LABORATORIO DE BIORREACTORES ELABORÓ: RAMÍREZ SAÉNZ D., SALGADO ROMAN J. M., RODRIGUEZ SIERRA J. C.

ACTUALIZÓ: JIMÉNEZ CASTILLO R. I.

PRÁCTICA 6. TRANSFERENCIA DE OXÍGENO

INTRODUCCIÓN.
En una fermentación, el objetivo principal de la aireación es proporcionar al microorganismo el oxígeno necesario
para su óptimo desarrollo y/o máxima producción del metabolito de interés. El microorganismo utiliza solamente
el oxígeno molecular disuelto en el medio de cultivo, por lo tanto este debe pasar primeramente de las burbujas
de aire al líquido y posteriormente hasta los microorganismos o las enzimas. Debido al consumo de los
microorganismos y a la poca solubilidad en agua que presenta el oxígeno, este debe ser suministrado
continuamente. Los mecanismos para disolver oxígeno en un líquido pueden clasificarse en tres esquemas básicos
de aireación: difusión, atrapamiento y aspersión.

La cantidad de oxígeno requerido por unidad de masa celular (1/YO2), está en función del microorganismo,
naturaleza del sustrato y de las condiciones fisicoquímicas de propagación. Para obtener su valor, se puede realizar
un balance en el sistema para relacionar la cantidad de oxígeno consumido con la cantidad de masa celular
formada por unidad de tiempo. Del mismo modo es importante cuantificar la velocidad de consumo de oxígeno
para establecer el balance entre éste y la velocidad de transferencia del mismo. Lo anterior se conoce como la ley
de la oferta y la demanda. Como la demanda está en función del sistema y la oferta está en relación a las
condiciones de operación, para alcanzar las mayores productividades en sistemas de fermentación, lo aconsejable
es ajustar la oferta a la demanda y no la demanda a la oferta.

Cálculo de la concentración máxima del gas disuelto en el líquido (𝐶𝐿 ∗).

La solubilidad de un gas poco soluble en un líquido está regido por la ley de Henry, la cual establece que, a
temperatura constante, la concentración del gas disuelto en el líquido será proporcional a la presión parcial del
gas, como se puede ver en la siguiente ecuación:

𝐶𝐿 ∗ = (𝑝𝑂2 /𝐻)

Donde H es la constante de Henry y 𝑝𝑂2 es la presión parcial del gas. La constante de Henry está en función de la
temperatura.

Cálculo de la velocidad específica de consumo de oxígeno (𝑄𝑂2 ) en microorganismos.

La velocidad con la cual un cultivo microbiano consume el oxígeno, se puede relacionar con la concentración de
oxígeno disuelto (OD) como lo muestra la siguiente ecuación:

(𝑄𝑂2max ) ∗ 𝐶𝐿
𝑄𝑂2 =
𝐶𝐿 + 𝐾𝑂2

Donde 𝑄𝑂2max es la velocidad específica de consumo de oxígeno máxima, 𝐶𝐿 es la concentración de oxígeno

disuelto y 𝐾𝑂2 es la constante de afinidad del microorganismo por el oxígeno.
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Cálculo de la velocidad volumétrica de transferencia de oxígeno (𝑉𝑇𝑂) en un sistema gas-líquido

Para sistemas gas-líquido se especifica 𝑉𝑇𝑂 como:

𝑉𝑇𝑂 = 𝐾𝐿 𝐴(𝐶𝐿 ∗ − 𝐶𝐿 )

Donde 𝐾𝐿 𝐴 es el coeficiente global de transferencia de masa del sistema indica la velocidad con que se transfiere
oxigeno del aire al líquido (t-1), 𝐶𝐿 concentración de oxígeno en la interfase gas-líquido y 𝐶𝐿 ∗ la concentración en
el seno del líquido.

OBJETIVOS.
El alumno aprenderá a determinar la velocidad de transferencia de oxígeno en biorreactores en un medio físico
aire-agua.

MATERIALES Y MÉTODOS.

MATERIAL: 2. Tanque de nitrógeno

1. Probeta 1L. comprimido REACTIVOS:
3. Biorreactor tipo tanque 1. Agua destilada.
EQUIPOS: agitado, lambda o airlift, con 2. Buffers de pH
1. Compresor de aire. accesorios.

PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL.
Importante: Todo el procedimiento experimental se realizará bajo la supervisión y asistencia de los profesores.

ACTIVIDADES PREVIAS:
1. Lavar y armar el biorreactor asignado, solo con los sistemas de aireación y control de temperatura y pH.
No es necesario mantener condiciones estériles.
2. Calibrar el electrodo de pH del biorreactor asignado.
3. Adicionar un volumen de agua igual a 60% del volumen total del biorreactor asignado y se ajustan la
temperatura y el pH a un valor de 30°C y 7 ± 0.2, respectivamente.
4. Calibrar el sensor de oxígeno disuelto.

