Ingeniería en Biotecnología de los RR.

NN
Biotecnología Industrial
Docente: Doc. María Elena Maldonado
Semestre: Octavo G1

Autores G2: Cueva Melissa, López Emilio, Palacios Ana, Sierra Antonela

Resumen

1. TÍTULO: AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS CON CAPACIDAD

DE PRODUCIR ANTIBIÓTICOS
2. INTRODUCCION
Los antibióticos producidos por microorganismos (o antibióticos naturales)
proceden de productos del metabolismo secundario de determinados hongos y
bacterias. Son compuestos capaces de inhibir los procesos vitales de otros
microorganismos, impidiendo su desarrollo y reproducción, y llevándolos por lo
tanto a la muerte. Por ejemplo; los hongos del género Penicillium o las bacterias
del género Streptomyces producen antibióticos naturales en su metabolismo
secundario. El metabolismo secundario comienza cuando el microorganismo
detiene su crecimiento por alguna razón (por ejemplo, por falta de alimento y
nutrientes), y los intermediarios metabólicos o productos finales comienzan a
acumularse dentro de la célula. Estos intermediarios y productos finales pueden
resultar tóxicos, y por eso la célula los convierte en productos menos tóxicos,
como los antibióticos. La producción de antibióticos naturales no afecta al
microorganismo productor, sino que su efecto permite la supervivencia de dicho
organismo con ciertas ventajas sobre sus competidores. (Koneman, 2008)
Para conocer qué antibióticos son los que inhiben el crecimiento de unos
determinados organismos se hacen una serie de ensayos, como por ejemplo los
antibiogramas. Un antibiograma es una prueba microbiológica que se realiza con
el fin de determinar la sensibilidad de una colonia bacteriana a un antibiótico.
(Lancini, 1995)
Los antibióticos se desarrollan ante la necesidad de controlar las enfermedades
infecciosas.
Concretamente las enfermedades causadas por bacterias, por lo que también se
les denomina “antimicrobianos”. Los antibióticos se caracterizan por actuar sobre
dichas células bacterianas (células procariotas), distintas a las células del
hombre (Células eucariotas), a las que se pretende eliminar en su totalidad.
(Leveau, 2010)
La penicilina fue por tanto el primer antibiótico que se descubrió, y demostró ser
tan eficaz para combatir infecciones anteriormente mortales que los científicos le
dieron el sobrenombre del “medicamento milagroso”. El descubrimiento de
Fleming desencadenó una revolución sanitaria sin precedentes en los anales de
las ciencias médicas. Desde entonces la innovación ha sido constante, y en los
últimos años se han creado moléculas derivadas de varios de los antibióticos ya
existentes, mejorando su efectividad y su selectividad, a la vez que se han
desarrollado nuevos medicamentos y se han mejorado las pautas y vías de
administración y el perfil de tolerabilidad de los antibióticos disponibles.
(Martínez, 2013)

El antibiótico vía oral está en la actualidad disponible para el tratamiento de

enfermedades infecciosas graves como son la neumonía adquirida en la
comunidad, la osteomielitis (infección del hueso), la pielonefritis (infección del
riñón), las infecciones por micobacterias y las enfermedades de transmisión
sexual. Las presentaciones de los antibióticos en solución (jarabe) permiten
calcular con exactitud las dosis pediátricas que habitualmente toman en
consideración el peso del niño, facilitando así su administración desde el
momento del nacimiento. (Martínez, 2013)

3. MATERIALES Y MÉTODOS
MATERIALES PARA CULTIVOS
MATERIALES REACTIVOS Microorganismos
Erlen meyers Agua destilada Bacillus subtilis
Mechero Agar Pseudomona
Cajas petri cepas bacterianas
del suelo volcánico
Microondas

Autoclave

Balanza analítica
Espátulas

Azas

TINCIÓN GRAM
Materiales Reactivos
Porta objetos Cristal violeta

Cubre objetos Solución de

lugol
Soporte Alcohol
acetona
Asa Safranina
bacteriológica
Mechero Aceite de
inmersión
Microscopio Agua
destilada

