Anda di halaman 1dari 89

SINTESIS DAN UJI TOKSISITAS TIGA SENYAWA

METOKSI FLAVANON TURUNAN


2’-HIDROKSIKALKON

SKRIPSI

OLEH:

SYAMSUL RIZAL
NIM. 0903121374

PROGRAM STUDI KIMIA


JURUSAN KIMIA
FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
UNIVERSITAS RIAU
PEKANBARU
2014
SINTESIS DAN UJI TOKSISITAS TIGA SENYAWA
METOKSI FLAVANON TURUNAN
2’-HIDROKSIKALKON

SKRIPSI

Diajukan Sebagai Salah Satu Syarat


Untuk Memperoleh Gelar Sarjana Sains

OLEH:

SYAMSUL RIZAL
NIM. 0903121374

PROGRAM STUDI KIMIA


JURUSAN KIMIA
FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
UNIVERSITAS RIAU
PEKANBARU
2014
SINTESIS DAN UJI TOKSISITAS TIGA SENYAWA
METOKSI FLAVANON TURUNAN
2’-HIDROKSIKALKON

Disetujui Oleh:

Pembimbing I Pembimbing II

Prof. Dr. Adel Zamri, M.S, DEA Drs. Yuharmen, M.Si


NIP. 19591220 198603 1 005 NIP. 19630105 1991021 001

Diketahui Oleh:

Ketua Jurusan Kimia

iii
Skripsi ini Telah Diuji oleh Tim Penguji Ujian Sarjana Sains
Program Studi Kimia
Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam
Universitas Riau Pekanbaru
Pada Tanggal 16 Desember 2013

Tim Penguji

1. Prof. Dr. Adel Zamri, M.S, DEA Ketua ( )


NIP. 19591220 198603 1 005

2. Dra. Itnawita, M. Si Sekretaris ( )


NIP. 19610505 198803 2 001

3. Drs. Yuharmen, M. Si Anggota ( )


NIP. 19630105 1991021 001

4. Dr. Hilwan Yuda Teruna, M.Si, Apt Anggota ( )


NIP. 19621011 199002 1 001

5. Drs. Akmal Mukhtar, SU Anggota ( )


NIP. 19520415 198003 1 001

Mengetahui
Dekan FMIPA Universitas Riau

Prof. Dr. Adel Zamri, M.S, DEA


NIP. 19591220 198603 1 005

iv
LEMBAR PERNYATAAN

Dengan ini saya menyatakan bahwa Skripsi yang berjudul “Sintesis dan Uji
Toksisitas Tiga Senyawa Metoksi Flavanon Turunan 2’-Hidroksikalkon”, benar
hasil penelitian saya dengan arahan dosen pembimbing dan belum pernah
diajukan dalam bentuk apapun untuk mendapatkan gelar Kesarjanaan. Dalam
skripsi ini tidak terdapat karya atau pendapat yang telah ditulis atau
dipublikasikan orang lain, kecuali secara tertulis dengan jelas dicantumkan dalam
naskah dengan menyebutkan referensi yang dicantumkan dalam daftar pustaka.
Pernyataan ini saya buat dengan sesungguhnya dan apabila dikemudian hari
terdapat penyimpangan dan ketidakbenaran dalam pernyataan ini, maka saya
bersedia menerima sanksi akademik berupa pancabutan gelar yang telah diperoleh
karna Skripsi ini, serta lainnya sesuai dengan norma yang berlaku di perguruan
tinggi.

Pekanbaru, 16 Desember 2013


Yang membuat pernyataan

SYAMSUL RIZAL
NIM. 0903121374

v
KATA PENGANTAR

Puji syukur kepada Allah SWT yang telah memberikan rahmat dan
hidayah-Nya serta kemudahan kepada penulis, sehingga dapat menyelesaikan
penelitian yang berjudul “Sintesis Dan Uji Toksisitas Tiga Senyawa Metoksi
Flavanon Turunan 2’-Hidroksikalkon” yang diajukan sebagai syarat untuk
melaksanakan penelitian tugas akhir.
Penulis mengucapkan terima kasih kepada Bapak Prof. Dr. Adel Zamri,
MS, DEA sebagai dosen pembimbing I dan Drs. Yuharmen, M.Si sebagai dosen
pembimbing II yang bersedia meluangkan waktu, memberikan bimbingan dan
sarannya kepada penulis dalam penyusunan hasil penelitian ini.
Penulis menyadari bahwa dalam penulisan hasil penelitian ini belum
sempurna, sehingga kritik dan saran yang membangun dari segala pihak sangat
diharapkan. Penulis mengharapkan semoga hasil penelitian ini bermanfaat bagi
kita semua dan dapat diteruskan menjadi penelitian yang bermanfaat bagi
perkembangan ilmu pengetahuan.

Pekanbaru, 10 Juni 2014i


2014

Syamsul Rizal
NIM. 0903121374

vi
ABSTRACT

Three methoxy flavanone compounds have been synthesized from cyclization of


2’-hydroxychalcones derivatives by microwave irradiation using sodium acetate
in ethanol as a catalyst. They were 2-(2-methoxyphenyl) chroman-4-one, 2-(3-
methoxyphenyl) chroman-4-one and 2-(4-methoxyphenyl)chroman-4-one. The
yield from of three flavanone analogues were 48,6 %, 75,9 % and 68,5 %. The
structures of the synthesized compounds were defined by using UV-VIS, FTIR,
MS and 1H NMR. Toxicity activity was determined using Brine Shrimp Lethality
Test (BSLT) against larvae of Arthemia salina Leach. The Toxicity of that
compounds were 23,45 µg/mL, 5,37 µg/mL dan 3,29 µg/mL. Accordings to the
primary test, analogue flavanone compounds are potentially as anticancer which
was proven by LC50 values <200 μg/mL.

Keywords : 2’-hydroxychalcone, Brine Shrimp Lethality Test (BSLT), flavanone,


microwave irradiation, toxicity.

vii
ABSTRAK

Tiga senyawa metoksi flavanon telah disintesis dari reaksi siklisasi turunan 2’-
hidroksikalkon dengan metode microwave irradiation menggunakan natrium
asetat di dalam etanol sebagai katalis. Senyawa flavanon tersebut yaitu, 2-(2-
metoksifenil) kroman-4-on, 2-(3- metoksifenil) kroman-4-on dan 2-(4-
metoksifenil) kroman-4-on. Rendemen dari ketiga flavanon masing-masing
sebesar 48,6 %, 75,9 % dan 68,5 %. Struktur senyawa hasil sintesis dianalisa
menggunakan UV-VIS, FTIR, MS dan 1H NMR. Toksisitas senyawa flavanon
ditentukan dengan menggunakan metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT)
terhadap larva Arthemia salina Leach. Nilai toksisitas senyawa tersebut berturut-
turut adalah 23,45 µg/mL, 5,37 µg/mL dan 3,29 µg/mL. Berdasarkan hasil uji,
senyawa analog flavanon tersebut berpotensi sebagai antikanker yang terbukti
dengan nilai LC50 < 200 µg/mL.

Kata kunci : 2’-hidroksikalkon, Brine Shrimp Lethality Test (BSLT), flavanon,


irradiasi microwave, toksisitas.

viii
DAFTAR ISI

HALAMAN PERSETUJUAN PEMBIMBING .............................................iii


HALAMAN PERSETUJUAN PENGUJI .......................................................iv
LEMBAR PERNYATAAN ..............................................................................v
KATA PENGANTAR.......................................................................................vi
ABSTRACK ......................................................................................................vii
ABSTRAK .........................................................................................................viii
DAFTAR ISI......................................................................................................ix
DAFTAR GAMBAR.........................................................................................xii
DAFTAR TABEL .............................................................................................xiii
DAFTAR LAMPIRAN .....................................................................................xiv
BAB I. PENDAHULUAN.............................................................................1
1.1. Latar Belakang.............................................................................1
1.2. Perumusan Masalah.....................................................................2
1.3. Tujuan Penelitian.........................................................................2
1.4. Tempat dan Waktu Penelitian......................................................2
BAB II. TINJAUAN PUSTAKA...................................................................3
2.1. Tinjauan Umum Flavonoid..........................................................3
2.2. Tinjauan Umum Kalkon ..............................................................4
2.2.1 Bioaktivitas kalkon ............................................................4
2.2.2 Sintesis kalkon....................................................................5
2.3. Kondensasi Aldol ........................................................................5
2.3.1. Kondensasi aldol menggunakan katalis basa ....................6
2.3.2. Kondensasi aldol menggunakan katalis asam ...................6
2.4. Tinjauan Umum Flavanon ...........................................................7
2.4.1. Bioaktivitas flavanon.........................................................8
2.4.2. Sintesis flavanon................................................................9
2.5. Tinjauan Umum Brine Shrimp Lethality Test ............................10
2.5.1. Artemia salina Leach.........................................................11
2.5.2. Morfologi dan lingkungan hidup Artemia salina
Leach ..................................................................................12

ix
2.5.3. Perkembangbiakan Artemia salina Leach .........................12
2.5.4. Konsentrasi Letal 50 (LC50) ..............................................13

BAB III. METODE PENELITIAN ................................................................14


3.1. Alat dan Bahan ............................................................................14
3.1.1. Alat-alat yang digunakan...................................................14
3.1.2. Bahan-bahan yang digunakan............................................14
3.1.3. Organisme yang digunakan ...............................................14
3.2. Metode Penelitian .......................................................................14
3.3. Prosedur Kerja ............................................................................16
3.3.1. Sintesis senyawa kalkon CA2, CA3 dan CA4 ....................16
3.3.2. Sintesis senyawa flavanon FA2, FA3 dan FA4 ...................16
3.3.3. Rekristalisasi......................................................................16
3.3.4. Pemurnian dengan kromatografi kolom ...........................17
3.3.5. Uji kemurnian dengan KLT ..............................................17
3.3.6. Penentuan titik leleh .........................................................17
3.3.7. Analisis struktur ................................................................17
3.3.8.Uji toksisitas menggunakan metode Brine Shrimp
Lethality Test ......................................................................18
3.3.9. Analisis data .....................................................................18
BAB IV. HASIL DAN PEMBAHASAN ........................................................20
4.1. Hasil.............................................................................................20
4.1.1. Sintesis senyawa kalkon ....................................................20
4.1.1.1 Sintesis senyawa (E)-1-(2-hidroksifenil)-3-(2-
metoksifenil)prop-2-en-1-on (CA2)........................20
4.1.1.2 Sintesis senyawa (E)-1-(2-hidroksifenil)-3-(3-
metoksifenil)prop-2-en-1-on (CA3)........................21
4.1.1.3 Sintesis senyawa (E)-1-(2-hidroksifenil)-3-(4-
metoksifenil)prop-2-en-1-on (CA4)........................21
4.1.2. Sintesis senyawa flavanon.................................................22
4.1.2.1 Sintesis senyawa 2-(2-metoksifenil)kroman-4-on
(FA2).......................................................................22

x
4.1.2.2 Sintesis senyawa 2-(3-metoksifenil)kroman-4-on
(FA3) ......................................................................23
4.1.2.3 Sintesis senyawa 2-(4-metoksifenil)kroman-4-on
(FA4) ......................................................................25
4.1.3. Uji Toksisitas.....................................................................26
4.2. Pembahasan .................................................................................27
4.2.1. Sintesis senyawa flavanon FA2, FA3 dan FA4 ...................27
4.2.2 Uji toksisitas senyawa FA2, FA3 dan FA4 ...........................33
BAB V. KESIMPULAN DAN SARAN ..........................................................36
5.1. kesimpulan...................................................................................36
5.2. Saran ...........................................................................................36
DAFTAR PUSTAKA ......................................................................................37
LAMPIRAN ......................................................................................................40

xi
DAFTAR GAMBAR

Gambar 2.1. Mekanisme reaksi pembentukan kalkon dengan katalis


basa ..............................................................................................6
Gambar 2.2. Mekanisme reaksi pembentukan kalkon dengan katalis
asam ............................................................................................7
Gambar 2.3. Mekanisme reaksi siklisasi 2'-hidroksikalkon menjadi
flavanon menggunakan katalis basa ............................................10
Gambar 2.4. Mekanisme reaksi siklisasi 2'-hidroksikalkon menjadi
flavanon menggunakan katalis asam ...........................................10
Gambar 2.5. Artemia salina Leach...................................................................11
Gambar 2.6. Siklus hidup Artemia salina Leach..............................................13
Gambar 3.1. Skema pendekatan retrosintesis senyawa kalkon ........................15
Gambar 4.1. Senyawa CA2 ...............................................................................20
Gambar 4.2. Senyawa CA3 ...............................................................................21
Gambar 4.3. Senyawa CA4 ...............................................................................22
Gambar 4.4. Senyawa FA2 ...............................................................................23
Gambar 4.5. Senyawa FA3 ...............................................................................24
Gambar 4.6. Senyawa FA4 ...............................................................................26
Gambar 4.7. Mekanisme reaksi pembentukan senyawa Flavanon...................27

xii
DAFTAR TABEL

Tabel 3.1. Senyawa awal dan senyawa target pada proses sintesis flavanon.....15
Tabel 4.1. Hasil uji toksisitas senyawa FA2, FA3 dan FA4 ................................26
Tabel 4.2. Data spectrum UV senyawa FA2, FA3 dan FA4 .................................28
Tabel 4.3. Data spektrum IR senyawa FA2, FA3 dan FA4 ..................................29
Tabel 4.4. Tetapan nilai kopling H-2, H-3a dan H-3b........................................30
Tabel 4.5. Interpretasi data 1H-NMR senyawa flavanon FA2, FA3 dan FA4 ......32

xiii
DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran 1. Skema Kerja Sintesis Analog 2’-Hidroksikalkon .....................40


