Immunodulator 1 PDF

UIN SYARIF HIDAYATULLAH JAKARTA
UJI IMUNOMODULATOR EKSTRAK ETANOL

JINTEN HITAM (Nigella sativa L.) TERHADAP
JUMLAH TOTAL LEUKOSIT, PERSENTASE
LIMFOSIT, PERSENTASE MONOSIT DAN KADAR
INTERLEUKIN-1β PADA MENCIT BALB/c
SKRIPSI
ZIKRIAH
NIM.108102000069
FAKULTAS KEDOKTERAN DAN ILMU KESEHATAN

PROGRAM STUDI FARMASI
JAKARTA
MEI 2014
UIN SYARIF HIDAYATULLAH JAKARTA
UJI IMUNOMODULATOR EKSTRAK ETANOL

JINTEN HITAM (Nigella sativa L.) TERHADAP
JUMLAH TOTAL LEUKOSIT, PERSENTASE
LIMFOSIT, PERSENTASE MONOSIT DAN KADAR
INTERLEUKIN-1β PADA MENCIT BALB/c
SKRIPSI
Diajukan sebagai salah satu syarat memperoleh gelar Sarjana Farmasi
(S.Far)
ZIKRIAH
NIM.108102000069
FAKULTAS KEDOKTERAN DAN ILMU KESEHATAN

PROGRAM STUDI FARMASI
JAKARTA
MEI 2014
ii
HALAMAN PERNYATAAN ORISINALITAS
iii
iv
v
ABSTRAK
Nama : Zikriah
Program Studi : Farmasi
Judul : Uji Imunomodulator Ekstrak Etanol Jinten Hitam (Nigella
sativa L.) Terhadap Jumlah Total Leukosit, Persentase
Limfosit, Persentase Monosit Dan Kadar Interleukin-1β
Pada Mencit BALB/c
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui efek imunomodulator ekstrak etanol

jinten hitam yang diberikan pada mencit BALB/c dengan dosis 125 mg/kgBB,
dosis 250 mg/kgBB dan dosis 500 mg/kgBB melalui parameter jumlah total
leukosit, persentase limfosit, persentase monosit dan kadar interleukin 1β. Uji
total leukosit, limfosit dan monosit dilakukan dengan cara mencit diberikan
ekstrak etanol jinten hitam selama 14 hari berturut - turut. Sampel darah diambil
pada hari ke – 7, hari ke – 14 dan hari ke – 21. Hasil penelitian menunjukkan
pemberian ekstrak etanol jinten hitam pada mencit mampu mempengaruhi jumlah
total leukosit dan persentase limfosit dengan hasil berbeda nyata (p<0,05) tetapi
tidak mampu mempengaruhi persentase monosit. Uji interleukin 1β dilakukan
dengan cara mencit diberikan ekstrak etanol jinten hitam selama 5 hari berturut –
turut. Pada hari kelima, dua jam setelah pemberian ekstrak etanol jinten hitam
diberikan LPS 20 μg/mencit dan 6 jam kemudian diambil sampel darah. Hasil dari
penelitian menunjukkan dosis 250mg/kg mampu menekan kadar interleukin 1β
yang diinduksi lipopolisakarida tetapi secara uji statistik Kruskal-Wallis
menunjukkan hasil tidak berbeda nyata (P>0,05).
Kata kunci: jinten hitam, leukosit, interleukin 1β
vi
ABSTRACT
Name : Zikriah
Nim : Pharmacy
Title : Immunomodulatory Effect Of Black Cumin Ethanol Extract
(Nigella sativa L.) in Levels Of Leukocytes , Lymphocytes,
Monocytes And Interleukin - 1β In Mice BALB/c
This aims of this study was to determine the immunomodulatory effects from
ethanol extract of black cumin in mice. Mice are given ethanol extract of black
cumin dose 125 mg/kgBB, 250 mg/kg and 500 mg/kgBB through parameters the
total number of leukocytes ,percentage of lymphocytes, percentage of monocytes
and levels of interleukin 1β. The test of total leukocytes, percentage of
lymphocytes and percentage of monocytes was done by using mice that given
ethanol extract of black cumin for 14 days. Blood samples were taken 7th day,
14th day and 21th day. The results showed that ethanol extract of black cumin in
mice were able to influence the total number of leukocytes and the percentage of
lymphocytes with results significant different (p<0.05) but not able influence the
percentage of monocytes. Test interleukin 1β was done by using mice that given
ethanol extract of black cumin for 5 consecutive days. On the fifth day, two hours
after administration of ethanol extract, mice are given LPS 20 μg/mice and 6
hours later blood sample was taken. The results showed that dose 250 mg/kg
suppressed levels of interleukin 1β induced by lipopolysaccharide but the
statistical analisis Kruskal-Wallis were not significant different (P>0.05)
Keyword: black cumin, leukocytes, interleukin 1β
vii
KATA PENGANTAR
Puji syukur saya ucapkan kepada Tuhan Yang Maha Esa, Karena atas
berkat dan Rahmat-Nya, Saya dapat menyelesaikan skripsi ini. Penulisan skripsi
ini dilakukan dalam rangka memenuhi salah satu syarat untuk mencapai gelar
Sarjana Farmasi pada Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan Universitas Islam
Negeri (UIN) Syarif Hidayatullah Jakarta.
Saya menyadari bahwa tanpa bantuan dan bimbingan dari berbagai pihak,
dari masa perkuliahan sampai penyusunan skripsi ini, sangantlah sulit bagi saya
untuk menyelesaikan skripsi ini. Oleh Karena saya mengucapkan terima kasih
kepada :
1) Ibu Farida Sulistiawati, M.Si, Apt selaku pembimbing pertama dan Ibu drh.
Rr. Bhintarti S. Hastari, M.Biomed selaku pembimbing kedua, yang memiliki
andil besar dalam proses penelitian dan penyelesain tugas akhir saya, semoga
segala bantuan dan bimbingan ibu mendapat imbalan yang baik dari ALLAH
SWT.
2) Kementrian Agama RI selaku pemberi beasiswa, sehingga penulis dapat
menempuh pendidikan di Program Studi Farmasi Fakultas kedokteran dan
Ilmu Kesehatan Universitas Islam Negeri Syarif Hidayatullah Jakarta.
3) Bapak Prof. DR. (hc) dr. M.K Tadjudin Sp.And, selaku Dekan Fakultas
Kedokteran dan Ilmu Kesehatan Univeritas Islam Negeri (UIN) Syarif
Hidayatullah Jakarta.
4) Bapak Drs Umar Mansur M.Sc, selaku ketua Program Studi Farmasi Fakultas
Kedokteran dan Ilmu Kesehatan Univeritas Islam Negeri (UIN) Syarif
Hidayatullah Jakarta.
5) Bapak dan Ibu dosen dan karyawan yang telah memberikan bimbingan dan
bantuan selama saya menempuh pendidikan di Program Studi Farmasi
Fakultas kedokteran dan Ilmu Kesehatan Univeritas Islam Negeri (UIN) Syarif
Hidayatullah Jakarta
6) Kak Eris, drh. Dewi, mbak Rani serta staf laboratorium Farmasi yang telah
membantu dan membimbing selama penelitian
viii
7) Ayahanda Drs. Arsyadi dan Ummi Dra. Rusmani yang selalu berdoa,
memberikan dukungan dan nasihat. Kak Zakiah dan Dik Zia Ulhaq tercinta
yang selalu memberikan inpirasi dan kebahagian.
8) Teman – teman farmasi, rekan – rekan CSS MoRA 2008, dan sahabat –
sahabatku Fafa, Aam, Mamyu, Vany, Eva, Aye dan Nia yang selalu menjadi
sahabat disaat suka duka dimasa perkuliahan.
Penulis menyadari bahwa masih ada kekurangan dalam penyusunan skripsi ini
sehingga kritik dan saran dari para pembaca sangat diharapkan untuk menjadikan
skripsi ini lebih baik lagi. Akhir kata, saya berharap Allah Swt membalas segala
kebaikan, semua pihak yang telah membantu. Semoga skripsi ini membawa
manfaat bagi pengembangan ilmu.
Ciputat, Februari 2014
Penulis
ix
xi
DAFTAR ISI
Halaman
HALAMAN JUDUL ..................................................................................................... ii
HALAMAN PERNYATAAN ORISINALITAS ........................................................ iii
HALAMAN PERSETUJUAN PEMBIMBING ........................................................ iv
HALAMAN PENGESAHAN ....................................................................................... v
ABSTRAK ..................................................................................................................... vi
ABSTRACT .................................................................................................................. vii
KATA PENGANTAR ................................................................................................... viii
HALAMAN PERNYATAAN PERSETUJUAN PUBLIKASI ................................. xi
DAFTAR ISI ................................................................................................................. xii
DAFTAR TABEL ......................................................................................................... xiv
DAFTAR GAMBAR ..................................................................................................... xv
DAFTAR LAMPIRAN ................................................................................................. xvi
BAB 1. PENDAHULUAN ............................................................................................ 1
1.1 Latar Belakang .............................................................................................. 1
1.2 Rumusan Masalah ......................................................................................... 3
1.3 Hipotesis........................................................................................................ 3
1.4 Tujuan Penulisan ........................................................................................... 3
1.5 Manfaat Penulisan ......................................................................................... 4
BAB 2. TINJAUAN PUSTAKA ................................................................................... 5
2.1 Jinten Hitam (Nigella sativa L.) .................................................................... 5
2.2 Sistem Imun .................................................................................................. 9
2.3 Sitokin .......................................................................................................... 13
2.4 Interleukin – 1β ............................................................................................. 13
2.5 Leukosit ......................................................................................................... 15
2.6 ELISA ........................................................................................................... 18
2.7 Lipopolisakarisa ............................................................................................ 20
BAB 3. METODOLOGI PENELITIAN ..................................................................... 22
3.1 Tempat dan Waktu Penelitian ...................................................................... 22
3.2 Bahan............................................................................................................. 22
3.3 Alat ................................................................................................................ 22
3.4 Hewan Uji ..................................................................................................... 22
3.5 Prosedur Penelitian........................................................................................ 23
3.5.1 Pembuatan Suspensi Na-CMC .......................................................... 23
3.5.2 Aklitimasi Hewan Uji ....................................................................... 23
3.5.3 Uji Peningkatan Total Leukosit, Limfosit dan Monosit................... 23
3.5.4 Uji Kadar Interleukin 1β ................................................................... 23
3.5.5 Pengambilan Darah .......................................................................... 25
3.5.6 Perhitungan Total Leukosit ............................................................... 25
3.5.7 Analisa Persentase Monosit dan Persentase Limfosit ....................... 26
3.5.8 Pengukuran Kadar IL-1β ................................................................... 26
3.5.9 Analisa Statistik ................................................................................ 27
BAB 4. PEMBAHASAN ............................................................................................. 28
4.1 Leukosit ....................................................................................................... 27
4.2 Monosit ........................................................................................................ 32
4.3 Limfosit ....................................................................................................... 35
xii
4.4 Interleukin 1β ............................................................................................... 36
BAB 5. KESIMPULAN DAN SARAN ........................................................................ 40
DAFTAR PUSTAKA .................................................................................................... 41
xiii
DAFTAR TABEL
2.1 Kandungan kimia biji Nigella sativa L secara umum ......................................... 8
2.2 Kandungan kimia minyak Nigella sativa L ........................................................ 9
2.3 Kandungan biji nutrisi biji Nigella sativa L per 100 gram ................................ 9
3.1 Data perlakuan hewan uji untuk uji total leukosit, limfosit dan monosit........... 22
3.2 Data Perlakuan untuk uji kadar interleukin IL - 1β ............................................ 23
5.1 Hasil Jumlah Total Leukosit (per mm3) .............................................................. 27
5.2 Hasil Persentase Monosit (per mm3) ................................................................... 30
5.3 Hasil Persentase Limfosit (per mm3) .................................................................. 33
5.4 Rata – Rata Kadar IL-1β .................................................................................... 36
xiv
DAFTAR GAMBAR
2.1 Nigella sativa L ................................................................................................. 6
2.2 Struktur kimia kandungan aktif minyak Nigella sativa L ................................... 7
2.3 Struktur Thymoquinone ...................................................................................... 11
2.4 Gambaran umum sistem imun ............................................................................ 15
3.1 Skema pembacaan diferensiasi leukosit .............................................................. 25
5.1 Perbandingan nilai total leukosit setiap kelompok.............................................. 29
5.2 Perbandingan nilai differensial monosit setiap kelompok .................................. 31
5.3 Perbandingan nilai differensial limfosit setiap kelompok................................... 33
5.4 Perbandingan kadar Interleukin 1β ..................................................................... 35
xv
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran 1. Surat Keterangan Hewan Uji ...................................................................... 48
Lampiran 2. Alat dan Bahan yang digunakan ................................................................. 49
Lampiran 3. Alur Penelitian ............................................................................................ 51
Lampiran 4. Pembuatan Larutan Uji ............................................................................... 52
Lampiran 5.Kegiatan Penelitian ...................................................................................... 54
Lampiran 6. Gambar Pemeriksaan Total Leukosit, Monosit dan Limfosit..................... 55
Lampiran 7. Jumlah Total Leukosit, Persentase Monosit Dan Limfosit Hari 7 ............. 56
Lampiran 8. Jumlah Total Leukosit, Persentase Monosit Dan Limfosit Hari 14 ........... 63
Lampiran 9. Jumlah Total Leukosit, Persentase Monosit dan Limfosit Hari 2 .............. 70
Lampiran 10. Hasil Uji Normalitas Total Leukosit Hari 7 ............................................. 71
Lampiran 11. Hasil Uji Nonparametik Kruskal-Wallis Data total leukosit hari 7 .......... 72
Lampiran 12. Hasil Uji Uji Mann-Whitney Data total leukosit hari 7 ............................ 73
Lampiran 13. Hasil Uji Normalitas Total Leukosit Hari 14 ........................................... 74
Lampiran 14. Hasil Uji Homogenitas Data total leukosit hari 14 ................................... 75
Lampiran 15. Hasil Uji Nonparametik Kruskal-Wallis Data total leukosit hari 14 ........ 76
Lampiran 16. Hasil Uji Mann-Whitney Data Total Leukosit hari 14 ............................. 71
Lampiran 17. Hasil Uji Normalitas Total Leukosit Hari 21 ........................................... 75
Lampiran 18. Hasil Uji Homogenitas Data total leukosit hari 21 ................................. 76
Lampiran 19. Hasil Uji ANOVA Data Total Leukosit Hari 21 ...................................... 77
Lampiran 20. Hasil Uji Post Hoc Data Total Leukosit hari 21 ....................................... 78
Lampiran 21. Hasil Uji Normalitas Monosit Hari 7 ....................................................... 79
Lampiran 22. Hasil Uji Homogenitas Data monosit hari 7 ........................................... 80
Lampiran 23. Hasil Uji ANOVA Data Monosit hari 7 ................................................... 81
Lampiran 24. Hasil Uji Normalitas Monosit Hari 14 ..................................................... 82
Lampiran 25. Hasil Uji Homogenitas Data Monosit Hari 14 ........................................ 83
Lampiran 26. Hasil Uji ANOVA Data Monosit hari 14 ................................................. 84
Lampiran 27. Hasil Uji Normalitas Monosit Hari 21 ..................................................... 85
Lampiran 28. Hasil Uji Homogenitas Data Monosit Hari 21 ....................................... 86
Lampiran 29. Hasil Uji ANOVA Data Monosit hari 21 ................................................. 87
Lampiran 30. Hasil Uji Post Hoc Data Monosit Hari 21 ................................................ 88
Lampiran 31. Hasil Uji Normalitas Limfosit Hari 7 ....................................................... 89
Lampiran 32. Hasil Uji Homogenitas Data limfosit hari 7 ........................................... 90
Lampiran 33. Hasil Uji Nonparametik Kruskal-Wallis Data limfosit hari 7 .................. 91
Lampiran 34. Hasil Uji Mann-Whitney Data Limfosit hari 7 ......................................... 92
Lampiran 35. Hasil Uji Normalitas Limfosit Hari 14 ..................................................... 95
Lampiran 36. Hasil Uji Homogenitas Data limfosit hari 14 .......................................... 96
Lampiran 37. Hasil Uji Nonparametik Kruskal-Wallis Data limfosit hari 14 ................ 97
Lampiran 38. Hasil Uji Mann-Whitney Data Limfosit hari 14 ....................................... 98
Lampiran 39. Hasil Uji Normalitas Data Limfosit hari 21 ............................................. 102
Lampiran 40. Hasil Uji Homogenitas Data limfosit hari 21 ......................................... 103
Lampiran 41. Hasil Uji ANOVA Data Limfosit hari 21 ................................................. 104
Lampiran 42. Hasil Uji Post Hoc Data Limfosit hari 21................................................. 105
Lampiran 43. Hasil Uji Normalitas Total Leukosit Kontrol ........................................... 106
Lampiran 44. Hasil Uji Nonparametik Kruskal-Wallis Total Leukosit Kontrol ............ 107
Lampiran 45. Hasil Uji Normalitas Total Leukosit Dosis Rendah ................................. 108
Lampiran 46. Hasil Uji Homogenitas Data Total Leukosit Dosis Rendah ..................... 109
Lampiran 47. Hasil Uji ANOVA Data Total Leukosit Dosis Rendah ............................ 110
xvi
Lampiran 48. Hasil Uji Normalitas Total Leukosit Dosis Sedang ................................. 111
Lampiran 49. Hasil Uji Homogenitas Data total Leukosit Dosis Sedang ....................... 112
Lampiran 50. Hasil Uji ANOVA Data Total Leukosit Dosis Sedang ............................ 113
Lampiran 51. Hasil Uji Post Hoc Data Total Leukosit Dosis Sedang ............................ 114
Lampiran 52. Hasil Uji Normalitas Total Leukosit Dosis Tinggi................................... 115
Lampiran 53. Hasil Uji Homogenitas Data Total Leukosit Dosis Tinggi ..................... 116
Lampiran 54. Hasil Uji ANOVA Data Total Leukosit Dosis Tinggi ............................. 117
Lampiran 55. Hasil Uji Normalitas Monosit Kontrol ..................................................... 118
Lampiran 56. Hasil Uji Homogenitas Data Monosit Kontrol ......................................... 119
Lampiran 57. Hasil Uji Nonparametik Kruskal-Wallis Data Monosit Kontrol .............. 120
Lampiran 58. Hasil Uji Mann-Whitney Data Monosit Kontrol ...................................... 121
Lampiran 59. Hasil Uji Normalitas Monosit Dosis rendah ............................................ 123
Lampiran 60. Hasil Uji Homogenitas Data Monosit Dosis Rendah ............................... 124
Lampiran 61. Hasil Uji Nonparametik Kruskal-Wallis Monosit Dosis Rendah ............. 125
Lampiran 62. Hasil Uji Normalitas Monosit Dosis Sedang............................................ 126
Lampiran 63. Hasil Uji Homogenitas Data Monosit Dosis Sedang ............................... 127
Lampiran 64. Hasil Uji ANOVA Data Monosit Dosis Sedang ...................................... 128
Lampiran 65. Hasil Uji Normalitas Monosit Dosis Tinggi ............................................. 129
Lampiran 66. Hasil Uji Homogenitas Data Monosit Dosis Tinggi................................. 130
Lampiran 67. Hasil Uji Nonparametik Kruskal-Wallis Monosit Dosis Tinggi .............. 131
Lampiran 68. Hasil Uji Normalitas Limfosit Kontrol..................................................... 132
Lampiran 69. Hasil Uji Homogenitas Data Limfosit Kontrol ........................................ 133
Lampiran 70. Hasil Uji Nonparametik Kruskal-Wallis Data Limfosit Kontrol ............. 134
Lampiran 71. Hasil Uji Normalitas Limfosit Dosis Rendah ........................................... 135
Lampiran 72. Hasil Uji Homogenitas Data Limfosit Dosis Rendah............................... 136
Lampiran 73. Hasil Uji ANOVA Data Limfosit Dosis Rendah...................................... 137
Lampiran 74. Hasil Uji Normalitas Limfosit Dosis Sedang ........................................... 138
Lampiran 75. Hasil Uji Homogenitas Data Limfosit Dosis Sedang ............................... 139
Lampiran 76. Hasil Uji ANOVA Data Limfosit Dosis Sedang ...................................... 140
Lampiran 77. Hasil Uji Post Hoc Data Limfosit Dosis Sedang ...................................... 141
Lampiran 78. Hasil Uji Normalitas Limfosit Dosis Tinggi ............................................ 142
Lampiran 79. Hasil Uji Homogenitas Data Limfosit Dosis Tinggi ................................ 143
Lampiran 80. Hasil Uji ANOVA Data Limfosit Dosis Tinggi ....................................... 144
Lampiran 81. Uji Interleukin 1 β .................................................................................... 145
xvii
BAB 1
PENDAHULUAN
1.1 Latar Belakang
Indonesia merupakan negara kepulauan yang tersusun dari 17.508
pulau beriklim tropis heterogen berada di antara dua benua dan dua
samudra juga kaya akan fauna dan flora. Iklim tropis juga sangat cocok
untuk pertumbuhan berbagai makhluk hidup termasuk bakteri dan agen
pembawa penyakit lainnya. Adanya agen pembawa penyakit ini
menyebabkan sistem imun melemah sehingga menimbulkan berbagai
penyakit (Sukowati, 2010).
Sistem imun merupakan sebuah mekanisme yang digunakan tubuh
untuk mempertahankan keutuhan tubuh sebagai perlindungan terhadap
bahaya yang ditimbulkan berbagai benda asing atau antigen. Sistem imun
adalah gabungan sel, molekul dan jaringan yang berperan dalam resistensi
terhadap infeksi. Sistem imun diperlukan untuk mempertahankan keutuhan
tubuhnya terhadap bahaya yang dapat ditimbulkan berbagai bahan dalam
lingkungan hidup (Baratawidjaja, 2009).
Pemakaian obat tradisional masih banyak digunakan dalam
meningkatkan kesehatan masyarakat di Indonesia meski sekarang sudah
banyak orang menggunakan obat–obatan modern sebagai pelengkap tetapi
obat tradisional masih mempunyai kedudukan khusus dalam masyarakat.
Pengobatan secara tradisional berdasarkan pada upaya untuk
mengembalikan dan memperkuat penyembuhan secara alami (Donatus,
1983).
Salah satu tanaman yang dipercaya dapat meningkatkan sistem
imun adalah jinten hitam (Nigella sativa L.) atau yang lebih dikenal di
masyarakat dengan habbatus saudah dan merupakan spesies famili
Ranunculaceae yang berasal dari mediterrania. Minyak jinten hitam
mengandung thymoquinon (TQ), dithymquinon (DTQ), nigellon,
thymohydroquinon (THQ), dan thymol (THY). Kandungan lainnya adalah
saponin, alkaloid, lemak, karbohidrat, protein, mineral, vitamin dan
sembilan asam amino essensial. (Salem et al., 2005).
1 UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

