de entrega de biocidas

• Permiten la liberación controlada, necesaria y suficiente de cantidades

de principios activos en un período específico para obtener la máxima
eficacia biológica y minimizar efectos nocivos (Tsuji 2001. J. Microencapsul.
18:137-147).

• La velocidad de liberación depende de las características del

nanomaterial, los ingredientes de unión y las condiciones
medioambientales.

• Beneficios de las formulaciones basadas en nanomateriales

– Mejora de la eficacia debido a mayor área de superficie, mayor solubilidad, inducción
de actividad sistémica por el pequeño tamaño de partícula, mayor movilidad y menor
toxicidad que formulaciones convencionales (Sasson et al., 2007).

13
 Sistemas de entrega de biocidas

Retos
– Múltiples perturbaciones medioambientales, grandes áreas para cubrir
con aspersión, costo.

– Nanomateriales involucran bajos volúmenes y aplicaciones costosas.

• Sistema convencional asperja fácilmente químicos en grandes volúmenes.

– El uso de NP debe ser muy preciso y se enfoca en el ciclo de vida y el

comportamiento del patógeno o la plaga.

– Fitoquímicos pueden presentar problemas de estabilidad y costo.

• Aceites esenciales: Inestabilidad química en presencia de aire, luz, humedad y alta
temperaturas pueden causar rápida evaporación y degradación de compuestos activos.
• Soluciones: Incorporación de aceites esenciales en formulaciones de liberación
controlada de NP, previene la evaporación y degradación, incrementa la estabilidad y
mantiene al mínimo la aplicación/dosis mínima efectiva.

14
 Sistemas de entrega de biocidas: Ejemplos

• Pesticidas químicos
– Protección de avermectina de la luz UV con NP de sílica porosa (Li et al., 2007).
– Liberación controlada de fungicidas tebuconazol y clorotalonil con NP de PVP para
preservación de madera (Liu et al., 2007).
– Nanoarcillas para prevención de daño por UV (El-Nahhal et al., 1999) y evitar re-cristalización .

• De origen vegetal –potencial para la asociación con pequeña agricultura y conocimiento

tradicional-
– NP lípidicas (200nm) con ácidos grasos de cadena larga y emulsificantes protegen de la
degradación al acetato de tocoferol y vitamina E.
– Incorporación de aceite esencial de Artemisia arborescens en NP lipídicas redujeron la
evaporación y mejoraron el control de plagas de cítricos (La et al., 2006).
– Aceite esencial de ajo, cargado en NP poliméricas cubiertas con PEG sirvieron como
insecticida para control de Tribolium castaneum (Yang et al., 2009).
– Nanosílica amorfa de diversas fuentes ha sido probada como biopesticida (considerada
como segura por OMS).

• Microbios y sus productos

– Bacterias, hongos y virus pueden funcionar como agentes de control.
– Micopesticidas de contacto (no necesitan ser ingeridos).
– Esporas recubiertas con NP para germinación retardada por hidratación.
15
 Entrega de fertilizantes basada en NP

Retos
• Aplicación de grandes cantidades de fertilizante en forma de sales de
amonio, urea, nitratos o fosfatos es perjudicial para el ambiente y para
la salud humana.
• Aún en el suelo, muchos de los fertilizantes no están disponibles para
las plantas y causan polución.

Ventajas
• Fertilizantes cubiertos con NP pueden contribuir a la liberación lenta,
rápida disolución, disponibilidad eficiente de fertilizantes y evitar
contaminación ambiental.
• Nano-revestimientos (cubrimiento de superficies).

16
 Fertilizantes en NP: Ejemplos

• Químicos
– Fertilizantes con nano-revestimientos de azufre (>100nm) mejoran
liberación, reducen tasa de disolución y permiten liberación lenta.
– Uso de NP poliméricas de quitosan (78 nm) controlan la liberación de NPK de
fuentes como urea, Ca2PO4 y KCl (Corradini et al., 2010).

• Biofertilizantes
– Formulaciones vivas de microorganismos benéficos -para formación de
micorrizas, promotores de crecimiento- (Rhizobium, Azotobacter,
Azospirillum, Pseudomonas, Bacillus, algas verde-azules).
– Pasos críticos: Almacenamiento y aplicación de formulaciones;
deshidratación; formación de agregados.
– Nano-formulaciones de micronutrientes para aspersión foliar y
suplementación de suelos con nutrientes atrapados en nanomateriales para
liberación lenta (Peteu et al., 2010).

17
 Sistemas de entrega de material genético basados en NP

Obstáculos de la transformación vegetal

• Focalización de los sistemas de entrega.
• Transporte a través de la membrana celular.
• Consumo y degradación en endolisosomas.
• Tráfico intracelular del ADN al núcleo.
• Entrega de genes con vectores virales tienen un reducido rango de hospederos.
– Permiten la inserción de cantidades limitadas de material genético.
– Resurgimiento de síntomas virales.
• Microinyección, Agrobacterium y bombardeo tiene baja eficiencia (0,01% - 20%).

