Anda di halaman 1dari 6

judul

teori
tujuan
metode
hasil(data)
diskusi
Imobilisasi katalase melalui adsorpsi ke alam
dan karbon aktif diubah diperoleh dari walnut di
berbagai metode

Dalam pekerjaan ini, imobilisasi katalase menjadi karbon aktif karbon aktif alami dan
dimodifikasi
oleh asam klorida dilakukan. Pada bagian eksperimental, efek pH, kekuatan ionik dan
suhu reaksi dipilih sebagai parameter, dengan percobaan yang dilakukan dalam sistem batch.
Untuk
optimasi prosedur imobilisasi, nilai-nilai parameter kinetik dievaluasi. Hal ini diamati
bahwa stabilitas penyimpanan dan operasional enzim meningkat dengan imobilisasi. Hasil
diperoleh dari percobaan menunjukkan bahwa karbon aktif merupakan dukungan yang
berharga bagi adsorpsi
enzim.
PENDAHULUAN
Ada banyak keuntungan dari menggunakan enzim amobil
dan beberapa dari mereka memiliki relevansi khusus di
bidang teknologi pangan. Di kawasan industri, kontrol
pengeluaran harus kaku karena tambah rendah
nilai produk (Guisan et al., 1993). kedua organik
dan anorganik bahan seperti kaca berpori, gel silika,
hydro gel, dan selulosa yang digunakan untuk persiapan amobil
enzim. Imobilisasi enzim melalui
metode fisik tetap paling umum digunakan (Baileey
dan Ollis, 1986; Kennedy et al, 1990)..
Enzim imobilisasi oleh fisik adsorpsi memiliki
Manfaat dari penerapan yang luas, dan dapat memberikan praktis
kenyamanan regenerasi sederhana dukungan oleh
mengeluarkan enzim dinonaktifkan dan reload mendukung
dengan batch segar katalis aktif (Khan et al., 2006).
Prosedur yang berbeda telah dikembangkan untuk enzim
imobilisasi, ini termasuk untuk bahan adsorpsi larut,
jebakan dalam matriks polimer, enkapsulasi,
silang dengan pereaksi bifunctional, atau kovalen menghubungkan
ke operator larut. Di antaranya, adsorpsi ke
bahan pendukung padat adalah yang paling umum, paling mudah untuk
melakukan dan protokol tertua imobilisasi fisik
* Sesuai penulis. E-mail: aycangurbor@yahoo.com.
metode. Yang paling penting keuntungan dari metode ini
adalah stabilitas aktivitas enzim setelah imobilisasi
dan penggunaan kembali dari enzim dan bahan pendukung untuk berbagai
tujuan karena reversibilitas metode
(Akgol et al., 2005).
Tujuan dari pekerjaan ini adalah untuk melumpuhkan catlase dengan
secara signifikan lebih tinggi aktivitas, lebih stabil dari pada yang lain
studi sebelumnya (Alkan et al., 2005), dan untuk menentukan optimal
kondisi proses imobilisasi seperti pH,
ionik kekuatan dan suhu reaksi.

BAHAN DAN METODE


bahan
Katalase (CAT) (hidrogen peroksida oxidoreductase; EC.1.11.1.6),
dari hati sapi (250.000 U mg-1), diperoleh dari Sigma (St
Louis, MO, USA), dan karbon aktif yang diperoleh dari wilayah
Eskisehir di Turki. Semua bahan kimia dan pelarut lainnya yang digunakan dalam
penelitian adalah purhased Fom Merck AG (Darmstadt, Jerman) dan
adalah kelas analitis. Walnut yang digunakan dalam penelitian ini diperoleh
dari wilayah Bahcesaray (Van-Turki).