2
Selama berabad-abad biji dari tanaman jinten hitam telah

digunakan sebagai obat herbal untuk meningkatkan kesehatan dan
melawan penyakit terutama di Timur tengah dan Asia Tenggara (Gilani et
al., 2004). Jinten hitam dikenal sebagai salah satu herbal dalam
pengobatan nabi atau thibun nabawi. Dalam kitab Shahih Bukhari Muslim,
Abu Hurairah r.a. berkata bahwa dia pernah mendengar Rasullah S.A.W.
bersabda sebagai berikut :
Hadits riwayat Abu Hurairah Radhiyallahu’anhu: Rasulullah Shallallahu

alaihi wassalam bersabda: Sesungguhnya pada jinten hitam itu terdapat
obat untuk segala macam penyakit kecuali kematian.
Beberapa penelitian telah dilakukan mengenai efek

imunomodulator dari ekstrak etanol jinten hitam, salah satunya adalah
penelitian Suhatri et al. (2010) dimana pemberian ekstrak etanol biji jinten
hitam (Nigella sativa L.) tehadap mencit yang telah diberikan antigen
suspensi eritrosit kambing 5% dapat meningkatkan titer antibodi dengan
dosis 50 mg/kg BB, 100 mg/kg BB, dan 200 mg/kg BB dan dapat
meningkatkan jumlah limfosit, dan monosit serta menurunkan jumlah
neutrofil segmen dengan sangat signifikan (P<0,01).
Pada penelitian Suhatri pemberian ekstrak etanol jinten hitam
dilakukan terhadap mencit yang telah diinduksi antigen, sementara itu
belum diketahui data pengujian efek imunomodulator ekstrak etanol jinten
hitam terhadap mencit tanpa pemberian antigen. Pada penelitian ini
dilakukan uji imunomodulator dengan pemberian ekstrak etanol jinten
hitam tanpa pemberian antigen dengan melihat parameter jumlah total
leukosit, persentase limfosit dan persentase monosit.
Penelitian lain mengenai ekstrak etanol jinten hitam adalah
penelitian Michel et al. (2010) yang menunjukkan bahwa ekstrak etanol
jinten hitam dapat menurunkan kadar IL-1β pada mencit yang diinduksi
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

3
kerusakan hati dengan CCl4. Interleukin-1β (IL-1β) sangat poten sebagai

sitokin pro inflamasi dan terlibat pada berbagai respons melawan antigen.
Pada proses inflamasi sistem imun akan melepaskan sitokin pro inflamasi
yaitu : IL-1β, Il-6 dan TNF-α. (Omar, 2001).
Pada penelitian ini akan dilihat pengaruh ekstrak etanol jinten
hitam terhadap efek penekanan interleukin 1β pada mencit yang diinduksi
dengan lipopolisakarida. Lipopolisakarida merupakan komponen dinding
sel bakeri yang menstimulasi respons inflamasi dengan mengaktivasi
sitokin pro inflamasi (Manu dan Kuttan, 2008).
1.2 Perumusan Masalah
1. Apakah ekstrak etanol jinten hitam dapat mempengaruhi jumlah total

leukosit, persentase limfosit, persentase monosit serta kadar IL- 1β?
2. Berapa dosis ekstrak etanol jinten hitam yang dapat mempengaruhi
jumlah total leukosit, persentase limfosit, persentase monosit serta
kadar IL- 1β?
1.3 Hipotesis
Ekstrak etanol jinten hitam dapat mempengaruhi jumlah total
leukosit, persentase limfosit, persentase monosit serta kadar IL- 1β.
1.4 Tujuan Penelitian

Mengetahui pengaruh pemberian ekstrak etanol jinten hitam
terhadap jumlah IL- 1β pada mencit yang diberi lipopolisakarida dan
mengetahui efek imunomodulator ekstrak etanol jinten hitam yang
diberikan pada mencit BALB/c melalui parameter total leukosit.

4
1.5 Manfaat Penelitian

1. Mengetahui respon sistem imun mencit melalui gambaran total
leukosit, persentase limfosit dan persentase monosit yang diberi
ekstrak etanol jinten hitam.
2. Menyiarkan pengobatan thibun nabawi dan menjadi acuan untuk
pengembangan sediaan imunostimulant dari ekstrak etanol jinten
hitam.

BAB 2
TINJAUAN PUSTAKA
2.1 Deskripsi Jinten Hitam (Nigella sativa L.)
2.1.1 Klasifikasi
Berdasarkan ilmu taksonomi, klasifikasi tanaman jinten hitam
adalah sebagai berikut (Depkes RI, 1979):
Kingdom : Plantae
Subkingdom : Traceabionta
Divisi : Spermatophyta
Subdivisi : Magnoliophyta
Kelas : Magnoliopsida dicotyledon
Subkelas : Magnoliidae
Ordo : Ranunculales
Famili : Ranunculaceae
Genus : Nigella Linn.
Spesies : Nigella sativa.
Nama lain Nigella sativa L. adalah : Kalonji (bahasa Hindi),
Kezah (Hebrew), Hamushka (Rusia), Habbatus Sauda’ (Arab), Siyah
daneh (Persian), Fennel Flower / Black Carraway / Nutmeg Flower /
Roman Coriander / Black Onian Seed (English), atau Jinten Hitam
(Indonesia).
2.1.2 Morfologi
Jinten hitam merupakan tanaman herba tahunan, tegak, dengan
tinggi berkisar antara 30 sampai 60 cm. Daun berbentuk lanset, linearis,
ujung lancip. Daun berwarna hijau keabu-abuan, halus dan berbulu. Bunga
berwana hijau pucat ketika muda dan biru terang ketika masak, kemudian
menjadi biru pucat atau putih. Daun bagian bawah bertangkai dan bagian
atas duduk. Daun membalut bunga kecil. Kelopak bunga ada lima, bundar
telur, ujungnya agak meruncing sampai agak tumpul, pangkal mengecil
membentuk sudut yang pendek dan besar. Mahkota bunga pada umumnya

6
delapan, agak memanjang, lebih kecil dari kelopak bunga, berbulu jarang
dan pendek.
Gambar 2.1 Jinten Hitam

Bibir bunga dua, bibir bagian atas pendek, lanset, ujung
memanjang berbentuk benang, ujung bibir bunga bagian bawah berbentuk
tumpul. Benang sari banyak, gundul. Kepala sari jorong dan sedikit tajam,
berwarna kuning. Buah berbentuk bulat telur atau agak bulat. Buah
memiliki kapsul nektar yang banyak, umumnya 10 dan berbentuk seperti
saku. bulat. Biji hitam, trigonal, panjang 1,5-3 mm dengan permukaan
kasar dan bagian dalam berwarna putih berminyak. Biji memiliki
rasa sedikit pahit dan pedas dengan tekstur renyah (Peter, 2004).
2.1.3 Budidaya, Ekologi dan penyebaran (Depkes, 1979)

Tanaman ini diperbanyak dengan biji. Di Indonesia tanaman ini
belum dibudidayakan secara umum. Tumbuh dari daerah Levant ke arah
timur Samudra Indonesia sebagai gulma semusim. Bagian tanaman yang
digunakan biji.
2.1.4 Kandungan Kimia

Kandungan kimia dari biji jinten hitam minyak atsiri (0,5 – 1,6 %)
meliputi nigellon, thymoquinon (TQ), thymol, carvacrol, α dan β-pipene,
d-limoene, d-citronellot, thymohydroquinon, dithymoquinon, 4 - terpineol
dan p-cymene. Asam lemak (35.6 – 41,6 %) yaitu asam linoleat, asam

7
linolenat, asam miristat, asam arakidonat, asam palmitat, asam oleat, sterol
dan asam stearat. Protein (22.7%) Asam amino meliputi albumin,
globulin, lisin, leusin, isoleusin, valin, glisin, alanin, fenilalanin, arginin,
asparagin, cystine, asam glutamat, asam aspartat, prolin, serin, treonin,
triptopan dan tirosin. Mineral seperti Fe, Na, Cu, Zn, P, dan Ca.
Gambar 2.2 Struktur kimia kandungan aktif minyak jinten hitam

TQ, DTQ, THY, dan THQ (Salem, 2005)
Jinten hitam mengandung vitamin seperti asam askorbat, tiamin,

niasin, piridoksin, asam folat dan gizi (Gilani et al., 2004). Alkaloid
meliputi indazol nigellicine, isoquinolin nigellimin dan N – Oksidannya
dan indozol alkaloid nigellidin (Tahir, 2006). Monosakarida dalam bentuk
glukosa, ramnosa, xilosa dan arabinosa (Salem et al., 2005)
Tabel 2.1 Kandungan kimia biji jinten hitam secara umum

Kandungan % (w/w)
Oil 3 – 35,5
Protein 16-19,9
Karbohidrat 33-34
Serat 4,5-6,5
Kadar Abu 3,7-7

8
Saponin 0,013
Kadar Air 5-7
Sumber : Tahir dan Bakeet, 2006
Tabel 2.2 Kandungan kimia minyak jinten hitam
Kandungan % (w/w)
Asam Linoleat 44,7-56
Asam Oleat 20,7-24,6
Asam Linolenat 0,6-1,8
Asam Arakidonat 2-3
Palmitoleic Acid 3
Eicosadienoic Acid 2-2.5
Asam Palmitat 12-14,3
Asam Stearat 2,7-3
Asam Miristat 0,16
Sumber: Tahir dan Bakeet, 2006)
Tabel 2.3 Kandungan nutrisi biji jinten hitam per 100 gram
Kandungan Biji Eropa Biji Etopia
Kadar Air (g) 4 6,6
Protein (g) 22 13,8
Lemak (g) 41 32,2
Karbohidrat (g) 17 –
Serat (g) 8 16,4
Kadar Abu (g) 4,5 7,5
N (g) – 2,2
Na (g) 0,5 –
Kalium (g) 0,5 –
Kalsium (g) 0,2 0,5
P (g) 0,5 0,6
Besi (mg) 10 17
Vitamin B1 (mg) 1,5 0,62
Niacin (mg) 6 9,5
Sumber: Peter, 2004

9
2.1.5 Farmakologi
Berdasarkan penelitian – penelitian yang telah dilakukan jinten
hitam memiliki aktivitas farmakologi sebagai berikut :
a. Sistem imun
Berdasarkan penelitian Suhatri et al., (2008) pemberian ekstrak
etanol biji jinten hitam dapat meningkatkan titer antibodi pada mencit
dengan dosis 50 mg/kg BB, 100 mg/kg BB, dan 200 mg/kg BB dan dapat
meningkatkan jumlah limfosit dan monosit serta menurunkan jumlah
neutrofil segmen dengan sangat signifikan (P<0,01), namun tidak terhadap
sel eosinofil dan neutrofil batang.
b. Anti histamin
Minyak jinten hitam yang dapat menurunkan kadar IgE, jumlah
eosinofil dan kortisol endogen di dalam plasma dan urin pada penderita
asma (Salem et al., 2005)
c. Anti atherogenik
Jinten hitam menghasilkan efek antiatherogenic dengan
menurunkan LDL secara signifikan dan meningkatkan kadar HDL
kolesterol pada tikus (Buriro et al., 2011).
d. Anti mikroba
Hasil penelitian menunjukkan 90.3 % dari methichilin-resistant
Sthaphylococcus aureus (MRSA) sensitif terhadap ekstrak jinten hitam
dengan konsentrasi 5 mg/dics. Hal ini mengindikasikan jinten hitam dapat
menghambat efek dari MRSA (Aslam et al., 2011).
2.2 Sistem Imun
Sistem imun adalah gabungan sel, molekul, dan jaringan yang
berperan dalam resistensi terhadap infeksi. Imunitas adalah resistensi
terhadap penyakit terutama infeksi. Reaksi yang dikoordinasi sel – sel,
molekul – molekul dan bahan lainnya terhadap mikroba disebut respons
imun. Sistem imun tubuh diperlukan untuk mempertahankan keutuhannya
terhadap bahaya yang dapat ditimbulkan berbagai bahan dalam lingkungan
hidup (Baratawidjaja, 2009).

10
Imunitas (kekebalan) merupakan terminologi yang digunakan

untuk respons spesifik dari sistem imun. Kekebalan terhadap infeksi, baik
yang terbentuk mengikuti paparan organisme penyebab maupun yang
dapat dirangsang secara buatan dengan imunisasi terutama untuk resiko
paparan. (Underwood, 1996).
Mekanisme sistem imun diklasifikasikan menjadi sistem imun non
spesifik dan sistem imun spesifik
2.2.1 Sistem imun non spesifik
a. Pertahanan fisik
Pertahanan fisik terdiri dari kulit yang utuh dan epitel lapisan
mukus yang dalam kondisi normal tidak dapat ditembus mikrobial.
Disamping itu, gerakan dapat membuang mikroorganisme, seperti pada
reflek batuk, bersin dan muntah, bersama – sama dengan gerakan yang
konstan seperti bergetarnya silia pada traktus respiratorius dan peristaltik
usus (Underwood, 1996).
b. Pertahanan biokimia
Lisozim dalam keringat, ludah, air mata dan air susu ibu
melindungi tubuh terhadap berbagai kuman gram positif dapat
menghancurkan lapisan peptidoglikan dinding bakteri. Air susu ibu
mengandung laktosidase dan asam neuraminik yang bersifat antibakteri
terhadap E. coli dan asam dalam saluran pencernaan oleh enzim proteolitik
dan cairan empedu dalam usus halus; dan oleh asiditas vagina. Zat kimia
ini membentuk lingkungan yang tidak nyaman untuk bakteri yang bukan
flora normal (Baratawidjaja, 2009).
c. Pertahanan humoral
Sistem imun nonspesifik menggunakan berbagai molekul larut.
Molekul larut tertentu diproduksi di tempat infeksi atau cedera dan
berfungsi lokal. Molekul tersebut antara lain adalah peptide antimikroba
seperti defensing, katelisidin dan IFN dengan efek antiviral. Faktor larut
lainnya diproduksi di tempat yang lebih jauh dan dikerahkan ke jaringan
sasaran melalui sirkulasi seperti komplemen, protein fase akut, mediator

11
asal fosfolipid dan sitokin seperti IL-1, IL-6, dan TNF – α (Baratawidjaja,
2009).
d. Pertahanan Selular
Fagosit, sel NK, sel mast dan eosinofil berperan dalam sistem imun
nonspesifik selular. Sel – sel sistem imun tersebut dapat ditemukan dalam
sirkulasi atau jaringan. Fagositosis adalah garis pertahanan kedua tubuh
terhadap agen infeksius. Pertahanan ini terdiri dari proses penelanan dan
pencernaan mikroorganisme serta toksin setelah berhasil menembus tubuh
(Baratawidjaja, 2009).
2.2.2 Sistem Imun Spesifik
a. Humoral
Pemeran utama dalam sistem sel imun spesifik humoral adalah sel
B atau limfosit B. Sel B berasal dari sel asal multipoten di sumsum tulang.
Sel B yang dirangsang oleh benda asingkan berpoliferasi, berdiferensiasi
dan berkembang menjadi sel plasma yang memproduksi antibodi. Antibodi
yang dilepaskan dapat ditemukan di dalam serum (Baratawidjaja, 2009).
b. Selular
Limfosit T atau sel T berperan pada sistem imun spesifik selular.
Sel T berasal dari sumsum tulang tetapi proliferasi dan diferensiasinya
terjadi dalam timus atas pengaruh berbagai faktor asal timus. Sel T terdiri
dari beberapa subset sel dengan fungsi yang berlainan yaitu CD4+ (Th1,
Th2), CD8+ ( CTL/Tc ) dan Ts ( sel Tr / Th. )

12
Gambar 2.4 Gambaran umum sistem imun (Baratawidjaja, 2009)
Fungsi sistem imun spesifik selular adalah pertahanan terhadap

bakteri yang hidup intraselular, virus, jamur, parasit dan keganasan. Sel
CD4+ mengaktifkan sel Th yang selanjutnya mengaktifkan makrofag
untuk menghancurkan mikroba. Sel CD8+ memusnahkan sel terinfeksi.
(Baratawidjaja, 2009)
2.2.3 Imunomodulator
Imunomodulator adalah obat yang diharapkan dapat
mengembalikan, memperbaiki dan mengembalikan ketidakseimbangan
sistem imun yang fungsinya terganggu atau menekan fungsinya yang
berlebihan. Imunorestorasi dan imunostimulasi disebut imunopotensiasi
atau up regulation, sedangkan imunosupresi disebut down regulation.
Imunorestorasi ialah suatu cara untuk mengembalikan fungsi sistem imun
yang terganggu dengan memberikan berbagai komponen sistem imun,
seperti immunoglobulin dalam bentuk ISG, HSG, plasma, plasmapheresis,
leukopheresis, transparansi sumsum tulang, hati dan timus (Baratawidjaja,
2009).
Imunostimulan atau imunopotensiasi adalah cara memperbaiki
fungsi sistem imun dengan menggunakan imunostimulan yaitu bahan yang
merangsang sistem imun. Bahan yang disebut imunostimulator yaitu

13
hormon timus, limfokin, interferon, antibodi monoklonal, ekstrak leukosit,

bahan asal bakteri dan jamur juga bahan sintetik seperti levamisol,
isoprinosin, muramil dipeptida dan lain-lain. Imunosupresi merupakan
suatu tindakan untuk menekan respons imun. Kegunaannya di klinik
terutama pada transplantasi untuk mencegah reaksi penolakan dan pada
berbagai penyakit inflamasi yang menimbulkan kerusakan atau gejala
sistemik, seperti autoimun atau autoinflamasi. Bahan yang berfungsi
sebagai imunosupresi seperti steroid (glukokortikoid dan kortikosteroid),
cytosan, metotreksat dan lain-lain. (Baratawidjaja, 2009).
2.3 Sitokin
Sitokin merupakan protein pemberi sinyal intraselular yang bekerja
secara lokal dengan parakrin atau autokrin dengan terikat pada reseptor
yang memiliki afinitas dan memacu reaktivitas sistem imun, baik pada
imunitas spesifik atau nonspesifik. Sitokin diproduksi oleh makrofag atau
monosit (monokin), limfokin (limfosit), sel – sel endotel, hepatosit, sel –
sel epitel keratinosit, dan firoblas. Sitokin jika dijumpai dalam sirkulasi,
biasanya terdapat dalam konsentrasi pikogram permililiter (pg/mL)
(Baratawidjaja, 2009; Isselbacher et al., 1999).
Sitokin berperan dalam imunitas nonspesifik dan spesifik dan
mengawali, mempengaruhi dan meningkatkan respon nonspesifik.
Makrofag diransang oleh IFN-γ, TNF-α, dan IL – 1 disamping juga
memproduksi sitokin – sitokin tersebut. IL – 1, IL – 6, TNF-α, merupakan
sitokin proinflamasi dan inflamasi spesifik (Baratawidjaja, 2009).
2.4 Interleukin – 1 (IL – 1 )
Pada tahun 1970 diketahui bahwa makrofag penyaji antigen juga
melepaskan sebuah faktor telarut, interleukin-1, yang mengaktifkan
limfosit – T dan menginduksi produksi sebuah faktor sekunder,
interleukin-2, yang meransang proliferasi dan produksi immunoglobulin
oleh limfosit – B. Pembebasan faktor – faktor ini berfungsi untuk
melipatgandakan dan menunjang respon imun (Bloom, 1994).
Interleukin-1 dahulu dikenal sebagai leukocyte activating factor
(LAF), B cell activator factor (BAF), mononuclear cell factor (MCF),

14
leucocyte endogenous mediator (LEM), hemeopoetin-1 dan sejumlah

nama lain, tetapi dengan ditemukan antibodi terhadap IL-1 dan
rekombinan IL-1, saat ini nama IL-1 diberikan pada subtansi ini. Monosit
atau makrofag yang disebut sel kupffer, sel Langerhans, sel dendritik
maupun makrofag yang terdapat dalam paru – paru, limpa atau tempat
lain, merupakan sumber utama IL-1. IL-1 juga dapat disintesis oleh hampir
semua sel berinti yang lain, tetapi tidak oleh eritrosit. Saat ini sudah
diketahui bahwa fungsi utama IL-1 adalah mediator respons inflamasi
pejamu pada imunitas bawaan (Kresno, 1996)
Interleukin adalah bagian dari sitokin yang disintesis oleh limfosit,
monosit dan sel – sel lain yang merangsang pertumbuhan sel T, sel B dan
sel hematopoiesis. Interleukin 1 sampai interleukin 18 mempunyai fungsi
biologis yang variasi (Cruse dan Lewis, 2003). IL-1 adalah sitokin yang
diproduksi terutama dengan aktivasi mononuklear fagosit yang berfungsi
sebagai mediator inflamasi pada respon imun nonspesifik, meningkatkan
proliferasi sel Th dan pertumbuhan serta diferensiasi sel B (Abbas dan
Licthtman, 2004)
Interleukin – 1 terdiri dari dua bentuk yaitu α dan β. Keduanya
berikatan pada reseptor yang sama dan memiliki aktivitas biologi yang
sama termasuk berinteraksi dengan sel endotel untuk meningkatkan
pengaturan ekspresi molekul adhesi pada sel endotel, menstimulasi
produksi kemokin oleh sel endotel dan makrofag juga menginduksi
sintesis protein fase akut oleh hepar. IL α dan β mempunyai kesamaan
berat molekul umum kurang lebih 17,5 kDa dan mempunyai 26 % asam
amino yang homolog (Abbas dan Licthtman, 2004; Isselbacher et al.,
1999)
Fungsi utama IL – 1 adalah sama dengan TNF, yaitu mediator
terhadap infeksi dan ransangan lain. IL – 1 bersama TNF berperan pada
imunitas nonspesifik. Sumber utama IL – 1 yaitu fagosit mononuklear
yang diaktifkan, makrofag, sel – sel endotel, sel dendritik, sel – sel
Langerhans. Efek biologis IL – 1 sama seperti TNF yang tergantung dari
jumlah yang diproduksi (Baratawidjaja, 2009; Johnson et al., 2011).

