INDENTIFICACION DE EQUIPOS B UTILIZADOS EN BIOLOGIA CELULAR

Christiam Camilo Cardona Bermudez-16113191. Tatiana Yaritza Hernández Chona-16113102.

Kevin Enrique Parada Becerra-1611340.3

Universidad Francisco de Paula Santander. Facultad Ciencias Agrarias y del Ambiente.

Ingeniería Biotecnológica.

Resumen

El laboratorio de Biología Molecular es el espacio físico donde se ejecutan actividades propias

asociadas al tipo de investigación que se realice. Para que estas actividades se lleven a cabo sin

ningún contratiempo, se deben tener en cuenta las reglas mínimas para garantizar la integridad

física del investigador, alejándose de cualquier situación riesgos a que sea foco de eventos

perjudiciales. (Sandoval, 2013). El siguiente informe daremos a conocer algunas normas de

bioseguridad, normas basicas antes de entrar al laboratorio y el reconocimiento e identificación

de los equipos y algunos materiales utilizados basicos en el laboratorio de biología molecular

palabras claves: micropipetas, volúmenes, normas de bioseguridad.

Introducción

La bioseguridad comprende un conjunto de medidas preventivas, destinadas a mantener el

control de factores de riesgo laborales procedentes de agentes biológicos, físicos o químicos,

logrando la prevención de impactos nocivos, asegurando que el desarrollo o producto final de

dichos procedimientos no atenten contra la salud y seguridad de los estudiantes y todo el

personal que realice prácticas en el laboratorio. El nivel de bioseguridad asignado a un trabajo

dependerá de la evaluación del riesgo que represente la ejecución de dicho trabajo y estos

abarcan desde la utilización de agentes patógenos hasta el diseño y construcción de las

instalaciones. Además de velar por la seguridad del individuo, atienden a la precaución y cuidado

de los diferentes materiales que se utilicen dentro del área de trabajo. (Sandoval, 2013). El

reconociemiento del material y los equipos del laboratorio Tambien son indispensables para

poder hacer unas buenas practucas de laboratorio tanto para evitar cualquier accidente y para

haci tener unsa buenas practicas sobre el area de trabajo.

MATERIALES Y REACTIVOS

 Cámara fotográfica o cellular para tomar imagen de los equipos

 Bata
 Libreta para notas

EQUIPOS

Balanza analitica, marca PRECISA:

La balanza analítica es un instrumento utilizado en el laboratorio, que esta diseñada para medir

pequeñas masas, en un principio de un rango menor del miligramo (y que hoy día, las digitales,

llegan hasta la diezmilésima de gramo: [0,0001 g o 0,1 mg]). Su característica más importante es

que poseen muy poco margen de error, lo que las hace ideales para utilizarse en mediciones muy

precisas. están bastante desarrolladas de manera que no es necesaria la utilización de cuartos

especiales para la medida del peso. Aun así, el simple empleo de circuitos electrónicos no

elimina las interacciones del sistema con el ambiente. De estos, los efectos físicos son los más

importantes porque no pueden ser suprimidos. La balanza analítica, por otra parte, tiene los

mecanismos necesarios para contrarrestar la masa que está siendo medida sin necesidad de usar

masas reales. Para esto, debe tener los ajustes de calibración necesarios para compensar las

diferencias gravitacionales. En este sentido, se vale de un electroimán que genera la fuerza que
compense la muestra que se esté midiendo. El resultado lo arroja midiendo la fuerza necesaria

que se haya requerido para equilibrar la balanza.

Fig1.Balanza analítica, marca PRECISA

Autoclave semiautomática, maraca STURDY

Es un recipiente de presión metálico de paredes gruesas con un cierre hermético que permite

trabajar a alta presión para realizar una reacción industrial, una cocción o

una esterilización con vapor de agua. Su construcción debe ser tal que resista la presión y

temperatura desarrollada en su interior. La presión elevada permite que el agua alcance

temperaturas superiores a los 100 °C. La acción conjunta de la temperatura y el vapor produce la

coagulación de las proteínas de los microorganismos, entre ellas las esenciales para la vida y la

reproducción de éstos, hecho que lleva a su destrucción. Las autoclaves son ampliamente

utilizadas en laboratorios, como una medida elemental de esterilización de material, obtiene una

presion interna 103kPa, lo cual provoca que el vapor alcance una temperatura de 121 grados

Celsius a un tiempo tipico de 15-20 minutos.