Ventajas de usar NP
• NP de oro (5 – 25 nm) embebidas en matrices de carbono.
– Fácil acceso a la célula con incremento de la eficiencia.
– Más bajos requerimientos de plásmidos y oro comparado con el sistema
tradicional (Vijakumar et al., 2010).
– Daño mínimo e incremento de la regeneración de plantas. 18
 Entrega de material genético* con NP: Ejemplos

• Superficie tipo panel con NP de sílica con poros de 3nm cubierta con disulfuro y
NP de oro (10-15 nm) transportaron ADN a células aisladas y hojas intactas con la
pistola génica (Torney et al., 2007)

• NP de almidón (50-100 nm) conjugadas con material fluorescente Tris-(2,2’-

bypiridine) ruthenium (Ru(bpy)3)2+ se usaron para introducir plásmidos en
Dioscorea sp. en presencia de ultrasonido.

• Otros vectores: liposomas catiónicos nanoparticulados y polímeros catiónicos.

• Introducción de ARNdc para RNAi.

– NP Quitosan (<500nm) estabilizan la entrega de ARNdc (unión, protección y penetración).

* (…
19
 Secuenciación de ADN y nanotecnología

http://www.nanoporetech.com/t
echnology/minion-a-miniaturised-
sensing-instrument

100- 250 pb 500 pb - 1 Kpb 5.000- 10.000 pb (5.000.000- 10.000.000 pb)x4

(15 días) (5 días) (2 días) (2 horas)
2,5 USD/base 0,5 USD/base 1.000M-100 M USD/genoma 1.000 USD/genoma

Al 18 de septiembre de 2012
- Total de genomas: 18.242
- Genomas secuenciados : 3.722
- Proyectos en curso: 14.471 BIOINFORMÁTICA
- Metagenomas: 340
20
http://www.genomesonline.org
 Genómica Funcional: Microarreglos

900
30x30

57.600
4x16x30x30

- Ejemplo de convergencia tecnológica

- Disminución de costos por punto de
información
- Nuevos métodos de análisis
- Reproducibilidad
14.400
16x30x30
- Creación de consorcios

21
 Interacción de ómicas en Agricultura

Bioinformatics

Chen, N. et al. 2012. Metabolic network

reconstruction: advances in in silico
interpretation of analytical information. 22
Current opinion in biotech. 23(1): 77-82. …)
 Nanosensores en agricultura

• Aún en el ámbito de investigación.

Potencial
• Desarrollo de sensores y métodos de diagnóstico para monitoreo in situ
permitirán a los agricultores monitorear las condiciones ambientales para
crecimiento y protección de las plantas
• Se espera que los sistemas de detección contribuyan a incrementar
productividad y disminuir el uso de agroquímicos (antibióticos, pesticidas y
nutrientes) gracias a la intervención temprana.
• Aumento de la sensibilidad de detección (Guo et al., 2009).
Nanobiosensores para detección de pesticidas.
– Ventajas: Miniaturización, medición de más variabes, mayor sensibilidad, menos cantidad de
muestra, más rápidas tasas de detección, lecturas en tiempo real y aplicación de metodologías
diversas (electronica, colorimétrico, flurométrico y cambios de masa)
Nanobiosensores para detección de fitopatógenos
– Nueva tecnología de detección basada en NP de sílica (60nm) con un colorante fluorescente y un
conjugado de anticuerpos específicos a antígenos de superficie del microbio de interés (Zhao et
al., 2004). Se puede detectar hasta solo una célula.

23
 Remediación y Nanobiotecnología

Actualidad
• Métodos de remoción de contaminantes de suelos y aguas pasan por incineración,
fitoremediación, procesos fotoquímicos, uso de ultrasonido, oxidación avanzada,
etc.

Nanobiotecnología
• Pesticidas como atrazina, molinato y clorpirifos, en fuentes de agua, pueden
degradarse con nanopartículas de hierro cerovalente (ZVI, 1-100 nm) por aplicación
directa.
• Biopolímeros de FeS (200nm) degradan lindano, contaminante persistente en
fuentes de agua y alimentos (Paknikar et al., 2005).
• Descomposición fotocatalítica de residuos de pesticidas usando titanio con Fe2O3
(Sasson et al., 2007).
• NP para prevención de la erosión (formación de “costras biodegradables” en el
suelo, ETC Group, 2004).
• Bio-remediación de metales tóxicos. Disminución de la toxicidad de cobre por
conversión del mismo en NP por hongos endomicorrícicos.

24
 Contenido

• Definiciones
• Avances
• Bioseguridad y Nanobiotecnología
• Educación y Comunicación
• Consideraciones Finales

25
 Bioseguridad
Biosafety ≠ Biosecurity

Bioseguridad (Biosafety)
• Prevención de la pérdida a gran escala de la integridad biológica
• Se enfoca en la ecología y la salud humana
– En ecología: se refiere a las formas de vida importadas más allá de los límites de las eco-regiones
– En agricultura: La reducción del riesgo de introducción de virus o transgenes.
– En medicina: Se refiere a órganos y tejidos de origen biológico o productos de terapia genética y virus para
cuyo manejo se debe cumplir con protocolos de contención de laboratorio (medidos como 1, 2, 3 y 4, en
orden creciente de peligro).
– En química: v.g. nitratos en el agua, químicos que afectan la fertilidad, pesticidas, etc.
– En exobiología: v.g. la política de la NASA para contener microbios extraterrestres que pudiera estar
presentes en muestras del espacio – bioseguridad nivel 5.