MÉTODOS
 Realizar un caldo nutritivo con medio para Bacillus subtilis, Pseudomona
 En 1L de agua destilada colocar el medio según las indicaciones para
hacer el caldo nutritivo para B. subtilis y Pseudomonas
 Calentar en microondas
 Autoclavar el medio
 Dispensar los microorganismos en los caldos nutritivos
 En 1L de agua destilada colocar el medio para preparar el agar
 Calentar en microondas
 Autoclavar el medio
 Dispensar el medio en las cajas Petri
 Dejar solidificar
 Prendido el mechero sembrar en una caja Bacilllus subtilis usando el asa
 Sembrar en una caja Petri Pseudomonas
  Dejar incubar
 En las cajas Petri con B.subtilis y Pseudomonas separar en 4 partes y
sembrar los microorganismos aislados de las cepas bacterianas del suelo
volcánico.
 Dejar incubar
 Observar la actividad antibiótica mediante alos de inhibición en cada una
de las cajas
TINCIÓN GRAM
 Tomar una muestra del medio con el asa y colocar en el porta objetos
 Dejar secar a temperatura ambiente o fijarlas utilizando un mechero.
 Agregar azul violeta (cristal violeta o violeta de genciana) y esperar un
minuto.
 Enjuagar con agua no directamente sobre la muestra
 Agregar lugol y esperar un minuto aproximadamente.
 Agregar alcohol acetona y esperar entre 5 y 30 segundos según la
concentración del reactivo (parte crítica de la coloración). (las gram - se
decoloran, las gram + no)
 Enjuagar con agua.
 Tinción de contraste agregando safranina y esperar un minuto. Este tinte
dejará de color rosado-rojizo las bacterias gram negativas.
 Lavar levemente con agua.
 Dejar secar la placa y colocar un cubre objetos.
 Observar al microscopio en lente 100 x usando aceite de inmersión.

RESÚMEN
Los antibióticos producidos por microorganismos proceden de productos del
metabolismo secundario de determinados hongos y bacterias en esta práctica
queremos comprobar la producción de antibióticos por bacterias aisladas de
suelos volcánicos para esto se realizó un caldo nutritivo para las cepas Bacillus
subtilis y Pseudomona con el objetivo de sembrar en cajas Petri y hacerlas crecer
para comprobar la actividad antimicrobiana de 4 cepas que fueron aisladas de
suelo volcánico, se colocó una marca para poder identificar en que parte de la
caja se sembraba las cepas del suelo volcánico enumerandoles del 1, una vez
que se dejaron incubar se observaron alos de inhibición causadas por la cepa 1
por lo tanto esta cepa es la que tuvo mayor producción de antibióticos, es
necesario e importante conocer el tipo de bacteria con la cual estamos
trabajando para poder seguir estudiándola y poder clasificarle el primer paso
para clasificar bacterias es mediante tinción gram el cual se realizó para la cepa
con actividad antibiótica dando como resultado una bacteria gram negativa
después de haber realizado la tinción gram y la observación al microscopio con
lente 100X

4. RESULTADOS
Gráfico Explicación
Se observa en Bacillus subtilis un halo
de inhibición alrededor del antibiótico
sembrado, lo que nos indica que el
antibiótico en el puesto 1 actuó sobre
nuestro microorganismo.

En el caso de Pseudomonas, se
observa una inhibición total del
microorganismo, por lo que se deduce
que los 4 antibióticos resultaron
efectivos para Pseudonomas.
 Realizando tinción Gram se observó
que las bacterias obtenidas, era Gram
negativas.