 Fig2. Autoclave semiautomática, maraca STURDY

Baño seco, marca LABNET

Los baños secos de Labnet Digital están disponibles en configuraciones solas, duales, y cuatro

del bloque y proporcionan una gama de temperaturas amplia hasta 150C, que lo hace útil para

una variedad de usos en los laboratorios de la biología molecular, de la histología, clínicos,

ambientales, e industriales. Se han diseñado para incorporar la mejor combinación de

características incluyendo capacidad del bloque, exhibiciones duales, y una punta de prueba

externa de la temperatura que da a investigadores de las ciencias de la vida la confianza y la

eficacia que necesitan al trabajar con las muestras preciosas.

Fig3. Autoclave semiautomática, maraca STURDY

Plancha de calentamiento con agitación, marca BERCHMARK

En el laboratorio, las placas calefactoras se utilizan generalmente para calentar el material de

vidrio o su contenido. Poseen un selector de potencia que permite ajustar la emisión térmica y el

tiempo necesario para calentar un determinado recipiente. Una placa analógica típica tiene unas

dimensiones aproximadas de 300 x 300 mm y una superficie de cerámica capaz de resistir el

ataque químico. Alcanzan temperaturas máximas en la superficie de hasta 450 °C, aunque por lo

general no se emplean temperaturas tan elevadas. Sus aplicaciones son muy variadas, aunque

predomina el calentamiento de recipientes con líquidos como vasos de precipitados, matraces de

fondo plano. Se deben cumplir las instruciones de uso y mantenimiento y cumplir los requisitos

de seguridad para evitar accidentes.

Fig4. Plancha de calentamiento con agitación, marca BERCHMARK

Centrifuga, marca HERMLE

La centrífuga se ha diseñado para utilizar la fuerza centrífuga para separar sólidos suspendidos

en un medio líquido por sedimentación o para separar líquidos de diversa densidad. Los

movimientos rotacionales permiten generar fuerzas mucho más grandes que la gravedad, en

periodos controlados de tiempo.

 Fig5. Centrifuga, marca HERMLE

Micropipetas de (0.5-10ul;10-100uñ;100-1000ul), marcas BRAND Y LABNET

La micropipeta es un instrumento de laboratorio empleado para succionar y transferir pequeños

volúmenes de líquidos y permitir su manejo en las distintas técnicas analíticas. Es de destacar

que el uso de micropipeta permite emplear distintos líquidos sin tener que lavar el aparato: para

ello, se emplean puntas desechables, de plástico, que habitualmente son estériles. Los volúmenes

captables por estos instrumentos varían según el modelo: los más habituales, denominados p20,

p200 y p1000, admiten un máximo de 20; 200 y 1000 μL, respectivamente.. Existen varios tipos

de puntas: por ejemplo, las amarillas para pipetear volúmenes pequeños (por ejemplo, 10 μL), y

las azules para pipetear volúmenes grandes (por ejemplo, 800 μL).

Fig6. Micropipetas de (0.5-10ul;10-100uñ;100-1000ul), marcas BRAND Y LABNET

Microcentriguga, marca HETTICH

Microcentrífuga es una máquina centrífuga especializada utilizada en el laboratorio clínico. Ésta

pone en rotación una muestra más pequeña para separar por fuerza rotatoria sus componentes o

fases (generalmente una sólida y una líquida), en función de su densidad.