15
Dampak biologis IL-1 bergantung pada jumlah sitokin yang

dilepaskan pada kadar rendah fungsi utamanya adalah sebagai mediator
inflamasi lokal, misalnya berinteraksi dengan sel endotel untuk
meningkatkan koagulasi dan meningkatkan ekspresi molekul permukaan
yang membantu adhesi leukosit. Dalam kadar tinggi IL-1 masuk ke dalam
sirkulasi dan melancarkan efek endokrin, misalnya menyebabkan demam,
menginduksi sintesis protein fase akut oleh hepar dan mengawali kakeksia.
IL-1 berfungsi meningkatkan pertumbuhan dan diferensiasi limfosit,
disamping itu IL-1 merangsang secara nonspesifik ekspresi berbagai
reseptor antigen pada permukaan sel sehingga secara tidak langsung
meningkatkan respons imun spesifik. (Kresno, 1996)
Daya kerja imunologik utama interleukin – 1 yaitu meransang
reseptor IL-2 muncul dalam sel – sel T, meningkatkan pengaktifan sel B,
menginduksi timbulnya demam, reaktan fase akut dan IL – 6.
Meningkatkan resistensi nonspesifik, (Johnson et al., 2011).
Interleukin-1β sangat poten sebagai sitokin pro inflamasi dan
terlibat pada berbagai respons melawan antigen. Pada proses inflamasi
sistem imun akan melepaskan sitokin pro inflamasi yaitu : IL-1β, Il-6 dan
TNF-α. (Omar, 2001). IL-1β dikeluarkan oleh peripheral blood
mononuklear jika terkena agen inflamasi. Ketika dikeluarkan ke dalam
darah IL-1β memiliki aktivitas yang luas dan berperan dalam penyakit
inflamasi (Haq et al., 1999). IL-1β, tetapi tidak IL-1α berpotensi ssebagai
aktivator respons imun humoral dan dan IL-Ra mempunyai peran penting
dalam mengatur fungsi sistem imun (Nakae et al., 2001).
2.5 Leukosit
Leukosit merupakan sel darah yang memiliki nukleus dan tidak
bewarna dalam keadaan segar. Bentuknya bulat dalam peredaran darah,
tetapi berupa sel ameboid pleimorfik dalam jaringan, atau pada substrat
padat invivo. Leukosit terdiri dari leukosit leukosit granular atau leukosit
nongranular. Leukosit granular terdiri dari eosinofil, basofil, dan neutrofil.
Leukosit bergranular terdiri dari dari limfosit dan monosit. Jumlah leukosit
dalam sirkulasi berkisar antara 5000 sampai 9000 permilimeter kubik

16
darah, tetapi jumlah ini bervariasi sesuai umur, bahkan pada waktu yang
berbeda sepanjang hari. Jumlah leukosit dalam jaringan dan organ sangat
besar tetapi tidak dapat dihitung. Variasi kecil jumlah leukosit tidak
mempunyai arti klinik, tetapi adanya infeksi dalam tubuh, meningkatkan
leukosit sampai 20.000 bahkan 40.000 permilimeter kubik darah. Jumlah
relatif berbagai jenis leukosit, disebut hitung jenis leukosit, biasanya cukup
konstan: neutrofil 55-60%; eosinofil 1-3%; basofil 0.07%; limfosit 22-33%
dan monosit 3-7% . (Bloom, 1994).
Leukosit berfungsi untuk melindungi tubuh terhadap invasi benda
asing, termasuk bakteri dan virus. Sebagian besar aktivitas leukosit
berlangsung dalam jaringan dan bukan dalam aliran darah. Pelepasan zat
kimia oleh jaringan yang rusak menyebabkan leukosit bergerak mendekati
(kemotaksis positif) atau menjauhi (kemotaksis negatif) sumber zat.
Semua lekosit adalah fagositik, tetapi kemampuan ini lebih berkembang
pada neutrofil dan monosit. Setelah diproduksi di sumsum tulang, leukosit
bertahan kurang lebih satu hari dalam sirkulasi sebelum masuk ke
jaringan. Sel ini tetap dalam jaringan selama beberapa hari, beberapa
minggu, atau beberapa bulan, bergantung jenis leukositnya. Infeksi atau
kerusakan jaringan mengakibatkan peningkatan jumlah leukosit. (Sloane,
1995)
2.6 Limfosit
Sebanyak 20% dari semua leukosit dalam sirkulasi darah orang
dewasa merupakan limfosit yang terdiri dari sel B dan sel T yang
merupakan kunci pengontrol sitem imun. Biasanya sel limfosit hanya
memberikan reaksi terhadap zat asing tetapi tidak terhadap selnya sendiri
(Baratawidjaja, 2009).
Struktur limfosit mengandung nukleus bulat bewarna biru gelap
yang berkeliling lapisan tipis sitoplasma. Ukurannya bervariasi; ukuran
terkecil 5 μm sampai 8 μm; ukuran terbesar 15 μm. Limfosit berasal dari
sel – sel batang sumsum tulang merah, tetapi melanjutkan differensiasi dan
proliferasinya dalam organ lain. (Sloane, 1995)

17
Tabel 2.4 Limfosit yang berperan dalam respon imun spesifik

(Baratawidjaja, 2009)
Jenis Sel Fungsi Sel Produk Fungsi Produk
B Produksi antibodi Antibodi Neutralisasi
Presentasi antigen Opsonisasi
Lisis sel
Th2 Meningkatkan Sitokin IL-3, IL- Membantu sel B

prosuksi antibodi oleh 4, IL-5, IL-10, dan Tc
sel B IL-13
Meningkatkan Tc
Aktif
Th1 Mengawali dan IL-2, IFN γ , Mediator
meningkatkan TNF inflamasi
inflamasi
Tr Menurukan produksi Faktor Suppress Th
antibodi sel B suppressor akibatnya
Menurunkan sel T mensupress B
aktif dan Tc juga
Tc Lisis sel target IFN γ Meningkatkan
antigenic ekspresi MHC
Aktivasi sel NK
Perforin Merusak
Membran sel
target
NKT Pemusnahan sel IL-4, IFN γ
sasaran
2.7 Monosit
Monosit mencapai 3 % sampai 8 % dari jumlah total leukosit dan
merupakan sel darah terbesar, diameternya rata – rata berukuran 12 μm –
18 μm. Nukleus besar berbentuk telur atau seperti ginjal, yang dikelilingi
sitoplasma bewarna biru keabuan pucat. Monosit sangat aktif. Sel ini siap

18
bermigrasi melalui pembuluh darah. Jika monosit telah meninggalkan

aliran darah, maka sel ini menjadi histiosit jaringan (makrofag tetap)
(Sloane, 1995). Monosit berperan sebagai APC, mengenal, menyerang
mikroba, dan sel kanker dan juga memproduksi sitokin, mengerahkan
pertahanan sebagai respon terhadap infeksi (Baratawidjaja, 2009).
2.8 Enzyme Linked Immunosorbent Assay ( Elisa )
Elisa adalah pemeriksaan yang praktis dan sensitif untuk
menemukan antibodi. Antigen mula – mula diikat benda padat kemudian
ditambah antibodi yang dicari. Setelah itu ditambahkan lagi antigen yang
bertanda enzim, seperti peroksidase dan fosfatase. Akhirnya ditambahkan
subtrat kromogen yang bila bereaksi dengan enzim dapat menimbulkan
warna. Perubahan warna yang terjadi sesuai dengan jumlah enzim yang
diikat dan sesuai pula dengan kadar antibodi yang dicari (Baratawidjaja,
2009; Johnson et al., 2011).
Prinsip dasar teknik ELISA adalah interaksi total antara antigen
dan antibodi yang teradsorpsi secara pasif pada permukaan fase padat
(permukaan microwellplate) yang terbuat dari plastik (polipropilen atau
polietilen). Hasil interaksi yang berupa lapisan monomolekuler tersebut
kemudian direaksikan dengan enzim peroksidase yang telah
dikonyugasikan dengan avidin. Enzim peroksidase yang terikat kemudian
akan bereaksi dengan larutan 2,2’-azino-bis-3ethylbenzothiozoline-6-
sulfonic acid (ABTS) yang ditambahkan dan membentuk warna hijau.
Warna hijau ini intensitasnya dapat diukur secara visual atau dengan alat
spektrofotometer. Makin banyak antigen yang berinteraksi dengan
antibodi makin tinggi intensitas warnanya. (Sumartini et al., 2002)
Interaksi antara antigen dan antibodi dapat terjadi karena ikatan
hidrogen antara gugus – gugus bermuatan yang terdapat pada keduanya,
selanjutnya terjadi ikatan elektrostatik yang timbul karena muatan listrik
yang muncul kemudian karena interaksi keduanya. Ikatan Van Der Waals
juga timbul karena muatan listrik yang muncul kemudian karena interaksi
keduanya. Ikatan Van Der Waals juga timbul karena muatan positif dan
negatif antara kelompok gugus pada antigen dan antibodi. Hasil interaksi

19
antigen dan antibodi ini akhirnya akan menghasilkan molekul air. Jadi agar
interaksi terjadi maksimum maka molekul air dalam microwellplate
sedapat mungkin dihindarkan keberadaannya. Setiap tahapan reaksi
tersebut diatas selesai maka selalu diikuti dengan pencucian larutan garam
jadi kelebihan pereaksi antibodi atau antigen akan terbuang bersama
larutan garam. Oleh karena itu bila tidak ada antigen dan antibodi yang
berinteraksi secara spesifik, reaksi selanjutnya takkan terjadi dan warna
yang diharapkan timbul tak ada (Sumartini et al., 2002)
1. Direct ELISA
Antigen ditambahkan sehingga teradsorbsi pada fase padat
selama proses inkubasi. Setelah diikunbasi, antigen yang tidak terikat
pada fase padat dicuci. Antibodi yang spesifik terhadap antigen yang
telah dilabel dengan enzim (konjugasi) ditambahkan dan diinkubasi.
Konjugat akan berikatan dengan antigen pada fase padat. Selanjutnya
konjugat yang tidak terikat dicuci. Kemudian ditambahkan substrat
atau kromogen. Sehingga menghasilkan warna melalui proses katalisis
enzim. Perubahan warna yang terjadi diukur menggunakan
spektrofotometer (Crowther, 2001).
2. Indirect ELISA
Antigen ditambahkan sehingga teradsorbsi pada fase padat
selama proses inkubasi. Antibodi ditambahkan dan diinkubasi
kemudian antibodi akan mengikat antigen spesifik pada fase padat.
Antibodi yang tidak terikat dengan antigen fase padat dicuci.
Kemudian Antibodi yang telah dilabel enzim (konjugat) berupa
antibodi antispesies ditambahkan, sehingga semua antibodi yang
terikat dengan antigen akan diikat selanjutnya diinkubasi dan konjugat
yang berlebih dicuci. Substrat ditambahkan untuk mengikat konjugat
dan setelah terjadi perubahan warna, reaksi dihentikan. Kemudian
warna yang terjadi dibaca pada spektrofometer (Crowther, 2001)

20
3. Direct Sandwich ELISA

Antibodi ditambahkan sehingga teradsorbsi pada fase padat
selama proses inkubasi Antibodi yang bebas dicuci. Kemudian antigen
ditambahkan lalu diinkubasi sehingga antigen berikatan dengan
antibodi selama proses inkubasi dan antigen yang tidak terikat dicuci.
Kemudian ditambahkan konjugat antibodi yang sama atau berbeda
dengan antibodi pada fase padat. Setelah ditambahkan konjugat
diinkubasi, konjugat bebas dicuci. Penambahan substrat sampai terjadi
perubahan warna kemudian reaksi dihentikan dan diukur kuantitas
warnanya menggunakan spektrofotometer (Crowther, 2001).
4. Indirect Sandwich
Antibodi ditambahkan sehingga teradsorbsi pada fase padat
selama proses inkubasi. Antibodi yang bebas dicuci selanjutnya
ditambahkan antigen. Antigen akan berikatan dengan antibodi pada
fase padat selama proses inkubasi lalu antigen yang tidak terikat
dicuci. Selanjutnya ditambahkan antibodi (Ab2) yang berbeda dengan
antibodi pada fase padat. Kemudian diinkubasi, Ab2 bebas dicuci.
Konjugat antispesies ditambahkan yang dapat mengikat serum yang
berasal dari spesies yang sama dengan Ab2 tetapi tidak dapat bereaksi
dengan antibodi fase padat. Lalu ditambahkan substrat sampai terjadi
perubahan warna kemudian reaksi dihentikan dan diukur dengan
spektrofotometer (Crowther, 2001).
2.9 Lipopolisakarida
Lipolisakarida merupakan salah satu lapisan dinding sel bakteri
Gram negatif yang tersusun atas dua lapisan lipid, polisakarida, dan
protein. Lipid dan polisakarida terikat pada lapisan luar dari membrane
terluar membentuk struktur lipopolisakarida. Polisakarida dalam LPS
tersusun atas dua bagian, yaitu polisakarida inti dan O-polisakarida.
Bagian lipid dalam lipopolisakarida disebut dengan lipid A. Bagian lipid A
tersebut merupakan bagian yang toksik dalam lipopolisakarida (Madigan,
2003).

21
Lipopolisakarida merupakan komponen dinding sel bakeri yang

menstimulasi respons inflamasi dengan mengaktivasi sitokin pro inflamasi
(Manu dan Kuttan, 2008)

BAB 3
METODOLOGI PENELITIAN
3.1 Tempat dan Waktu Peneltian

Laboratorium Farmasi Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta. Proses penelitian dimulai sejak bulan
September hingga Desember 2013.
3.2 Bahan
Bahan – bahan yang digunakan dalam penelitian adalah Na CMC
0,5%, kit ELISA untuk IL-1β (Boster Biological Technology), ekstrak
etanol jinten hitam (Arifiani AA. 2012), lipopolisakarida (Sigma-Aldrich),
larutan Giemsa, larutan Turk, minyak emersi, methanol, dan aquades.
3.3 Alat
Alat – alat yang digunakan yaitu timbangan hewan, kandang
mencit beserta tempat makan dan minum, sonde, sentrifugator (Hettich
Zentrifugen), timbangan, alat gelas, mikropipet, tabung EDTA 1ml,
tabung Eppendorf, hemositometer yang terdiri dari pipet pengencer dan
kamar hitung Neubauer, gelas objek, cover glass, kotak preparat, dan
mikroskop cahaya.
3.4 Hewan Uji

Hewan uji yang digunakan dalam penelitian ini adalah mencit galur
BALB/c berumur 6 – 8 minggu dengan berat badan 20 – 23 gram yang
diperoleh dari UGM.
Diberikan makan berupa berupa butiran (pellet) dan minuman ad
libitum.

23
3.5 Prosedur Penelitian

3.5.1 Pembuatan Supensi Na-CMC 0.5 %
Lima ratus miligram Na-CMC ditimbang, kemudian dilarutkan dalam
sebagian akuades hangat, diaduk dan ditambah akuades sambil terus
diaduk memakai batang pengaduk. Setelah larut semua sisa akuades
ditambahkan sampai didapatkan volume larutan Na-CMC 100 ml dengan
memakai labu takar 100 ml.
3.5.2 Aklitimasi Hewan Uji

Hewan uji terlebih dahulu diadaptasikan (aklitimasi) terhadap
lingkungan selama 2 minggu. Hewan uji terdiri dari mencit galur BALB/c
setiap kelompok terdiri dari 5 hewan uji. Menurut WHO minimal hewan
uji untuk satu kelompok uji adalah 5 ekor.
3.5.3 Uji Peningkatan Total Leukosit, Persentase Limfosit dan Monosit

Mencit BALB/c sebanyak 24 ekor dibagi dalam 4 kelompok
perlakuan berdasarkan dosis ektrak etanol jinten hitam yang diberikan.
Pemberian ekstrak diberikan selama 14 hari berturut secara oral. Setiap
hari ke – 7, hari ke 14 dan hari ke 21. Darah diambil melalui pleksus retro
orbital mata mencit.
Tabel 3.1. Kelompok untuk uji total leukosit, limfosit dan monosit
No Kelompok Perlakuan Pengambilan
Darah
1. Kontrol diberikan Na-CMC 0.5% 0.5 Hari ke - 7, ke -
ml/kgBB selama 14 hari berturut 14, dan Ke 21
- turut
2. Dosis diberikan ekstrak etanol jinten Hari ke - 7, ke -
Rendah hitam 125 mg/kgBB selama 14 14, dan Ke 21
hari berturut – turut
Sedang hitam 250 mg/kgBB selama 14 14, dan Ke 21
Tinggi hitam 500 mg/kgBB selama 14 14, dan Ke 21

24
3.5.4 Uji Kadar Interleukin 1β (IL-1β)

Pada uji kadar IL-1β dilakukan pemberian ekstrak etanol jinten
hitam secara oral dengan dosis 125 mg/kgBB, 250 mg/kgBB dan 500
mg/kgBB. Selanjutnya pada hari ke – 5, dua jam setelah pemberian ekstrak
etanol jinten hitam diberikan LPS 20 μg/mencit. Darah mencit diambil 6
jam kemudian, melalui pleksus retro orbital mata mencit (Manu dan
Kuttan, 2008).
Tabel 3.2 Data Perlakuan untuk uji kadar IL - 1β
No Kelompok Perlakuan Pengambilan
darah
1. Kontrol diberikan Na-CMC 0.5% 0.5 Hari ke – 5
ml/kgBB selama 5 hari berturut -
turut
2. LPS Diberikan LPS 20 μg/mencit pada Hari ke – 5
hari ke 5
3. Ekstrak diberikan ekstrak etanol jinten Hari ke – 5
Etanol Dosis hitam 125 mg/kgBB selama 5 hari
Rendah berturut - turut. Hari ke – 5 dua
jam setelah pemberian ekstrak,
diberikan LPS 20 μg/mencit
Sedang berturut - turut. Hari ke – 5 dua
Tinggi berturut - turut. Hari ke – 5 dua

25
3.5.5 Pengambilan darah

Darah diambil dari setiap hewan uji melalui pleksus retro orbital
mata mencit. Sampel darah untuk uji total leukosit dimasukkan ke dalam
tabung vacutainer EDTA dan sampel darah untuk uji IL-1β dimasukkan ke
tabung vacutainer EDTA yang berbeda. Darah untuk uji IL-1β disentrifus
pada 3000 rpm selama 20 menit, plasma yang muncul dimasukkan ke
dalam tabung Eppendorf disimpan pada suhu – 20oC sampai waktu
pemeriksaan IL-1β dengan ELISA.
3.5.6 Perhitungan Total Leukosit

Penghitungan jumlah leukosit total dilakukan menggunakan
hemositometer dengan pengenceran 1:20. Untuk memperoleh pengenceran
1:20 sampel darah dihomogenkan, kemudian dihisap dengan
menggunakan pipet leukosit dan aspirator sampai tera 0,5. Selanjutnya,
larutan Turk dihisap hingga tera 11, aspirator dicabut kemudian
dihomogenkan secara manual, yaitu dengan cara memutar membentuk
angka 8. Selanjutnya sampel dibuang sekitar 2-3 tetes, setelah itu
dimasukkan ke dalam kamar hitung Neubauer dan ditutup dengan gelas
penutup kemudian diperiksa dengan mikroskop perbesaran 40 x 10.
Leukosit dihitung pada empat kotak besar di tiap sudut tiap sisi kamar
hitung. Sel yang menempel di garis pemisah sebelah kiri dan di garis atas
kotak persegi ikut dihitung, sel yang menempel di kedua sisi kotak lain
tidak ikut dihitung (Anandika, 2011).
Karena kedalaman kamar kamar hitung Neubauer adalah 0,1 mm
dan luas adalah 4 mm2 (terdiri dari 4 kamar masing-masing dengan luas 1
mm2 jadi total 4 mm2). Maka volume kotak adalah 0,4 mm3(Kulisic, 2006)
N x faktor pengenceran
Jumlah total leukosit per mm3 =
Volume Kotak
Nx20
=
0,4 𝑚𝑚𝑚𝑚3
= 50 N
N : Jumlah total leukosit dari 4 kamar hitung

26
3.5.7 Analisa Persentase Monosit dan Limfosit

Sampel darah segar diteteskan pada gelas objek dan dibuat preparat
apus. Setelah dibiarkan mengering di udara, preparat apus kemudian
difiksasi dengan methanol selam 5 menit. Preparat kemudian diwarnai
dengan pewarna Giemsa dengan pengenceran 1 : 9 selama 30 menit..
Selanjutnya preparat dicuci menggunaan aquades dan dibiarkan
mengering. Setelah kering preparat diperiksa dibawah mikroskop dengan
pembesaran 100 x dengan dibubuhi minyak emersi pada permukaan
sediaan apus tersebut. Pertama – tama dihitung sampai 100 sel leukosit,
kemudian dari 100 sel leukosit dihitung jumlah monosit dan limfosit. Lalu
ditentukan persentase monosit dan limfosit dari total 100 leukosit tersebut
dengan rumus sebagai berikut (Handajani dan Dharmawan , 2009).
∑ 𝑙𝑙𝑙𝑙𝑙𝑙𝑙𝑙𝑙𝑙𝑙𝑙𝑙𝑙𝑙𝑙
% Limfosit = 100
𝑥𝑥 100 %
∑ 𝑚𝑚𝑚𝑚𝑚𝑚𝑚𝑚𝑚𝑚𝑚𝑚𝑚𝑚
% Monosit = 100
𝑥𝑥 100 %
Gambar 4.1 Skema pembacaan diferensiasi leukosit
3.5.8 Pengukuran kadar IL-1β dengan ELISA

Sebanyak 0.1 ml sampel, kontrol dan standar dimasukkan ke dalam
microplate yang telah dilapisi anti - mouse IL - 1β antibodi kemudian
diinkubasi selama 90 menit pada suhu 370C lalu membuang isi plate dan
keringkan menunggunakan handuk, Tambahkan 0.1 ml biotinylated anti
mouse IL - 1β antibody inkubasi pada suhu 370C selama 60 menit lalu
mencuci microplate dengan 0.01M PBS sebanyak 3 kali. Tambahkan
0,1ml larutan ABC diinkubasi pada suhu 370C selama 30 menit lalu
mencuci microplate dengan 0.01M PBS sebanyak 5 kali.