Lampiran 2. Skema Kerja Sintesis Analog Flavanon....................................41
Lampiran 3. Skema uji aktivitas toksisitas dengan metode Brine
Shrimp Lethality Test (BSLT) senyawa FA2 .............................42
Lampiran 4. Skema uji aktivitas toksisitas dengan metode Brine
Shrimp Lethality Test (BSLT) senyawa FA3 dan FA4 ..............43
Lampiran 5. Hasil Uji KLT senyawa CA2 .....................................................44
Lampiran 6. Hasil Uji KLT senyawa CA3 .....................................................45
Lampiran 7. Hasil Uji KLT senyawa CA4 .....................................................46
Lampiran 8. Hasil Uji KLT perbandingan senyawa kalkon (CA2, CA3 dan
CA4) dengan senyawa kalkon Sofiana (2014) ..........................47
Lampiran 9. Hasil Uji KLT senyawa FA2 .....................................................48
Lampiran 10. Hasil Uji KLT senyawa FA3 .....................................................49
Lampiran 11. Hasil Uji KLT senyawa FA4 .....................................................50
Lampiran 12. Kromatogram HPLC senyawa FA2 ...........................................51
Lampiran 13. Kromatogram HPLC senyawa FA3 ...........................................52
Lampiran 14. Kromatogram HPLC senyawa FA4 ...........................................53
Lampiran 15. Spektrum UV senyawa FA2 ......................................................54
Lampiran 16. Spektrum UV senyawa FA3 ......................................................55
Lampiran 17. Spektrum UV senyawa FA4 ......................................................56
Lampiran 18. Spektrum IR senyawa FA2 ........................................................57
Lampiran 19. Spektrum IR senyawa FA3 ........................................................58
Lampiran 20. Spektrum IR senyawa FA4 ........................................................59
Lampiran 21. Spektrum 1H-NMR senyawa FA2 .............................................60
Lampiran 22. Spektrum 1H-NMR senyawa FA3 .............................................61
Lampiran 23. Spektrum 1H-NMR senyawa FA4 .............................................62
Lampiran 24. Spektrum MS senyawa FA2 ......................................................63
Lampiran 25. Spektrum MS senyawa FA4 ......................................................64
Lampiran 26. Hasil LC50 uji toksisitas senyawa FA2 ......................................65
Lampiran 27. Hasil LC50 uji toksisitas senyawa FA3 ......................................66

xiv
Lampiran 28. Hasil LC50 uji toksisitas senyawa FA4 ......................................67
Lampiran 29. Perhitungan rendemen senyawa kalkon CA2 ............................68
Lampiran 30. Perhitungan rendemen senyawa kalkon CA3 ............................69
Lampiran 31. Perhitungan rendemen senyawa kalkon CA4 ............................70
Lampiran 32. Perhitungan rendemen senyawa flavanon FA2 .........................71
Lampiran 33. Perhitungan rendemen senyawa flavanon FA3 .........................72
Lampiran 34. Perhitungan rendemen senyawa flavanon FA4 .........................73
Lampiran 35. Nilai probit sesuai besarnya persentase.....................................74

xv
BAB I
PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang


Flavonoid merupakan kelompok senyawa yang banyak ditemui di alam,
struktur molekul sederhana dan tersebar luas baik pada tumbuhan tingkat tinggi
maupun rendah. Penelitian mengenai senyawa flavonoid seringkali dikaitkan
dengan manfaat senyawa tersebut untuk kehidupan sehari-hari. Salah satu manfaat
senyawa flavonoid adalah sebagai obat tradisional dalam penyembuhan suatu
penyakit tertentu. Hal ini dikaitkan dengan aktivitas fisiologis dari jenis senyawa
flavonoid tertentu.
Flavonoid merupakan metabolit sekunder yang paling beragam dan
tersebar luas. Sekitar 5-10% metabolit sekunder tumbuhan adalah flavonoid,
dengan struktur kimia dan peran biologi yang sangat beragam (Macheix et al.,
1990).
Flavonoid dibagi menjadi sebelas golongan didasarkan pada perbedaan
struktur C3 dan posisi cincin B pada unit C3 yaitu flavon, flavanol, isoflavon,
flavanon, flavanonol, isoflavanon, kalkon, dihidrokalkon, auron, antosianidin dan
flavan (Matsjeh, 2004).
Kalkon dan flavanon, awalnya diisolasi dari alam adalah senyawa bioaktif
yang luar biasa dengan kerangka 1,3-diarilpropan milik keluarga flavonoid.
Kalkon (1,3-difenil-2 propen-1-on) baik terbentuk secara alami maupun sintetis
telah dilaporkan memiliki berbagai aktivitas biologis seperti antikanker,
antimitosis, antiinflamasi, antimalaria, antiangiogenik, antiinfeksi, antimikroba,
antioksidan dan antiproliferatif.
Flavanon (2-fenilkromen-4-on) juga telah telah dilaporkan memiliki
manfaat seperti antikanker, antimikroba, antiproliferatif, antiinflamasi,
kardiovaskular, antimalaria, antiangiogenik, dan hipotensif. Senyawa ini telah
menarik perhatian para ahli kimia, ahli biokimia dan farmasi karena kemampuan
aktivitas farmakologi dan penggunakannya sebagai perantara dalam sintesis dan
biosintesis berbagai senyawa bioaktif.

1
Metode sintesis senyawa flavanon sampai saat ini masih menggunakan
pendekatan metode Baker-Vankataraman, kondensasi Aldol, kondensasi Claisen
dan penataan ulang Fries.

1.2 Perumusan Masalah


Isolasi flavanon dari tumbuhan memiliki banyak kelemahan diantaranya
lamanya waktu isolasi dan menggunakan banyak pelarut, selain itu jumlahnya
yang terbatas dan persentasenya dalam tumbuhan juga kecil serta variasi
strukturnya relatif sedikit. Sintesis adalah cara yang paling tepat untuk mengatasi
kelemahan dari isolasi, dengan sintesis memungkinkan para peneliti untuk
memvariasi struktur flavanon yang diinginkan, memperoleh hasil sintesis yang
banyak dan bisa dengan cepat menguji aktivitasnya.

1.3 Tujuan Penelitian


Tujuan dari penelitian ini adalah :
1. Mensintesis tiga analog senyawa flavanon turunan 2’-hidroksikalkon yaitu
2’-metoksiflavanon, 3’-metoksiflavanon dan 4’-metoksiflavanon
2. Karakterisasi senyawa flavanon yang diperoleh dengan spektrometer UV,
FTIR , MS dan 1H-NMR
3. Mengetahui aktivitas toksisitas senyawa flavanon yang diperoleh dan
membandingkannya berdasarkan perbedaan posisi subtituen metoksi.
1.4 Tempat dan Waktu Penelitian
Penelitian ini dilakukan di laboratorium Kimia Organik Sintesis, Jurusan
Kimia, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Riau.
Analisis produk dengan spektrofotometer UV, FTIR dan HPLC dilakukan di
Jurusan Kimia FMIPA-UR. Analisis produk dengan 1H-NMR dan MS dilakukan
di ITB, Bandung. Penelitian ini berlangsung sekitar 10 bulan.

2
BAB II
TINJAUAN PUSTAKA

2.1. Tinjauan Umum Flavonoid


Flavonoid merupakan salah satu metabolit sekunder, kemungkinan
keberadaannya dalam daun dipengaruhi oleh adanya proses fotosintesis sehingga
daun muda belum terlalu banyak mengandung flavonoid (Markham, 1988).
Flavonoid mempunyai kerangka dasar karbon yang terdiri dari 15 atom
karbon, dimana dua cincin benzen (C6) terikat pada suatu rantai propan (C3)
sehingga membentuk suatu susunan C6-C3-C6. Susunan ini dapat menghasilkan
tiga jenis struktur, yakni 1,3-diarilpropan atau flavonoid (1), 1,2-diarilpropan atau
isoflavonoid (2), dan 1,1-diarilpropan atau neoflavonoid (3). Ketiga struktur
tersebut dapat dilihat pada Gambar 1.

(1) (2) (3)

Flavonoid memiliki banyak jenis, salah satunya adalah kalkon. Kalkon


mempunyai peranan penting karena merupakan senyawa antara (intermediet)
dalam pembuatan senyawa turunan flavonoid lainnya. Kalkon dapat
bertransformasi menjadi flavanon.
Pembentukan Flavonoid dimulai dengan memperpanjang unit
fenilpropanoid (C6-C3) yang berasal dari turunan sinamat seperti asam p-kumarat,
asam kafeat, atau asam ferulat. Senyawa ini juga mempunyai aktivitas biologis
yang sangat menarik diantaranya mempunyai aktivitas antimikroba (Harbone,
1994), antioksidan (Pietta, 2000), antialergi (Vender et al., 1993), antikanker dan
antitumor (Usman et al., 2005).
Flavonoid dibagi menjadi sebelas golongan didasarkan pada perbedaan
struktur C3 dan posisi cincin B pada unit C3 yaitu flavon, flavanol, isoflavon,

3
flavanon, flavanonol, isoflavanon, kalkon, dihidrokalkon, auron, antosianidin dan
flavan (Matsjeh, 2004).

2.2. Tinjauan Umum Kalkon


Kalkon (4) merupakan salah satu jenis metabolit sekunder golongan
flavonoid yang dihasilkan oleh tumbuhan dan merupakan senyawa flavonoid
paling sederhana yang pertama kali terbentuk melalui jalur sikimat dan asetat
malonat (Markham, 1988).
Senyawa kalkon terdapat pada berbagai jenis tumbuhan di alam yang
berperan sebagai senyawa prekursor untuk biosintesis flavonoid dan isoflavonoid
(Patil et al., 2009). Kalkon terdistribusi dalam sayur-sayuran, buah-buahan, teh
dan kedelai. Kalkon berperan dalam pigmenetasi bunga, tumbuhan kalkon
ditemukan dalam pigmen daun bunga berwarna kuning, dalam kebanyakan
terdapat dalam tanaman Heliantheaetribe, Coreopsidinae, Subtribe dan famili
Compositae (Dyrager, 2012). Senyawa kalkon mengandung gugus etilen keto (-
CO-CH=CH-) yang reaktif. Adanya gugus tersebut menyebabkan molekul kalkon
mempunyai berbagai macam aktivitas biologis (Jayapal et al., 2010).
Kalkon merupakan senyawa aromatik dengan 2 cincin aromatik yang
dihubungkan oleh 3 karbon α, β tidak jenuh, nama IUPAC nya 1,3-difenil-1, 2-
propen-1-on.

O b
6' 6
5 ' A 1' 1 B 5
a
4' 2' 2 4
3' 3

(4)
2.2.1. Bioaktivitas Kalkon
Pemanfaatan senyawa kalkon yang telah ditemukan baik melalui sintesis
maupun isolasi telah banyak diaplikasikan di bidang farmasi, seperti sebagai zat
sitotoksik, antivirus, anestesi, antimikroba, antitumor, antijamur, antikanker dan
lain sebagainya (Jayapal et al., 2010). Selain itu, kalkon juga dapat digunakan
sebagai antioksidan, anti-inflamasi, antihepatotoksik, antimalaria, dan beberapa
kalkon lainnya digunakan sebagai inhibitor tirosin dan juga dilaporkan memiliki
aktivitas hypoglycemic (Patil et al., 2009).

4
2.2.2. Sintesis Kalkon
Secara umum, kalkon dapat disintesis dengan berbagai metode salah
satunya adalah melalui reaksi kondensasi suatu aldehid aromatik dengan suatu
keton aromatik melalui kondesasi Claisen-Schmidt (Palleros, 2000) menggunakan
katalis basa atau asam yang diikuti oleh reaksi dehidrasi (Patil et al., 2009).
Tetapi dengan berkembangnya teknik sintesis pada saat ini, metode
sintesis kalkon menjadi semakin beragam. Selain menggunakan katalis asam dan
basa, juga dapat digunakan K2CO3 anhidrat sebagai katalis dan sintesis dilakukan
tanpa menggunakan pelarut dengan iradiasi microwave (Jayapal et al., 2010).
Pada penelitian ini akan digunakan metode non-konvensional yaitu iradiasi
microwave untuk mensintesis kalkon sebelum di siklisasi menjadi flavanon.
Menggunakan katalis basa yaitu KOH dan Poly Ethylen Glycol (PEG)-400
sebagai pelarut. Penggunaan PEG sebagai pelarut karena merupakan pelarut yang
ramah lingkungan, tidak toksik, murah, produk rendemen tinggi, bisa digunakan
kembali dan larut dalam air sehingga tidak akan terdapat dalam hasil reaksi.
Selain itu PEG memiliki tekanan uap yang sangat rendah sehingga bisa diabaikan
dan tidak memiliki gugus halogen (Dawane et al., 2009).

2.3. Kondensasi Aldol


Reaksi kondensasi adalah reaksi penggabungan dari dua atau lebih
molekul yang sama atau berlainan dengan atau tanpa hilangnya suatu molekul
kecil seperti air (Riawan, 1990). Reaksi kondensasi hampir mirip dengan reaksi
polimerisasi. Perbedaannya, pada reaksi kondensasi penggabungan hanya
melibatkan dua atau tiga molekul yang berkondensasi, sedangkan pada
polimerisasi dapat sampai ratusan atau bahkan jutaan molekul (Fessenden dan
Fessenden, 1994). Sedangkan kata aldol diturunkan dari kata aldehid dan alkohol
(London, 2010).
Dalam kondensasi aldol, suatu ikatan karbon-karban baru yang terbentuk
antara atom karbon α dari satu senyawa karbonil dan atom karbon karbonil yang
lainnya. Karena keasaman atom hidrogen α dari senyawa karbonil membuatnya
memungkinkan senyawa karbonil tersebut untuk bereaksi dengan yang lainnya
sehingga menghasilkan suatu produk gabungan keduanya berupa suatu aldehid
dan suatu alkohol (Fessenden dan Fessenden, 1994).