DESARROLLO EXPERIMENTAL:
EFECTO DEL FLUJO DE AIREACIÓN (FA):
1. Ajustar la velocidad de agitación en 300 rpm y 3 Hz, para el tanque agitado y el biorreactor Lambda,
respectivamente.
2. Conectar la línea de gas al aire y ajustar el flujo para 0.36 vvm. o unidades equivalentes.
3. Tomar la lectura del valor de la concentración de OD que marque el equipo al inicio y cada 1 minuto
durante 9 minutos.
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4. Conectar la línea de gas al nitrógeno y ajustar el flujo para 0.36 vvm.
5. Tomar la lectura del valor de la concentración de OD que marque el equipo al inicio y cada 1 minuto hasta
que la concentración de OD se mantenga constante.
6. Volver a conectar la línea de gas al aire y ajustar el flujo para 0.36 vvm.
7. Tomar la lectura del valor de la concentración de OD que marque el equipo al inicio y cada 1 minuto hasta
que la concentración de OD se mantenga constante.
8. Repetir pasos 4 a 7 variando las vvm que se presentan en la tabla 6.1.
9. Determinar el valor real de la concentración de OD y anotar el valor en la tabla 6.1.

EFECTO DE LA VELOCIDAD DE AGITACIÓN (N):

1. Ajustar el flujo de aire para 0.6 vvm y la velocidad de agitación a 250 rpm.
2. Tomar la lectura del valor de la concentración de OD que marque el equipo al inicio y cada 1 minuto
durante 9 minutos.
3. Conectar la línea de gas al nitrógeno y ajustar el flujo para 0.6 vvm.
4. Tomar la lectura del valor de la concentración de OD que marque el equipo al inicio y cada 1 minuto hasta
que la concentración de OD se mantenga constante.
5. Volver a conectar la línea de gas al aire y ajustar el flujo para 0.6 vvm.
6. Tomar la lectura del valor de la concentración de OD que marque el equipo al inicio y cada 1 minutos hasta
que la concentración de OD se mantenga constante.
7. Repetir pasos 4 a 7 variando las velocidades de agitación que se presentan en la tabla 6.2.
8. Determinar el valor real de la concentración de OD y anotar el valor en la tabla 6.2.

Tabla 6.1. Resultados del efecto del flujo de aireación.

VOP=

FLUJO DE AIREACIÓN TIEMPO CONCENTRACIÓN DE OD CONCENTRACIÓN REAL DE

VVM
(L/MIN) (MINUTOS) EN EQUIPO ( ) OD ( )

0.36
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FLUJO DE AIREACIÓN TIEMPO CONCENTRACIÓN DE OD CONCENTRACIÓN REAL DE

VVM
(L/MIN) (MINUTOS) EN EQUIPO ( ) OD ( )

0.60

0.83
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Tabla 6.2. Resultados del efecto de la velocidad de aireación.

VOP= FA=

TIEMPO CONCENTRACIÓN DE OD CONCENTRACIÓN REAL DE

VELOCIDAD DE AGITACIÓN
(MINUTOS) EN EQUIPO ( ) OD ( )

250

450
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TIEMPO CONCENTRACIÓN DE OD CONCENTRACIÓN REAL DE

VELOCIDAD DE AGITACIÓN
(MINUTOS) EN EQUIPO ( ) OD ( )

600
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RESULTADOS Y DISCUSIÓN.
Elabore un informe, el cual contenga los siguientes puntos:
a. Protocolo para la determinación real de la concentración de OD.
b. Gráfica de concentración de OD contra tiempo y estime el KLa de acuerdo a la metodología sugerida en la
teoría. Detalle el procedimiento para el cálculo del KLa.
c. Compare el valor del KLa obtenido contra lo reportado en la literatura y explique sus resultados.

OBSERVACIONES
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REFERENCIAS.

1. Aiba, S. y Humprey A.E. Biochemical Engineering. Academic Press. EUA. 1973, 434 págs.
2. Atkinson, B. Reactores Bioquímicos. Reverté. Barcelona. 1986, 296 págs.
3. Bailey, J.E. y Ollis, D. F. Biochemical Engineering Fundamentals. McGraw-Hill. Singapur.1990, 962 págs.
4. Doran, P. M. Bioprocess Engineering Principles . Academic Press. EUA. 1995, 439 págs.
5. Dunn, I.J. Variable-volume continuous cultivation. Biotechnology and Bioengineering. 1975. Vol. XVII, págs.
1805-1822.
6. Oldshue, J.Y. Fermentation mixing scale-up techniques. Biotechnology and Bioengineering. 1966. Vol. VIII,
págs. 3-24.
7. Stanbury, P.F. et. al. Principles of Fermentation Technology. Butterworth-Heinemann. EUA. 1999, 376 págs.
8. Taguchi, H. Power requirement in non-newtonian fermentation broth. Biotechnology and Bioengineering.
1966. Vol. VIII, págs. 43-54
9. Wang, D. Fermentation and Enzyme Technology. John Wiley & Sons. Nueva York, EUA. 1979, 384 págs.