27
Menambahkan 90 ul dengan TMB Color developing agen dan

didiamkan selama 30 menit pada suhu ruangan di tempat yang gelap.
Ditambahkan 0.1 ml TMB stop solution. Dibaca optical density absorbasi
dengan ELISA reader yang diatur pada 450 nm.
3.5.9 Analisa Statistik

Analisa jumlah total leukosit, presentase monosit, presentase
limfosit dan kadar IL-1β menggunakan ANOVA (Analysis Of Variance)
dengan menggunakan program SPSS 17,0 for windows taraf kepercayaan
sebesar 95% dengan (α= 0,05).

BAB 4
HASIL DAN PEMBAHASAN
4.1 Leukosit
Hasil dari perhitungan jumlah total leukosit hari 7, hari 14 dan hari
21 pada mencit BALB/c yang diberikan ekstrak etanol jinten hitam dosis
rendah (125 mg/kgBB), dosis sedang (250 mg/kgBB) dan dosis tinggi
(500 mg/kgBB) didapatkan hasil sebagai berikut :
Tabel 5.1 Hasil Jumlah Total Leukosit (per mm3)
Kelompok Mencit Rata – rata jumlah total leukosit ( x103 per mm3)
Hari ke – 7 Hari Ke – 14 Hari ke 21
Kontrol 4,3 ± 0,8 5,0 ± 1,9 4,8 ± 0,9

Dosis Rendah 6,3 ± 2,5 8,3 ± 1,4 9,1 ± 2,2
Dosis Sedang 7,6 ± 0,8 12,7 ± 1,0 11,2 ±2,2
Dosis Tinggi 11,1 ± 2,1 11,0 ± 3,5 11,3 ±3,5
Hasil penelitian menunjukkan jumlah total leukosit kelompok

kontrol hari 7, 14 dan 21 berada dalam kisaran normal. Kisaran normal
jumlah total leukosit pada mencit BALB/c adalah 4 - 12 x 103 per mm3
(Arrington, 1972). Jumlah total leukosit hari 7 kelompok ekstrak etanol
jinten hitam dosis rendah, dosis sedang dan dosis tinggi lebih tinggi
dibandingkan kelompok kontrol. Jumlah total leukosit meningkat seiring
meningkatnya dosis ekstrak etanol jinten hitam yang diberikan. Kelompok
ekstrak etanol jinten hitam dosis tinggi memiliki jumlah total leukosit
paling tinggi.
Jumlah total leukosit hari 7 dianalisis dengan menggunakan SPSS
17. Hasil uji normalitas dengan menggunakan Saphiro-Wilk menunjukan
bahwa jumlah total leukosit tidak terdistribusi normal (p>0,05) kemudian
dilakukan tranformasi agar didapatkan data yang normal tetapi hasil yang
diperoleh jumlah total leukosit tetap tidak terdistribusi normal. Syarat

29
normalitas tidak terpenuhi sehingga jumlah total leukosit harus dianalisis

dengan statistik non parametik Kruskal Wallis. Hasil uji Kruskal Wallis
menunjukan terdapat perbedaan bermakna dengan nilai signifikan p=0,03
(p<0,05) maka dilanjutkan dengan uji Mann Whitney. Hasil uji Mann
Whitney menunjukkan bahwa terdapat perbedaan yang bermakna antara
kelompok kontrol dengan kelompok dosis sedang (p=0,009), kelompok
kontrol dengan kelompok dosis tinggi (p=0,009) dan kelompok sedang
dengan kelompok dosis tinggi (p = 0,009)
Jumlah total leukosit hari 14 kelompok pemberian ekstrak etanol
dibandingkan kontrol tetapi masih berada dalam kisaran normal. Jumlah
total leukosit meningkat seiring meningkatnya dosis ekstrak etanol jinten
hitam yang diberikan. Kelompok ekstrak etanol jinten hitam dosis sedang
memiliki jumlah total leukosit paling tinggi.
bahwa jumlah total leukosit terdistribusi normal (p>0,05). Selanjutnya
dilakukan uji homogenitas menggunakan Levene test. Hasil uji
homogenitas menunjukan bahwa jumlah total leukosit tidak bervariasi
homogen (p<0,05) kemudian dilakukan tranformasi data agar diteroleh
data yang homogen tetapi hasil yang diperoleh jumlah total leukosit tidak
bervariasi homogen. Syarat homogenitas tidak terpenuhi sehingga jumlah
total leukosit harus dianalisis dengan statistik non parametik Kruskal
Wallis.
Hasil uji Kruskal Wallis menunjukan terdapat perbedaan bermakna
dengan nilai signifikan 0,005 (p<0,05) maka dilanjutkan dengan uji Mann
Whitney. Hasil uji Mann Whitney menunjukkan bahwa terdapat perbedaan
yang bermakna antara kelompok kontrol dengan kelompok dosis rendah (p
= 0,028), kelompok kontrol dengan kelompok dosis sedang (p = 0,009),
kelompok kontrol dengan kelompok dosis tinggi (p=0,016) dan kelompok
rendah dengan kelompok dosis sedang (p = 0,009).

30
Pengambilan darah hari 21 (pemberian ekstrak dihentikan sejak

hari 14 sampai hari 21), jumlah total leukosit kelompok ekstrak etanol
dibandingkan kontrol tetapi masih berada dalam kisaran normal. Jumlah
total leukosit meningkat seiring meningkatnya dosis ekstrak etanol jinten
hitam yang diberikan. Kelompok ekstrak etanol jinten hitam dosis tinggi
memiliki jumlah total leukosit paling tinggi.
bahwa jumlah total leukosit terdistribusi normal (p>0,05). Selanjutnya
homogenitas menunjukan bahwa jumlah total leukosit bervariasi homogen
(p>0,05). Data terdistribusi normal dan bervariasi sama, maka syarat uji
anova terpenuhi. Berdasarkan uji anova diperoleh nilai probabilitas sebesar
0,002 (P<0,05) artinya ada perbedaan signifikan rata – rata total leukosit
pada kelompok kontrol, dosis rendah, dosis sedang dan dosis tinggi. Untuk
mengetahui adanya perbedaan yang bermakna antara masing – masing
kelompok dilanjutkan dengan uji Post Hoc. Berdasarkan uji Post Hoc
kelompok yang berbeda adalah kelompok kontrol dengan kelompok dosis
sedang (p = 0,04) dan kelompok kontrol dengan kelompok dosis tinggi
(p=0,04).
Perbandingan total leukosit antara hari 7, 14 dan 21 menggunakan
uji anova menunjukkan hanya kelompok dosis sedang yang memiliki
perbedaan yang signifikan antara hari 7, 14 dan 21 p= 0,00. Untuk
kelompok yang berbeda adalah kelompok hari 7 dan hari 14.

31
14000
12000
10000
8000 Kontrol
6000 Dosis Rendah
4000 Dosis Sedang

Dosis Tinggi
2000
0
Hari ke - 7 Hari Ke - Hari ke 21
14
Gambar 5.1 Perbandingan nilai total leukosit antara Mencit BALB/c yang
diberikan ekstrak etanol jinten hitam dan Mencit BALB/c yang tidak
diberikan ekstrak etanol jinten hitam
Jumlah total leukosit tertinggi terdapat pada hari ke 14 kelompok

dosis sedang 12700 per rmm3. Peningkatan jumlah total leukosit masih
dalam kisaran normal dan tidak mengindikasi adanya infeksi. Indikasi
adanya infeksi jumlah total leukosit adalah 20,000 bahkan 40,000
permilimter kubik darah (Bloom dan Fawcett 1994). Pada hari ke 21 atau
setelah pemberian ekstrak etanol jinten hitam dihentikan selama 7 hari
jumlah total leukosit tetap lebih tinggi dibandingkan kelompok kontrol.
Tousson et al, (2011) menyebutkan bahwa konstituen darah kelinci
yang diberikan biji jinten hitam menunjukkan peningkatan yang signifikan
dalam persentase hemoglobin, hematokrit, rata-rata korpuskula
hemoglobin dan jumlah sel darah putih.
Hasil dari penelitian data jumlah total leukosit berada pada batas
tinggi normal menurut Vieira (2011) jumlah total leukosit yang berada
pada batas tertinggi normal menunjukkan sistem imun memproduksi
jumlah total leukosit yang cukup dalam sirkulasi darah untuk melawan
infeksi. Peningkatan jumlah total leukosit menunjukkan kemampuan
sistem imun untuk melawan infeksi atau benda asing. Leukosit yang
merupakan sistem imun alamiah (spesifik) berperan penting dalam
melindungi tubuh dari serangan mikroorganisme. Penggunaan ekstrak

32
etanol biji jinten hitam sangat efektif untuk meningkatkan sistem imun
atau imunostimulan (Suhatri dan Aldi, 2010).
Jumlah total leukosit pada hari 7, hari 14 dan hari 21 menunjukkan
perbedaan yang signifikan (p<0,05) terhadap setiap kelompok perlakuan.
4.2 Monosit
Hasil perhitungan persentase monosit hari 7, hari 14 dan hari 21
pada mencit BALB/c yang diberikan ekstrak etanol jinten dosis rendah
(125 mg/kgBB), dosis sedang (250 mg/kgBB) dan dosis tinggi (500
mg/kgBB) didapatkan hasil sebagai berikut :
Tabel 5.2 Hasil Persentase Monosit (per mm3)
Kelompok Rata – rata monosit (x 103 per mm3)

Mencit
Kontrol
0,25 ± 0,14 0,30 ± 0,29 0,03 ± 0,03
Dosis Rendah
0,48 ± 0,41 0,15 ± 0,13 0,22 ± 0,06
Dosis Sedang
0,37 ± 0,18 0,21 ± 0,20 0,44 ± 0,33
Dosis Tinggi
0,19 ± 0,15 0,13 ± 0,10 0,25 ± 0,27
Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa persentase monosit

kelompok kontrol pada hari 7 dan 14 berada dalam kisaran normal
sedangkan pada hari 21 persentase monosit menurun. Kisaran normal
persentase monosit pada mencit BALB/c adalah 60 – 600 per mm3
(Research Animal Resources, University of Minnesota).
Pada hari 7 persentase monosit kelompok ekstrak etanol jinten
hitam dosis rendah dan dosis sedang lebih tinggi dibandingkan kontrol
sedangkan kelompok ekstrak etanol jinten hitam dosis tinggi memiliki
persentase monosit yang lebih rendah dibandingkan kontrol.
Persentase monosit hari 7 dianalisis dengan menggunakan SPSS
bahwa persentase monosit terdistribusi normal (p>0,05). Selanjutnya

33

homogenitas menunjukan bahwa persentase monosit bervariasi homogen
0.281 (P>0,05) artinya tidak ada perbedaan signifikan rata – rata
persentase monosit pada kelompok kontrol, dosis rendah, dosis sedang dan
dosis tinggi.
hitam dosis rendah, dosis sedang dan dosis tinggi lebih rendah
dibandingkan kontrol. Persentase monosit hari 14 dianalisis dengan
menggunakan SPSS 17. Hasil uji normalitas dengan menggunakan
Saphiro-Wilk menunjukan bahwa persentase monosit terdistribusi normal
(p>0,05). Selanjutnya dilakukan uji homogenitas menggunakan Levene
test. Hasil uji homogenitas menunjukan bahwa persentase monosit
bervariasi homogen (p>0,05). Data terdistribusi normal dan bervariasi
sama, maka syarat uji anova terpenuhi. Berdasarkan uji anova diperoleh
nilai probabilitas sebesar 0.519 (P>0,05) artinya tidak ada perbedaan
signifikan rata – rata persentase monosit pada kelompok kontrol, dosis
rendah, dosis sedang dan dosis tinggi
hitam dosis rendah, dosis sedang, dan dosis tinggi lebih tinggi
dibandingkan kontrol. Kelompok dosis sedang memiliki persentase
monosit paling tinggi.
Persentase monosit hari 21 dianalisis dengan menggunakan SPSS
bahwa persentase monosit terdistribusi normal (p>0,05). Selanjutnya
homogenitas menunjukan bahwa persentase monosit tidak bervariasi
homogen (p>0,05) maka dilakukan tranformasi data hasil yang diperoleh
persentase monosit bervariasi homogen. Data terdistribusi normal dan
bervariasi sama, maka syarat uji anova terpenuhi. Berdasarkan uji anova
diperoleh nilai probabilitas sebesar 0,00 (P<0,05) artinya ada perbedaan

34
signifikan rata – rata persentase monosit pada kelompok kontrol, dosis

rendah, dosis sedang dan dosis tinggi. Untuk mengetahui adanya
perbedaan yang bermakna antara masing – masing kelompok dilanjutkan
dengan uji Post Hoc. Berdasarkan uji Post Hoc kelompok yang berbeda
adalah kelompok kontrol dengan kelompok dosis rendah (p=0,002),
kelompok kontrol dengan kelompok dosis sedang (p=0,00) dan kelompok
kontrol dengan kelompok dosis tinggi (p=0,00)
Perbandingan data monosit dari hari 7, 14 dan 21 menunjukkan
hanya kelompok kontrol yang memiliki perbedaan yang signifikan dari
hari 7, 14 dan 21 dengan uji Kruskal Wallis p=0,018. Untuk mengetahui
adanya perbedaan yang bermakna antara masing – masing kelompok
dilanjutkan dengan uji Mann Whitney. Berdasarkan uji Mann Whitney
kelompok yang berbeda adalah kelompok hari 7 dengan hari 21 dan
kelompok hari 14 dan 21.
600
500
400
Kontrol
300 Dosis Rendah
Dosis Sedang
200
Dosis Tinggi
100
0
Hari ke - 7 Hari Ke - 14 Hari ke 21
Gambar 5.2 Perbandingan persentase monosit antara Mencit BALB/c yang
Monosit berperan sebagai sel yang mampu mengenal, menyerang

mikroba, serta sel kanker dan juga memproduksi sitokin, mengerahkan
pertahanan sebagai respon terhadap infeksi (Baratawidjaja, 2009).
Persentase monosit yang tinggi didalam darah berperan penting dalam

35
melindungi tubuh dari serangan mikroorganisme. Hasil penelitian

menunjukkan bahwa ekstrak etanol jinten hitam dosis rendah (125
mg/kgBB), dosis sedang (250 mg/kgBB) dan dosis tinggi (500 mg/kgBB)
tidak mampu mempengaruhi persentase monosit pada mencit BALB/c.
Secara statistik persentase monosit pada hari 7, hari 14 dan hari 21
menunjukkan tidak ada perbedaan signifikan persentase monosit antar
kelompok perlakuan.
4.3 Limfosit
Hasil dari perhitungan persentase limfosit pada hari 7, hari 14 dan
hari 21 pada mencit BALB/c yang diberikan ekstrak etanol jinten hitam
dosis rendah (125 mg/kgBB), dosis sedang (250 mg/kgBB) dan dosis
tinggi (500 mg/kgBB) didapatkan hasil sebagai berikut :
Tabel 5.3 Hasil Persentase Limfosit (per mm3)
Kelompok Mencit Rata – rata limfosit ( x103 per mm3)
Kontrol 3,79 ± 0,84 4,21 ± 2,30 4,82 ± 0,94
Dosis Rendah 5,74 ± 2,10 8,09 ± 1,50 8,72 ± 2,23
Dosis Sedang 7,12 ± 0,67 12,34 ± 0,96 10,72 ± 2,61
Dosis Tinggi 10,92 ± 2,14 10,85 ± 3,41 10,91 ± 3,21
Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa persentase limfosit

kelompok kontrol pada hari 7, 14 dan hari 21 memiliki persentase limfosit
yang berada dalam kisaran normal. Kisaran normal persentase limfosit
pada mencit BALB/c adalah 3.300 – 14.250 per mm3 (Research Animal
Resources, University of Minnesota). Kelompok ekstrak etanol jinten
hitam dosis rendah, dosis sedang dan dosis tinggi pada hari 7 persentase
limfosit lebih tinggi dibandingkan kontrol. Persentase limfosit meningkat
seiring dengan meningkatnya dosis ekstrak etanol jinten hitam yang
diberikan.
Persentase limfosit hari 7 dianalisis dengan menggunakan SPSS


36
bahwa persentase limfosit terdistribusi normal (p>0,05). Selanjutnya

homogenitas menunjukan bahwa persentase limfosit tidak bervariasi
homogen (p<0,05) kemudian dilakukan tranformasi data hasil yang
diperoleh persentase limfosit tidak bervariasi homogen. Syarat
homogenitas tidak terpenuhi maka persentase limfosit dianalisis dengan
statistik non parametik Kruskal Wallis. Hasil uji Kruskal Wallis
menunjukan terdapat perbedaan yang bermakna dengan nilai signifikan
0,003 (p<0,05 ) maka dilanjutkan dengan uji Mann Whitney. Hasil uji
Mann Whitney menunjukkan bahwa terdapat perbedaan yang bermakna
antara kelompok kontrol dengan kelompok dosis sedang (p = 0,009),
kelompok kontrol dengan kelompok dosis tinggi (p=0,009) dan
kelompok rendah dengan kelompok dosis tinggi (p = 0,016).
Pada hari 14 persentase limfosit kelompok pemberian ekstrak
etanol Jinten hitam dosis rendah, dosis sedang dan dosis tinggi lebih tinggi
dibandingkan kontrol tetapi masih berada dalam kisaran normal.
Persentase limfosit meningkat seiring dengan meningkatnya dosis ekstrak
etanol jinten hitam yang diberikan. Persentase limfosit paling tinggi berada
pada kelompok dosis sedang.

homogenitas menunjukan bahwa persentase limfosit tidak bervariasi
homogen (p<0,05) kemudian dilakukan tranformasi data hasil yang
diperoleh persentase limfosit tidak bervariasi homogen. Syarat
homogenitas tidak terpenuhi sehingga persentase limfosit harus dianalisis
dengan statistik non parametik Kruskal Wallis.
Hasil uji Kruskal Wallis menunjukan nilai signifikan 0,005
(p<0,05) maka dilanjutkan dengan uji Mann Whitney. Hasil uji Mann
Whitney menunjukkan bahwa terdapat perbedaan yang bermakna antara
kelompok kontrol dengan kelompok dosis rendah (p=0,028), kelompok

37
kontrol dengan kelompok dosis sedang (p=0,009), kelompok kontrol

dengan kelompok dosis tinggi (p=0,016) dan kelompok rendah dengan
kelompok dosis sedang (p=0,009).
Persentase limfosit hari 21 (pemberian ekstrak dihentikan sejak
hari 14 sampai hari 21), kelompok ekstrak etanol jinten hitam dosis
rendah, sedang dan dosis tinggi lebih tinggi dibandingkan kontrol tetapi
masih berada dalam kisaran normal. Persentase limfosit meningkat seiring
dengan meningkatnya ekstrak etanol jinten hitam yang diberikan.
Persentase limfosit paling tinggi berada pada kelompok dosis tinggi.
homogenitas menunjukan bahwa persentase limfosit bervariasi homogen
0,003 (P<0,05) artinya ada perbedaan signifikan rata – rata persentase
limfosit pada kelompok kontrol, dosis rendah, dosis sedang dan dosis
tinggi. Untuk mengetahui adanya perbedaan yang bermakna antara masing
– masing kelompok dilanjutkan dengan uji Post Hoc. Berdasarkan uji Post
Hoc kelompok yang berbeda adalah kelompok kontrol dengan kelompok
dosis sedang (p=0,008) dan kelompok kontrol dengan kelompok dosis
tinggi (p= 0,006).
Perbandingan data limfosit dari hari 7, 14 dan 21 menggunakan uji
anova menunjukkan hanya kelompok dosis sedang yang memiliki
perbedaan yang signifikan dari hari 7, 14 dan 21 dengan p=0,01. Untuk
kelompok yang berbeda adalah kelompok hari 7 dengan hari 14.

38
14000
12000
10000
Kontrol
8000
Dosis Rendah
6000 Dosis Sedang
4000 Dosis Tinggi
2000
0
Hari ke - 7 Hari Ke - 14 Hari ke 21
Gambar 5.3 Perbandingan persentase limfosit antara Mencit BALB/c yang
Mekanisme jinten hitam terhadap sistem imun belum jelas

diperkirakan dengan cara meningkatkan aktivasi limfosit dan poliferasi
atau meningkatkan makrofaq dan limfosit T – helper (Banaceraf dan
Unanue, 1979)
Peningkatan limfosit dapat dindikasikan bahwa ekstrak etanol
jinten hitam mempunyai aktivitas imunostimulator. Limfosit merupakan
sel yang terlibat pada aktivitas respon imun spesifik Limfosit merupakan
kunci utama sistem kekebalan yang mampu melawan agen asing. Ada dua
jenis kekebalan, yaitu kekebalan humoral dan seluler. Kekebalan humoral
melibatkan peranan antibodi yang bersirkulasi sebagai gamma globulin,
yang dilakukan oleh limfosit B. Sedangkan kekebalan seluler adalah
sistem pertahanan yang dilakukan oleh limfosit T, bertanggung jawab
terhadap reaksi alergi tertunda (delayed allergy reaction) dan penolakan
transplantasi jaringan asing, membentuk pertahanan utama terhadap
infeksi virus, jamur dan beberapa bakteri (Ganong, 2003).
Persentase limfosit pada hari 7, hari 14 dan hari 21 menunjukkan
terdapat perbedaan yang signifikan (p<0,05) terhadap setiap kelompok
perlakuan.