5
2.3.1. Kondensasi Aldol Menggunakan Katalis Basa
Metode yang biasa digunakan untuk mensintesis kalkon adalah kondensasi
aldol dengan menggunakan katalis basa dengan konsentrasi biasanya 10%-60%
(Patil et al., 2009). Basa yang sering digunakan pada umumnya adalah NaOH atau
KOH dengan menggunakan etanol sebagai pelarut, tetapi bisa juga menggunakan
Ba(OH)2 atau LiOH (Jayapal et al., 2010).
Hidrogen yang terletak pada atom karbon yang berdekatan dengan ikatan
rangkap karbon-oksigen bersifat asam dan dapat dengan mudah dipindahkan oleh
basa. Bila suatu aldehid diolah dengan basa seperti NaOH akan membentuk ion
enolat dalam konsentrasi rendah yang dapat bereaksi dengan gugus karbonil dari
molekul aldehid yang lain (Fessenden dan Fessenden, 1986). Ion enolat bereaksi
dengan suatu molekul aldehid lain dengan cara mengadisi pada karbon karbonil
untuk membentuk suatu ion alkoksida, yang kemudian mengambil sebuah proton
dari dalam air untuk menghasilkan aldol produk itu.

O O O O
H H
O O
CH2 H
OH
H

O O +OH2 O OH

Gambar 2.1. Mekanisme reaksi pembentukan kalkon dengan katalis basa

2.3.2. Kondensasi Aldol Menggunakan Katalis Asam


Reaksi aldol juga dapat berlangsung dalam medium asam menggunakan
HCl, BF3, B2O3, asam p-toluensulfonik dan lain-lain (Jayapal et al., 2010), namun
katalis asam yang umum digunakan yaitu H2SO4 dan SOCl2 (Jayapal et al., 2010).
Mekanisme reaksi kondensasi yang dikatalis asam adalah menyangkut
dengan protonasi senyawa karbonil. Pada katalis asam ion H+ akan terikat secara
parsial dengan atom O yang terdapat pada karbonil suatu aldehid. Ikatan rangkap

6
pada karbonil akan menetralkan muatan atom O, sehingga atom C pada karbonil
akan bermuatan positif.

Gambar 2.2 Mekanisme reaksi pembentukan kalkon dengan katalis asam

2.4. Tinjauan Umum Flavanon


Flavanon (5) adalah prekursor biosintesis utama untuk flavonoid seperti
flavon atau isoflavon dan dua intermediet flavonoid penting: flavan-4-ol
(prekursor biosintesis untuk pembentukan 3-deoksiantosianin) dan
dihidroflavonol (intermediet biosintesis dalam pembentukan katekin, flavonol,
antosianin dan proantosianidin) (Heller & Forkmann, 1988; Haslam, 1993 dan
Mann, 1994). Flavanon tersebar luas di alam, terus menarik perhatian karena
cakupan aktivitas biologisnya (seperti hipotensi, antijamur, antibakteri, antitumor)

7
(Middleton et al.; 1994, Harborne et al., 2001; Nijveldt et al., 2001; Wang et al.,
2001 dan Heim et al., 2002).
Flavanon merupakan senyawa metabolit sekunder golongan flavonoid
yang berasal dari jalur sikimat dan asetat malonat yang dihasilkan dalam jumlah
yang relatif sedikit oleh tumbuhan (Harbon, 1992).

(5)

Penentuan struktur flavanon cepat dilakukan berdasarkan metode klasik.


Polihidroksiflavanon mudah dikenal dengan terbentuknya warna merah
lembayung, bila flavanon direduksi dengan magnesium dalam asam klorida pada
larutan etanol (Hardjono, 1996).

2.4.1. Bioaktivitas Flavanon


Berbagai jenis senyawa, kandungan dan aktivitas antioksidatif flavonoid
sebagai salah satu kelompok antioksidan alami yang terdapat pada sereal, sayur-
sayuran dan buah, telah banyak dipublikasikan.
Telah banyak dilaporkan bahwa flavonoid yang diisolasi dari tumbuhan
mempunyai berbagai keaktifan biologis antara lain sebagai insektisida,
antimikroba, antivirus, antijamur, obat infeksi pada luka, mengurangi pembekuan
darah pada tubuh, antioksidan, antitumor dan antikanker.
Senyawa flavanon yang pernah diisolasi dari tumbuhan yaitu 5,7-
dihidroksi-2-(4-hidroksifenil)kroman-4-on (6) (Kanno et al., 2005), 5-hidroksi-7-
metoksi-2 fenilkroman-4-on (7) dari tumbuhan Boesenbergia pandurata yng
berpotensi sebagai antikanker (Shindo et al., 2006), 7-hidroksi-5-metoksi-2-
fenilkroman-4-on (8) senyawa yang bersifat fungistatik dan fungisida (Bohm,
1975), 5,7-dihidroksi-2-fenilkroman-4-on (9) yang berkhasiat sebagai antioksidan
(Shindo et al., 2006).

8
OH H3CO O
HO O

OH O
OH O

(6) (7)

HO O HO O

O O OH O

(8) (9)

2.4.2. Sintesis Flavanon


Flavanon selalu disintesis melalui dua langkah, 2’-hidroksikalkon
disintesis melalui metode yang paling umum digunakan, yaitu reaksi kondensasi
Claisen-Schmidt antara 2-hidroksiasetofenon dan benzaldehid. Langkah kedua
meliputi siklisasi 2'-hidroksikalkon untuk membentuk flavanon. Namun demikian,
konversi kalkon ke flavanon tidak pernah sempurna dan selalu menghasilkan
produk campuran.
Selain itu, dalam dua dekade terakhir penggunaan energi microwave untuk
melakukan reaksi organik telah menjadi sangat populer karena memiliki beberapa
keunggulan dibandingkan reaksi organik klasik seperti mempersingkat waktu
reaksi, meningkatkan rendemen dan ramah lingkungan (Green chemistry).
Flavanon bisa juga diperoleh dari prekursor selain kalkon, yaitu
mereaksikan 3-kloro-2,3-dihidro-3-nitro-2-fenil-4H-1-benzo-4-piranon dengan
hidrida timah tributil dan 2,2'-azobisisobutironitril (Dauzonne & Monneret, 1997),
3-bromo-1-fenil prop-2-nil aril eter dengan merkuri (II) trifluroroasetat
(Subramanian & Balasubramanian, 1990), mengoksidasi flavan-4-ol (Bhatia et al.,
1968) dan memperlakukan 1-(2-hidroksifenil)-3- fenil propana-1,3-dion dengan
benzaldehid (Joglekar & Samat, 1988).

9
Gambar 2.3. Mekanisme reaksi siklisasi 2'-hidroksikalkon menjadi flavanon
menggunakan katalis basa

OH H OH OH

O O OH
H

O O OH
H

O OH OH
H

Gambar 2.4. Mekanisme reaksi siklisasi 2'-hidroksikalkon menjadi flavanon


menggunakan katalis asam

2.5. Tinjauan Umum Brine Shrimp Lethality Test


Uji toksisitas dilakukan dengan mengamati kematian hewan percobaan
dan respon kematian ini dianggap sebagai pengaruh senyawa yang diuji. Uji
toksisitas dimaksudkan untuk memaparkan adanya efek toksik dan atau menilai
batas keamanan dalam kaitannya dengan penggunaan suatu senyawa. Pengukuran

10
toksisitas dapat ditentukan secara kuantitatif yang menyatakan tingkat keamanan
dan tingkat berbahaya zat tersebut (Cassaret dan Doull’s, 1975).
Brine Shrimp Lethality Test (BSLT) merupakan salah satu metode
skrining untuk menentukan efek toksik suatu ekstrak ataupun senyawa. Kematian
Artemia salina Leach digunakan sebagai parameter untuk menunjukkan adanya
kandungan zat aktif tanaman yang bersifat sitotoksik (Cassaret et al., 1975).

2.5.1. Artemia salina Leach


Artemia salina Leach merupakan organisme sejenis udang -udangan yang
berukuran kecil dan dikenal dengan nama brine shrimp (Djarijah,1995). Artemia
salina Leach digunakan sebagai hewan uji untuk menentukan efek toksik suatu
senyawa yang diwujudkan sebagai racun (Meyer et al., 1982).

Klasifikasi Artemia salina Leach menurut Dumitrascu (2011) adalah :


Divisi : Animal
Filum : Arthropoda
Kelas : Crustaceae
Subkelas : Branchiopoda
Ordo : Anostraca
Famili : Arthemidae
Genus : Artemia
Spesies : Artemia salina Leach

Gambar 2.5. Artemia salina Leach

11
2.5.2. Morfologi dan Lingkungan Hidup Artemia salina Leach
Artemia salina Leach diperdagangkan dalam bentuk dorman yang
dinamakan kista. Kista memiliki bentuk bulat kecil berwarna kelabu kecoklatan
dengan diameter berkisar 200-300 μm. Kista berkualitas baik jika diinkubasi
dalam air berkadar garam 5-70 permil akan menetas sekitar 18-24 jam. Artemia
yang baru menetas disebut nauplius yang berwarna kuning tua, berbentuk lonjong
dengan panjang sekitar 400 mikron, lebar 170 mikron dan berat 0,002 mg.
Nauplius berangsur-angsur mengalami perkembangan dan perubahan morfologis
dengan 15 kali pergantian kulit hingga menjadi dewasa. Pada setiap pergantian
kulit disebut instar (Mudjiman, 1995).
Beberapa tahapan proses penetasan Artemia yaitu tahap hidrasi, pecahnya
cangkang, payung atau pengeluaran. Tahap hidrasi terjadi penyerapan air sehingga
kista yang diawetkan dalam bentuk kering akan menjadi bulat dan aktif
bermetabolisme. Tahap pecahnya cangkang disusul dengan tahap payung, terjadi
sebelum nauplius keluar dari cangkang (Mudjiman, 1995).
Artemia salina hidup planktonik di perairan berkadar garam tinggi antara
15-30 permil, suhu yang dikehendaki berkisar antara 25°C-30°C, oksigen terlarut
sekitar 3 mg/L dan pH antara 7,3-8,4. Artemia salina Leach tidak dapat
mempertahankan diri dari pemangsa musuh-musuhnya karena tidak mempunyai
alat atau cara untuk membela diri, salah satu cara untuk menghindarkan diri dari
pemangsa hewan lain dengan berpindah ke kondisi alam berupa lingkungan hidup
berkadar garam tinggi. Pada umumnya pemangsa tidak dapat hidup lagi pada
kondisi itu (Mudjiman, 1995).

2.5.3 Perkembangbiakan Artemia salina Leach


Perkembangbiakannya yaitu berupa biseksual dan partenogensis.
Keduanya dapat terjadi ovovivipar atau ovipar. Pada ovovivipar keluar dari
induknya sudah berupa anak yang dinamakan nauplius, sedangkan pada ovipar
anak keluar dari induknya berupa telur, bercangkang tebal yang dinamakan siste.
Perkembangbiakan jenis biseksual harus melalui proses perkawinan antara induk
jantan dengan induk betina. Pada jenis partenogensis tidak ada perkawinan karena
memang tidak pernah ada jantannya. Jadi, betina akan beranak dengan sendirinya
tanpa perkawinan (Mudjiman, 1995).

12
Gambar 2.6. Siklus hidup Artemia salina Leach

Sebelum ditetaskan telur-telur tersebut perlu dicuci terlebih dahulu, yakni


dengan direndam di dalam air tawar selama 1 jam, baru kemudian dimasukan
dalam wadah penetasan. Suhu air yang baik selama proses penetasan adalah
antara 25-30 0C. Sedangkan kadar oksigennya harus lebih dari 2 mg/L. Untuk
merangsang proses penetasannya media penetasan tersebut perlu disinari dengan
lampu yang dipasang di samping wadah. Dalam waktu 24-36 jam setelah
pemasukan telur, biasanya telur-telur itu sudah menetas menjadi anak Artemia
yang dinamakan nauplius (Mudjiman, 1995).

2.5.4. Konsentrasi Letal 50 (LC50)


Nilai LC50 merupakan angka yang menunjukan konsentrasi ekstrak yang
dapat menyebabkan kematian sebesar 50 % dari jumlah hewan uji (Baraja, 2008).
Kematian merupakan salah satu diantara kriteria toksisitas. Salah satu caranya
ialah menggunakan senyawa dengan dosis maksimal, kemudian kematian hewan
uji dicatat. Angka kematian hewan dihitung sebagai Lethal Dose (LD50) atau
Lethal Concentration (LC50). Suatu senyawa dinyatakan mempunyai potensi
toksisitas akut jika mempunyai harga LC50 kurang dari 1000 μg/ml LC50 (Azis,
2009).

13
BAB III
METODE PENELITIAN

3.1. Alat dan Bahan

3.1.1. Alat-alat yang digunakan


Alat-alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah sebagai berikut: 1 set
alat destilasi, labu bulat, plat KLT GF254, bejana KLT, lampu ultraviolet, kertas
saring, kolom gravitasi, corong buchner, pompa vakum, neraca analitik,
microwave ME109F, alat penentu titik leleh Fisher John, HPLC (Shimadzu
Lcsolution jenis kolom Shim-Pack dengan panjang dan diameternya 150x4,6
mm), spektrofotometer Inframerah (Shimadzu, IR Prestige-21), spektrofotometer
UV-Vis (Genesys 10S UV-Vis v4.002 2L9N175013), spektroskopi NMR (Agilent
500 MHz), spektroskopi Massa (MS water LCT premier XE mode positif) dan
alat-alat gelas yang biasa digunakan di laboratorium.

3.1.2. Bahan-bahan yang digunakan


Bahan-bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah sebagai berikut:
2’-hidroksiasetofenon (Merck), 2-metoksibenzaldehid (Merck), 3-metoksi
benzaldehid (Merck), 4-metoksibenzaldehid (Merck), Poli Etilen Glikol (Merck),
kristal kalium hidroksida (Merck), asam klorida (Merck), garam natrium asetat,
metanol, etanol, etil asetat, n-heksana, diklorometan, kloroform, indikator
universal (Merck) , air laut dan akuades.

3.1.3. Organisme yang digunakan


Organisme yang digunakan adalah larva Artemia salina Leach yang
diperoleh dari koleksi Laboratorium Kimia Organik, Jurusan Kimia.