Modifikasi permukaan karbon aktif dengan asam klorida


Untuk mempersiapkan asam karbon aktif, 50 g karbon aktif alami dicampur
dengan 1 M 250 ml HCI dalam mekanis pengadukan selama 1 jam dan direbus
selama 5 h. Semua sampel karbon aktif dikeringkan dalam oven pada 80 ° C untuk
12 jam, tanah dan melewati saringan 270 mesh.
Imobilisasi katalase dengan adsorpsi
Katalase adsorpsi pada karbon aktif alami dan karbon aktif
dimodifikasi oleh asam klorida dilakukan pada pH yang berbeda dalam
penyangga fosfat (pH 4,0-9,0). Konsentrasi awal katalase adalah 0,2 mg cm-3 dalam buffer yang
sesuai. Adsorpsi
Percobaan dilakukan pada temperatur yang berbeda (20 - 70 ° C)
untuk karbon aktif alami dan dimodifikasi masing-masing, dengan terus-menerus
diaduk selama 1 jam Setelah periode ini, katalase bergerak membran
telah dihapus dari larutan enzim, dicuci dengan buffer yang sama 4
dan disimpan pada suhu 4 ° C dalam bufer segar. kali
Dalam rangka untuk menentukan kapasitas adsorpsi dari alam dan
dimodifikasi karbon aktif, jumlah katalase dalam medium itu
dibuat untuk 0,01 g. Pengujian adsorpsi dilakukan pada waktu yang berbeda
pH, suhu dan kekuatan ion. Jumlah aktivitas enzim teradsorpsi pada tanah liat itu
dihitung sebagai perbedaan antara nilai-nilai yang diperoleh dalam
persiapan asli dan supernatan (Alkan et al., 2005).
Protein estimasi
Jumlah protein dalam persiapan enzim kristal dan dalam
solusi mencuci ditentukan dengan metode Bradford, menggunakan
sebuah Shimadzu (Model 1601) spektrofotometer. Sebuah kurva kalibrasi
dibangun dengan serum bovin albumin (BSA) solusi digunakan
sebagai standar (Bradford, 1976).
Kegiatan uji yang bebas dan amobil katalase
Aktivitas katalase ditentukan secara spektrofotometri dengan langsung
pengukuran penurunan absorbansi hidrogen
peroksida pada 240 nm karena dekomposisi oleh enzim.
Solusi hidrogen peroksida (50 mM) digunakan untuk menentukan
aktivitas enzim baik bebas dan melumpuhkan. A 5 cm3 reaksi
Campuran itu preincubated pada 30 ° C selama 60 menit dan reaksi
mulai dengan menambahkan 5 ml larutan buffer. Tingkat perubahan dalam
adsorbance (A240 min-1?) dihitung dari bagian kapal awal
dengan bantuan kurva kalibrasi (yang adsorbance hidrogen
peroksida solusi dari berbagai konsentrasi (50 mM)) pada 240 nm.
Catalases amobil pada karbon aktif alami dan dimodifikasi
diperkenalkan ke campuran assay untuk initate reaksi di atas. Setelah
60 menit, reaksi dihentikan dengan menghilangkan karbon aktif
dari campuran reaksi. Absorbansi campuran reaksi
ditentukan dan aktifitas katalase bergerak dihitung.
Uji Aktivitas ini dilakukan selama pH 4,0-9,0
dan suhu berkisar dari 20 - 70 ° C untuk menentukan pH dan suhu
profil untuk enzim bebas dan amobil. Efeknya
konsentrasi substrat diuji pada konsentrasi 50 mM H2O2.
Hasil pH dan suhu yang disajikan dalam
normalisasi bentuk dengan nilai tertinggi dari setiap set yang ditugaskan
nilai 100 kegiatan%.
Stabilitas amobil katalase selama menggunakan kembali berulang
Retensi aktivitas catalse immobilisasi telah diuji dalam batch
Sistem seperti diuraikan dalam bagian 2.5. Setelah setiap periode reaksi,
enzim aktif disk karbon telah dihapus dari media reaksi
dan dicuci dengan buffer fosfat (0,05 M, pH 7) pada 30 ° C selama 15
min untuk menghilangkan substrat sisa pada disk membran. Mereka
itu kembali ke dalam medium reaksi segar mengandung 50 mM
H2O2.
HASIL DAN PEMBAHASAN
Dalam penelitian kami, enzim amobil memberi nilai Km dari
7.1 mM dibandingkan dengan 3,57 mM untuk enzim bebas.
Nilai Vmaks ditemukan 39,40 IU / ml / menit dan 37,03
IU / ml / menit untuk enzim bebas, masing-masing. Para Vmaks
nilai amobil katalase ditemukan lebih rendah dari itu
bebas katalase. Hilangnya aktivitas dapat dikaitkan dengan
interaksi enzim dan kelompok-kelompok fungsional pada
permukaan manik-manik atau area yang luas kontak antara
enzim dan dukungan, menyebabkan deformasi besar enzimatik
konformasi (Çetinus dan Öztop, 2000;. Li et al,
2004). Perbedaan nilai Km antara bebas dan
lainnya amobil katalase dapat attributted ke dalam
Aksesibilitas batas molekul substrat untuk aktif
situs dari amobil katalase. Penurunan Vmaks
nilai, hasil dari imobilisasi, dianggap terkait
dengan nilai Km, karena semakin rendah nilai Km,
semakin besar afinitas antara enzim dan substrat
(Demir et al, 2008;. Akgöl et al, 2001.).
Itu ditemukan sebagai Km 7,1 mM, Vmaks 39,40 mmol / min
mg protein untuk karbon aktif alami dan; Km 3,84 mM,
Vmaks 36,80 mmol / menit / mg protein untuk asam-aktif karbon
im-dimobilisasi katalase. Bahwa hasil yang berbeda ditemukan
dari temuan lain (Çetinus dan Öztop, 2003,
2000a, b; Li et al, 2004;. Gupta dan Ravikumar, 2000).
Mirip hasil melibatkan perubahan dalam Km dan nilai-nilai Vmaks
setelah imobilisasi enzim telah dilaporkan dalam
literatur (Çetinus dan Öztop, 2000; Li et al, 2004;. Gupta
dan Ravikumar, 2000).
Kegiatan PPO dari tanah liat amobil ditentukan,
dan kemudian efek dari suhu reaksi yang optimum,
thermostability, pH, efek optimal ionik dan parameter kinetik