39
4.4 Interleukin 1 β (IL -1β)

Hasil pemeriksaan kadar IL-1β dengan menggunakan ELISA pada
mencit yang diinduksi dengan lipolisakarida didapatkan hasil sebagai
berikut :
Tabel 5.4 Rata – Rata Kadar IL-1β

Kelompok Rata – Rata
IL-1β (ρg/ml)
Kontrol 7,8 ± 0
Lipopolisakarida 78,5 ± 117,0
Dosis Rendah 123,8 ± 211,8
Dosis Sedang 70,0 ± 62,4
Dosis Tinggi 164,4 ± 202,7
Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa rata – rata kadar IL-1β

pada kelompok kontrol adalah 7,8 ρg/ml. Kadar IL-1β pada kelompok LPS
meningkat dibandingkan dengan kelompok kontrol. Peningkatan kadar IL-
1β dikarenakan pemberian lipopolisakarida. Lipopolisakarida merupakan
komponen dinding sel bakteri yang menstimulasi respons inflamasi
dengan mengaktivasi sitokin pro inflamasi (Manu dan Kuttan, 2008). Pada
proses inflamasi sistem imun akan melepaskan sitokin pro inflamasi yaitu :
IL-1β, Il-6 dan TNF-α. (Omar, 2001). IL-1β sangat poten sebagai sitokin
pro inflamasi dan terlibat pada berbagai respons melawan antigen. IL-1β
merupakan sitokin pro inflamasi yang akan dikeluarkan oleh peripheral
blood mononuklear jika terkena agen inflamasi. Ketika dikeluarkan ke
dalam darah IL-1β memiliki aktivitas yang luas dan berperan dalam
penyakit inflamasi (Haq et al., 1999).
Dampak biologis IL-1 bergantung pada jumlah sitokin yang
dilepaskan pada kadar rendah fungsi utamanya adalah sebagai mediator
inflamasi lokal, misalnya berinteraksi dengan sel endotel untuk
meningkatkan koagulasi dan meningkatkan ekspresi molekul permukaan
yang membantu adhesi leukosit. Dalam kadar tinggi IL-1 masuk ke dalam
sirkulasi dan melancarkan efek endokrin, misalnya menyebabkan demam,

40
menginduksi sintesis protein fase akut oleh hepar dan mengawali kaheksia
(Kresno, 1996)
Kadar IL-1β pada kelompok dosis rendah (125 mg/kgBB) dan
dosis tinggi (500 mg/kgBB) lebih tinggi dibandingkan kelompok LPS
menunjukkan bahwa etanol dosis rendah (125 mg/kgBB) dan dosis tinggi
(500 mg/kgBB) tidak mampu menurunkan kadar IL-1β. Kadar IL-1β pada
kelompok dosis sedang lebih rendah dibandingkan dengan LPS, kelompok
dosis rendah, dan kelompok dosis tinggi hal ini menunjukkan bahwa dosis
sedang (250 mg/kgBB) mampu menurunkan kadar IL - 1β. Penelitian
sebelumnya menunjukkan bahwa ekstrak etanol jinten hitam mengandung
timoquinon sebesar 0,2575% (Arifiani, 2012).
Aziz (2011) menyatakan timoquinon mampu menurunkan IL-1β

pada mencit BALB/c yang diinduksi dengan lipopolisakarida sehingga
adanya kandungan IL-1β dalam ekstrak etanol jinten hitam sehingga dapat
menurunkan kadar IL-1β yang diinduksi oleh lipopolisakarida. Hasil
penelitian menunjukkan bahwa dosis sedang (250 mg/kgBB) adalah dosis
yang terbaik dalam menurunkan kadar IL-1β yang distimulasi oleh
lipopolisakarida.
Data IL-1β dianalisis dengan menggunakan SPSS 17. Hasil uji

normalitas dengan menggunakan Saphiro-Wilk menunjukan bahwa IL-1β
tidak terdistribusi normal (p>0,05). Syarat anova tidak terpenuhi sehingga
jumlah total leukosit harus dianalisis dengan statistik non parametik
Kruskal Wallis. Hasil uji Kruskal Wallis menunjukan tidak terdapat
perbedaan bermakna dengan nilai signifikan 0.121 (p<0,05 ).

41
Nilai
180
160
140
120
Kontrol
100
LPS
80
Dosis Rendah + LPS
60
40 Dosis Sedang + LPS
20 Dosis Tinggi + LPS

0
Kontrol LPS Dosis Dosis Dosis
Rendah + Sedang + Tinggi +
LPS LPS LPS
Gambar 5.6 Perbandingan kadar IL-1β antara kelompok kontrol,

Kelompok lipopolisakarida dan dan kelompok yang diberikan
lipopolisakarida diiringi ekstrak etanol Jinten Hitam.
Hasil data IL-1β memiliki standar deviasi yang tidak memenuhi

syarat sehingga tidak bisa dijadikan sebagai referensi. Hal ini dikarenakan
beberapa sampel plasma darah yang diperoleh tidak terbaca oleh elisa
reader akibat hemolisis.

BAB 5
KESIMPULAN DAN SARAN
5.1 Kesimpulan
1. Ekstrak etanol jinten hitam dosis 125mg/kgBB, 250 mg/kgBB dan 500
mg/ kgBB mampu mempengaruhi jumlah total leukosit dan
mempengaruhi persentase limfosit
mg/ kgBB tidak menunjukkan pengaruh terhadap persentase monosit
dan kadar IL-1β
mg/ kgBB mampu mempengaruhi jumlah total leukosit dan persentase
limfosit
5.2 Saran
Dilakukan uji lanjutan untuk melihat lama penurunan jumlah total leukosit
setelah pemberian ekstrak etanol jinten hitam.

DAFTAR PUSTAKA
Abbas, Abul K, dan Andrew H. Lichtman, 2006. Basic Immunology 2nd Edition.
Elsevier – Health Sciences Div
Abdulelah, H.A.A. dan Zainal-Abidin, B. A. H. 2007. In Vivo Anti-malarial Tests

of Nigella sativa (Black Seed) Different Extracts. Science Publications. 2 (2): 46-
50
Adamu, harami, Ekanem, Bulama. 2010. Identification of Essential Oil

Components from Nigella sativa Seed by Gas Chromatography-Mass
Spectroscopy. Abubakar Tafawa Balewa University. 9 (10): 966-967.
Aggarwal, Bharat B., Kunnumakkara, Ajaikumar B. 2009. Molecular Targets and

Therapeutic Uses of Spices Modern Uses for Ancient Medicine. World Scientific.
Hal. 258-260.
Anington LR. 1972. Introductory Laboratory Animal Science. The Breeding, Care
and Managenment of Experinmenta1 Animals. New York: The Interstate Printers
& Publishers Inc.
Arifiani AA. 2012. Karakterisasi Simplisia Dan Standardisasi Ekstrak Etanol Biji
Jinten Hitam (Nigella sativa L.). Uin Syarif Hidayatullah Jakarta.
Arora, rajesh. 2008. Herbal Radiomodulators Applications in Medicine,

Homeland Defence and Space. CAB International. Hal. 76-77.
Aslam M, Khan M, Ahmad S. 2011. In Vitro Bactericidal Activity Of Seeds

Extract Of Nigella sativa Against Methicillin Resistant Staphylococcus aureus
Isolated From Tertiary Care Hospital Delhi Ncr Region India. IJRPD 90-93
Anandika, D.W. 2011. Ekstrak Bawang Putih (Allium sativum) Menurunkan

Jumlah Leukosit pada Mencit Model Sepsis akibat Paparan Staphylococcus
aureus. CDK 183.Vol.38:2

42
Anderson SP, Lorraine MW. 2006. Patofisiologi Konsep Klinis Proses-Proses

Penyakit Edisi 6. Jakarta. EGC.
Azis S. 2011. Standardisasi Bahan Obat Alam. Yogyakarta : Graha Ilmu
Aziz AEA, El Sayed NS, Mahran LG. 2011. Anti-Asthmatic And Anti-Allergic
Effects Of Thymoquinone On Airway-Induced Hypersensitivity In Experimental
Animals. Journal of Applied Pharmaceutical Science 01 (08); 2011: 109-117.
Banacerrfa B, Unanue . 1979. Textbook of Immunology
Bloom, Fawcet. 1994. A Textbook of Histology. Penerjemah: Jan Tambayong.

Jakarta: Penerbit Buku Kedokteran (EGC) . 409
Boraschi, D., Villa, L., Volpini, G., BossaÁ, P., Censini, S., Ghiara, P., Scapigliat,
G., Nencioni, L., Bartalini, M., and Matteucci, G. 1990. Differential activity Of
Interleukin 1 Alpha And Interleukin 1 Beta In The Stimulation Of The Immune
Response In Vivo. Eur J Immunol 20, 317±321.
Buriro, M.A., Tayyab, M., Ditta, A. Effect Of Nigella sativa On Serum

Cholesterol Of Albino Rat. Professional Med J Mar 2011;18(1): 142-146
Crowther JR. 2001. The ELISA Guidebook. New Jersey : Humana Press.
Cruse JM, Lewis RE. 2003. Atlas Of Immunology. Florida: CRC Press
Departemen Kesehatan RI. 1995. Farmakope Indonesia Edisi IV. Direktorat

Jendral Pengawasan Obat dan Makanan : Jakarta
Departemen Kesehatan RI. 2008. Farmakope Herbal Indonesia Edisi I. Direktorat

Jendral Pengawasan Obat dan Makanan : Jakarta. Hal. 174-177.
Departemen Kesehatan RI. 1979. Materia Medika Indonesia Jilid III. Direktorat
Departemen Kesehatan RI. 1985. Tanaman Obat Indonesia Jilid I. Direktorat

Jendral Pengawasan Obat dan Makanan : Jakarta. Hal. 33.

43
Departemen Kesehatan RI. 2000. Parameter Standar Umum Ekstrak Tumbuhan

Obat. Direktorat Jendral Pengawasan Obat dan Makanan : Jakarta.
Departemen Kesehatan RI. 1989. Vadmekum Bahan Obat Alam. Direktorat

Dinarello CA. IL-β. Department of Infectious Diseases, University of Colorado

Health Sciences Center.
Donatus IA. 1983, Peranan Farmakologi Dalam Pengembangan Obat

Tradisional, oleh Husin, M, Risalah Simposium Penelitian Tumbuhan Obat III,
Fakultas Farmasi Gajah Mada, Jogjakarta.
El Bagir. N. 2010. Immune Response and Pasteurella Resistance in Rabbits Fed

Diets Containing Various Amounts of Black Cumin Seeds. Department of
Biochemistry, Faculty of Veterinary Medicine. 5 (2): 163-167.
Farnsworth, R. Norman. 1966. Biological and Phytochemical Screening of Plants.

Wiley Company
Ganong WF. 2003. Buku Ajar Fisiologi Kedokteran. Ed ke-20. Widjajakusumah

HMD et al. penerjemah; Widjajakusumah HMD, editor. Jakarta: EGC.
Terjemahan dari: Review of Medical Physiology.
Gerige, Saptha., Gerige, Mahesh., 2008. GC-MS Analysis of Nigella sativa Seeds
and Antimicrobial Activity of its Volatile oil. Departament of Biotecnology; Sri
Krishnadeveraya University; Anantapura - A. P. – India. pp. 1189-1192.
Ghonime M, Eldomany R, Abdelaziz A, Soliman H, 2011. Evaluation Of

Immunomodulatory Effect Of Three Herbal Plants Growing In Egypt. Department
of Microbiology and Immunology, Helwan University: Helwan. 33(1):141 – 145.
Gilani Hassan A. 2004. A Review Of Medicinal Uses and Pharmacological

Activities of Nigella sativa L. Departement of Biological and Biomedical Science.
7 (4): 441-451.

44
Gartner LP, Hiatt JL, Strum JM, 2012.Essential Biologi Sel dan Histologi.
Penerjemah : Fajar Arifin Gunawijaya. Pamulang: Bina Rupa Aksara Publisher
Hailat N., Al-Kahil S., Alkofahi A., Lafi S., Al-Ani F., Al-Darraji A., Bataineh Z.
1998. Effects of Nigella sativa Extracts on Antibody Response of Rats Vaccinated
with Brucella Vaccine. Faculty of Pharmacy Jordan University. pp. 217-221.
Halawani, Eman. 2009. Antibacterial Activity of Thymoquinone and

Thymohydroquinone of Nigella sativa L. and Their Interaction with Some
Antibiotics. Department of Biology Faculty of Science Taif University. 3 (5-6):
148-152.
Haq A, Lobo PI, Al Tufail M, Rama NR and Al-Sedairy ST. Immunmodulatory

effect of Nigella sativa proteins fractionated by ion exchange chromatography. Int
J Immunopharmacology 1999; 21: 288-5
Haq A, Abdullah M, Lobo PI, Al Tufail M, Khalid SA, Khabar, Kirtikant V.

Sheth, and Al-Sedairy ST. Nigella sativa: effect on human lymphocytes and
polymorphonuclear leukocyte phagocytic activity. Int J Immunopharmacology
30(1995): 147-155.
Harborne, J.B. 1987. Metode Fitokimia Penuntun Cara Modern Menganalisis

Tumbuhan. Penerbit ITB : Bandung. Hal 6-9.
Helmi, A., Anggraini, N., Handayani, D., Rasyid, R., 2006, Standarisasi Ekstrak
Etanol Daun Eugenia cumini Merr.,J. Sains Tek. Far., 11(2)
Isselbacher, dkk. Harrison: Prinsip-Prinsip Ilmu Penyakit Dalam. Jakarta:

EGC;1999:2
Junquira Carlos, Carneiro Jose, Kelly Robert O. 1998. Basic Histology.

Penerjemah: Jan Tambayong. Jakarta: Penerbit Buku Kedokteran (EGC). 270.
Johnson GA, Zielger RJ, Hawley L. 2011. Essential Mikrobiologi dan Imunologi.
Tangerang Selatan: Binarupa Aksara Publisher

45
Kanter, Mehmet. dkk. 2005. Gastroprotective Activity Of Nigella sativa L Oil And
Its Constituent, Thymoquinone Against Acute Alcohol-Induced Gastric Mucosal
Injury In Rats. Elsevier. 11(42):6662-6666.
Khanza, Abu. 2010. Fit and Fresh through Habbatussauda. Cicero Publishing:
Jakarta. Hal. 45-56.
Karmen Gama Baratawidjaja, 2009. Imunologi Dasar Edisi Delapan. Jakarta:

Balai Penerbit FKUI.
Kresno, S.B. 1996. Imunologi: Diagnosis dan Prosedur Laboratorium, Ed. III,
Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia.
Kulisic Z, Tambur Z, Maličević Z, Bakrač NA, Misic Z. 2006. White Blood Cell
Differential Count In Rabbits Artificially Infected With Intestinal Coccidia. J.
Protozool. Res. 16, 42-50.
Luo Y, Su Y, Shen Y, Zhao L, Li K. 2004. The Levels of Plasma IL-1β, IL-6 of

C57BL/6J Mice Treated with MPTP and Brain Lateralization. Department of
Microbiology and Immunology, Shantou University Medical College, Shantou,
China.
Manu KA and Kuttan G. 2008. Immunomodulatory activities of Punarnavine, an

alkaloid from Boerhaavia diffusa. Immunopharmacology and Immunotoxicology:
377–387
Madigan, M.T., J.M. Martinko, dan J. Parker. 2003. Brock Biology of

Microorganisms. Pearson Education, Inc. New Jersey. Halaman 79-80.
Mbarek, L. Ait. dkk. 2007. Anti-tumor Properties of Blackseed (Nigella sativa l.)
Extracts. Cadi-Ayyad University. 40: 839-847
Musa, Daoud. dkk. 2004. Antitumor Activity Of An Ethanol Extract Of Nigella

Sativa Seeds. Harran university. 6: 735—740.

46
Michel CG, dkk. 2010. Phytochemical And Biological Investigation Of The

Extracts Of Nigella sativa L. Seed Waste. Pharmacognosy Department, Faculty of
Pharmacy, Cairo University, Egypt
Nakae S, Asano M, Horai R, Iwakura Y. Interleukin-1β, bt not interleukin-1α is

required for T-Cell- dependent antibody production. Immunology 2001; 104: 402-
409.
Norsharina, ismail. dkk. 2011. Thymoquinone Rich Fraction From Nigella sativa
And Thymoquinone Are Cytotoxic Towards Colon And Leukemic Carcinoma Cell
Lines. Academic Journals. pp. 3359-3366.
Omar EM. 2001. Analysis of Single Nucleotide in the Interleukin-1β Gene Using
5' Nuclease Assays. In: Interleukin Protocols. New Jersey : Humana Press
Paarakh, Padmaa M. 2010. A comprehensive review Nigella sativa Linn.

Department of Pharmacognosy, The Oxford College of Pharmacy. pp.409-429.
Padhye, S., Banerjee, S. 2008. Therapeutic Potential Of Black Cumin Seeds And
Beyond. Department of Pathology and Division of Internal Medicine. 6(b): 495–
510.
Peter, K. V. 2004. Handbook of Herbs and Spices Volume 2. Cambridge England.

Woodhead Publishing Ltd.
RAR 2007. Reference values for laboratory animals: normal hematological

values. Research Animal Resources, University of Minnesota.
Salem Mohamed L. 2005. Immunomodulatory and therapeutic properties of the

Nigella sativa L. seed. Int. J. Immunopharmacol: 1749– 1770.
Santoso singgih. 2008. Panduan Lengkap Menguasai SPSS 16. PT. Elex Media
Komputindo. Jakarta: 239-247, 315-319
Shoieb AM, Elgayyar M, Dudrick PS, Bell JL, Tithof PK. In Vitro Inhibition Of
Growth And Induction Of Apoptosis In Cancer Cell Lines By Thymoquinone. Int J
Oncol 2003; 22: 107–13.

47
Singh, gurdip. dkk. 2005. Chemical constituents and antimicrobial and

antioxidant potentials of essential oil and acetone extract of Nigella sativa
seeds.Chemistry Department, DDU Gorakhpur University. 85:2297–2306.
Sloane E. Anatomi dan Fisiologi. Jakarta: EGC Penerbit Buku Kedokteran.
Sutrisno, BB. 1986. Analisis Jamu Edisi I. Fakultas Farmasi Universitas

Pancasila: Jakarta. Hal. 6-9.
Suhatri, Aldi Y. 2010. Aktifitas Ekstrak Etanol Biji Jintan Hitam (Nigella sativa
Linn.) Terhadap Titer Antibodi Dan Jumlah Sel Leukosit Pada Mencit Putih
Jantan. Fakultas Farmasi Universitas Andalas.
Sukowati S, 2010. Masalah Vektor Demam Berdarah Dengue (DBD) dan

Pengedaliannya di Indonesia. Buletin Jendela Epidemiologi. Vol 2
Sumartini S, Zuas O, Julismardiany R, Susilawati E. Aplikasi Elisa Kit Untuk

Mendeteksi Adanya Daging Babi Dalam Makanan. Pusat Penelitian Kimia:
Tangerang
Swamy S.M.K. 1998. Cytotoxic and Immunopotentiating Effects of Ethanolic

Extract of Nigella sativa L. Seeds. Department of Pharmacology, Faculty of
Medicine, National University of Singapore. 70 (2000) 1–7.
Tahir K, Bakeet D. 2006. A Plea for Urgent Clinical Evaluation of its Volatile
Oil. Department of Pharmacology, College of Pharmacy, King Saud University
Riyadh Saudi Arabia: 2 – 3
Tousson E, El-Moghazy E, El-Atrsh E. 2011.The possible effect of diets

containing Nigella sativa and Thymus vulgaris on blood parameters and some
organs structure in rabbit. Toxicology and Industrial Health
Underwood, JCE.1996. General and Systematic Pathology Second Edition.

Penerjemah: Sarjadi. Jakarta: Penerbit Buku Kedokteran (EGC). 190
Virella G. 1997. Introduction to Medical Immunology Fourth Edition. New York:

Marcel Dekker

48
Vieira K. 2011. Improving Abnormal Results. University Of Florida College Of

Medicine
Yeheya M. 2009. A Review Therapeutic Role of Phrophetic Medicine Habbat El

Baraka (Nigella sativa L.). Departement of Pharmacy. 7 (9): 1203-1208.