3.2. Metode Penelitian


Metode yang digunakan untuk mendapatkan tiga senyawa analog kalkon
turunan 2’-hidroksiasetofenon pada penelitian ini adalah melalui pendekatan
sintetik yang didasarkan pada kondensasi aldol dari keton aromatik dan aldehid
aromatik, seperti yang terlihat pada skema retrosintesis berikut.

14
O O O

R1 R2 R1 R2

Gambar 3.1. Skema pendekatan retrosintesis senyawa kalkon

Pendekatan kimia kombinatrial digunakan dalam penelitian ini untuk


menghasilkani sejumlah senyawa dengan senyawa awal 2’-hidroksiasetofenon
(K) dan 3 senyawa aldehid aromatik yaitu 2’-metoksibenzaldehid (A2), 3’-
metoksibenzaldehid (A3), dan 4’-metoksibenzaldehid (A4). Hasil sintesis atau
molekul target dapat dilihat pada Tabel 3.1.
Tabel 3.1. Senyawa awal dan senyawa target pada proses sintesis flavanon

Keton
Aldehid

(A2) (CA2) (FA2)

(A3) (CA3) (FA3)

(A4) (CA4)
(FA4)

15
3.3. Prosedur Kerja

3.3.1. Sintesis senyawa kalkon CA2, CA3 dan CA4


2’-hidroksiasetofenon (5mmol) dan turunan metoksibenzaldehid (5mmol)
dilarutkan dengan Poli Etilen Glikol (PEG) sebanyak 5 mL dalam erlenmeyer.
Tambahkan katalis KOH sebanyak 30 mmol kemudian diiradiasi microwave
selama 1-8 menit pada daya 180 W. Selanjutnya, larutan dinetralkan dengan HCl
dingin. Endapan disaring dengan corong Bunchner kemudian dicuci dengan
akuades dan n-heksana dingin. Kemurnian senyawa lalu diuji dengan KLT, jika
masih terdapat lebih dari satu noda maka dilakukan rekristalisasi dengan pelarut
yang sesuai.

3.3.2. Sintesis senyawa flavanon FA2, FA3 dan FA4.


Senyawa turunan 2’-hidroksikalkon sebanyak 0,5 mmol dilarutkan dengan
5 mL etanol dalam erlenmeyer. Tambahkan 0,5 gram garam natrium asetat dan
0,5 ml air kemudian diiradiasi microwave selama 15-18 menit dengan daya 300
W. Setelah itu, tambahkan dengan air dingin untuk membentuk padatan. Endapan
disaring dengan corong Bunchner lalu diuji dengan KLT. Pemurnian senyawa
dilakukan dengan kromatografi kolom menggunakan eluen 3% etil asetat dalam n-
heksana.

3.3.3. Rekristalisasi
Senyawa flavanon dalam bentuk padatan dilakukan rekristalisasi dengan
cara memasukannya kedalam beaker gelas kemudian ditambahkan tetes demi tetes
pelarut yang telah dipanaskan dan dapat melarutkannya hingga semua padatan
larut. Larutan dalam keadaan panas disaring menggunakan corong biasa dan
ditampung dengan erlenmeyer. Filtrat lalu dipanaskan kembali hingga jenuh, lalu
ditambahkan pelarut n-heksana hingga menjadi agak keruh. Larutan didinginkan
sampai terbentuk kristal. Kristal yang terbentuk kemudian disaring dengan corong
Bunchner dan dicuci dengan n-heksana dingin sambil divakum hingga kering.
Kemurnian kristal yang diperoleh dilakukan uji KLT dengan berbagai sistem
eluen.

16
3.3.4. Pemurnian dengan Kromatografi Kolom
Flavanon yang diperoleh dilakukan pemurnian dengan kromatografi
kolom 1 cm. Kolom kromatografi diisi dengan silika gel 70-230 mesh. Pengisisan
kolom dilakukan dengan membuat bubur silika terlebih dahulu, lalu dimasukkan
ke dalam kolom dengan menggunakan corong. Senyawa yang akan dimurnikan
dilakukan preadsorpsi dan dimasukkan dalam kolom. Kemudian dielusi
menggunakan pelarut 3 % etil asetat dalam n-heksana. Hasil kolom yang keluar
ditampung dalam vial dan dikeringkan pelarutnya sehingga diperoleh padatan
senyawa murni.

3.3.5. Uji kemurnian dengan KLT


Eluen disiapkan dengan perbandingan tertentu dan dibiarkan menguap
pada chamber tertutup agar uapnya menjadi jenuh. Sampel dilarutkan dengan
pelarut yang sesuai dalam vial dan ditotolkan dengan menggunakan pipa kapiler
pada jarak 0,6 cm dari tepi bawah plat silika gel GF254. Plat dimasukkan ke dalam
chamber dan eluen dibiarkan naik sampai garis akhir. Setelah itu plat diangkat,
dikeringkan dan noda dilihat dengan bantuan lampu UV pada panjang gelombang
254 nm atau dengan bantuan pereaksi penampak noda. Jika hanya ada satu noda,
maka dapat disimpulkan senyawa tersebut sudah murni. Untuk memastikannya
dapat dilakukan kembali analisis KLT dengan perbandingan eluen yang berbeda.
Kemudian ditentukan harga Rf-nya.

3.3.6. Penentuan titik leleh


Titik leleh ditentukan dengan mengambil sedikit kristal lalu diletakkan di
antara dua kaca objek pada alat penentu titik leleh Fisher John, termometer
dipasang pada alat kemudian alat dinyalakan. Apabila range titik leleh senyawa
kecil atau sama dengan 20C maka senyawa tersebut murni.

3.3.7. Analisis struktur


Senyawa flavanon hasil sintesis ditentukan strukturnya melalui
1
spektrofotometer UV, FTIR, MS dan H-NMR. Pengukuran spektrum UV dan
FTIR dilakukan di jurusan kimia FMIPA Universitas Riau, sedangkan pengukuran
spektrum NMR dan MS dilakukan di Institut Teknologi Bandung (ITB).

17
3.3.8. Uji toksisitas metode Brine Shrimp Lethality Test
Telur Artemia salina dimasukkan dalam wadah pembiakan yang berisi air
laut dan telah dilengkapi dengan aerasi dan lampu. Penetasan telur dilakukan
selama 48 jam sampai membentuk larva dengan menerangi wadah yang tidak
ditempati telur udang dengan sinar lampu.
Masing-masing vial uji di kalibrasi sebanyak 5 mL. Pengujian dilakukan
dengan konsentrasi 10, 50 dan 100 µg/mL untuk senyawa FA2 sedangkan untuk
senyawa FA3 dan FA4 dilakukan dengan konsentrasi 7, 5, 3 dan 1 µg/mL dengan
pengulangan masing-masing tiga kali. 20 mg sampel ditimbang dan dilarutkan
dalam 2 mL metanol. Maka didapat larutan induk dengan konsentrasi 10.000
µg/mL, kemudian diencerkan secara bertingkat sehingga diperoleh larutan 1.000,
100, 50 dan 10 µg/mL. larutan induk dengan konsentrasi 10 µg/mL tersebut
dipipet sebanyak 3,5 mL untuk konsentrasi 7 µg/mL, 2,5 mL untuk konsentrasi 5
µg/mL dan 1,5 mL untuk konsentrasi 3 µg/mL dan 0,5 mL untuk konsentrasi 1
µg/mL.
Masing-masing vial uji dibiarkan menguap metanolnya. Kemudian larutkan
kembali senyawa uji dengan 50 µL DMSO, selanjutnya ditambahkan air laut
hampir mencapai batas kalibrasi, selanjutnya masing-masing ditambahkan larva
udang Arthemia salina Leach sebanyak 10 ekor dan ditambahkan air laut
beberapa tetes sampai batas kalibrasi. Kematian larva udang diamati setelah 24
jam. Dari data yang dihasilkan dihitung nilai LC50 dengan metode kurva
menggunakan tabel analisis probit (Meyer et al., 1982).
Untuk kontrol, 50 µL DMSO dipipet dengan menggunakan pipet mikro
dimasukkan ke dalam vial uji, ditambahkan air laut hampir mencapai batas
kalibrasi. Kemudian masukkan larva Artemia salina 10 ekor. Di tambahkan lagi
air laut beberapa tetes hingga batas kalibrasi. Masing-masing konsentrasi dibuat 3
kali pengulangan.

3.3.9. Analisis data


Untuk melihat pengaruh pemberian senyawa flavanon terhadap larva
Artemia salina dilakukan perhitungan statistik dengan analisis probit. Perhitungan
ini dilakukan dengan membandingkan antara larva yang mati terhadap jumlah
larva keseluruhan, sehingga diperoleh persen kematian. Kemudian dilihat dalam

18
tabel nilai probit. Dari nilai tersebut diketahui nilai probit kemudian dimasukkan
dalam persamaan regresi, sehingga dapat nilai LC50.
Persamaan regresi :
Y = ax + b
LC50 =x
Keterangan :
x : Konsentrasi
a : Slope (kemiringan dari garis regresi linear)
y : Nilai Probit
b : Intercept (garis potong)

19
BAB IV
HASIL DAN PEMBAHASAN

4.1. Hasil
4.1.1. Sintesis senyawa kalkon
4.1.1.1. Sintesis senyawa (E)-1-(2-hidroksifenil)-3-(2-metoksifenil)prop-2-en-
1-on (CA2)
OH O O OCH3
KOH OH O
+ H
-H2O
OCH3

 Senyawa murni yang diperoleh berupa padatan berwarna kuning dengan


berat 0,776 g
 Rendemen hasil yang diperoleh 61%
 Titik leleh senyawa yang diperoleh 94-96°C
 Rf senyawa yang diperoleh
0,43 (n-heksana : etil asetat = 9,5 : 0,5)
0,53 (n-heksana : diklorometana = 6 : 4)
0,39 (n-heksana : kloroform = 7 : 3) (Lampiran 5)

Gambar 4.1. Senyawa CA2

20
4.1.1.2. Sintesis senyawa (E)-1-(2-hidroksifenil)-3-(3-metoksifenil)prop-2-en-
1-on (CA3)
O
OH O OH O
KOH
H OCH3
+
-H2O
OCH3

 Senyawa murni yang diperoleh berupa kristal berwarna kuning dengan


berat 0,585 g
 Rendemen hasil yang diperoleh 46%
 Titik leleh senyawa yang diperoleh 90-91°C
 Rf senyawa yang diperoleh
0,40 (n-heksana : etil asetat = 9,5 : 0,5)
0,44 (n-heksana : diklorometana = 6 : 4)
0,29 (n-heksana : kloroform = 7 : 3) (Lampiran 6)

Gambar 4.2. Senyawa CA3

4.1.1.3. Sintesis senyawa (E)-1-(2-hidroksifenil)-3-(4-metoksifenil)prop-2-en-


1-on (CA4)

OH O O OH O
KOH
+ H
-H2O
H3CO OCH3

 Senyawa murni yang diperoleh berupa padatan berwarna kuning dengan


berat 0,663 g
 Rendemen hasil yang diperoleh 52%

21
 Titik leleh senyawa yang diperoleh 87-89°C
 Rf senyawa yang diperoleh
0,38 (n-heksana : etilasetat = 9,5 : 0,5)
0,40 (n-heksana : diklorometana = 6 : 4)
0,26 (n-heksana : kloroform = 7 : 3) (Lampiran 7)

Gambar 4.3 Senyawa CA4

4.1.2. Sintesis senyawa flavanon


4.1.2.1. Sintesis senyawa 2-(2-metoksifenil)kroman-4-on (FA2)

 Senyawa murni yang diperoleh berupa padatan berwarna putih kekuningan


dengan berat 0,0627 g
 Rendemen hasil yang diperoleh 48,6 %
 Titik leleh senyawa yang diperoleh 57 - 58°C
 Rf senyawa yang diperoleh
0,35 (n-heksana : etil asetat = 9,5 : 0,5)
0,48 (n-heksana : diklorometana = 5 : 5)
0,38 (n-heksana : kloroform = 7 : 3) (Lampiran 9)
 Kromatogram HPLC
Detektor : λ 210 nm, tR : 11,64 menit
λ 320 nm, tR : 11,64 menit (Lampiran 12)
Laju aliran : 1 ml/menit
 Spektrum UV (MeOH) : λ maks (nm) = 256, 277 dan 316 (Lampiran 15)

22
 Spektrum IR (KBr) (cm-1) : 3069 (C-H aromatik); 2934 (C-H metil); 1691
(C=O); 1604 (C=C); 1465 (C-H metilen); 1239 (C-O metoksi) (Lampiran
18)
 Spektrum 1H-NMR ( (CD3)2SO ) (ppm) : 7,81 (d, 1H, Kroman-5-H, J =
8 Hz), 7,61 (d, 1H, Kroman-7-H, J = 8 Hz), 7,58 (t, 1H, Ar-6’-H, J = 7
Hz), 7,38 (t, 1H, Ar-4’-H, J = 8 Hz), 7,11 (d, 1H, Kroman-8-H, J = 7,5
Hz), 7, 09 (t, 1H, Ar-5’-H, J = 8 Hz), 7,08 (d, 1H, Ar-3’-H, J = 8 Hz), 7,04
(t, 1H, Kroman-6-H, J = 7,5 Hz), 5,82 (dd, 1H, Kroman-2-Hx, Jax=13,5
Hz, Jbx= 2 Hz), 3,82 (s, 3H,Ar-2’-OCH3), 3,19 (dd, 1H, Kroman-3-Ha,
Jax= 13,5 Hz, Jab= 17 Hz), 2,77 (dd, 1H, Kroman-3-Hb, Jbx= 2,5 Hz,
Jab= 17 Hz ) (Lampiran 21).
 Massa molekul dihitung sebagai C15H16O3 [M+H]+ : 255,1021 m/z dan
ditemukan pada spektrum massa 255,1015 m/z, selisih massa : 0,0006
(Lampiran 24)