diselidiki (Demir et al., 2008).
Pengaruh temperatur terhadap aktivitas katalitik
Pada penentuan pengaruh suhu pada bebas,
alami aktif karbon dan karbon aktif dimodifikasi oleh asam,
aktivitas enzim diselidiki dalam buffer fosfat dalam
Kisaran suhu 20 - 70 ° C. Hasil penelitian menunjukkan bahwa
suhu optimum aktivitas tertinggi
katalase 30 ° C untuk semua (Gambar 1). Suhu optimum
jamur amobil katalase diberikan sebagai
40 ° C dan aktivitas ditemukan mirip dengan temuan kami
(Estrada dkk, 1991.). Suhu optimum reaksi
untuk enzim bebas telah ditemukan untuk menjadi 40 ° C, dan untuk
enzim amobil, 45 ° C (Yakup Arica, 2000). Para
suhu optimum immobilisasi katalase diberikan
sebagai 35 ° C dan aktivitas ditemukan mirip dengan temuan kami.
Ini adalah suhu optimum enzim bebas diberikan dalam
sastra dan enzim buku pedoman. Jadi, imobilisasi
Metode tidak menunjukkan efek pada suhu optimum
enzim (Yildiz et al., 2004). Maksimum yang
aktivitas enzim bebas dan amobil telah ditemukan
pada sekitar 25 ° C dalam literatur (Savran et al., 2006). Dalam literatur
suhu optimum ditemukan pada sekitar 35 ° C untuk bebas
dan amobil katalase menunjukkan bahwa hilangnya
Aktivitas katalase amobil lebih rendah daripada
gratis katalase untuk suhu tinggi. Dukungan memiliki
melindungi efek pada suhu tinggi di mana
deaktivasi enzim berlangsung (Akgöl et al., 2001). Ini
tampaknya bahwa karbon aktif dapat melindungi enzim
terhadap denaturasi pada suhu tinggi.
Pengaruh pH terhadap aktivitas katalitik
Untuk penentuan pengaruh pH pada enzim
bebas, enzim terimobilisasi oleh karbon aktif alami dan
enzim terimobilisasi dengan karbon aktif dimodifikasi oleh asam,
buffer fosfat yang digunakan dalam kisaran pH 4 - 9.
Nilai pH optimum untuk enzim bebas menengah,
amobil oleh karbon aktif alami, bergerak dengan
pencampuran asam karbon aktif yang diperoleh sebagai 7, 7 dan 6,
masing-masing. PH optimum hati sapi amobil
katalase diberikan sebagai 7 dan aktivitas yang ditemukan mirip
temuan kami (Yildiz et al., 2004). enzim amobil
kurang sensitif terhadap perubahan pH pada pH, 7 dan sedikit
lebih sensitif pada pH 7 dari gratis katalase. Dalam penelitian kami,
pengaruh pH terhadap aktivitas bebas dan amobil
katalase persiapan untuk degradasi hidrogen peroksida
telah dipelajari di berbagai nilai pH pada 35 ° C. para
Reaksi dilakukan dalam buffer fosfat dan
hasilnya disajikan pada Gambar 2. Kedua enzim menunjukkan sebuah 7,0 pH
optimum enzim amobil tetapi memiliki
pH yang lebih luas berbagai aktivitas tinggi (Çetinus dan Öztop,
2003). Stabilitas amobil katalase pada pH rendah
dapat dikaitkan dengan kelompok amino / imina, karena
mereka dapat mengikat proton dalam matriks, mengakibatkan penurunan
dari konsentrasi lokal dari proton dekat enzim
molekul (Gupta dan Ravikumar, 2000). hasil yang diperoleh
dari studi menunjukkan bahwa sistem buffer fosfat
memberikan hasil yang paling cocok untuk kedua gratis dan semua amobil
katalase.
Pengaruh kekuatan ion pada aktivitas katalitik
Pengaruh kekuatan ion pada pencampuran katalase amobil asam karbon aktif,
katalase-alami karbon aktif dan bebas diselidiki. Langsung imobilisasi enzim pada
celite 545 dari amonium sulfat protein difraksinasi
kentang telah ditunjukkan (Kennedy et al, 1990.). beberapa
peneliti telah menunjukkan imobilisasi
kentang enzim melalui adsorpsi pada kitin, chitosani dan
545 celite mendukung menghasilkan stabilisasi enzim
aktivitas terhadap air-larut pelarut organik .hasil
menunjukkan bahwa aktivitas tertinggi bebas, bergerak dengan
alami aktif karbon dan bergerak dengan mencampur asam-aktif
karbon berada di 0,20 M (Gambar 3).
Pengaruh waktu
Aktifitas katalase untuk ezyme amobil menemukan bahwa 76,8%
aktivitas enzim dipertahankan selama penyimpanan di
+20 ° C selama 60 hari. Hasil penelitian menunjukkan bahwa amobil
enzim lebih stabil daripada enzim bebas (Gambar 4). Dalam karya lain, bebas dan
amobil catalases telah
disimpan dalam buffer fosfat (50 mM, pH 7,0) pada suhu 4 ° C dan
pengukuran aktivitas yang dilakukan selama periode
100 hari. Gratis katalase kehilangan sekitar 50% dari kegiatannya
dalam waktu 20 - 25 hari dan kehilangan aktivitas yang tersisa di dalam
70 hari, sedangkan Ch-CAT dan CBCh-CAT kehilangan sekitar
50% dari aktivitas mereka dalam waktu 60 dan 70 hari, masing-masing.
Kedua catalases bergerak dilindungi 50% dari mereka
aktivitas setelah 70 hari. Diamati bahwa diamobilisasi
katalase dipertahankan sekitar 50% aktivitas setelah 7 - 8
siklus. Ditemukan bahwa Ch-CAT dan CB-Ch-CAT telah
operasional yang lebih tinggi stabilitas (Çetinus dan Öztop, 2000). Dalam
pekerjaan, meskipun enzim bebas dipertahankan sekitar 50% dari
Kegiatan untuk 18 hari, bergerak katalase yang
basah disimpan tetap sekitar 50% dari tingkat kegiatannya selama 25
hari, dan yang disimpan kering tetap sekitar 50% dari
tingkat aktivitas selama 5 hari (Çetinus dan Öztop, 2000). Ini
Hasil penelitian menunjukkan bahwa thermostability dari amobil
katalase menjadi signifikan lebih tinggi daripada bebas
katalase pada suhu yang lebih tinggi