Fig7. Microcentriguga, marca HETTICH

Transiluminador UV

El transiluminador es un equipo necesario que usa en principio luz UV con diferentes longitudes

de onda como recurso para observar, analizar y tomar fotografías de proteínas, aminoácidos,

péptidos, ácidos nucleicos en geles de agarosa con colorantes como el bromuro de etidio. Su

diseño especial emite longitudes de onda UV de intensidad de excitación unitaria o doble para la

retroiluminación de materiales fluorescentes transparentes. Los modos 254 nm, 312 nm (302

nm), 365 nm, 254 & 365 nm, 312 nm & 254 & (302 nm) están disponibles para diferentes

aplicaciones. Hay dos opciones de dimensiones de visualización de tamaño de filtro: 26 x 21 cm

y 21 x 21 cm para las diferentes necesidades del usuario. El modo de 365nm es ofrecido para

visualizar con facilidad los geles bajo onda larga durante largos períodos de tiempo, evitando

rasgar o dañar la foto. El modo de 254nnm se utiliza para irradiar las muestras. El modo
312nm(302nm) se sugiere para operación con geles generales. Los modos de longitud de onda

unitaria están equipados con un interruptor de alta intensidad / baja intensidad

Fig8. Transiluminador UV

Camara de Elecctroforesis, horizontal(pequeña, contaminada con BrEt)marca THERMO

SCIENTIC, horizontal(pequeña), marca BIORAD, dual vertical(minigeles),

vertical(grande), marca CLEAVER, horizontal(mediana),marca BIORAD, horizontal,

marca THERMO SCIENTIFIC

La electroforesis es una técnica para la separación de moléculas según la movilidad de un campo

eléctrico. La separación puede realizarse sobre la superficie hidratada de un soporte sólido, a

través de una matriz porosa (electrophoresis en gel), o bien en disolución (electroforesis libre).

Dependiendo de la técnica que se use, la separación obedece en (electrophoresis en gel), o bien

en disolución (electroforesis libre). Dependiendo de la técnica que se use, la separación obedece

en distinta medida a la carga eléctrica de las moléculas y a su masa.

 Fig9. Camara de electrophoresis horizontal, marca THERMO SCIENTIC y BIORAD

Fig10. Camara de electrophoresis vertical, marca CLEAVER

Vortex, marca HEIDOLPH

Es un dispositivo simple que se usa comúnmente en los laboratorios para agitar pequeños tubos,

En los laboratorios de cultivos celulares y de microbiología se pueden utilizar para suspender las

células.

Fig11. Vortex, marca HEIDOLPH

Cabina de flujo laminar

Cámara de flujo laminar o campana de flujo laminar es un recinto que emplea un ventilador para

forzar el paso de aire a través de un filtro HEPA o ULPA y proporcionar aire limpio a la zona de

trabajo libre de partículas de hasta 0.1 micras. Estas cabinas están diseñadas para proporcionar

un aire limpio y constante a una velocidad de paso de aire de 0.30 a 0.50 metros por segundo.

Fig12. Cabina de flujo laminar

Termociclador, marca RESEARCH

Un termociclador, también conocido como máquina de PCR o reciclador térmico de PCR es un

aparato usado en Biología Molecular que permite realizar los ciclos de temperaturas necesarios

para una reacción en cadena de la polimerasa de amplificación de ADN o para reacciones de

secuencia con el método de Sanger. El modelo más común consiste en un bloque de resistencia

eléctrica que distribuye a través de una placa una temperatura homogénea durante tiempos que

pueden ser programables, normalmente con rangos de temperatura de 4 °C a 96 °C.

 Fig13. Termociclador, marca RESEARCH

Congelador de -80°C, marca Panasonic

Diseñado específicamente para uso clínico y de laboratorio, los congeladores de -80°c se

fabrican para cubrir todas las necesidades de almacenamiento a bajas temperaturas, para poder

guardar todo el material que se deba guardar a -80°C o a temperaturas minimas depende de lo

que se pueda utilizar este congelador.

Fig13. Congelador de -80°C, marca Panasonic

Incubadora digital, marca ESCO

Las incubadoras Esco CelCulture® CO₂ son ampliamente utilizadas en la investigación

científica para cultivar y mantener cultivos celulares. Los campos típicos de aplicación incluyen

la ingeniería de tejidos, fertilización in vitro, neurociencia, investigación del cáncer,

investigación con células madre, medicina regenerativa y otras investigaciones

Fig14. Incubadora digital, marca ESCO

Cuestionario

1. Consultar otras sustancias toxicas que se utilicen en el laboratorio de biología molecular

 VA-044: En biología molecular se utiliza para la separación de las proteínas la

electroforesis en gel de poliacrilamida. Esta técnica conocida como PAGE por sus siglas

en inglés, polyacrylamide gel electrophoresis, se basa en que las diferentes proteínas

migrarán a una velocidad distinta en un medio cargado eléctricamente.