Gambar 4.4. Senyawa FA2

4.1.2.2. Sintesis senyawa 2-(3-metoksifenil)kroman-4-on (FA3)

 Senyawa murni yang diperoleh berupa padatan berwarna putih kekuningan


dengan berat 0,0964 g
 Rendemen hasil yang diperoleh 75,9 %
 Titik leleh senyawa yang diperoleh 68 - 69°C

23
 Rf senyawa yang diperoleh
0,25 (n-heksana : etil asetat = 9,5 : 0,5)
0,35 (n-heksana : diklorometana = 5 : 5)
0,23 (n-heksana : kloroform = 7 : 3) (Lampiran 10)
 Kromatogram HPLC
Detektor : λ 210 nm, tR : 10,76 menit
λ 320 nm, tR : 10,76 menit (Lampiran 13)
Laju aliran : 1 ml/menit
 Spektrum UV (EtOAc) : λ maks (nm) = 253, 280 dan 316 (Lampiran 16)
 Spektrum IR (KBr) (cm-1) : 3062 (C-H aromatik); 2957 (C-H metil); 1693
(C=O); 1603 (C=C); 1465 (C-H metilen); 1233 (C-O metoksi) (Lampiran
19)
 Spektrum 1H-NMR (CDCl3) (ppm) : 7,93 (dd, 1H, Kroman-5-H, Ja= 7,5
Hz, Jb= 1,5 Hz), 7,51 (dt, 1H, Kroman-7-H, Ja= 8 Hz, Jb= 2 Hz), 7,35 (t,
1H, Ar-5’-H, J = 8 Hz), 7, 08 (s, 1H, Ar-2’-H), 7,06 (t, 1H, Kroman-6-H, J
= 8 Hz), 7,05 (d, 1H, Ar-6’-H, J = 7 Hz), 7,05 (d, 1H, Kroman-8-H, J = 7
Hz), 6,93 (dd, 1H, Ar-4’-H, Ja = 7 Hz, Jb = 2,5 Hz), 5,46 (dd, 1H,
Kroman-2-Hx, Jax=13,5 Hz, Jbx= 2,5 Hz), 3,85 (s, 3H,Ar-3’-OCH3), 3,08
(dd, 1H, Kroman-3-Ha, Jax= 13,5 Hz, Jab= 17 Hz), 2,9 (dd, 1H, Kroman-
3-Hb, Jbx= 2,5 Hz, Jab= 17 Hz ) (Lampiran 22).

Gambar 4.5. Senyawa FA3

24
4.1.2.3. Senyawa 2-(4-metoksifenil)kroman-4-on (FA4)

 Senyawa murni yang diperoleh berupa padatan berwarna putih kekuningan


dengan berat 0,0884 g
 Rendemen hasil yang diperoleh 68,5 %
 Titik leleh senyawa yang diperoleh 80 - 81°C
 Rf senyawa yang diperoleh
0,23 (n-heksana : etil asetat = 9,5 : 0,5)
0,33 (n-heksana : diklorometana = 5 : 5)
0,23 (n-heksana : kloroform = 7 : 3) (Lampiran 11)
 Kromatogram HPLC
Detektor : λ 210 nm, tR : 10,52 menit
λ 320 nm, tR : 10,52 menit (Lampiran 14)
Laju aliran : 1 ml/menit
 Spektrum UV (EtOAc) : λ maks (nm) = 254, 274 dan 316 (Lampiran 17)
 Spektrum IR (KBr) (cm-1) : 3030 (C-H aromatik); 2959 (C-H metil); 1690
(C=O); 1610 (C=C); 1465 (C-H metilen); 1224 (C-O metoksi) (Lampiran
20)
 Spektrum 1H-NMR (CDCl3) (ppm) : 7,93 (dd, 1H, Kroman-5-H, Ja= 8
Hz, Jb= 1,5 Hz), 7,51 (dt, 1H, Kroman-7-H, Ja = 7 Hz, Jb = 1,5 Hz), 7,41
(d, 2H, Ar-2’,6’-H, J = 8,5 Hz ), 7,05 (t, 2H, Kroman-6,8-H, J = 7 Hz),
6,96 (d, 2H, Ar-3’,5’-H, J = 8,5 Hz), 5,43 (dd, 1H,Kroman-2-Hx, Jax=
13,5 Hz, Jbx= 3 Hz), 3,34 (s, 3H, Ar-4’-OCH3), 3,11 (dd, 1H, Kroman-4-
Ha, Jax= 13,5 Hz, Jab= 17 Hz), 3,87 (dd, 1H, Kroman-4-Hb, Jbx= 3 Hz,
Jab= 17 Hz) (Lampiran 23)
 Massa molekul dihitung sebagai C16H15O3 [M+H]+ : 255,1018 m/z dan
ditemukan pada spektrum massa 255,1021 m/z, selisih massa : 0,0003
(Lampiran 25)

25
Gambar 4.6. Senyawa FA4

4.1.3. Uji Toksisitas


Hasil uji toksisitas tiga analog flavanon turunan 2’-hidroksikalkon dapat
dilihat pada Tabel 4.1
Tabel 4.1. Hasil uji toksisitas senyawa FA2, FA3 dan FA4
Nama Struktur Nilai LC50
Senyawa Senyawa (µg/ml)

FA2 23,45

FA3 5,37

FA4 3,29

26
4.2. Pembahasan
4.2.1. Sintesis senyawa flavanon FA2, FA3 dan FA4
Senyawa flavanon (FA2, FA3 dan FA4) disintesis melalui proses siklisasi
turunan 2’-hidroksikalkon menggunakan metode microwave dengan katalis
CH3COONa dan pelarut etanol yang diberi sedikit air. Berikut adalah tiga
senyawa analog flavanon yang dihasilkan.
 2’-metoksiflavanon (FA2)
 3’-metoksiflavanon (FA3)
 4’-metoksiflavanon (FA4)
Mekanisme reaksi pembentukan masing-masing senyawa flavanon dapat dilihat
pada Gambar 4.7.

Keterangan : R = o-OCH3 (FA2), m-OCH3 (FA3), p-OCH3 (FA4)

Gambar 4.7. Mekanisme reaksi pembentukan senyawa Flavanon

27
Senyawa flavanon disintesis dari senyawa awal 2-hidroksiasetofenon
dengan turunan benzaldehid menggunakan katalis KOH dan pelarut PEG untuk
memperoleh senyawa 2’-hidroksikalkon. Selanjutnya disiklisasi menggunakan
katalis garam natriun asetat dan pelarut etanol yang ditambahkan sedikit air.
Penambahan sedikit air bertujuan agar garam natrium asetat dapat larut sempurna
sehingga reaksi berlangsung lebih baik. Tahapan reaksi sintesis senyawa analog
flavanon dipantau dengan menggunakan KLT dan dari pemantauan diketahui
bahwa reaksi selesai setelah 15-18 menit.
Ketiga senyawa berbentuk padatan berwarna putih kekuningan. Pemurnian
ketiga senyawa dilakukan dengan kolom kromatografi gravitasi menggunakan
silika gel 60 (70-230 mesh) dan eluen 3 % etil asetat dalam n-heksana. Kemurnian
dari ketiga analog flavanon kemudian diuji dengan KLT, titik leleh dan HPLC.
Uji kemurnian dengan KLT menggunakan eluen yang bervariasi dan
perbandingan yang berbeda, senyawa FA2, FA3 dan FA4 menunjukkan satu noda
pada plat KLT (Lampiran 9, 10, dan 11). Uji kemurnian dengan titik leleh
menunjukkan kedua senyawa tersebut memiliki range titik leleh < 2°C. Uji
kemurnian dengan HPLC menunjukkan satu puncak dominan pada senyawa FA2,
FA3 dan FA4 dengan tR masing-masing sebesar 11,64 ; 10,76 dan 10,52 menit
(Lampiran 12, 13 dan 14).
Spektrum UV FA2, FA3 dan FA4 masing-masing memperlihatkan adanya
serapan maksimum pada λ 256;277;316 nm, 253;280;316 nm, dan 254;274;316
nm menunjukkan adanya ikatan rangkap terkonjugasi (Lampiran 15, 16 dan 17).
Untuk lebih jelas dapat dilihat pada Tabel 4.3.

Tabel 4.2. Data spektrum UV senyawa FA2, FA3 dan FA4

No. Senyawa λ maksimum


1 FA2 256, 277, 316 nm
2 FA3 253, 280, 316 nm
3 FA4 254, 274, 316 nm

Spektrum IR senyawa FA2, FA3 dan FA4 masing-masing memperlihatkan


adanya serapan pada bilangan gelombang 1691, 1693, dan 1690 cm-1 yang
menunjukkan adanya gugus C=O terkonjugasi. Serapan pada bilangan gelombang

28
3069, 3062, dan 3030 cm-1 menunjukkan adanya gugus C-H aromatik. Gugus C-H
metil pada senyawa FA2, FA3 dan FA4 masing-masing diperlihatkan adanya
serapan bilangan gelombang 2934, 2957, dan 2959 cm-1. Gugus C-O metoksi
diperlihatkan adanya serapan bilangan gelombang 1239, 1233, dan 1242 cm-1.
Serapan pada bilangan gelombang 1604, 1603, dan 1610 cm-1 yang menunjukkan
adanya gugus C=C aromatik. Gugus C-H metilen diperlihatkan adanya serapan
bilangan gelombang 1465 cm-1 untuk ketiga senyawa. Untuk lebih jelas dapat
dilihat pada Tabel 4.4 (Lampiran 18, 19, dan 20).

Tabel 4.3. Data spektrum IR senyawa FA2, FA3 dan FA4


Spektrum IR (cm-1)
Senyawa C-H C-H C=C C-H C-O
C=O
(aromatik) (metil) (aromatik) (metilen) (metoksi)
FA2 3069 2934 1691 1604 1465 1239
FA3 3062 2957 1693 1603 1465 1233
FA4 3030 2959 1690 1610 1465 1224

Pada spektrum 1H-NMR senyawa flavanon (FA2, FA3 dan FA4) akan
terlihat pola pergeseran kimia yang khas. Pergeseran tersebut terjadi karena
adanya korelasi antara dua proton yang terletak pada atom C-3 (H3a dan H3b)
dengan sebuah proton pada atom C-2 (Hx) yang di sebut dengan ABX type
splitting pattern. Proton H-2 muncul pada pergeseran kimia 5,424-5,84 ppm,
proton H-3a muncul pada pergeseran kimia 3,05-3,23 ppm dan H-3b muncul
pada pergeseran kimia 2,75-2,92 ppm dengan puncak double of doublet (dd).
Proton H-3a dan H-3b dari cincin kroman memiliki tetapan kopling
sebesar 17 Hz karena merupakan proton geminal. Nilai tetapan kopling antara
proton H-2 dan H-3a sebesar 13,5 Hz yang mengindikasikan kedua proton
tersebut memiliki posisi trans-diaxial, sehingga dapat disimpulkan bahwa proton
H-2 memiliki orientasi aksial dan gugus 2-aril memiliki orientasi equatorial.
Proton Ha terletak pada posisi axial., sedangkan proton Hb terletak pada
posisi equatorial., dengan konstanta kopling (J) terhadap proton Hx berdasarkan
persamaan Karplus seperti dijelaskan pada gambar berikut.

29
Tabel 4.4. Tetapan nilai kopling H-2, H-3a dan H-3b

J FA2 FA3 FA4


Jab 17 Hz 17 Hz 17 Hz
Ha R
O Jax (180 )0
13,5 Hz 13,5 Hz 13,5 Hz
Jbx (600) 2,5 Hz 2,5 Hz 3 Hz
Hb
O Hx

Spektrum 1H-NMR senyawa FA2 menunjukkan jumlah proton yang sesuai


dengan senyawa yang diharapkan, dapat dilihat pada Tabel 4.6. Adanya
pergeseran kimia pada δ 7,81 ppm (d, 1H, J = 8 Hz) menunjukkan proton H pada
posisi C-5 cincin kroman. Pergeseran kimia pada 7,61 ppm (t, 1H, J = 8 Hz)
menunjukkan proton H pada posisi C-7 cincin kroman. Proton pada posisi C-6’
memiliki puncak doublet dengan pergeseran kimia δ 7,58 ppm. Proton pada C-4’
dan C-5’ memiliki puncak triplet dengan pergeseran kimia berturut-turut sebesar
7,38 ppm dan 7,09 ppm dan memiliki nilai kopling yang sama sebesar 8 Hz.
Pergeseran kimia pada 7,11 ppm (d, 1H, J = 7,5 Hz) menunjukkan proton H pada
posisi C-8 cincin kroman. Pergeseran kimia pada 7,08 ppm (d, 1H, J = 8 Hz)
menunjukan proton H pada posisi C-3’ gugus aril. Proton pada posisi C-6 cincin
kroman ditunjukan pada puncak triplet dengan pergeseran kimia sebesar 7,04 ppm
(t, 1H, J = 7,5 Hz). Puncak singlet berasal dari proton H gugus OCH3 pada posisi
C-2’ dengan pergeseran kimia sebesar 3,82 ppm. pergeseran kimia pada 5,82 ppm
(dd, 1H, Jax = 13,5 Hz, Jbx= 2 Hz) menunjukan proton H pada posisi C-2 cincin
kroman. Pada posisi C-3 terdapat dua puncak yang berasal dari dua proton, yaitu
319 ppm (dd, 1H, Jax= 13,5 Hz, Jab= 17 Hz) yang terletak pada posisi aksial dan
2,779 ppm (dd, 1H, Jab= 17 Hz, Jbx= 2,5 Hz) yang terletak pada posisi ekuatorial
(lampiran 21).
Spektrum 1H-NMR senyawa FA3 menunjukkan jumlah proton yang sesuai
dengan senyawa yang diharapkan, dapat dilihat pada Tabel 4.6. Adanya
pergeseran kimia pada δ 7,93 ppm (dd, 1H, Ja= 7,5 Hz, Jb= 1,5 Hz) menunjukkan
proton H pada posisi C-5 cincin kroman. Pergeseran kimia pada 7,51 ppm (dt, 1H,
Ja = 8 Hz, Jb = 2 Hz) menunjukkan proton H pada posisi C-7 cincin kroman.
Proton pada posisi C-6 dan C-5’ memiliki puncak triplet dengan pergeseran kimia