48
Lampiran 1. Surat Keterangan Hewan Uji

49
Lampiran 2 . Alat dan Bahan yang digunakan
Hemasitometer
Tabung Tamo
Mikroskop Setrifus

50
Differesial Leukosit Counter
Larutan Turk Larutan Giemsa

51
Lampiran 3. Alur Penelitian
Jinten hitam berpotensi sebagai anti inflamasi, anti oksidan, antitumor dan
beberapa penelitian menunjukan bahwa jinten hitam berkhasiat sebagai
imunomodulator
Dilakukan peneletian untuk membandingkan dan mengetahui efektifitas ekstrak

etanol Jinten hitam terhadap jumlah total leukosit mencit dan jumlah IL- 1β
pada mencit yang diberikan LPS
Serbuk Jinten hitam
Ekstrak Etanol
Aklitimasi Hewan Uji
Pemberian ekstrak etanol selama 5 hari Pemberian ekstrak etanol selama 14 hari
berturut -turut berturut -turut
Hari ke – 5 dua jam setelah ekstrak Pengambilan darah melalui retro-orbital

etanol, diberikan LPS 20 μg/kgBB plexus pada hari ke 7, hari ke 14 dan hari
mencit. Enam jam kemudian diambil ke 21
darah melalui retro-orbital plexus
Penentuan kadar IL-1β menggunakan Perhitungan Total Leukosit, Limfosit dan

ELISA Monosit

52
Lampiran 4. Pembuatan Larutan Uji

A. Pembuatan Larutan Uji Ekstrak Etanol Untuk Uji Total Leukosit
1. Dosis Rendah 2.5 mg/20 gr BB atau 125 mg/kg BB
mg
Dosis � BB� × Berat Badan (kg)
kg
VaO Mencit ∶
Konsentrasi
mg
125 ×0.02kg
kg
0.5 ml ∶
Konsentrasi
Konsetrasi : 5 mg/ml
VaO Total : VaO x Jumlah Mencit x Lama Pemberian

: 0.5 ml x 8 x 14
: 56 ml x 2
: 112 ml
Jumlah ekstrak yang ditimbang : VaO Total x Konsentrasi
: 112 ml X 5 mg/ml
: 560 mg
2. Dosis Sedang 5 mg/ 20 grBB atau 250 mg/kgBB
mg
kg
VaO Mencit ∶
Konsentrasi
mg
250 ×0.02kg
kg
0.5 ml ∶
Konsentrasi
: 0.5 ml x 8 x 14
: 56 ml x 2
: 112 ml
: 112 ml X 10 mg/ml
: 1120 mg

53
3. Dosis Tinggi 10 mg/20 grBB atau 500 mg/kgBB
mg
kg
VaO Mencit ∶
Konsentrasi
mg
500 ×0.02kg
kg
0.5 ml ∶
Konsentrasi

: 0.5 ml x 8 x 14
: 56 ml x 2
: 112 ml
: 112 ml X 20 mg/ml
: 2240 mg
B. Pembuatan Larutan Uji Ekstrak Etanol Untuk Uji Interleukin 1 Beta

1. Dosis Rendah 2.5 mg/20 gr BB atau 125 mg/kg BB
mg
kg
VaO Mencit ∶
Konsentrasi
mg
125 ×0.02kg
kg
0.5 ml ∶
Konsentrasi

: 0.5 ml x 5 x 14
: 12.5 x 2
: 25 ml
:25 ml X 5 mg/ml
:125 mg
2. Dosis Sedang 5 mg/ 20 grBB atau 250 mg/kgBB
mg
kg
VaO Mencit ∶
Konsentrasi
mg
250 ×0.02kg
kg
0.5 ml ∶
Konsentrasi

54

: 0.5 ml x 5 x 14
: 12.5ml x 2
: 25 ml
: 25 ml X 10 mg/ml
: 250 mg
3. Dosis Tinggi 10 mg/20 grBB atau 500 mg/kgBB
mg
kg
VaO Mencit ∶
Konsentrasi
mg
500 ×0.02kg
kg
0.5 ml ∶
Konsentrasi

: 0.5 ml x 5 x 14
: 12.5
:25 ml
: 25 ml X 20 mg/ml
: 500 mg
Lampiran 5.Kegiatan Penelitian
Apusan Darah Fiksasi

55
Lampiran 6. Gambar Pemeriksaan Total Leukosit, Monosit dan Limfosit
Monosit
Limfosit
Total Leukosit

56
Lampiran 7. Jumlah Total Leukosit, Presendase Monosit Dan Limfosit Hari 7
1. Jumlah Total Leukosit Pengambilan Hari 7

Total Lekosit
Kelompok No I II Rata - Rata Total Leukosit (mm3)
1 112 91 101.5 5075
2 59 86 72.5 3625
Kontrol 5 64 83 73.5 3675
7 37 110 73.5 3675
8 93 117 105 5250
Rata - Rata 85.2 4260.0
1 83 85 84 4200
2 167 131 149 7450
Etanol Dosis
3 78 99 88.5 4425
Rendah
4 185 217 201 10050
7 107 100 103.5 5175
Rata - Rata 125.2 6260.0
1 162 172 167 8350
2 158 182 170 8500
Etanol Dosis
4 134 140 137 6850
Sedang
7 144 140 142 7100
8 148 130 139 6950
Rata - Rata 151.0 7550.0
1 211 178 194.5 9725
2 285 278 281.5 14075
Etanol Dosis
3 192 150 171 8550
Tinggi
4 241 203 222 11100
6 250 234 242 12100
Rata - Rata 222.2 11110.0

57
2. Persentase Monosit dan Limfosit Hari 7
Jumlah Differensial Leukosit

% Differensial Lekosit
Kelompok No Monosit Limfosit Eusonofil Basofil Monosit Limfosit Eusonofil Basofil
1 8% 86% 1% 5% 406 4364.5 50.75 253.75
2 9% 85% 1% 6% 326.25 3081.25 36.25 217.5
Kontrol 5 8% 89% 2% 2% 294 3270.75 73.5 73.5
7 4% 89% 2% 5% 147 3270.75 73.5 183.75
8 1% 95% 2% 2% 52.5 4987.5 105 105
Rata - Rata 6% 89% 2% 4% 245.2 3795.0 67.8 166.7
1 1% 99% 0% 0% 42 4158 0 0
2 5% 94% 0% 1% 372.5 7003 0 74.5
Etanol Dosis
3 6% 94% 0% 0% 265.5 4159.5 0 0
Rendah
4 11% 88% 1% 0% 1105.5 8844 100.5 0
7 12% 88% 0% 0% 621 4554 0 0
Rata - Rata 7% 93% 0% 0% 481.3 5743.7 20.1 14.9
1 4% 96% 0% 0% 334 8016 0 0
2 8% 90% 0% 2% 680 7650 0 170
Etanol Dosis
4 4% 95% 1% 1% 274 6507.5 68.5 68.5
Sedang
7 3% 96% 0% 1% 213 6816 0 71
8 5% 95% 0% 0% 347.5 6602.5 0 0
Rata – Rata 5% 94% 0% 1% 369.7 7118.4 13.7 61.9
1 4% 96% 0% 0% 389 9336 0 0
2 2% 98% 0% 0% 281.5 13793.5 0 0
Etanol Dosis
3 2% 98% 0% 0% 171 8379 0 0
Tinggi
4 0% 100% 0% 0% 0 11100 0 0
6 1% 99% 0% 0% 121 11979 0 0
Rata – Rata 2% 98% 0% 0% 192.5 10917.5 0 0

58
Lampiran 8. Jumlah Total Leukosit, Persentase Monosit Dan Limfosit Hari 14

1. Jumlah Total Leukosit Hari 14
No Total Lekosit Total Leukosit
Kelompok Rata - Rata (per mm3)
I II
1 75 96 85.5 4275
2 162 152 157 7850
5 62 55 58.5 2925
7 137 98 117.5 5875
8 89 74 81.5 4075
Kontrol Rata - Rata 100.0 5000.0
1 149 137 143 7150
2 235 186 210.5 10525
Etanol Dosis Rendah 3 144 135 139.5 6975
4 175 161 168 8400
7 173 156 164.5 8225
Rata - Rata 165.1 8255.0
1 261 230 245.5 12275
2 317 240 278.5 13925
Etanol Dosis Sedang 4 254 258 256 12800
7 226 222 224 11200
8 274 253 263.5 13175
Rata - Rata 253.5 12675.0
1 124 148 136 6800
2 289 251 270 13500
Etanol Dosis Tinggi 3 182 197 189.5 9475
4 217 171 194 9700
6 323 295 309 15450
Rata - Rata 219.7 10985.0

59
2. Persentase Monosit Dan Limfosit Hari 14

Kelompok No Monosit Limfosit Eusonofil Basofil Monosit Limfosit Eusonofil B
1 18% 79% 0% 3% 769.5 3377.25 0 1
2 2% 97% 0% 1% 157 7614.5 0
Kontrol 5 2% 71% 25% 2% 58.5 2076.75 731.25
7 7% 93% 0% 0% 411.25 5463.75 0
8 3% 62% 34% 1% 122.25 2526.5 1385.5
Rata - Rata 6% 80% 12% 1% 303.7 4211.8 423.4
1 3% 97% 0% 0% 214.5 6935.5 0
2 1% 99% 0% 0% 105.25 10419.75 0
Etanol Dosis
3 5% 95% 0% 0% 348.75 6626.25 0
Rendah
4 0% 100% 0% 0% 0 8400 0
7 1% 98% 1% 0% 82.25 8060.5 82.25
Rata - Rata 2% 98% 0% 0% 150.2 8088.4 16.5
1 2% 96% 0% 2% 245.5 11784 0
2 1% 98% 1% 0% 139.25 13646.5 139.25
Etanol Dosis
4 1% 99% 0% 0% 128 12672 0
Sedang
7 0% 99% 1% 0% 0 11088 112
8 4% 95% 1% 0% 527 12516.25 131.75
Rata - Rata 2% 97% 1% 0% 208.0 12341.4 76.6
1 2% 98% 0% 0% 136 6664 0
2 2% 98% 0% 0% 270 13230 0
Etanol Dosis
3 1% 99% 0% 0% 94.75 9380.25 0
Tinggi
4 0% 100% 0% 0% 0 9700 0
6 1% 99% 0% 0% 154.5 15295.5 0
Rata - Rata 1% 99% 0% 0% 131.1 10854.0 0.0

60
Lampiran 9. Jumlah Total Leukosit, Persentase Monosit dan Limfosit Hari 21
1. Jumlah Total Leukosit Hari 21

Kelompok No Total Leukosit Rata - Rata Total Leukosit (mm3)
I II
1 76 61 68.5 3425
2 85 126 105.5 5275
5 98 86 92 4600
7 94 103 98.5 4925
Kontrol 8 127 113 120 6000
Rata - Rata 96.9 4845.0
1 151 160 155.5 7775
2 121 129 125 6250
Etanol Dosis Rendah 3 253 226 239.5 11975
4 195 176 185.5 9275
7 211 207 209 10450
Rata - Rata 182.9 9145.0

1 323 272 297.5 14875
2 167 217 192 9600
Etanol Dosis Sedang 4 226 232 229 11450
7 211 233 222 11100
8 175 192 183.5 9175
Rata - Rata 224.8 11240.0
1 341 264 302.5 15125
2 271 307 289 14450
3 148 166 157 7850
Etanol Dosis Tinggi
4 150 166 158 7900
6 186 253 219.5 10975
Rata - Rata
225.2 11260

61
2. Persentase Monosit Dan Limfosit Hari 21

Kelompok No Monosit Limfosit Eusonofil Basofil Monosit Limfosit Eusonofil Basofil
1 1% 99% 0% 0% 34.25 3390.75 0 0
2 0% 100% 0% 0% 0 5275 0 0
Kontrol 5 0% 100% 0% 0% 0 4600 0 0
7 1% 99% 0% 0% 49.25 4875.75 0 0
8 1% 99% 0% 0% 60 5940 0 0
Rata - Rata 1% 99% 0% 0% 29 4816 0 0
1 2% 95% 3% 0% 155.5 7386.25 233.25 0
2 5% 94% 1% 0% 312.5 5875 62.5 0
Etanol Dosis
3 2% 96% 2% 0% 239.5 11496 239.5 0
Rendah
4 2% 93% 5% 0% 185.5 8625.75 463.75 0
7 2% 98% 0% 0% 209 10241 0 0
Rata - Rata 3% 95% 2% 0% 220.4 8725 199.8 0
1 0% 100% 0% 0% 0 14875 0 0
2 9% 91% 0% 0% 864 8736 0 0
Etanol Dosis
4 2% 98% 0% 0% 229 11221 0 0
Sedang
7 5% 94% 1% 0% 555 10434 111 0
8 6% 91% 0% 3% 550.5 8349.25 0 275.25
Rata - Rata 4% 95% 0% 1% 439.7 10723.05 22.2 55.1
1 4% 95% 0% 1% 605 14368.75 0 151.25
2 3% 96% 0% 1% 433.5 13872 0 144.5
Etanol Dosis
3 3% 96% 0% 1% 235.5 7536 0 78.5
Tinggi
4 0% 100% 0% 0% 0 7900 0 0
6 1% 99% 0% 0% 0 10865.25 0 0
Rata - Rata 2% 97% 0% 1% 254.8 10908.4 0 74.9

62
Lampiran 10. Hasil Uji Normalitas Total Leukosit Hari 7
Tujuan : Untuk melihat data total leukosit hari 7 terdistribusi normal atau tidak.
Hipotesis :
Ho : Data total leukosit hari 7 terdistribusi normal.
Ha : Data total leukosit hari 7 tidak terdistribusi normal.
Pengambilan keputusan :
Jika nilai signifikansi ≥ 0.05, maka Ho diterima.
Jika nilai signifikansi ≤ 0.05, maka Ho ditolak.
Hasil Uji Normalitas Hasil Uji Normalitas Total Leukosit Hari 7
Tests of Normality
Kolmogorov-Smirnova Shapiro-Wilk
Kadar Ekstrak Statistic df Sig. Statistic df Sig.
Total Leukosit (/mm3) Kontrol .360 5 .032 .736 5 .022
Dosis Rendah .269 5 .200* .868 5 .259
Dosis Sedang .312 5 .126 .793 5 .071
Dosis Tinggi .142 5 .200* .988 5 .972
a. Lilliefors Significance Correction
*. This is a lower bound of the true significance.
Keputusan : Data total leukosit hari 7 tidak terdistribusi normal sehingga

dilakukan uji non parametik Kruskal-Wallis.

63
Lampiran 11. Hasil Uji Nonparametik Kruskal-Wallis Data total leukosit hari 7
Tujuan : Untuk mengetahui ada atau tidaknya perbedaan data total leukosit
hari 7.
Hipotesis :
Ho : Data total leukosit hari 7 tidak berbeda secara bermakna
Ha : Data total leukosit hari 7 berbeda secara bermakna
Pengambilan Keputusan :
Jika nilai signifikansi ≤ 0,05 Ho ditolak, berarti terdapat perbedaan.
Jika nilai signifikasi ≥ 0,05 Ho diterima, berarti tidak terdapat perbedaan.
Hasil Uji Nonparametik Kruskal-Wallis Data total leukosit hari 7
Test Statisticsa,b
Total Leukosit (/mm3)
Chi-Square 13.685
df 3
Asymp. Sig. .003
a. Kruskal Wallis Test
b. Grouping Variable: Kadar Ekstrak
Keputusan : Data total leukosit hari 7 berbeda secara bermakna.

64
Lampiran 12. Hasil Uji Uji Mann-Whitney Data total leukosit hari 7
Ranks
Kadar Ekstrak N Mean Rank Sum of Ranks
Total Leukosit (/mm3) Kontrol 5 4.00 20.00
Dosis Rendah 5 7.00 35.00
Total 10
Test Statisticsb
Total Leukosit
(/mm3)
Mann-Whitney U 5.000
Wilcoxon W 20.000
Z -1.571
Asymp. Sig. (2-tailed) .116
Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] .151a
a. Not corrected for ties.
Ranks
Dosis Sedang 5 8.00 40.00
Total 10

65
Test Statisticsb
Total Leukosit
(uL)
Mann-Whitney U .000
Wilcoxon W 15.000
Z -2.619
b. Grouping Variable: Kadarekstrak
Ranks
Total Leukosit /mm3) Kontrol 5 3.00 15.00
Dosis Tinggi 5 8.00 40.00
Total 10
Test Statisticsb
Total Leukosit
(/mm3)
Mann-Whitney U .000
Wilcoxon W 15.000
Z -2.619
Ranks
Total Leukosit (/mm3) Dosis Rendah 5 4.60 23.00
Total 10

66
Test Statisticsb
Total Leukosit
(/mm3)
Wilcoxon W 23.000
Z -.940
Ranks
Total 10
Test Statisticsb
Total Leukosit
(/mm3)
Wilcoxon W 17.000
Z -2.193
Ranks
Total Leukosit (/mm3) Dosis Sedang 5 3.00 15.00
Total 10

67
Test Statisticsb
Total Leukosit
(/mm3)
Mann-Whitney U .000
Wilcoxon W 15.000
Z -2.611

68

Tujuan : Untuk melihat data total leukosit hari 14 terdistribusi normal atau
tidak.
Hipotesis :
Tests of Normality
Kadar Ekstrak Statistic df Sig. Statistic df Sig.
Total Leukosit (/mm3) Kontrol .248 5 .200* .943 5 .689
Dosis Rendah .259 5 .200* .881 5 .316
Dosis Sedang .149 5 .200* .988 5 .973
Dosis Tinggi .245 5 .200* .947 5 .714
Keputusan : Data total leukosit hari 14 terdistribusi normal

69
Lampiran 14. Hasil Uji Homogenitas Data total leukosit hari 14
Tujuan : Untuk melihat data total leukosit hari 14 homogen atau tidak.
Hipotesis :
Ho : Data total leukosit hari 14 bervariasi homogen.
Ha : Data total leukosit hari 14 tidak bervariasi homogen.
Hasil Uji Homogenitas Data Total Leukosit hari 14
Test of Homogeneity of Variances
Total Leukosit (/mm3)
Levene Statistic df1 df2 Sig.
3.966 3 16 .027
Keputusan : Data total leukosit hari 14 tidak bervariasi homogen, sehingga

dilakukan uji non parametik Kruskal-Wallis

70
Lampiran 15. Hasil Uji Nonparametik Kruskal-Wallis Data total leukosit hari 14
Tujuan : Untuk mengetahui ada atau tidaknya perbedaan data total leukosit hari
14.
Hipotesis :
Hasil Uji Nonparametik Kruskal-Wallis Data total leukosit hari 14

Test Statisticsa,b
Total Leukosit
(/mm3)
Chi-Square 12.806
df 3
Asymp. Sig. .005

71
Lampiran 16. Hasil Uji Mann-Whitney Data Total Leukosit hari 14
Ranks
Total 10
Test Statisticsb
Total Leukosit
(/mm3)
Wilcoxon W 17.000
Z -2.193
Ranks
Total 10

72
Test Statisticsb
Total Leukosit
(/mm3)
Mann-Whitney U .000
Wilcoxon W 15.000
Z -2.611
Ranks
Total 10
Test Statisticsb
Total Leukosit
(/mm3)
Wilcoxon W 16.000
Z -2.402
Ranks
Total 10

73
Test Statisticsb
Total Leukosit
(/mm3)
Mann-Whitney U .000
Wilcoxon W 15.000
Z -2.611
Ranks
Total Leukosit Dosis Rendah 5 4.40 22.00

(/mm3)
Total 10
Test Statisticsb
Total Leukosit
(/mm3)
Wilcoxon W 22.000
Z -1.149
Ranks
Total Leukosit (/mm3) Dosis Sedang 5 6.20 31.00
Total 10

74
Test Statisticsb
Total Leukosit
(/mm3)
Wilcoxon W 24.000
Z -.731

75

Tujuan : Untuk melihat data total leukosit hari 21 terdistribusi normal atau
tidak.
Hipotesis :

Tests of Normality
Kadar Ekstrak Statistic Df Sig. Statistic df Sig.
Total Leukosit (/mm3) Kontrol .198 5 .200* .975 5 .909
Dosis Rendah .130 5 .200* .991 5 .983
Dosis Sedang .263 5 .200* .887 5 .340
Dosis Tinggi .234 5 .200* .856 5 .213
Keputusan : Data total leukosit hari 21 terdistribusi normal

76
Lampiran 18. Hasil Uji Homogenitas Data total leukosit hari 21
Tujuan : Untuk melihat data total leukosit hari 21 homogen atau tidak.
Hipotesis :
Ho : Data total leukosit hari 21 bervariasi homogen.
Ha : Data total leukosit hari 21 tidak bervariasi homogen.
Hasil Uji Homogenitas Data Total Leukosit hari 21
Total Leukosit (/mm3\)
2.668 3 16 .083
Keputusan : Data total leukosit hari 21 bervariasi homogen,

77
Lampiran 19. Hasil Uji ANOVA Data Total Leukosit Hari 21
hari 21.
Hipotesis :
Hasil Uji ANOVA Total Leukosit Hari 21

ANOVA
Sum of Squares df Mean Square F Sig.
Between Groups 1.368E8 3 4.558E7 7.933 .002
Within Groups 9.193E7 16 5745781.250
Total 2.287E8 19

78
Lampiran 20. Hasil Uji Post Hoc Data Total Leukosit hari 21
Multiple Comparisons

Bonferroni
95% Confidence Interval

Mean Difference
(I) Kadar Ekstrak (J) Kadar Ekstrak (I-J) Std. Error Sig. Lower Bound Upper Bound
Kontrol Dosis Rendah -4300.00000 1516.01863 .071 -8860.6902 260.6902
Dosis Sedang -6395.00000* 1516.01863 .004 -10955.6902 -1834.3098
Dosis Tinggi -6415.00000* 1516.01863 .004 -10975.6902 -1854.3098
Dosis Rendah Kontrol 4300.00000 1516.01863 .071 -260.6902 8860.6902
Dosis Sedang -2095.00000 1516.01863 1.000 -6655.6902 2465.6902
Dosis Tinggi -2115.00000 1516.01863 1.000 -6675.6902 2445.6902
Dosis Sedang Kontrol 6395.00000* 1516.01863 .004 1834.3098 10955.6902
Dosis Rendah 2095.00000 1516.01863 1.000 -2465.6902 6655.6902
Dosis Tinggi -20.00000 1516.01863 1.000 -4580.6902 4540.6902
Dosis Tinggi Kontrol 6415.00000* 1516.01863 .004 1854.3098 10975.6902
Dosis Rendah 2115.00000 1516.01863 1.000 -2445.6902 6675.6902
Dosis Sedang 20.00000 1516.01863 1.000 -4540.6902 4580.6902
*. The mean difference is significant at the 0.05 level.

79
Lampiran 21. Hasil Uji Normalitas Monosit Hari 7

Tujuan : Untuk melihat data monosit hari 7 terdistribusi normal atau
tidak.
Hipotesis :
Ho : Data Monosit Hari 7 terdistribusi normal.
Ha : Data monosit hari 7 tidak terdistribusi normal.
Hasil Uji Normalitas Hasil Uji Normalitas Monosit hari 7
Tests of Normality
Kadar ekstrak (mg/kgBB) Kolmogorov-Smirnova Shapiro-Wilk
Statistic df Sig. Statistic df Sig.
Monosit (/mm3\) 0 .234 5 .200* .949 5 .729
125 .206 5 .200* .951 5 .745
250 .350 5 .045 .816 5 .109
500 .157 5 .200* .991 5 .984
Keputusan : Data monosit hari 7 terdistribusi normal

80
Lampiran 22. Hasil Uji Homogenitas Data monosit hari 7
Tujuan : Untuk melihat data monosit hari 7 homogen atau tidak.
Hipotesis :
Ho : Data monosit hari 7 bervariasi homogen.
Ha : Data monosit hari 7 tidak bervariasi homogen.
Hasil Uji Homogenitas Data Monosit hari 7

Monosit (mm3\)
2.461 3 16 .100
Keputusan : Data monosit hari 7 bervariasi homogen,

81
Lampiran 23. Hasil Uji ANOVA Data Monosit hari 7
Tujuan : Untuk mengetahui ada atau tidaknya perbedaan data monosit hari
7.
Hipotesis :
Ho : Data monosit hari 7 tidak berbeda secara bermakna
Ha : Data monosit hari 7 berbeda secara bermakna
Hasil Uji ANOVA Monosit hari 7
ANOVA
Monosit (mm3\)
Between Groups 251359.600 3 83786.533 1.392 .281
Within Groups 962834.400 16 60177.150
Total 1214194.000 19
Keputusan : Data monosit hari 7 tidak berbeda secara bermakna.