Bioseguridad (Biosecurity)
– Concepto que se enfoca en dar respuesta a amenazas hipotéticas (guerra biológica,
bioterrorismo, etc.) para lo cual las medidas de bioseguridad son insuficientes.

26
 Bioseguridad y Nanobiotecnología

• Protocolo de Cartagena sobre Seguridad de la Biotecnología del

CDB (2000).
– En principio , trata de la definición agrícola, pero algunos grupos buscan que se
expanda para incluir riesgos post-genéticos: nuevas moléculas, formas de vida
artificial, robots que puedan competir directamente con la cadena natural de
alimentos, nanobiotecnología, etc.
– En la actualidad NO existe marco regulatorio formal específico para la utilización
dela NBT.

• El potencial es enorme, sin embargo será necesario hacer

evaluaciones de riesgo caso a caso y determinar la relación
beneficio-costo (ambiental, social y económico) del uso de la
tecnología.

27
 Bioseguridad y Nanobiotecnología

Riesgos Potenciales
• Las NP desafían las leyes de la física de las escalas hasta el momento empleadas por los insumos de
la agricultura. Desconocimiento
• Los nanomateriales podrían tener efectos tóxicos que no son aparentes en los materiales de escalas
superiores, especialmente en ecosistemas agrícolas abiertos (Nel et al., 2006)

Retos
• Atacar el uso excesivo de fertilizantes y pesticidas mediante nuevas alternativas para su entrega.
• Detectar de manera rápida y local la presencia de plagas y patógenos al igual que de los niveles de
nutrientes y pesticidas.
• Desarrollar métodos de remoción agroquímica o degradación para promover la salud del suelo.
• Hacer disponible la tecnología para el uso sencillo y seguro por parte del productor.
• La selección de nanomateriales para aplicación en campo debe incluir criterios de no toxicidad,
biocompatibilidad y biodegradabilidad.

Hechos
• En la actualidad existen productos alimenticios y nutricionales que contiene nano-aditivos, por
ejemplo hierro en bebidas nutricionales; micelas que transportan vitaminas; minerales y
fitoquímicos en aceites y óxido de zinc en los cereales (Hoyt y Mason, 2008).

28
 Contenido

• Definiciones
• Avances
• Bioseguridad y Nanobiotecnología
• Educación y Comunicación
• Consideraciones Finales

29
 Educación y Comunicación de la Nanobiotecnología

• Hay lecciones aprendidas relacionadas con la desinformación de la tecnología.

– Pérdida de oportunidades (económicas, productivas, etc.)
– Debates estériles basados en interpretaciones más que en hechos
• La NBT es poderosa, tiene un potencial enorme y será necesario transmitir de
manera objetiva e imparcial tales potencialidades, sus beneficios, sus posibles
riesgos y la manera de mitigar efectos adversos.
• La educación en este tipo de tecnologías es importante para poder generar masa
crítica de académicos, inversionistas y usuarios de la tecnología.
• Algunos mensajes a comunicar:
– Entrega pesticidas-nanocidas encapsulados para liberación controlada.
– Liberación lenta de fertilizantes asistido por nanomateriales.
– Uso eficiente de biofertilizantes y micronutrientes
– Aplicación eficiente de agroquímicos en campo.
– Mejoramiento genético.
– Nanosensores para detección de pesticidas y patógenos.
– NP para conservación de suelos o remediación.
• La NBT potenciará a la agricultura de precisión con técnicas novedosas, haciendo
uso óptimo de los recursos naturales mediante la aplicación de prácticas agrícolas
tradicionales.

30
 Contenido

• Definiciones
• Avances
• Bioseguridad en Nanobiotecnología
• Educación y Comunicación
• Consideraciones Finales

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 Reflexiones Finales

• La NBT es la convergencia de la biotecnología con la nanotecnología.

• Son múltiples las aplicaciones de la NBT en la agricultura

– Estabilización de biopesticidas. Entrega (aplicación, liberación controlada y uso eficiente) de
agroquímicos (biocidas), fertilizantes y micronutrientes. Efecto positivo en fitoprotección,
nutrición vegetal e impacto ambiental.
– Entrega de material genético para mejoramiento.
– Nanosensores para detección de pesticidas y patógenos.
– NP para conservación de suelos o remediación.

• La bioseguridad tiene un espacio importante para el desarrollo y consoldiación de la

NBT.

• La educación y la comunicación son fundamentales para el desarrollo de la NBT.

• La NBT potenciará a la agricultura de precisión con técnicas novedosas, haciendo uso

óptimo de los recursos naturales mediante la aplicación de prácticas agrícolas
tradicionales.

32
 IICA Sede Central
http://www.iica.int

PIPC
Arturo Barrera
E-mail: Arturo.Barrera@iica.int

AB&B
Pedro Rocha, Ph.D.
E-mail: Pedro.Rocha@iica.int

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