30
berturut-turut δ 7,06 ppm dan δ 7,35 ppm. Proton pada C-8 dan C-6’ memiliki
puncak doublet yang berdempetan dengan pergeseran kimia sebesar 7,05 ppm.
pergeseran kimia pada 5,46 ppm (dd, 1H, Jax = 13,5 Hz, Jbx= 2,5 Hz)
menunjukan proton H pada posisi C-2 cincin kroman. Pada posisi C-3 terdapat
dua puncak yang berasal dari dua proton, yaitu 3,08 ppm (dd, 1H, Jax= 13,5 Hz,
Jab= 17 Hz) yang terletak pada posisi aksial dan 2,89 ppm (dd, 1H, Jab= 17 Hz,
Jbx= 2,5 Hz) yang terletak pada posisi ekuatorial. pergeseran kimia pada 6,93
ppm (dd, 1H, Ja = 7 Hz, Jb = 2,5 Hz) menunjukan proton H pada posisi C-4’
gugus aril. Puncak singlet berasal dari posisi C-2’ dan proton H gugus OCH3 pada
posisi C-3’ dengan pergeseran kimia masing-masing sebesar 7,07 ppm dan 3,84
ppm (lampiran 22).
Spektrum 1H-NMR senyawa FA4 menunjukkan jumlah proton yang sesuai
dengan senyawa yang diharapkan, dilihat pada Tabel 4.6. Pergeseran kimia pada δ
7,93 ppm (td, 1H, Ja= 8 Hz, Jb= 1,5 Hz) menunjukkan proton H pada posisi C-5
cincin kroman. Pergeseran kimia pada 7,51 ppm (dt, 1H, Ja = 7 Hz, Jb = 1,5 Hz)
menunjukkan proton H pada posisi C-7 cincin kroman. Proton pada C-6 dan C-8
memiliki pergeseran kimia yang sama yaitu 7,05 ppm, namun memiliki puncak
yang berbeda. Puncak pada posisi C-6 memiliki puncak triplet dengan kopling
sebesar 7 Hz sedangkan puncak pada posisi C-8 memiliki puncak doublet dengan
nilai kopling yang sama. pergeseran kimia pada 5,43 ppm (dd, 1H, Jax = 13,5 Hz,
Jbx= 3 Hz) menunjukan proton H pada posisi C-2 cincin kroman. Pada posisi C-3
terdapat dua puncak yang berasal dari dua proton, yaitu 3,11 ppm (dd, 1H, Jax=
13,5 Hz, Jab= 17 Hz) yang terletak pada posisi aksial dan 2,87 ppm (dd, 1H, Jab=
17 Hz, Jbx= 3 Hz) yang terletak pada posisi ekuatorial. Proton H pada posisi C-
2’,6’ dan C-3’,5’ merupakan proton H yang saling simetris ditunjukkan dengan
pergeseran kimia masing-masing 7,41 ppm dan 6,96 ppm dengan puncak doublet.
Pergeseran kimia 3,84 ppm (s, 3H) menunjukkan proton H pada gugus OCH3
pada posisi C-4’ (lampiran 23).

31
Tabel 4.5. Interpretasi data 1H-NMR senyawa flavanon FA2, FA3 dan FA4
Nomor Senyawa FA2 Senyawa FA3 Senyawa FA4
Atom δH (ppm) δH (ppm) δH (ppm)
1 - - -
2Hx 5,82 (dd, 1H, 5,46 (dd, 1H, 5,43 (dd, 1H,
Jax = 13,5 Hz, Jax = 13,5 Hz, Jax = 13,5 Hz,
Jbx= 2 Hz) Jbx= 2,5 Hz) Jbx= 3 Hz)
3Ha 3,19 (dd, 1H, 3,08 (dd, 1H, 3,11 (dd, 1H,
Jax= 13,5 Hz, Jab= 17 Hz) Jax= 13,5 Hz, Jab= 17 Hz) Jax= 13,5 Hz, Jab= 17 Hz)
3Hb 2,77 (dd, 1H, 2,89 (dd, 1H, 2,87 (dd, 1H,
Jab= 17 Hz, Jbx= 2,5 Hz) Jab= 17 Hz, Jbx= 2,5 Hz) Jab= 17 Hz, Jbx= 3 Hz)
4 - - -
5 7,81 (d, 1H, 7,93 (dd, 1H, 7,93 (td, 1H,
J = 8 Hz) Ja= 7,5 Hz, Jb= 1,5 Hz) Ja= 8 Hz, Jb= 1,5 Hz)
6 7,04 (t, 1H, J = 7,5 Hz) 7,06 (t, 1H, J = 8 Hz) 7,05 (t, 1H, J = 7 Hz)
7 7,61 (t, 1H, 7,51 (dt, 1H, 7,51 (dt, 1H,
J = 8 Hz) Ja = 8 Hz, Jb = 2 Hz) Ja = 7 Hz, Jb = 1,5 Hz)
8 7,11 (d, 1H, J = 7,5 Hz) 7,05 (d, 1H, J = 7 Hz) 7,05 (d, 1H, J = 7 Hz)
Nomor Senyawa FA2 Senyawa FA3 Senyawa FA4
Atom δH (ppm) δH (ppm) δH (ppm)
1’ - - -
2’ 3,82 (s, 3H, -OCH3) 7,07 (s, 1H) 7,41 (d, 1H, J = 8,5 Hz)
3’ 7,08 (d, 1H, J = 8 Hz) 3,84 (s, 3H, -OCH3) 6,96 (d, 1H, J = 8,5 Hz)
4’ 7,38 (t, 1H, J = 8 Hz) 6,93 (dd, 1H, 3,84 (s, 3H, -OCH3)
Ja = 7 Hz, Jb = 2,5 Hz)
5’ 7,09 (t, 1H, J = 8 Hz) 7,35 (t, 1H, J = 8 Hz) 6,96 (d, 1H, J = 8,5 Hz)
6’ 7,58 (d, 1H, J = 7 Hz) 7,05 (d, 1H, J = 7 Hz) 7,41 (d, 1H, J = 8,5 Hz)

Berat molekul FA2 ditunjukkan oleh spektrum massa yang dihitung


sebagai C16H15O3 [M+H]+ dengan puncak ion molekul 255,1015 m/z sedangkan
puncak ion molekul yang dihitung secara teoritis adalah m/z 255,1021, selisih

32
massa molekul tersebut 0,0006. Senyawa FA3 tidak dapat dilakukan analisis MS
karena kemungkinan senyawa FA3 bersifat sangat nonpolar, sehingga tidak dapat
larut dalam pelarut yang digunakan untuk analisis MS (aseton dan air). Berat
molekul FA4 ditunjukkan oleh spektrum massa yang dihitung sebagai C16H15O3
[M+H]+ dengan puncak ion molekul 255,1018 m/z sedangkan puncak ion molekul
yang dihitung secara teoritis adalah 255,1021 m/z selisih massa molekul tersebut
0,0003. Selisih massa berdasarkan spektrum massa dengan massa perhitungan
menunjukkan perbedaan yang sangat kecil antara senyawa yang diharapkan
dengan senyawa flavanon yang diperoleh dan dapat dikatakan bahwa kedua
senyawa flavanon tersebut murni.

4.2.2. Uji toksisitas senyawa FA2, FA3 dan FA4


Uji aktivitas toksisitas dilakukan dengan menggunakan metode Brine
Shrimp Lethality Test (BSLT). Metode ini pertama kali dikembangkan oleh Meyer
et al (1982) yang diujikan pada larva Artemia salina Leach sebagai hewan uji.
Metode ini dipilih karena memiliki beberapa keuntungan seperti pelaksanaannya
sederhana, waktu relatif cepat, tidak memerlukan peralatan khusus dan
menggunakan sedikit sampel.
Senyawa analog flavanon FA2, FA3 dan FA4 diuji pada berbagai
konsentrasi waktu 24 jam pengujian. Perbedaan konsentrasi ini dimaksudkan
untuk mengetahui tingkat aktivitas masing-masing senyawa terhadap kematian
larva Artemia salina Leach. Pembuatan larutan uji menggunakan pelarut organik
metanol karena pelarut ini dapat melarutkan hampir semua senyawa dan mudah
menguap. Pelarut harus dibiarkan sampai menguap sempurna agar tidak
mengganggu pada pengujian toksisitas yang dilakukan. Sebelum ditambahkan air
laut terlebih dahulu ditambahkan DMSO (dimetil sulfoksida) yang dapat
membantu kelarutan senyawa uji dalam air laut sehingga senyawa dapat
terdistribusi secara merata. DMSO dalam pengujian ini digunakan sebagai
kontrol, sifatnya yang tidak terlalu toksik menjadi alasan dipilihnya DMSO untuk
membantu kelarutan senyawa dalam air laut dan penggunaannya pun dalam
konsentrasi kecil yaitu 50 µl agar tidak mengganggu hasil pengujian.
Hasil uji toksisitas dari tiga senyawa analog kalkon pada konsentrasi 100,
50 dan 10 µg/mL terhadap larva Artemia salina Leach yang dianalisis dengan

33
metode analisis probit menunjukkan efek positif terhadap kematian larva. Akan
tetapi, senyawa FA3 dan FA4 pada konsentrasi 100, 50 dan 10 µg/mL
menunjukkan efek kematian larva Artemia salina Leach 100%. Oleh karena itu,
senyawa FA3 dan FA4 diuji aktivitas toksisitasnya pada konsentrasi yang lebih
rendah yaitu 7, 5 dan 3 ppm untuk senyawa FA3, sedangkan untuk senyawa FA4
diuji aktivitas toksisitasnya pada konsentrasi 5, 3 dan 1 ppm. Berdasarkan hasil uji
pada senyawa FA2, FA3 dan FA4, menunjukkan tingkat potensi toksisitas secara
berturut-turut dengan nilai LC50 23,45 µg/mL, 5,37 µg/mL dan 3,29 µg/mL.
Aktivitas biologis suatu senyawa flavanon dipengaruhi oleh adanya
subtituen pada cincin kroman dan cincin arilnya. Pada penelitian ini ketiga
senyawa flavanon FA2, FA3 dan FA4 terdapat subtituen monometoksi (OCH3)
pada cincin arilnya dengan posisi yang berbeda. Hasil penelitian menunjukan
bahwa senyawa flavanon yang tersubtitusi metoksi pada posisi para memiliki sifat
toksik yang lebih besar daripada yang tersubtitusi metoksi pada posisi meta atau
ortho (FA4> FA3> FA2).
Subtituen metoksi yang terdapat pada senyawa flavanon dan perbedaan
posisi dari subtituen tersebut mempengaruhi aktivitas toksisitas senyawa flavanon.
Pengaruh sterik dapat mempengaruhi aktivitas toksisitas flavanon. Senyawa
flavanon FA4 lebih toksik dibandingkan dengan senyawa FA2 dan FA3
dikarenakan memiliki pengaruh sterik yang lebih kecil.
Efek induksi negatif pada metoksi tidak terlalu berpengaruh pada sifat
toksiknya, karena gugus metoksi memiliki efek induksi negatif yang sangat kecil.
Atom O bersifat elektronegatif (menarik elektron), namun gugus metil (CH3)
bersifat mendorong elektron sehingga mengurangi keelektronegatifan pada gugus
metoksi.
Menurut penelitian yang dilakukan oleh Sofiana (2014), senyawa kalkon
yang tersubtitusi monometoksi memiliki sifat toksik yang besar dikarenakan
ikatan α,β-tak jenuh dan efek mesomeri positif yang dipengaruhi oleh gugus
metoksinya. Namun, pada senyawa flavanon tidak lagi memiliki ikatan α,β-tak
jenuh dan resonansi yang disebabkan mesomeri positif ini tidak dapat
mempengaruhi gugus karbonil sehingga mengurangi sifat toksiknya.

34
Hasil uji toksisitas ketiga senyawa analog flavanon (FA2, FA3 dan FA4)
yang diperoleh dengan metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT) terhadap larva
Artemia salina Leach dapat dikatakan positif berpotensi sebagai senyawa
antikanker terbukti dengan nilai LC50 < 200 µg/mL

35
BAB V
KESIMPULAN DAN SARAN

5.1. Kesimpulan
Berdasarkan hasil penelitian yang telah dilakukan, maka dapat diambil
kesimpulan sebagai berikut:
1. Tiga senyawa analog flavanon yaitu 2-(2-metoksifenil)kroman-4-on (FA2),
2-(3-metoksifenil)kroman-4-on (FA3) dan 2-(4-metoksifenil)kroman-4-on
(FA4) berhasil disintesis melalui reaksi siklisasi analog 2’-hidroksikalkon
dengan iradiasi microwave menggunakan katalis natrium asetat (NaOAc)
dan pelarut etanol masing-masing menghasilkan rendemen 48,6 %, 75,9
%, dan 68,5 %.
2. Berdasarkan hasil karakterisasi mengunakan spektometer UV, IR, 1H-
NMR, dan MS, ketiga senyawa analog flavanon yang diperoleh dari hasil
penelitian merupakan senyawa dengan struktur yang diharapkan.
3. Senyawa analog flavanon FA2, FA3 dan FA4 menunjukkan aktivitas
toksisitas yang cukup baik dengan nilai LC50 masing-masing 23,45
µg/mL, 5,37 µg/mL dan 3,29 µg/mL.
4. Senyawa flavanon yang tersubtitusi metoksi pada posisi para memiliki
sifat toksik yang lebih besar daripada yang tersubtitusi metoksi pada posisi
meta atau orto (FA4> FA3> FA2).