82

tidak.
Hipotesis :
Ho : Data monosit hari 14 terdistribusi normal.
Tests of Normality
Kadar ekstrak Statistic df Sig. Statistic df Sig.
Monosit (mm3\) Kontrol .291 5 .191 .858 5 .220
Dosis Rendah .230 5 .200* .956 5 .779
Dosis Sedang .236 5 .200* .909 5 .463
Dosis Tinggi .206 5 .200* .979 5 .931

83
Lampiran 25. Hasil Uji Homogenitas Data Monosit Hari 14
Hipotesis :
Monosit (mm3\)
2.278 3 16 .119

84
14.
Hipotesis :
ANOVA
Monosit (mm3\)
Sum of Squares Df Mean Square F Sig.
Between Groups 90221.350 3 30073.783 .787 .519
Within Groups 611329.600 16 38208.100
Total 701550.950 19

85

tidak.
Hipotesis :
Ho : Data monosit hari 21 terdistribusi normal.
Tests of Normality
Trans_Monosit Kontrol .241 3 . .973 3 .687
Dosis Rendah .137 5 .200* .991 5 .981
Dosis Sedang .324 4 . .900 4 .430
Dosis Tinggi .243 3 . .972 3 .680

86
Lampiran 28. Hasil Uji Homogenitas Data Monosit Hari 21
Hipotesis :

Trans_Monosit
.719 3 11 .561

87
14.
Hipotesis :
ANOVA
Trans_Monosit
Between Groups 2.062 3 .687 21.852 .000
Within Groups .346 11 .031
Total 2.408 14

88
Lampiran 30. Hasil Uji Post Hoc Data Monosit Hari 21
Trans_Monosit
Bonferroni

Mean Difference
(I) Kadar ekstrak (J) Kadar ekstrak (I-J) Std. Error Sig. Lower Bound Upper Bound
Kontrol Dosis Rendah -.66343* .12952 .002 -1.0789 -.2479
Dosis Sedang -1.02864* .13545 .000 -1.4632 -.5941
Dosis Tinggi -.92983* .14481 .000 -1.3944 -.4653
Dosis Rendah Kontrol .66343* .12952 .002 .2479 1.0789
Dosis Sedang -.36521 .11897 .064 -.7469 .0165
Dosis Tinggi -.26640 .12952 .385 -.6819 .1491
Dosis Sedang Kontrol 1.02864* .13545 .000 .5941 1.4632
Dosis Rendah .36521 .11897 .064 -.0165 .7469
Dosis Tinggi .09881 .13545 1.000 -.3357 .5334
Dosis Tinggi Kontrol .92983* .14481 .000 .4653 1.3944
Dosis Rendah .26640 .12952 .385 -.1491 .6819
Dosis Sedang -.09881 .13545 1.000 -.5334 .3357

89
Lampiran 31. Hasil Uji Normalitas Limfosit Hari 7
Tujuan : Untuk melihat data limfosit hari 7 terdistribusi normal atau tidak.
Hipotesis :
Ho : Data limfosit hari 7 terdistribusi normal.
Ha : Data limfosit hari 7 tidak terdistribusi normal.
Hasil Uji Normalitas Hasil Uji Normalitas Limfosit hari 7
Tests of Normality
Kadar
ekstrak
(mg/kgB
B) Statistic df Sig. Statistic df Sig.
Limfosit (mm3) 0 .334 5 .070 .835 5 .153
125 .314 5 .119 .819 5 .115
250 .273 5 .200* .866 5 .252
500 .170 5 .200* .977 5 .916
Keputusan : Data limfosit hari 7 terdistribusi normal

90
Lampiran 32. Hasil Uji Homogenitas Data limfosit hari 7
Tujuan : Untuk melihat data limfosit hari 7 homogen atau tidak.
Hipotesis :
Ho : Data limfosit hari 7 bervariasi homogen.
Ha : Data limfosit hari 7 tidak bervariasi homogen.
Hasil Uji Homogenitas Data Limfosit hari 7
Limfosit (mm3)
3.903 3 16 .029
Keputusan : Data limfosit hari 7 tidak bervariasi homogen, sehingga dilakukan

uji non parametik Kruskal-Wallis

91
Lampiran 33. Hasil Uji Nonparametik Kruskal-Wallis Data limfosit hari 7
Tujuan : Untuk mengetahui ada atau tidaknya perbedaan data limfosit hari 7.
Hipotesis :
Ho : Data limfosit hari 7 tidak berbeda secara bermakna
Ha : Data limfosit hari 7 berbeda secara bermakna
Hasil Uji Nonparametik Kruskal-Wallis Data limfosit hari 7

Test Statisticsa,b
Limfosit (mm3)
Chi-Square 14.188
Df 3
Asymp. Sig. .003
b. Grouping Variable: Kadar

ekstrak
Keputusan : Data limfosit hari 7 berbeda secara bermakna.

92
Lampiran 34. Hasil Uji Mann-Whitney Data Limfosit hari 7
Ranks
Kadar ekstrak N Mean Rank Sum of Ranks
Limfosit (mm3) Kontrol 5 4.00 20.00
Total 10
Test Statisticsb
Limfosit (mm3)
Wilcoxon W 20.000
Z -1.571
b. Grouping Variable: Kadar ekstrak
Ranks
Total 10
Test Statisticsb
Limfosit (mm3)
Mann-Whitney U .000
Wilcoxon W 15.000
Z -2.619

93
Ranks
Total 10
Test Statisticsb
Limfosit (mm3)
Mann-Whitney U .000
Wilcoxon W 15.000
Z -2.619
Ranks
Limfosit (mm3) Dosis Rendah 5 4.60 23.00
Total 10
Test Statisticsb
Limfosit (mm3)
Wilcoxon W 23.000
Z -.940

94
Ranks
Total 10
Test Statisticsb
Limfosit (mm3)
Wilcoxon W 16.000
Z -2.402
Ranks
Limfosit (mm3) Dosis Sedang 5 3.00 15.00
Total 10
Test Statisticsb
Limfosit (mm3)
Mann-Whitney U .000
Wilcoxon W 15.000
Z -2.611

95
Lampiran 35. Hasil Uji Normalitas Limfosit Hari 14

Tujuan : Untuk melihat data limfosit hari 14 terdistribusi normal atau
tidak.
Hipotesis :
Tests of Normality
Kadar ekstrak Statistic Df Sig. Statistic df Sig.
Limfosit (mm3) Kontrol .241 5 .200* .907 5 .451
Dosis Rendah .218 5 .200* .918 5 .519
Dosis Sedang .172 5 .200* .984 5 .956
Dosis Tinggi .233 5 .200* .957 5 .787

96
Hipotesis :

Limfosit (mm3)
3.623 3 16 .036
Keputusan : Data limfosit hari 14 tidak bervariasi homogen, sehingga


97
Lampiran 37. Hasil Uji Nonparametik Kruskal-Wallis Data limfosit hari 14
Tujuan : Untuk mengetahui ada atau tidaknya perbedaan data limfosit hari 14.
Hipotesis :
Hasil Uji Nonparametik Kruskal-Wallis Data limfosit hari 14

Test Statisticsa,b
Limfosit (mm3)
Chi-Square 13.057
Df 3
Asymp. Sig. .005
b. Grouping Variable: Kadar

ekstrak

98
Lampiran 38. Hasil Uji Mann-Whitney Data Limfosit hari 14
Ranks
Total 10
Test Statisticsb
Limfosit (mm3)
Wilcoxon W 17.000
Z -2.193
Ranks
Total 10

99
Test Statisticsb
Limfosit (mm3)
Mann-Whitney U .000
Wilcoxon W 15.000
Z -2.611
Ranks
Total 10
Test Statisticsb
Limfosit (mm3)
Wilcoxon W 16.000
Z -2.402
Ranks
Total 10

100
Test Statisticsb
Limfosit (mm3)
Mann-Whitney U .000
Wilcoxon W 15.000
Z -2.611
Ranks
Total 10
Test Statisticsb
Limfosit (mm3)
Wilcoxon W 21.000
Z -1.358
Ranks
Limfosit (mm3) Dosis Sedang 5 6.20 31.00
Total 10

101
Test Statisticsb
Limfosit (mm3)
Wilcoxon W 24.000
Z -.731

102
Lampiran 39. Hasil Uji Normalitas Data Limfosit hari 21

Tujuan : Untuk melihat data limfosit hari 21 terdistribusi normal atau
tidak.
Hipotesis :
Tests of Normality
Limfosit (mm3) Kontrol .209 5 .200* .970 5 .876
Dosis Rendah .152 5 .200* .984 5 .954
Dosis Sedang .224 5 .200* .898 5 .397
Dosis Tinggi .226 5 .200* .869 5 .263

103
Hipotesis :

Limfosit (mm3)
2.026 3 16 .151
Keputusan : Data limfosit hari 21 bervariasi homogen,

104
Lampiran 41. Hasil Uji ANOVA Data Limfosit hari 21
Tujuan : Untuk mengetahui ada atau tidaknya perbedaan data limfosit hari
21.
Hipotesis :
Hasil Uji ANOVA Limfosit hari 21

ANOVA
Limfosit (mm3)
Within Groups 9.179E7 16 5736978.375
Total 2.119E8 19

105
Lampiran 42. Hasil Uji Post Hoc Data Limfosit hari 21
Limfosit (mm3)
Bonferroni

Mean Difference
(I) Kadar ekstrak (J) Kadar ekstrak (I-J) Std. Error Sig. Lower Bound Upper Bound
Kontrol Dosis Rendah -3908.60000 1514.85687 .121 -8465.7952 648.5952
Dosis Sedang -5907.00000* 1514.85687 .008 -10464.1952 -1349.8048
Dosis Tinggi -6092.20000* 1514.85687 .006 -10649.3952 -1535.0048
Dosis Rendah Kontrol 3908.60000 1514.85687 .121 -648.5952 8465.7952
Dosis Sedang -1998.40000 1514.85687 1.000 -6555.5952 2558.7952
Dosis Tinggi -2183.60000 1514.85687 1.000 -6740.7952 2373.5952
Dosis Sedang Kontrol 5907.00000* 1514.85687 .008 1349.8048 10464.1952
Dosis Rendah 1998.40000 1514.85687 1.000 -2558.7952 6555.5952
Dosis Tinggi -185.20000 1514.85687 1.000 -4742.3952 4371.9952
Dosis Tinggi Kontrol 6092.20000* 1514.85687 .006 1535.0048 10649.3952
Dosis Rendah 2183.60000 1514.85687 1.000 -2373.5952 6740.7952
Dosis Sedang 185.20000 1514.85687 1.000 -4371.9952 4742.3952

106
Lampiran 43. Hasil Uji Normalitas Total Leukosit Kontrol
Tujuan : Untuk melihat data total leukosit Kontrol terdistribusi normal atau tidak.
Hipotesis :
Ho : Data total leukosit Kontrol terdistribusi normal.
Ha : Data total leukosit Kontrol tidak terdistribusi normal.
Hasil Uji Normalitas Total Leukosit Kontrol
Tests of Normality
HariKe Statistic df Sig. Statistic df Sig.
TotalLeukosit Hari ke 7 .360 5 .032 .736 5 .022
Hari ke 14 .248 5 .200* .943 5 .689
Hari ke 21 .198 5 .200* .975 5 .909
Keputusan : Data total leukosit kontrol tidak terdistribusi normal sehingga

dilakukan uji non parametik Kruskal-Wallis.

107
Lampiran 44. Hasil Uji Nonparametik Kruskal-Wallis Data Total Leukosit Kontrol
kontrol dari hari 7, hari 14 dan hari 21
Hipotesis :
Ho : Data total leukosit kontrol tidak berbeda secara bermakna
Ha : Data total leukosit kontrol berbeda secara bermakna
Hasil Uji Nonparametik Kruskal-Wallis Data total leukosit kontrol
Test Statisticsa,b
TotalLeukosit
Chi-Square .781
df 2
Asymp. Sig. .677
b. Grouping Variable: HariKe
Keputusan : Data total leukosit kontrol tidak berbeda secara bermakna.

108
Lampiran 45. Hasil Uji Normalitas Total Leukosit Dosis Rendah
Tujuan : Untuk melihat data total leukosit dosis rendah terdistribusi normal
atau tidak.
Hipotesis :
Ho : Data total leukosit dosis rendah terdistribusi normal.
Ha : Data total leukosit dosis rendah tidak terdistribusi normal.
Hasil Uji Normalitas Total Leukosit Dosis rendah
Tests of Normality
TotalLeukosit Hari ke 7 .269 5 .200* .868 5 .259
Hari ke 14 .259 5 .200* .881 5 .316
Hari ke 21 .130 5 .200* .991 5 .983
Keputusan : Data total leukosit dosis rendah terdistribusi normal

109
Lampiran 46. Hasil Uji Homogenitas Data Total Leukosit Dosis Rendah
Tujuan : Untuk melihat data total leukosit dosis rendah homogen atau tidak.
Hipotesis :
Ho : Data total leukosit dosis rendah bervariasi homogen.
Ha : Data total leukosit dosis rendah tidak bervariasi homogen.
Hasil Uji Homogenitas Data Total Leukosit dosis rendah
TotalLeukosit
1.243 2 12 .323
Keputusan : Data total leukosit dosis rendah bervariasi homogen,

110
Lampiran 47. Hasil Uji ANOVA Data Total Leukosit Dosis Rendah
dosis rendah.
Hipotesis :
Ho : Data total leukosit dosis rendah tidak berbeda secara bermakna
Ha : Data total leukosit dosis rendah berbeda secara bermakna
Hasil Uji ANOVA Total Leukosit Dosis rendah
ANOVA
TotalLeukosit
Within Groups 5.259E7 12 4382437.500
Total 7.441E7 14
Keputusan : Data total leukosit dosis rendah tidak berbeda secara bermakna.

111
Lampiran 48. Hasil Uji Normalitas Total Leukosit Dosis Sedang
Tujuan : Untuk melihat data total leukosit dosis sedang terdistribusi normal
atau tidak.
Hipotesis :
Ho : Data total leukosit dosis sedang terdistribusi normal.
Ha : Data total leukosit dosis sedang tidak terdistribusi normal.
Hasil Uji Normalitas Total Leukosit Dosis sedang
Tests of Normality
TotalLeukosit Hari ke 7 .312 5 .126 .793 5 .071
Hari ke 14 .149 5 .200* .988 5 .973
Hari ke 21 .263 5 .200* .887 5 .340
Keputusan : Data total leukosit dosis sedang terdistribusi normal

112
Lampiran 49. Hasil Uji Homogenitas Data total Leukosit Dosis Sedang
Tujuan : Untuk melihat data total leukosit dosis sedang homogen atau tidak.
Hipotesis :
Ho : Data total leukosit dosis sedang bervariasi homogen.
Ha : Data total leukosit dosis sedang tidak bervariasi homogen.
Hasil Uji Homogenitas Data Total Leukosit Dosis Sedang
TotalLeukosit
1.339 2 12 .299
Keputusan : Data total leukosit dosis sedang bervariasi homogen,

113
Lampiran 50. Hasil Uji ANOVA Data Total Leukosit Dosis Sedang
Tujuan :
Untuk mengetahui ada atau tidaknya perbedaan data total leukosit dosis sedang.
Hipotesis :
Ho : Data total leukosit dosis sedang tidak berbeda secara bermakna
Ha : Data total leukosit dosis sedang berbeda secara bermakna
Hasil Uji ANOVA Total Leukosit Dosis Sedang
ANOVA
TotalLeukosit
Within Groups 2.699E7 12 2249125.000
Total 9.689E7 14
Keputusan : Data total leukosit dosis sedang berbeda secara bermakna.

114
Lampiran 51. Hasil Uji Post Hoc Data Total Leukosit Dosis Sedang
TotalLeukosit
Bonferroni

Mean Difference
(I) HariKe (J) HariKe (I-J) Std. Error Sig. Lower Bound Upper Bound
Hari ke 7 Hari ke 14 -5125.000* 948.499 .000 -7761.33 -2488.67
Hari ke 21 -3690.000* 948.499 .006 -6326.33 -1053.67
Hari ke 14 Hari ke 7 5125.000* 948.499 .000 2488.67 7761.33
Hari ke 21 1435.000 948.499 .469 -1201.33 4071.33
Hari ke 21 Hari ke 7 3690.000* 948.499 .006 1053.67 6326.33
Hari ke 14 -1435.000 948.499 .469 -4071.33 1201.33

115
Lampiran 52. Hasil Uji Normalitas Total Leukosit Dosis Tinggi
Tujuan : Untuk melihat data total leukosit dosis tinggi terdistribusi normal
atau tidak.
Hipotesis :
Ho : Data total leukosit dosis tinggi terdistribusi normal.
Ha : Data total leukosit dosis tinggi tidak terdistribusi normal.
Hasil Uji Normalitas Total Leukosit Dosis tinggi
Tests of Normality
TotalLeukosit Hari ke 7 .142 5 .200* .988 5 .972
Hari ke 14 .245 5 .200* .947 5 .714
Hari ke 21 .234 5 .200* .856 5 .213
Keputusan : Data total leukosit dosis tinggi terdistribusi normal

116
Lampiran 53. Hasil Uji Homogenitas Data Total Leukosit Dosis Tinggi
Tujuan : Untuk melihat data total leukosit dosis tinggi homogen atau tidak.
Hipotesis :
Ho : Data total leukosit dosis tinggi bervariasi homogen.
Ha : Data total leukosit dosis tinggi tidak bervariasi homogen.
Hasil Uji Homogenitas Data Total Leukosit dosis tinggi
TotalLeukosit
1.320 2 12 .303
Keputusan : Data total leukosit dosis tinggi bervariasi homogen,

117
Lampiran 54. Hasil Uji ANOVA Data Total Leukosit Dosis Tinggi
Tujuan : Untuk mengetahui ada atau tidaknya perbedaan data total leukosit dosis
tinggi.
Hipotesis :
Ho : Data total leukosit dosis tinggi tidak berbeda secara bermakna
Ha : Data total leukosit dosis tinggi berbeda secara bermakna
Hasil Uji ANOVA Total Leukosit Dosis tinggi
ANOVA
TotalLeukosit
Between Groups 189583.333 2 94791.667 .010 .990
Within Groups 1.141E8 12 9505291.667
Total 1.143E8 14
Keputusan : Data total leukosit dosis tinggi tidak berbeda secara bermakna.

118
Lampiran 55. Hasil Uji Normalitas Monosit Kontrol
Tujuan : Untuk melihat data monosit Kontrol terdistribusi normal atau tidak.
Hipotesis :
Ho : Data monosit Kontrol terdistribusi normal.
Ha : Data monosit Kontrol tidak terdistribusi normal.
Hasil Uji Normalitas Monosit Kontrol
Tests of Normality
Hari Ke Statistic df Sig. Statistic df Sig.
Total Monosit Kontrol Hari Ke 7 .234 5 .200* .949 5 .729
Hari Ke 14 .291 5 .191 .858 5 .220
Hari Ke 21 .249 5 .200* .872 5 .273
Keputusan : Data monosit kontrol terdistribusi normal

119
Lampiran 56. Hasil Uji Homogenitas Data Monosit Kontrol
Tujuan : Untuk melihat data monosit kontrol homogen atau tidak.
Hipotesis :
Ho : Data monosit kontrol bervariasi homogen.
Ha : Data monosit kontrol tidak bervariasi homogen.
Hasil Uji Homogenitas Data Monosit kontrol
Total Monosit Kontrol
6.781 2 12 .011
Keputusan : Data monosit kontrol tidak bervariasi homogen, sehingga dilakukan


120
Lampiran 57. Hasil Uji Nonparametik Kruskal-Wallis Data Monosit Kontrol
Tujuan : Untuk mengetahui ada atau tidaknya perbedaan data monosit kontrol.
Hipotesis :
Ho : Data monosit kontrol tidak berbeda secara bermakna
Ha : Data monosit kontrol berbeda secara bermakna
Hasil Uji Nonparametik Kruskal-Wallis Data monosit kontrol
Test Statisticsa,b
Total Monosit
Kontrol
Chi-Square 7.994
df 2
Asymp. Sig. .018
b. Grouping Variable: Hari Ke
Keputusan : Data monosit kontrol berbeda secara bermakna.

121
Lampiran 58. Hasil Uji Mann-Whitney Data Monosit Kontrol
Ranks
Hari Ke N Mean Rank Sum of Ranks
Total Monosit Kontrol Hari Ke 7 5 5.20 26.00
Hari Ke 14 5 5.80 29.00
Total 10
Test Statisticsb
Total Monosit
Kontrol
Wilcoxon W 26.000
Z -.313
Ranks
Hari Ke 21 5 3.20 16.00
Total 10

122
Test Statisticsb
Total Monosit
Kontrol
Wilcoxon W 16.000
Z -2.410
Ranks
Hari Ke 21 5 3.20 16.00
Total 10
Test Statisticsb
Total Monosit
Kontrol
Wilcoxon W 16.000
Z -2.410

123
Lampiran 59. Hasil Uji Normalitas Monosit Dosis rendah
Tujuan : Untuk melihat data monosit Dosis rendah terdistribusi normal atau
tidak.
Hipotesis :
Ho : Data monosit Dosis rendah terdistribusi normal.
Ha : Data monosit Dosis rendah tidak terdistribusi normal.
Hasil Uji Normalitas Monosit Dosis rendah
Tests of Normality
Total Monosit Dosis Rendah Hari Ke 7 .206 5 .200* .951 5 .745
Hari Ke 14 .230 5 .200* .956 5 .779
Hari Ke 21 .176 5 .200* .957 5 .788
Keputusan : Data monosit dosis rendah terdistribusi normal

124
Lampiran 60. Hasil Uji Homogenitas Data Monosit Dosis Rendah
Tujuan : Untuk melihat data monosit dosis rendah homogen atau tidak.
Hipotesis :
Ho : Data monosit dosis rendah bervariasi homogen.
Ha : Data monosit dosis rendah tidak bervariasi homogen.
Hasil Uji Homogenitas Data Monosit dosis rendah
Total Monosit Dosis Rendah
5.212 2 12 .023
Keputusan : Data monosit dosis rendah tidak bervariasi homogen, sehingga


125
Lampiran 61. Hasil Uji Nonparametik Kruskal-Wallis Data Monosit Dosis Rendah
Tujuan : Untuk mengetahui ada atau tidaknya perbedaan data monosit dosis rendah.
Hipotesis :
Ho : Data monosit dosis rendah tidak berbeda secara bermakna
Ha : Data monosit dosis rendah berbeda secara bermakna
Hasil Uji Nonparametik Kruskal-Wallis Data monosit dosis rendah
Test Statisticsa,b
Total Monosit
Dosis Rendah
Chi-Square 3.440
Df 2
Asymp. Sig. .179
Keputusan : Data monosit dosis rendah berbeda secara bermakna.