Kesimpulan
Perkembangan mendukung merupakan salah satu serbaguna
aspek yang perlu mendapatkan perhatian lebih di antara para pekerja
di bidang imobilisasi enzim. Sifat
carrier yang dipilih untuk metode imobilisasi pengaruh.
Akibatnya, data eksperimen yang diperoleh dari
penelitian ini mengungkapkan bahwa adsorpsi fisik cocok
untuk lampiran enzim menjadi karbon aktif sebagai
dukungan. Adsorpsi enzim pada karbon aktif dapat
mengurangi sejumlah besar aktivitas enzimatik. Amobil
catalases menunjukkan stabilitas penyimpanan yang lebih baik dan juga dapat
berguna untuk aplikasi dukungan. Karena ketersediaannya,
karbon aktif dapat diganti untuk mahal lainnya
adsorpsi bahan. Morever, dari aktifitas katalase
ditemukan bahwa 76,80% dari aktivitas enzim
dipertahankan selama penyimpanan pada 20 ° C selama 60 hari. Hasil
menunjukkan bahwa aktivitas katalase tertinggi bebas bergerak
oleh tanah liat alami dan diimobilisasi dengan tanah liat dimodifikasi oleh
ditentukan sebagai asam 0,20 M. Hasil penelitian menunjukkan
bahwa enzim amobil lebih stabil daripada enzim bebas.