5.2. Saran
Agar diperoleh hasil yang lebih baik pada penelitian-penelitian
selanjutnya, maka penulis menyarankan hal-hal sebagai berikut :
1. Perlu dilakukan sintesis dengan menggunakan metode atau katalis yang
lain sehingga diperoleh kondisi reaksi yang paling baik.
2. Perlu dilakukannya uji aktivitas lainnya terhadap senyawa flavanon ini
seperti antimikroba, antioksidan dan lain-lain agar pemanfaatannya luas,
tidak terbatas pada aktivitas toksisitasnya saja.
3. Perlu dilanjutkannya uji sitotoksik menggunakan cell line terhadap
senyawa flavanon ini karena nilai LC50 toksisitasnya cukup baik.

36
DAFTAR PUSTAKA

Albogami, A., Karama, U., Mousa, A., Khan, M., Mazroa, S. & Alkhathlan, H.
2012. Simple and Efficient One Step Synthesis of Functionalized
Flavanones and Chalcones. Oriental Journal Of Chemistry. 28(2): 619-
626.
Baraja, M. 2008. Uji Toksisitas Ekstrak Daun Ficus elastica Nois ex Blume
terhadap Artemia salina Leach dan Profil Kromatografi Lapis Tipis.
Skripsi. Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Surakarta,
Surakarta.
Cassaret, L. J. & Doull, J. 1975. Toxicology: The Basic Science of Poisons. Mac
Millan Publishing Co.Inc., New York.
Dawane, B.S., Konda, S.G., Mandawad, G.G. & Shaikh, B.M. 2009.
Poly(ethylene glycol) (PEG-400) as an alternative reaction solvent for the
synthesis of some new 1-(4-(40-chlorophenyl)-2-thiazolyl)-3-aryl-5-(2-
butyl-4-chloro-1H-imidazol-5yl)-2 pyrazolines and their in vitro
antimicrobial evaluation. European Journal of Medicinal Chemistry. 45:
387-392.
Dauzonne, D., & Monneret, C. 1997. A New Synthesis of Flavanones. Synthesis,
p1305-1308.
Dyrager, C. 2012. Design and Synthesis of Chalcone and Chromone Derivatives
as Novel Anticancer Agents. Tesis. University of Gothenburg, Swiss.
Fessenden, R.J. & Fessenden, J.S. 1994. Kimia Organik : Jilid 2, Edisi III
(Terjemahan Aloysius Hadyana Pudjaatmaka, Ph.D). Erlangga, Jakarta.
Harbone, J.B. 1994. The Flavonoids Advances In Research Since 1986, Chapman
& Hall: London.
Harborne, J.B., & Williams, C.A. 2001. Anthocyanins and other flavonoids.
Natural Product Reports. 18: 310-333.
Hardjono, S .1996. Sintesis Bahan Alam. Gadjah Mada University Press,
Yogyakarta.
Haslam, E. 1993. In Shikimic Acid Metabolism and Metabolites. Chichester,
John Wiley & Sons: 331.
Heim, K.E., Tagliaferro, A.R., & Bobilya, D.J. 2002. Flavonoids antioxidants:
Chemistry Metabolism and Structure-activity relationship. The Journal of
Nutritional Biochemistry. 13(10): 572-584.
Heller, W., & Forkmann, G. 1988. Biosynthesis of flavonoids. In: Harborne, J.B.
The Flavonoids: Advances in Research Since 1980. London, Chapman
and Hall: 399.
Jayapal., M.R., Prasad, K.S., Prasad, P.R., & Sreedhar, N.Y. 2010a. Synthesis and
Characterization of 4-Hydroxy Chalcones Using PEG-400 as a
Recyclable Solvent. Research Journal of Pharmaceutical., Biological
and Chemical Sciences.1(4): 480-485.

37
Jayapal., M.R., Prasad, K.S., & Sreedhar, N.Y. 2010b. Synthesis and
Characterization of 2,6-Dihydroxy Substituted Chalcones Using PEG-
400 as a Recyclable Solven. Journal of Pharmaceutical Science and
Research. 2(8): 450-458.
Joglekar, S.J., & Samant, S.D. 1988. Abnormal Base Catalyzed Reaction of
Formaldehyde and Benzaldehydes With 1-(2-Hydroxyphenyl)-3-Phenyl-
1,3-Propanedione. Tetrahedron Letters. 29(2): 241-244.
Kanno S, Tomizawa A, Hiura A, Osanai A, Shouji A, Ujibe A, Ohtake AT,
Kimura K, Ishikawa M. 2005. Inhibitory Effects of Naringenin on Tumor
Growth in Human Cancer Cell Lines and Sarcoma S-180-Implanted
Mice. Biological Pharmaceutical Bulletin. 28(3): 527-530.
Kulkarni, P., Wagh, P., Zubaidha, P. 2012. An Improved & Eco-Friendly Method
for the Synthesis of Flavanone by the Cyclization of 2’-Hydroxy
Chalcone using Methane Sulphonic Acid as Catalyst. Chemictry Journal.
2(3): 106-110
London, M. 2010. Aldol Condensation: Synthesis of Chalcones. Reading: Organic
Chemistry. University of Colorado, Colorado
Macheix, J-J., A. Fleuriet, & J. Billot. 1990. Fruit Phenolics. CRC Pres Inc., Boca
Raton, p147-237
Mann, J. 1994. In Chemical Aspects of Biosynthesis. Oxford University Press,
Oxford, p58
Markham, K.R. 1988. Cara Mengidentifikasi Flavonoid. Penerbit ITB, Bandung.
Matsjeh,S. 2004. Mempelajari Pengaruh Gugus Hidroksi Pada Metilsalisilat dan
Asetofenon Terhadap Sintesis Senyawa Kalkon. Jurnal Nusantara Kimia,
2000. 1(1): 2000
Meyer, B.N., Ferrigni, N.R., Jacobsen, J.E., Nichols, D.E. & McLaughlin, J.L.
1982. Brine shrimp: a convenient general bioassay for active plants-
constituents. Journal of Medicinal Plants Research. 45: 31-34.
Middleton Jr, E. & Kandaswami, C., 1994. The impact of plant flavonoids on
mammalian biology: implications for immunity, inflamation and cancer.
In: Harborne, J.B. (Ed.), The Flavonoids: Advances in Research Since
1986. Chapman & Hall, London, p619-652
Mudjiman, A. 1995. Budidaya Bandeng di Tambak. Penerbit Swadaya,
Jakarta.
Nijveldt, R.J., Nood, E., Hoom, D., Boelens, P.G., Norren, K., & Leeumen, P.
2001. Flavonoids: a review of probable mechanisms of action and
potential applications. The American Journal of Clinical Nutrition. 74:
418-425.
Palleros, D.R. 2000. Experimental Organic Chemistry. John Willey & Sons,
New York.
Patil, C.B., Mahajan, S.K., & Katti, S.A. 2009. Chalcone: A Versatile Molecule.
Journal of Pharmaceutical Science and Research. 1(3): 11-12.

38
Pietta, 2000. Flavonoids as Antioxidants. Jurnal of Natural Products. 63(7):
1035-1042
Riawan, S. 1990. Kimia Organik. Binarupa Aksara, Jakarta.
Shindo, K., Kato., M., Kinoshita, A., Kobayashi, A., & Koike, Y., 2006, Analyses
of Antioxidant Activities contained in the Boesenbergia pandurata Schult
Rhizome, Biosci. Biotechnol. Biochem., 70(9): 2281-2284
Sofiana, A. 2014, Sintesis Dan Uji Toksisitas Tiga Analog Kalkon Dari 2’-
Hidroksiasetofenon Dengan Metoksi Benzaldehid. Skripsi. FMIPA UR,
Pekanbaru.
Subramanian, R.S. & Balasubramanian, K.K. 1990. Mercury(II) Trifluoroacetate-
mediated Transformation of 3-Bromo-1-phenylprop-2-ynyl Aryl Ethers,
a Novel Synthesis of Flavanones. Journal of The Chemical Society
Chemical Communication, p1469-1470
Usman, H., Hakim, E.H., Achmad, S.A., Harlim, T., Jalaluddin, M.N., Syah,
Y.M., Juliawati, L.D., Makmur, L. & Katajima, M. 2005. 2’,4’-
dihidroksi-3’,5’,6’-Trimetoksi Kalkon suatu Senyawa Antitumor dari
Kulit Batang Tumbuhan Cryptocarya costata (Lauraceae). Jurnal
Matematika dan Sains. 10: 97- 100.
Vender, B., Haemers, A. & Vlieunek, A. J. 1993. In Bioactive Natural Products;
Detection And Structural Determination. Ed.Collegate, S.M and
Molyneux. CRC Press. 17: 343- 355.
Wang, Y., Tan, W., Li, W.Z., & Li, Y. 2001. A Facile Synthetic Approach to
Prenylated Flavanones:  First Total Syntheses of (±)-dBonannione A and
(±)-Sophoraflavanone A. Jurnal of Natural Products. 64: 196-199.

39
Lampiran 1. Skema Kerja Sintesis Analog 2’-Hidroksikalkon

2’-hidroksiasetofenon (5mmol) + turunan benzaldehid (5mmol)


+ PEG (5mL) kedalam erlenmeyer

+ KOH (30 mmol)

microwave selama 1-8 menit


dengan daya 180 W

+ HCl 3N dingin (± 10 mL) atau hingga netral

Saring dan dicuci dengan


akuades dingin dan heksan
dingin

Padatan Filtrat

Uji KLT, jika lebih dari


satu noda direkristalisasi

Uji kemurnian dengan KLT


Senyawa murni
dan titik leleh

Siklisasi kalkon menjadi


flavanon

40
Lampiran 2. Skema Kerja Sintesis Analog Flavanon

Turunan 2’hidroksi kalkon (0,5 mmol) + etanol (5 mL) + natrium


asetat (500 mg) + 4 tetes air

microwave selama 15-18 menit dengan daya 300 W dengan


pengaturan waktu setiap 30 detik

ditambahkan Akuades dingin

Saring

Padatan Filtrat

Kolom kromatografi
menggunakan eluen 3% etil Uji kemurnian dengan
asetat dalam n-heksana KLT, titik leleh dan HPLC

Karakterisasi dengan UV,


IR, MS dan 1H-NMR

Uji Toksisitas

41
Lampiran 3. Skema uji aktivitas toksisitas dengan metode Brine Shrimp Lethality
Test (BSLT) senyawa FA2

20 mg sampel dilarutkan dengan


2 mL metanol
(Larutan induk 10.000 µg/mL)

0,5 mL Larutan induk 10.000 1 mL Larutan induk 1.000 µg/mL


µg/mL + 4,5mL metanol + 9 mL metanol
(larutan induk 1000 µg/mL) (larutan induk 100 µg/mL)

0,5 mL Larutan 2,5 mL Larutan 0,5 mL Larutan


induk 1.000 µg/mL induk 100 µg/mL induk 100 µg/mL
@ 3 fial @ 3 fial @ 3 fial
(larutan konsentrasi (larutan konsentrasi (larutan konsentrasi
100 µg/mL) 50 µg/mL) 10 µg/mL)

Pelarut dibiarkan menguap

Dimetilsulfoksida ditambahkan sebanyak 50µL

Air laut ditambahkan sebanyak 5 mL

10 ekor larva udang dimasukkan ke dalam masing-masing vial uji

Hitung jumlah kematian larva udang setelah 24 jam

Hitung LC50 dengan metode kurva menggunakan tabel analisis probit

42
Lampiran 4. Skema uji aktivitas toksisitas dengan metode Brine Shrimp Lethality
Test (BSLT) senyawa FA3 dan FA4

20 mg sampel dilarutkan dengan 2 mL metanol


(Larutan induk 10.000 µg/mL)

0,5 mL Larutan induk 10.000


µg/mL + 4,5mL metanol
(larutan induk 1000 µg/mL)

0,5 mL Larutan induk 1.000


µg/mL + 4,5mL metanol
(larutan induk 100 µg/mL)

2,5 mL Larutan induk 100 µg/mL


+ 22,5mL metanol
(larutan induk 10 µg/mL)

0,5 mL Larutan induk 10 µg/mL 1,5 mL Larutan induk 10 µg/mL


@ 3 fial @ 3 fial
(larutan konsentrasi 1 µg/mL) (larutan konsentrasi 3 µg/mL)

3,5 mL Larutan induk 10 2,5 mL Larutan induk 10


µg/mL @ 3 fial µg/mL @ 3 fial
(larutan konsentrasi 7 µg/mL) (larutan konsentrasi 5 µg/mL)

Pelarut dibiarkan menguap

Dimetilsulfoksida ditambahkan sebanyak 50µL

Air laut ditambahkan sebanyak 5 mL

10 ekor larva udang dimasukkan ke dalam masing-masing vial uji

Hitung jumlah kematian larva udang setelah 24 jam

Hitung LC50 dengan metode kurva menggunakan tabel analisis probit

43
Lampiran 5. Hasil Uji KLT senyawa CA2

H : E = 9,5 : 0,5 H : DCM = 6 : 4 H : Kl = 7 : 3


Rf = 0,43 Rf = 0,53 Rf = 0,39

Keterangan :
H : n-heksana
E : etilasetat
DCM : diklorometan
Kl : kloroform
A2 : Aldehid
K : Keton

H:E = 9,5 : 0,5 CA2 : senyawa kalkon CA2

Rf A2 = 0,4
Rf CA2 = 0,43
Rf K = 0,53

44
Lampiran 6. Hasil Uji KLT senyawa CA3

H : E = 9,5 : 0,5 H : DCM = 6 : 4 H : Kl = 7 : 3


Rf = 0,40 Rf = 0,44 Rf = 0,29

Keterangan :
H : n-heksana
E : etilasetat
DCM : diklorometan
Kl : kloroform
A3 : Aldehid
K : Keton

H:E = 9,5 : 0,5 CA3 : senyawa kalkon CA3

Rf A3 = 0,4
Rf CA3 = 0,4
Rf K = 0,53

45
Lampiran 7. Hasil Uji KLT senyawa CA4

H : E = 9,5 : 0,5 H : DCM = 6 : 4 H : Kl = 7 : 3


Rf = 0,38 Rf = 0,40 Rf = 0,26

Keterangan :
H : n-heksana
E : etilasetat
DCM : diklorometan
Kl : kloroform
A4 : Aldehid
K : Keton