126
Lampiran 62. Hasil Uji Normalitas Monosit Dosis Sedang
Tujuan : Untuk melihat data monosit dosis sedang terdistribusi normal atau
tidak.
Hipotesis :
Ho : Data monosit dosis sedang terdistribusi normal.
Ha : Data monosit dosis sedang tidak terdistribusi normal.
Hasil Uji Normalitas Monosit dosis sedang
Tests of Normality
Total Monosit Dosis Sedang Hari Ke 7 .350 5 .045 .816 5 .109
Hari Ke 14 .236 5 .200* .909 5 .463
Hari Ke 21 .230 5 .200* .962 5 .821
Keputusan : Data monosit dosis sedang terdistribusi normal

127
Lampiran 63. Hasil Uji Homogenitas Data Monosit Dosis Sedang
Tujuan : Untuk melihat data monosit dosis sedang homogen atau tidak.
Hipotesis :
Ho : Data monosit dosis sedang bervariasi homogen.
Ha : Data monosit dosis sedang tidak bervariasi homogen.
Hasil Uji Homogenitas Data Monosit dosis sedang
Total Monosit Dosis Sedang
1.513 2 12 .259
Keputusan : Data monosit dosis sedang bervariasi homogen,

128
Lampiran 64. Hasil Uji ANOVA Data Monosit Dosis Sedang
Tujuan : Untuk mengetahui ada atau tidaknya perbedaan data monosit dosis sedang.
Hipotesis :
Ho : Data monosit dosis sedang tidak berbeda secara bermakna
Ha : Data monosit dosis sedang berbeda secara bermakna
Hasil Uji ANOVA Monosit dosis sedang
ANOVA
Total Monosit Dosis Sedang
Between Groups 141350.800 2 70675.400 1.158 .347
Within Groups 732565.200 12 61047.100
Total 873916.000 14
Keputusan : Data monosit dosis sedang tidak berbeda secara bermakna.

129
Lampiran 65. Hasil Uji Normalitas Monosit Dosis Tinggi
Tujuan : Untuk melihat data monosit Dosis tinggi terdistribusi normal atau
tidak.
Hipotesis :
Ho : Data monosit Dosis tinggi terdistribusi normal.
Ha : Data monosit Dosis tinggi tidak terdistribusi normal.
Hasil Uji Normalitas Monosit Dosis tinggi
Tests of Normality
Total Monosit Dosis Tinggi Hari Ke 7 .157 5 .200* .991 5 .984
Hari Ke 14 .206 5 .200* .979 5 .931
Hari Ke 21 .230 5 .200* .902 5 .419
Keputusan : Data monosit dosis tinggi terdistribusi normal

130
Lampiran 66. Hasil Uji Homogenitas Data Monosit Dosis Tinggi
Tujuan : Untuk melihat data monosit dosis tinggi homogen atau tidak.
Hipotesis :
Ho : Data monosit dosis tinggi bervariasi homogen.
Ha : Data monosit dosis tinggi tidak bervariasi homogen.
Hasil Uji Homogenitas Data Monosit dosis tinggi
Total Monosit Dosis Tinggi
3.230 2 12 .075
Keputusan : Data monosit dosis tinggi tidak bervariasi homogen, sehingga


131
Lampiran 67. Hasil Uji Nonparametik Kruskal-Wallis Data Monosit Dosis Tinggi
Tujuan : Untuk mengetahui ada atau tidaknya perbedaan data monosit dosis tinggi.
Hipotesis :
Ho : Data monosit dosis tinggi tidak berbeda secara bermakna
Ha : Data monosit dosis tinggi berbeda secara bermakna
Hasil Uji Nonparametik Kruskal-Wallis Data monosit dosis tinggi
Test Statisticsa,b
Total Monosit
Dosis Tinggi
Chi-Square .657
Df 2
Asymp. Sig. .720
Keputusan : Data monosit dosis tinggi berbeda secara bermakna.

132
Lampiran 68. Hasil Uji Normalitas Limfosit Kontrol
Tujuan : Untuk melihat data limfosit kontrol terdistribusi normal atau tidak.
Hipotesis :
Ho : Data limfosit kontrol terdistribusi normal.
Ha : Data limfosit kontrol tidak terdistribusi normal.
Hasil Uji Normalitas Limfosit kontrol
Tests of Normality
Total Limfosit Kontrol Hari Ke 7 .334 5 .070 .835 5 .153
Hari Ke 14 .241 5 .200* .907 5 .451
Hari Ke 21 .209 5 .200* .970 5 .876
Keputusan : Data limfosit kontrol terdistribusi normal

133
Lampiran 69. Hasil Uji Homogenitas Data Limfosit Kontrol
Tujuan : Untuk melihat data limfosit kontrol homogen atau tidak.

Hipotesis :
Ho : Data limfosit kontrol bervariasi homogen.
Ha : Data limfosit kontrol tidak bervariasi homogen.
Hasil Uji Homogenitas Data Limfosit kontrol
Total Limfosit Kontrol
4.960 2 12 .027
Keputusan : Data limfosit kontrol tidak bervariasi homogen, sehingga dilakukan


134
Lampiran 70. Hasil Uji Nonparametik Kruskal-Wallis Data Limfosit Kontrol
Tujuan : Untuk mengetahui ada atau tidaknya perbedaan data limfosit kontrol.
Hipotesis :
Ho : Data limfosit kontrol tidak berbeda secara bermakna
Ha : Data limfosit kontrol berbeda secara bermakna
Hasil Uji Nonparametik Kruskal-Wallis Data limfosit kontrol
Test Statisticsa,b
Total Limfosit
Kontrol
Chi-Square 2.344
df 2
Asymp. Sig. .310
Keputusan : Data limfosit kontrol berbeda secara bermakna.

135
Lampiran 71. Hasil Uji Normalitas Limfosit Dosis Rendah
Tujuan : Untuk melihat data limfosit dosis rendah terdistribusi normal atau
tidak.
Hipotesis :
Ho : Data limfosit dosis rendah terdistribusi normal.
Ha : Data limfosit dosis rendah tidak terdistribusi normal.
Hasil Uji Normalitas Limfosit Dosis rendah
Tests of Normality
Total Limfosit Dosis Rendah Hari Ke 7 .314 5 .119 .819 5 .115
Hari Ke 14 .218 5 .200* .918 5 .519
Hari Ke 21 .152 5 .200* .984 5 .954
Keputusan : Data limfosit dosis rendah terdistribusi normal

136
Lampiran 72. Hasil Uji Homogenitas Data Limfosit Dosis Rendah
Tujuan : Untuk melihat data limfosit dosis rendah homogen atau tidak.
Hipotesis :
Ho : Data limfosit dosis rendah bervariasi homogen.
Ha : Data limfosit dosis rendah tidak bervariasi homogen.
Hasil Uji Homogenitas Data Limfosit dosis rendah
Total Limfosit Dosis Rendah
.820 2 12 .464
Keputusan : Data limfosit dosis rendah bervariasi homogen,

137
Lampiran 73. Hasil Uji ANOVA Data Limfosit Dosis Rendah
Tujuan : Untuk mengetahui ada atau tidaknya perbedaan data limfosit dosis rendah.
Hipotesis :
Ho : Data limfosit dosis rendah tidak berbeda secara bermakna
Ha : Data limfosit dosis rendah berbeda secara bermakna
Hasil Uji ANOVA Limfosit Dosis Rendah
ANOVA
Total Limfosit Dosis Rendah
Within Groups 4.654E7 12 3878156.333
Total 7.118E7 14
Keputusan : Data limfosit dosis rendah tidak berbeda secara bermakna.

138
Lampiran 74. Hasil Uji Normalitas Limfosit Dosis Sedang
Tujuan : Untuk melihat data limfosit dosis sedang terdistribusi normal atau
tidak.
Hipotesis :
Ho : Data limfosit dosis sedang terdistribusi normal.
Ha : Data limfosit dosis sedang tidak terdistribusi normal.
Hasil Uji Normalitas Limfosit Dosis sedang
Tests of Normality
Total Limfosit Dosis Sedang Hari Ke 7 .273 5 .200* .866 5 .252
Hari Ke 14 .172 5 .200* .984 5 .956
Hari Ke 21 .224 5 .200* .898 5 .397
Keputusan : Data limfosit dosis sedang terdistribusi normal

139
Lampiran 75. Hasil Uji Homogenitas Data Limfosit Dosis Sedang
Tujuan : Untuk melihat data limfosit dosis sedang homogen atau tidak.
Hipotesis :
Ho : Data limfosit dosis sedang bervariasi homogen.
Ha : Data limfosit dosis sedang tidak bervariasi homogen.
Hasil Uji Homogenitas Data Limfosit dosis sedang
Total Limfosit Dosis Sedang
2.668 2 12 .110
Keputusan : Data limfosit dosis sedang bervariasi homogen,

140
Lampiran 76. Hasil Uji ANOVA Data Limfosit Dosis Sedang
Tujuan :
Untuk mengetahui ada atau tidaknya perbedaan data limfosit dosis sedang.
Hipotesis :
Ho : Data limfosit dosis sedang tidak berbeda secara bermakna
Ha : Data limfosit dosis sedang berbeda secara bermakna
Hasil Uji ANOVA Limfosit Dosis sedang
ANOVA
Within Groups 3.270E7 12 2724768.708
Total 1.042E8 14
Keputusan : Data limfosit dosis sedang berbeda secara bermakna.

141
Lampiran 77. Hasil Uji Post Hoc Data Limfosit Dosis Sedang

Bonferroni

Mean Difference
(I) Hari Ke (J) Hari Ke (I-J) Std. Error Sig. Lower Bound Upper Bound
Hari Ke 7 Hari Ke 14 -5222.800* 1043.986 .001 -8124.53 -2321.07
Hari Ke 21 -3604.600* 1043.986 .014 -6506.33 -702.87
Hari Ke 14 Hari Ke 7 5222.800* 1043.986 .001 2321.07 8124.53
Hari Ke 21 1618.200 1043.986 .441 -1283.53 4519.93
Hari Ke 21 Hari Ke 7 3604.600* 1043.986 .014 702.87 6506.33
Hari Ke 14 -1618.200 1043.986 .441 -4519.93 1283.53

142
Lampiran 78. Hasil Uji Normalitas Limfosit Dosis Tinggi
Tujuan : Untuk melihat data limfosit dosis tinggi terdistribusi normal atau
tidak.
Hipotesis :
Ho : Data limfosit dosis tinggi terdistribusi normal.
Ha : Data limfosit dosis tinggi tidak terdistribusi normal.
Hasil Uji Normalitas Limfosit dosis tinggi
Tests of Normality
Total Limfosit Dosis Tinggi Hari Ke 7 .170 5 .200* .977 5 .916
Hari Ke 14 .233 5 .200* .957 5 .787
Hari Ke 21 .226 5 .200* .869 5 .263
Keputusan : Data limfosit dosis tinggi terdistribusi normal

143
Lampiran 79. Hasil Uji Homogenitas Data Limfosit Dosis Tinggi
Tujuan : Untuk melihat data limfosit dosis tinggi homogen atau tidak.
Hipotesis :
Ho : Data limfosit dosis tinggi bervariasi homogen.
Ha : Data limfosit dosis tinggi tidak bervariasi homogen.
Hasil Uji Homogenitas Data Limfosit dosis tinggi
Total Limfosit Dosis Tinggi
.918 2 12 .426
Keputusan : Data limfosit dosis tinggi bervariasi homogen,

144
Lampiran 80. Hasil Uji ANOVA Data Limfosit dosis tinggi
Tujuan : Untuk mengetahui ada atau tidaknya perbedaan data limfosit dosis tinggi.
Hipotesis :
Ho : Data limfosit dosis tinggi tidak berbeda secara bermakna
Ha : Data limfosit dosis tinggi berbeda secara bermakna
Hasil Uji ANOVA Limfosit dosis tinggi
ANOVA
Total Limfosit Dosis Tinggi
Between Groups 11814.933 2 5907.467 .001 .999
Within Groups 1.060E8 12 8831604.567
Total 1.060E8 14
Keputusan : Data limfosit dosis tinggi tidak berbeda secara bermakna.

145
Lampiran 81. Uji Interleukin 1 β
1. Hasil Uji Interleukin 1β

146
Interleukin 1β Standar
Kelompok No Rata – Rata
per mm3 deviasi
1 7.8 7.8 0
2 7.8
kontrol 3 7.8
4 7.8
5 7.8
1 6 78.54 117.0
2 4.4
LPS 3 284
4 55.2
5 43.1
1 25 123.84 211.8
2 7.8
Dosis
3 500
Rendah
4 14.1
5 72.3
1 47.6 69.96 62.4
2 9.7
Dosis
3 107
Sedang
4 160
5 25.5
1 41.8 164.4 202.7
2 209
Dosis Tinggi 3 63.4
4 7.8
5 500

147
2. Hasil Elisa Reader Interleukin 1β
Parameters
Fit to : Assay
Fit type : Four Parameter Logistic
Wavelenght : 450
Concentration transform : Linear
Measurement transform : Linear
Markers : Mean
Formula : y = d + (a - d)/(1 + (x / c)^b
Parameter a : 0.29489
Parameter b : 0.888088287412139
Parameter c : 1138.040557333319
Parameter d : 4.31853842156026
Coefficient R2 : 0.9512
Graph
Plate Well Sample Conc Original Fitted Residual

Abs Abs
Cal_0001 0 0.295 0.295 0.000
200913 A01 Cal_0001 1/2 0 0.324 0.295 0.029
200913 A02 Cal_0001 2/2 0 0.266 0.295 - 0.029
Cal_0002 7.8 0.4 0.347 0.052
200913 B01 Cal_0002 1/2 7.8 0.434 0.347 0.086
200913 B02 Cal_0002 2/2 7.8 0.366 0.347 0.018
Cal_0003 15.6 0.425 0.39 0.036

148
Plate Well Sample Conc Original Fitted Residual

Abs Abs
200913 C01 Cal_00031/2 15.6 0.412 0.39 0.022
200913 C02 Cal_0003 2/2 15.6 0.439 0.39 0.049
Cal_0004 31.2 0.479 0.465 0.014
200913 D01 Cal_0004 1/2 31.2 0.465 0.465 0.000
200913 D02 Cal_0004 2/2 31.2 0.492 0.465 0.028
Cal_0005 62.4 0.592 0.594 - 0.002
200913 E01 Cal_0005 1/2 62.4 0.586 0.594 - 0.008
200913 E02 Cal_0005 2/2 62.4 0.598 0.594 0.003
Cal_0006 124.8 0.792 0.81 - 0.018
200913 F01 Cal_0006 1/2 124.8 0.803 0.81 - 0.007
200913 F02 Cal_0006 2/2 124.8 0.781 0.81 - 0.029
Cal_0007 249.6 1.17 1.15 0.028
200913 G01 Cal_0007 1/2 249.6 1.16 1.15 0.018
200913 G02 Cal_0007 2/2 249.6 1.18 1.15 0.038
Cal_0008 499.2 1.61 1.62 - 0.010
200913 H01 Cal_0008 1/2 499.2 1.58 1.62 - 0.041
200913 H02 Cal_0008 2/2 499.2 1.64 1.62 0.021
3. Uji Anova Interleukin 1β
a. Hasil Uji Normalitas
Tujuan : Untuk melihat data interleukin 1β terdistribusi normal atau tidak.
Hipotesis :
Ho : Data interleukin 1β terdistribusi normal.
Ha : Data interleukin 1β tidak terdistribusi normal.

149
Hasil Uji Normalitas Hasil Uji Normalitas Interleukin 1β
Tests of Normality
Statistic df Sig. Statistic df Sig.
TotalILB .307 25 .000 .627 25 .000
Keputusan : Data interleukin 1β tidak terdistribusi normal sehingga dilakukan

uji non parametik Kruskal-Wallis.
b. Hasil Uji Nonparametik Kruskal-Wallis Data interleukin 1β
Tujuan : Untuk mengetahui ada atau tidaknya perbedaan data interleukin

1β.
Hipotesis :
Ho : Data interleukin 1β tidak berbeda secara bermakna
Ha : Data interleukin 1β berbeda secara bermakna
Tabel 33. Hasil Uji Nonparametik Kruskal-Wallis Data interleukin 1β
Test Statisticsa,b
TotalILB
Chi-Square 7.307
df 4
Asymp. Sig. .121
b. Grouping Variable:
Kelompok Sampel
Keputusan : Data interleukin 1β berbeda secara bermakna.

150
4. Metode Uji Elisa
Pada ELISA Kit terdapat beberapa komponen, yaitu:
• Lyophilized recombinan mouse IL-1β standard: 10 ng /tube

• One well 96 well plate precoated with anti-mouse IL-1β
antibody.
• Sampel diluent buffer 30 ml.
• Biotinylated anti-mouse IL-1β antibody: 130 µl, dilution 1 :
100.
• Antibody diluent buffer
• Avidin-biotin-peroxidase complex (ABC) : 130 µl, dilution 1 :
100.
• ABC diluent buffer : 12 ml.
• TMB color developing agent : 10ml.
• TMB stop solution: 10 ml.
Dalam pelaksanaan uji menggunakan ELISA melalui beberapa tahap sebagai

berikut :
a. Preparasi
1. Tahap pengenceran : Karena serum yang dihasilkan berkisar
antara 500-5000 pg/ml. Pengenceran dilakukan sebanyak
1:10 (tambahkan 10 ul sampel kedalam 90 ul sampel diluent
buffer).
2. Persiapan reagen :
• Larutan standar 500 pg/ml IL-1β mencit : tambahkan
0.05 ml larutan standar IL-1β 10 ng /ml diatas ke
dalam 0.95 ml pelarut buffer sampel dan campur
merata. ( Catatan : sebaiknya preparasi dilakukan tidak
lebih dari 2 jam sebelum pengerjaan)
• Preparasi biotynillated anti-mouse IL-1β anti-body.
i. Total semua larutan harus 0,1 dikali banyak
sumur yang akan digunakan.

151
ii. biotynillated anti-mouse IL-1β anti-body harus

di larutkan pada 1 : 100 dengan anti-body diluet
buffer dan dicampur merata.
• Reparasi Avidin-biotin-peroxidase complex (ABC) :
i. Total volume harus sama dengan 0,1 ml dikali
jumlah sumuran yang digunakan.
ii. Avidin-biotin-peroxidase complex harus
dilarutkan pada 1 : 100 dengan larutan buffer
ABC. Dan dicampur merata.
b. Prosedur Pelaksanaan Uji
1. Memasukkan 0.1 ml standar, kontrol dan sampel
dimasukkan ke dalam microplate yang telah dilapisi anti -
mouse IL - 1β antibodi kemudian diinkubasi selama 90
menit pada suhu 370C.
2. Buang isi plate dan keringkan menunggunakan handuk
3. Tambahkan 0.1 ml biotinylated anti mouse IL - 1β antibody
inkubasi pada suhu 370C selama 60 menit
4. Cuci microplate dengan 0.01M PBS sebanyak 3 kali
5. Tambahkan 0,1 ml ABC working Solutions diinkubasi pada
suhu 370C selama 30 menit.
6. Cuci microplate dengan 0.01M PBS sebanyak 5 kali.
7. Ditambahkan 90 ul dengan TMB Color developing agen
dan didiamkan selama 30 menit pada suhu ruangan di
tempat yang gelap.
8. Ditambahkan 0.1 ml TMB stop solution.
9. Dibaca O.D absorbasi dengan ELISA reader yang diatur
pada 450 nm.

Immunodulator 1 PDF

Diunggah oleh

Informasi Dokumen

Judul Asli

Hak Cipta

Format Tersedia

Bagikan dokumen Ini

Bagikan atau Tanam Dokumen

Opsi Berbagi

Apakah menurut Anda dokumen ini bermanfaat?

Apakah konten ini tidak pantas?

Hak Cipta:

Format Tersedia

Immunodulator 1 PDF

Diunggah oleh

Hak Cipta:

Format Tersedia

UIN SYARIF HIDAYATULLAH JAKARTA

UJI IMUNOMODULATOR EKSTRAK ETANOL

FAKULTAS KEDOKTERAN DAN ILMU KESEHATAN

UJI IMUNOMODULATOR EKSTRAK ETANOL

FAKULTAS KEDOKTERAN DAN ILMU KESEHATAN

Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui efek imunomodulator ekstrak etanol

Ciputat, Februari 2014

1 UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

Selama berabad-abad biji dari tanaman jinten hitam telah

Hadits riwayat Abu Hurairah Radhiyallahu’anhu: Rasulullah Shallallahu

Beberapa penelitian telah dilakukan mengenai efek

UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

kerusakan hati dengan CCl4. Interleukin-1β (IL-1β) sangat poten sebagai

1.2 Perumusan Masalah

1. Apakah ekstrak etanol jinten hitam dapat mempengaruhi jumlah total

1.4 Tujuan Penelitian

UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

1.5 Manfaat Penelitian

UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

5 UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

Gambar 2.1 Jinten Hitam

2.1.3 Budidaya, Ekologi dan penyebaran (Depkes, 1979)

2.1.4 Kandungan Kimia

UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

Gambar 2.2 Struktur kimia kandungan aktif minyak jinten hitam

Jinten hitam mengandung vitamin seperti asam askorbat, tiamin,

Tabel 2.1 Kandungan kimia biji jinten hitam secara umum

UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

Imunitas (kekebalan) merupakan terminologi yang digunakan

UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

Gambar 2.4 Gambaran umum sistem imun (Baratawidjaja, 2009)

Fungsi sistem imun spesifik selular adalah pertahanan terhadap

UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

hormon timus, limfokin, interferon, antibodi monoklonal, ekstrak leukosit,

UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

leucocyte endogenous mediator (LEM), hemeopoetin-1 dan sejumlah

UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

Dampak biologis IL-1 bergantung pada jumlah sitokin yang

UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

Tabel 2.4 Limfosit yang berperan dalam respon imun spesifik

Th2 Meningkatkan Sitokin IL-3, IL- Membantu sel B

UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

bermigrasi melalui pembuluh darah. Jika monosit telah meninggalkan

UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

3. Direct Sandwich ELISA

UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

Lipopolisakarida merupakan komponen dinding sel bakeri yang

UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

3.1 Tempat dan Waktu Peneltian

3.4 Hewan Uji

22 UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

3.5 Prosedur Penelitian

3.5.2 Aklitimasi Hewan Uji

3.5.3 Uji Peningkatan Total Leukosit, Persentase Limfosit dan Monosit

UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

3.5.4 Uji Kadar Interleukin 1β (IL-1β)

UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

3.5.5 Pengambilan darah