(Anaya, 2003)
5. DISCUSIÓN

Es difícil predecir el resultado de las interacciones entre microorganismos, esto

puede deberse a factores como lo explica (Anaya, 2003) , que los antibióticos
son productos de procesos metabólicos de gran valor durante el crecimiento en
condiciones experimentales, donde su producción en ciertas colonias
microbianas cultivadas puede ser tardía debido a que, el crecimiento bacteriano,
puede ser asincrónico puesto que cada microorganismo se encuentra en un
punto diferente del ciclo, por esta razón es que en una población se encuentran
células que acaban de dividirse, otras replican su ADN y otras comienzan la
división celular. (Furci, G, 2017)

Al terminar la práctica y analizar los resultados pudimos corroborar con (Lancini

& Gallo, 1995) sobre el efecto que tiene los antibióticos sobre las colonias. En
las Bacillus Subtilis se presentó un halo de inhibición en el puesto 1 de nuestra
caja petri. Según (Furci, G, 2017) la razón por la cual algunos antibióticos no
tienen efecto sobre algunos microorganismos se puede deber al tipo de bacteria,
ya que pueden presentar una mayor resistencia a los antibiótico, esto es debido
a la estructura de cada bacteria, pues como se sabe las bacterias van
adquiriendo propiedades que las hace inmunes a los antibióticos.

En cambio en Pseudomona observamos que el antibiótico produjo un efecto

sobre dicho microorganismo ya que lo inhibió por completo esto corrobora con
(Guadarrama, Orozco, & Morales, 2015) el cual comenta que la concentración
de antibiótico sobre la disolución total, es un factor muy importante porque
provoca una lo que ocasiono una reacción fuerte frente a algunos
microorganismos.

Por último se logró verificar que las bacterias estudiadas eran Gram (-) debido a
su coloración Según (Koneman & Allen, 2008) las bacterias Gram(-) presentan
mejores resultados en estudios e investigaciones sobre producción de
antibióticos ya sea por sus características taxonómicas y características que
presentar los microorganismos de este orden.
 6. RECOMENDACIONES
El tamaño de las bacterias dificulta su visión al microscopio, por eso la tinción de
estas en la microbiología es un apartado sumamente trascendente.
La técnica de tinción tiene como finalidad crear un contraste entre la célula y el
medio que la rodea, y una de las más importantes, tanto por su aplicación clínica
para hacer una identificación preliminar de la bacteria causal de la infección y
por su practicidad, es la tinción de Gram. Es por eso que esta técnica se vuelve
fundamental en el estudio de la microbiología, y el conocimiento de su correcta
realización es prácticamente obligatorio. El estudio de la literatura acerca de la
tinción de Gram nos permite tener un preámbulo para poder diferenciar frente al
microscopio los diferentes tipos de microorganismos .Sin embargo, no hay que
pasar por alto que es de suma importancia tener un completo estudio previo de
los organismos y su reacción a la tinción para poder dar una respuesta certera
ante el cuestionamiento de la naturaleza de un microorganismo. (Leveau, 2010)
Por tanto se recomienda no descartar el uso de otros métodos para la
identificación de microorganismos las cuales se puede determinar el género,
grupo de géneros o en algún caso familia a la que pertenece un aislamiento. Las
pruebas primarias son: catalasa, oxidasa, OF, esporas, crecimiento en
aerobiosis y anaerobiosis y movilidad
También se puede hacer el uso de amplificación de ácidos nucleicos,
secuenciación, espectrometría de masas

7. BIBLIOGRAFÍA

Trabajos citados
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Arias, L., & Piñeros, P. (2008). En A. e. Filamentosos. Bogota : Pontificia Universidad Javeriana .

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Castro, C., Navas, C., & Caro, O. (20 de Enero de 2010). Obtención de amilasa fúngica a partir
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Furci, G. (2017). En F. A. Chile. Chile: Primera ed.

Guadarrama, A., Orozco, J., & Morales, M. (12 de Abril de 2015). OBTENCIÓN DE α-amilasa A
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https://smbb.mx/congresos%20smbb/morelia07/TRABAJOS/Area_III/Carteles/CIII-
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Koneman, E., & Allen, S. (2008). Diagnóstico Microbiológico. Argentina: Editorial Medica
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Lancini, G., & Gallo, G. (1995). Antibiotics: A Multidisciplinary Approach. New York: Plenum
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