H:E = 9,5 : 0,5 CA4 : senyawa kalkon CA4

Rf A4 = 0,27
Rf CA4 = 0,37
Rf K = 0,53

46
Lampiran 8. Hasil Uji KLT perbandingan senyawa kalkon (CA2, CA3 dan CA4)
dengan senyawa kalkon Sofiana (2014)

H : E = 9,5 : 0,5 H : E = 9,5 : 0,5 H : E = 9,5 : 0,5


Rf = 0,43 Rf = 0,40 Rf = 0,38

Keterangan :
H : n-heksana
E : etilasetat
CA2, CA3 dan CA4 : senyawa kalkon dalam penelitian ini
AM1, AM2 dan AM3 : senyawa kalkon yang telah disintesis oleh Sofiana (2014)

47
Lampiran 9. Hasil Uji KLT senyawa FA2

H : E = 9,5 : 0,5 H : DCM = 5 : 5 H : Kl = 7 : 3


Rf = 0,35 Rf = 0,48 Rf = 0,38

Keterangan :
H : n-heksana
E : etilasetat
DCM : diklorometan
Kl : kloroform
CA2 : senyawa kalkon CA2
FA2 : senyawa flavanon FA2

H : E = 9,5 : 0,5
Rf CA2 = 0,43
Rf FA2 = 0,35

48
Lampiran 10. Hasil Uji KLT senyawa FA3

H : E = 9,5 : 0,5 H : DCM = 5 : 5 H : Kl = 7 : 3


Rf = 0,25 Rf = 0,35 Rf = 0,23

Keterangan :
H : n-heksana
E : etilasetat
DCM : diklorometan
Kl : kloroform
CA3 : senyawa kalkon CA3
FA3 : senyawa flavanon FA3

H : E = 9,5 : 0,5
Rf CA3 = 0,40
Rf FA3 = 0,25

49
Lampiran 11. Hasil Uji KLT senyawa FA4

H : E = 9,5 : 0,5 H : DCM = 5 : 5 H : Kl = 7 : 3


Rf = 0,23 Rf = 0,33 Rf = 0,23

Keterangan :
H : n-heksana
E : etilasetat
DCM : diklorometan
Kl : kloroform
CA4 : senyawa kalkon CA4
FA4 : senyawa flavanon FA4
H : E = 9,5 : 0,5
Rf CA4 = 0,38
Rf FA4 = 0,23

50
Lampiran 12. Data Kromatogram HPLC senyawa FA2

Detektor : λ 210 nm, tR : 11,64 menit


λ 320 nm, tR : 11,64 menit

51
Lampiran 13. Data Kromatogram HPLC senyawa FA3

Detektor : λ 210 nm, tR : 10,76 menit


λ 320 nm, tR : 10,76 menit

52
Lampiran 14. Data Kromatogram HPLC senyawa FA4

Detektor : λ 210 nm, tR : 10,52 menit


λ 320 nm, tR : 10,52 menit

53
Lampiran 15. Spektrum UV senyawa FA2

Spektrum UV senyawa FA2


2.5

2
Absorbansi

1.5

0.5

0
200 250 300 350 400

λ (nm)

Puncak
λmaks (nm)
256
277
316

54
Lampiran 16. Spektrum UV senyawa FA3

Spektrum UV senyawa FA3


1.2

1
Absorbansi

0.8

0.6

0.4

0.2

0
200 250 300 350 400

λ (nm)

Puncak
λmaks (nm)
253
280
316

55
Lampiran 17. Spektrum UV senyawa FA4

Spektrum UV senyawa FA4


1.6
1.4
1.2
Absorbansi

1
0.8
0.6
0.4
0.2
0
200 250 300 350 400

λ (nm)

Puncak
λmaks (nm)
254
274
316

56
%T

10
20
30
40
50
60
70
80
90
4666,97
4620,68

4500
FA 2 Syamsul
4379,56

4279,26

4179,92
4116,27

4000
3912,77

3638,87
3624,40
Lampiran 18. Spektrum IR senyawa FA2

3522,17

3500
3365,93

3177,86

3069,84
3006,19

3000
2934,82

2841,27
2784,37
2704,32
2626,20

57
2542,29

2500
2454,52
2360,97
2332,04

2035,95
2000

1942,40
1909,61

1787,12

1691,64

1604,84
1500

1465,96

1367,59
1306,83
1239,32
1154,45
1113,94
1060,89
1031,00
989,53
1000

948,05
907,55
856,43
759,02

661,61
589,28
556,49
500

473,54
1/cm
105

60
67,5
75
82,5
90
97,5
%T

4500
FA3 Syamsul 2
4116,27

4000
Lampiran 19. Spektrum IR senyawa FA3

3500
3357,25

3188,47

3062,13
3024,51

3000
2957,97
2903,96
2839,34
2772,79

2623,30

58
2533,61

2500
2450,67
2359,04
2351,33

2176,76

2075,50
2000

1936,61
1859,46
1827,63
1777,48
1693,57

1602,91
1500

1465,00
1367,59
1357,94
1307,79
1263,43
1233,53
1226,78
1193,99
1155,41
1112,97
1053,18
1000

1037,75
987,60
945,16
875,72
852,57
781,20
704,05
648,11
635,57
563,24
536,23
500

459,08
1/cm
52,5
67,5
82,5
97,5
105
%T

60
75
90
112,5

4500
FA4 Syamsul 2
4000
Lampiran 20. Spektrum IR senyawa FA4

3500
3079,49
3030,30

3000
2959,90
2906,85
2842,23

59
2500
2361,94
2331,07

2035,95
2000

1952,05

1690,68

1610,63
1517,08
1465,00
1500

1432,21
1376,27
1307,79
1259,57
1224,85
1177,59
1144,80
1112,97
1062,82
1027,14
1000

984,70
904,65
855,47
840,04
819,78
768,67
724,30
619,18
586,39
544,91
500

523,70
451,36
1/cm
Lampiran 21. Spektrum 1H-NMR senyawa FA2

60
Lampiran 22. Spektrum 1H-NMR senyawa FA3

61
Lampiran 23. Spektrum 1H-NMR senyawa FA4

OCH3

62
Lampiran 24. Spektrum MS senyawa FA2

63
Lampiran 25 Spektrum MS senyawa FA4

64
Lampiran 26. Hasil LC50 uji toksisitas senyawa FA2

Jumlah larva
Jumlah larva Persen
Konsentrasi Artemia Nilai
Artemia tiap kematian
( µg/mL ) yang mati probit
uji (%)
1 2 3 Rata-rata
10 10 1 1 3 1,67 16,7 4,046
50 10 10 9 10 9,67 96,7 6,881
100 10 10 10 10 10 100 9,768

12

10
y = 0.063x + 3.520 9.768
8
Nilai probit

6 6.881

4
4.046
2

0
0 20 40 60 80 100 120

Konsentrasi

Perhitungan LC50 :
Persamaan regresi :
y = 0,0631x + 3,520
Untuk LC50 respon adalah 50% sehingga nilai probit (y) adalah 5
5 = 0,0631x + 3,520
0,0631x = 5 – 3,520
0,0631x = 1,48
x = 23,45
LC50 = 23,45 µg/mL

65
Lampiran 27. Hasil LC50 uji toksisitas senyawa FA3

Jumlah larva
Jumlah larva Persen
Konsentrasi Artemia Nilai
Artemia tiap kematian
( µg/mL ) yang mati probit
uji (%)
1 2 3 Rata-rata
3 10 2 2 3 2,33 23,3 4,261
5 10 4 5 5 4,67 46,7 4,95
7 10 7 6 7 6,67 66,7 5.468

6
y = 0.301x + 3.384 5.468
5
4.95
4
Nilai probit

4.261
3

0
0 1 2 3 4 5 6 7 8

Konsentrasi

Perhitungan LC50 :
Persamaan regresi :
y = 0,301x + 3,384
Untuk LC50 respon adalah 50% sehingga nilai probit (y) adalah 5
5 = 0,301x + 3,384
0,301 x = 5 – 3,384
0,301 x = 1,616
x = 5,37
LC50 = 5,37 µg/mL

66
Lampiran 28. Hasil LC50 uji toksisitas senyawa FA4

Jumlah larva
Jumlah larva Persen
Konsentrasi Artemia Nilai
Artemia tiap kematian
( µg/mL ) yang mati probit
uji (%)
1 2 3 Rata-rata
1 10 1 2 1 1,33 13,3 3,874
3 10 5 4 5 4,67 46,7 4,95
5 10 9 7 7 7,67 76,7 5.772

6
y = 0.474x + 3.441
5 5.772
Nilai probit

4.95
4

3 3.874

0
0 1 2 3 4 5 6

Konsentrasi

Perhitungan LC50 :
Persamaan regresi :
y = 0,474x + 3,441
Untuk LC50 respon adalah 50% sehingga nilai probit (y) adalah 5
5 = 0,474x + 3,441
0,474x = 5 – 3,441
0,474x = 1,559
x = 3,29
LC50 = 3,29 µg/mL

67
Lampiran 29. Perhitungan rendemen senyawa kalkon CA2

OH O O OCH3
KOH OH O
+ H
-H2O
OCH3

(K) (A2) (CA2)

 5 mmol 2’-hidroksiasetofenon g = 0,005 mol x 136,15 g/mol


= 0,68075 g
 5 mmol 2-metoksibenzaldehid g = 0,005 mol x 136,15 g/mol
= 0,68075 g
 Berat murni kalkon CA2 = 0,776 g

2’-hidroksiasetofenon + 2-metoksibenzaldehid Kalkon CA2


Mula-mula 0,005 mol 0,005 mol -
Bereaksi 0,005 mol 0,005 mol 0,005 mol
Sisa - - 0,005 mol

Berat teoritis CA2 = 0,005 mol x 254,1021 g/mol


= 1,271 g
Berat murni CA2
Rendemen =
Berat teoritis CA2 x 100 %
0,776 g
= x 100 %
1,271 g
= 61 %

68
Lampiran 30. Perhitungan rendemen senyawa kalkon CA3

O
OH O OH O
KOH
+ H OCH3
-H2O

OCH3

(K) (A3) (CA3)

 5 mmol 2’-hidroksiasetofenon g = 0,005 mol x 136,15 g/mol


= 0,68075 g
 5 mmol 3-metoksibenzaldehid g = 0,005 mol x 136,15 g/mol
= 0,68075 g
 Berat murni kalkon CA3 = 0,585 g

2’-hidroksiasetofenon + 3-metoksibenzaldehid Kalkon CA3


Mula-mula 0,005 mol 0,005 mol -
Bereaksi 0,005 mol 0,005 mol 0,005 mol
Sisa - - 0,005 mol

Berat teoritis CA3 = 0,005 mol x 254,1021 g/mol


= 1,271 g
Berat murni CA3
Rendemen =
Berat teoritis CA3 x 100 %
0,585 g
= x 100 %
1,271 g
= 46 %

69
Lampiran 31. Perhitungan rendemen senyawa kalkon CA4

OH O O
KOH OH O
+ H
-H2O
OCH3 OCH3

(K) (A4) (CA4)

 5 mmol 2’-hidroksiasetofenon g = 0,005 mol x 136,15 g/mol


= 0,68075 g
 5 mmol 4-metoksibenzaldehid g = 0,005 mol x 136,15 g/mol
= 0,68075 g
 Berat murni kalkon CA4 = 0,585 g

2’-hidroksiasetofenon + 3-metoksibenzaldehid Kalkon CA4


Mula-mula 0,005 mol 0,005 mol -
Bereaksi 0,005 mol 0,005 mol 0,005 mol
Sisa - - 0,005 mol

Berat teoritis CA3 = 0,005 mol x 254,1021 g/mol


= 1,271 g
Berat murni CA4
Rendemen =
Berat teoritis CA4 x 100 %
0,663 g
= x 100 %
1,271 g
= 52 %

70
Lampiran 32. Perhitungan rendemen senyawa flavanon FA2

CA2 FA2
 Berat murni kalkon CA2 = 0,127 g

Berat murni FA2


Rendemen = x 100 %
Berat CA2
0,0627 g
= x 100 %
0,127 g
= 48,6 %

71
Lampiran 33. Perhitungan rendemen senyawa flavanon FA3

CA3 FA3

 Berat murni kalkon CA3 = 0,127 g

Berat murni FA3


Rendemen = x 100 %
Berat CA3
0,0964 g
= x 100 %
0,127 g
= 75,9 %

72
Lampiran 34. Perhitungan rendemen senyawa flavanon FA4

CA4 FA4

 Berat murni kalkon CA4 = 0,127 g

Berat murni FA4


Rendemen = x 100 %
Berat CA4
0,0884 g
= x 100 %
0,127 g
= 68,5 %

73
Lampiran 35. Nilai probit sesuai besarnya persentase

% 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9

0 …. 2,674 2,946 3,119 3,249 3,555 3,445 3,524 3,595 3,659

10 3,718 3,773 3,825 3,874 3,920 3,964 4,006 4,046 4,085 4,122

20 4,158 4,194 4,228 4,261 4,294 4,326 4,357 4,387 4,417 4,447

30 4,476 4,504 4,532 4,560 4,597 4,615 4,642 4,668 4,695 4,721

40 4,747 4,773 4,798 4,824 4,849 4,900 4,925 4,950 4,950 4,975

50 5,000 5,030 5,05 5,075 5,100 5,126 5,151 5,202 5,202 5,227

60 5,253 5,279 5,305 5,332 5,358 5,385 5,413 5,468 5,468 5,496

70 5,524 5,553 5,583 5,613 5,643 5,674 5,706 5,772 5,772 5,806

80 5,842 5,878 5,915 5,954 5,994 6,036 6,080 6,175 6,175 6,227

90 6,282 6,341 6,405 6,476 6,476 6,645 6,751 6,881 7,054 7,326

100 9,768 - - - - - - - - -

74