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Universidad de Oriente

Núcleo Bolívar – Virología

Universidad De Oriente
Núcleo Bolívar
Escuela de ciencias de la salud
“Dr. FRANCISCO BATTISTINI CASALTA”
Departamento de Bioanálisis
Virología

Tema Nº1: Diagnostico Virológico.

Profesora: Integrantes del grupo:

Zulinan Vasquez Br. Aragón María CI:25.901.361

Br. Arnias Uriel CI:23.986.987

Br. Carrisales Jhoselin CI:26.384.187

Br. Sánchez Milagro CI:26.829336

Br. Vahlis Petter CI:25.933.187

Ciudad Bolivar, octubre 2018


Universidad de Oriente
Núcleo Bolívar – Virología

Western Blot

Es una prueba para el estudio de proteínas, descrito por primera vez por Towbin, que
permite la detección de una sola proteína dentro de una muestra biológica.

La especificidad se logra mediante la utilización de un anticuerpo que reconoce y se une


a un epítope único de la proteína de interés. Esta puede estimar el tamaño de una
proteína, confirmar la presencia de modificaciones post-traduccionales y comparar
cuantitativamente los niveles de proteína entre muestras.
a) Preparación de la muestra: Extracción de las proteínas de las muestras biológicas
mediante disrupción mecánica o química.
b) Electroforesis en gel de Acrilamida: Las proteínas en el extracto se separan de acuerdo a
su tamaño mediante electroforesis. Se prepara un gel de acrilami-da, bisacrilamida. El
dodecilsulfato de sodio (SDS) añadido al gel se une a las proteínas y confiere, de forma
proporcional a la masa de cada proteína, una carga negativa a cada una de ellas.
c) Transferencia electroforética a una membrana: Las proteínas son transferidas
electroforéticamente a un soporte rígido o membrana, dónde quedan inmovilizadas.
d) Hibridación del Anticuerpo: La membrana con las proteínas inmovilizadas debe tratar-se
para bloquear las zonas con ausencia de proteínas y así evitar la unión no específica de
los anticuerpos. A continuación se incuba con un anticuerpo primario dirigido contra el
epítopo específico de la proteína diana. Tras varios lavados de la membrana, se adiciona
un anti-cuerpo secundario marcado que se unirá de forma específica al anticuerpo
primario, proporcionando una forma de detección.
e) Detección de las Bandas: Después de un lavado de la membrana para eliminar el
anticuerpo no unido, se pro-cede a detectar la localización de la banda en la membrana.
Para la detección de quimioluminiscencia, se utiliza un anticuerpo secundario conjugado
con el enzima peroxidasa (HRP); la adición de un sustrato de HRP provoca una reacción
enzimática que da como resultado final la emisión de luz. Dicha luz pue-de ser detectada
en una película de rayos X, o de forma digital, mediante un sistema de captación de
imágenes. La detección de fluorescencia se basa en la captación de luz emitid por
sustancias fluoróforas conjugadas con el anticuerpo secundario.

ELISA (Enzyme-Linked-Immunosorbent Assay)

Los métodos ELISA son los que contienen una mezcla de péptidos sintéticos o
recombinantes, y en algunos casos una combinación de ambos, frente a los que se miden
los anticuerpos IgG que tiene la muestra. Cuando se indica que un suero es reactivo con
esta metodología se está afirmando que tiene anticuerpos frente a alguno o todos los
antígenos empleados en la prueba, pero no sabemos frente a cuál o cuáles.

 La molécula de captura es fijada a una fase solida (tubos, microplacas, etc.) y con la
incubación de la muestra (suero o plasma) a temperatura y tiempos definidos,
formando así el complejo Ag-Ac, eliminándose los excedentes de reactivos y muestra
que no intervienen en la reacción mediante lavados con soluciones tamponadas.
 La detección del Ag, o el Ac, o el complejo inmune Ag-Ac es colorimétrica, para lo cual
se usa un sustrato cromógeno, que es desdoblado por la enzima de marcación. Luego
se lee la absorbancia a una determinada longitud de onda, que puede transformar el
resultado de un valor cualitativo a uno cuantitativo.
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Núcleo Bolívar – Virología

Hemaglutinación

Las Hemaglutininas son glicoproteínas capaces de unirse a receptores específicos en la


membrana de glóbulos rojos de diferentes especies animales pueden ponerse en
evidencia en el sobrenadante de los cultivos, poniendo en evidencia la infección de esas
células a través de la unión de los glóbulos rojos a la superficie celular. Propiedad
descubierta en 1941 por Hirst McCLelland, para el virus de la influenza, es utilizada para
cuantificar virus.

Es un método simple, de un solo paso, que implementa suero y que a menudo se usa
para la detección de antígenos virales en muestras clínicas. Estos dependen de la fijación
inicial de anticuerpos antivirales específicos sobre eritrocitos. Estas pruebas en general se
complementan o se confirman por medio de otros ensayos debido al elevado porcentaje
de reacciones inespecíficas.

Técnica Utilidad Diagnostico


Western Blot  Permite la detección  Orthomyxovirus.
de una sola proteína  Adenovirus.
dentro de una  Rotavirus.
muestra biológica. • VIH.
 Estima el tamaño de  Enfermedad de
una proteína. Lyme.
 Confirmar la  Encefalopatía
presencia de Espongiforme
modificaciones post- Bovina. (Enfermedad
traduccionales. de las vacas locas)

ELISA (Enzyme-Linked-  Son económicos.  Hepadnavirus.


Immunosorbent Assay)  Poseen gran • VHA.
estabilidad. • VHB.
 Poseen gran • VHC.
versatilidad porque  Retrovirus.
permiten desarrollar • HIV.
diferentes formatos  Hantavirus.
de acuerdo a la  Herpesvirus.
molécula que se (Citomegalovirus
desea poner en Humano)
evidencia.  Togavirus. (Rubeola)
 Virus Epstein-Barr.
Hemaglutinación  Técnica rápida y  Grupos sanguíneos.
barata.  Enfermedad de
 Tiene buena Chagas.
sensibilidad y  VDRL. (Venereal
especificidad cuando Dysease Research
es utilizada junto con Laboratory)
otras técnicas  Adenovirus.
serológicas.  Rotavirus. (En heces
el más importante,
mostrando una
buena sensibilidad
cuando se lo
compara con el EIA)