FÓLICO, ÁCIDO [NOTA: emplear materiales de vidrio

inactínico].
H Sistema cromatográfico, Solución de ácido
N N
H2N
fosfórico 3 N, Solución de hidróxido de amonio 6 N,
N
H
N
Fase móvil, Solución del estándar interno, Solución
N
H
O
madre del estándar, Preparación estándar y
O N
OH Aptitud del sistema - Proceder según se indica en
O
H OH Valoración.
O
Solución muestra - Emplear la Solución madre
de la muestra preparada según se indica en
C19H19N7O6 PM: 441,4 59-30-3 Valoración.
Procedimiento - Inyectar en el cromatógrafo
Definición - Ácido Fólico es Ácido N-[4-
aproximadamente 10 µl de la Solución muestra.
[[(2-amino-1,4-dihidro-6-pteridinil)metil]amino]be
Desarrollar los cromatogramas durante al menos
nzoil]-L-glutámico. Debe contener no menos de
dos veces el tiempo de retención del ácido fólico.
97,0 por ciento y no más de 102,0 por ciento de
Registrar los cromatogramas y medir las respuestas
C19H19N7O6, calculado sobre la sustancia anhidra y
de todos los picos. La suma de las respuestas de
debe cumplir con las siguientes especificaciones.
todos los picos, excepto el correspondiente al ácido
Caracteres generales - Polvo cristalino fólico, no debe ser mayor de 2,0 %.
amarillo, amarillo pardo o amarillo anaranjado,
Impurezas orgánicas volátiles <520>
inodoro. Soluble en ácido clorhídrico 3 N caliente,
Método II.
en ácido sulfúrico 2 N caliente y en ácido
clorhídrico da soluciones de color amarillo pálido. VALORACIÓN
Fácilmente soluble en soluciones diluidas de [NOTA: emplear materiales de vidrio
hidróxidos y carbonatos alcalinos; muy poco inactínico].
soluble en agua; insoluble en acetona, alcohol, Sistema cromatográfico - Emplear un equipo
cloroformo y éter. para cromatografía de líquidos con un detector
Sustancia de referencia - Ácido Fólico SR-FA. ultravioleta ajustado a 280 nm y una columna de
25 cm × 4,0 mm con fase estacionaria constituida
CONSERVACIÓN
por octadecilsilano químicamente unido a partículas
En envases inactínicos bien cerrados. porosas de sílice de 3 a 10 µm de diámetro. El
ENSAYOS caudal debe ser aproximadamente 1,2 ml por
minuto.
Identificación Solución de ácido fosfórico 3 N - Disolver 9,8 g
A - Absorción ultravioleta <470> de ácido fosfórico en 100 ml de agua.
Solvente: solución de hidróxido de sodio Solución de hidróxido de amonio 6 N - Diluir
1 en 250. 40 ml de hidróxido de amonio a 100 ml con agua.
Concentración: 10 µg por ml. Fase móvil - Transferir 2,0 g de fosfato
Relación de absorbancias: A256 / A365 entre monobásico de potasio a un matraz aforado de
2,80 y 3,00. 1 litro y disolver en aproximadamente 650 ml de
B - Disolver 250 mg de Ácido Fólico en agua. Agregar 15,0 ml de solución de hidróxido de
hidróxido de sodio 0,1 N y diluir a 25 ml con el tetrabutilamonio 0,5 M en metanol, 7,0 ml de
mismo solvente. La rotación específica (ver 170. Solución de ácido fosfórico 3 N y 270 ml de
Determinación de la rotación óptica) debe ser metanol. Enfriar a temperatura ambiente y ajustar a
aproximadamente + 20°, calculada con respecto a la pH 5,0 con Solución de ácido fosfórico 3 N o
sustancia anhidra. Solución de hidróxido de amonio 6 N. Completar a
Determinación de agua <120> volumen con agua, mezclar y filtrar. [NOTA:
Titulación volumétrica directa. Agitar el controlar el pH antes de usar.]
metanol antes, durante el agregado de la muestra y Solución del estándar interno - Disolver
en la determinación. No más de 8,5 %. aproximadamente 50 mg de metilparabeno en
1,0 ml de metanol, diluir a 25,0 ml con Fase móvil
Determinación del residuo de ignición <270> y mezclar.
No más de 0,3 %. Solución madre del estándar - Preparar una
Pureza cromatográfica solución de Ácido Fólico SR-FA en Fase móvil de
aproximadamente 1 mg por ml. [NOTA: para
disolver el Ácido Fólico emplear 1 ml de hidróxido
de amonio al 10 % por cada 100 ml de la Solución
madre del estándar.]
Preparación estándar - Transferir 4,0 ml de la
Solución madre del estándar a un matraz aforado de
50 ml, agregar 4,0 ml de Solución del estándar
interno, completar a volumen con Fase móvil y
mezclar.
Solución madre de la muestra - Pesar
exactamente alrededor de 100 mg de Ácido Fólico,
transferir a un matraz aforado de 100 ml y agregar
aproximadamente 40 ml de Fase móvil y 1 ml de
hidróxido de amonio al 10 %. Completar a
volumen con Fase móvil y mezclar.
Preparación muestra - Transferir 4,0 ml de la
Solución madre de la muestra a un matraz aforado
de 50 ml, agregar 4,0 ml de la Solución del
estándar interno, completar a volumen con Fase
móvil y mezclar.
Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
Cromatografiar la Preparación estándar y registrar
los cromatogramas según se indica en
Procedimiento: la resolución R entre los picos de
metilparabeno y ácido fólico no debe ser menor de
3,6; la desviación estándar relativa para inyecciones
repetidas no debe ser mayor de 2,0 %.
Procedimiento - Inyectar por separado en el
cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
10 µl) de la Preparación estándar y la Preparación
muestra, registrar los cromatogramas y medir las
respuestas de los picos principales. Calcular la
cantidad de C19H19N7O6 en la porción de Ácido
Fólico en ensayo.