 TAPS: Otro buffer comercializado por Wako es el ácido N-[tris(hidroximetil)metil]-3-

aminopropanosulfónico (TAPS). El TAPS tiene capacidad reguladora entre pH 7.7 y 9.1.

Puede ser usado para electroforesis capilar de ADN, como fase móvil para cromatografía

y en otras técnicas de biología molecular.

 HEPES: El HEPES (4-(2-hidroxietil)-1-piperazínetanosulfónico) es uno de los tampones

zwitteriónicos más usados en experimentos biológicos. Tiene capacidad reguladora entre

los valores de pH de 6.8 y 8.2.

 Bis-Tris: Bis-Tris es la forma abreviada de llamar al bis(2-hidroxietil)amino-

tris(hidroximetil)metano usado en biología molecular para gran cantidad de ensayos. En

su estructura química se encuentra una amina terciaria que es la encargada de mantener el

equilibrio ácido base que le confiere capacidad reguladora a esta sustancia en el rango de

pH de 5.8 a 7.3. Puede ser usado en el ensayo de la creatina quinasa, como medio

protector de biomoléculas refrigeradas y en la biosíntesis de muchas otras moléculas de

interés en la investigación biomédica.

 Target mRNA Cloning Kit Wako: Este reactivo de laboratorio es útil para la

amplificación del ARN mensajero cuando se cuenta con pocas moléculas de este. Puede

ser usado para cuantificar la cantidad de ARN etiquetado que está presente en un cultivo.
 PIPES: El nombre común del PIPES es ácido piperazín-N,N′-bis(2-etanosulfónico) y se

usa también como tampón en ensayos biológicos. Es uno de los buffers estudiados por

Good y colaboradores en la década de los 60. Este tampón ácido tiene una constante de

equilibrio cercana al pH fisiológico por lo que es muy útil en experimentos que precisan

del cultivo de células, resiste el paso por la autoclave, lo que le confiere una ventaja

adicional para ser seleccionado como tampón ácido en estudios que requieren la fijación

de células.
 ACES: ACES o ácido N-(2-acetamido)-2-aminoetanosulfónico es un tampón

zwiteriónico con capacidad reguladora en el rango de pH entre 6.4 y 7.4, Es útil para la

separación de proteínas por electroforesis de enfoque isoeléctrico (IEF) en dos

dimensiones
  ADA: El ácido N-(Carbamoilmetil)iminodiacético o ADA es un tampón biológico útil en

el rango de pH entre 6.4 y 7.4, usado para la preparación de gradientes de pH con

sustratos inmovilizados, por ejemplo en una columna capilar monolítica.

 BES: El tampón conocido como BES es el ácido N,N-Bis(2-hidroxietil)-

2aminoetanosulfónico, este buffer biológico tiene utilidad en mucho procesos

dependientes del pH, entre los que se encuentra la separación por electroforesis capilar.
 TES: El ácido N-[tris(hidroximetil)metil]-2-aminoetanosulfónico, conocido como TES

que es usado, entre otras aplicaciones, para el crecimiento de células epidérmicas a pH

entre 7.4 y 7.9. Es también un buffer de Good.

 Bicine: El bicine, nombre con el que se conoce a la N,N-bis(2-hidroxietil)glicina es un

tampón recomendado para ensayos bioquímicos que se realicen a bajas temperaturas.

Tiene un pKa de 8.35 y ha sido usado en ensayos de cristalografía, determinación

cuantitativa de biomoléculas y muchos otros experimentos de biología molecular.

 MES: El buffer preparado con MES (ácido 4-morfolínetanosulfónico) es útil para el

cultivo celular de plantas en el rango de pH entre 5.8 y 6.5. Es usado como fase móvil

para aislar la tubulina de cerebro por cromatografía de gel.

 CAP: Se conoce como CAPS al ácido 3-(ciclohexilamino)-1-propanosulfónico, buffer

utilizado en experimentos de biología molecular, de naturaleza zwiteriónica, que puede

usarse en el rango de pH entre 7.9 y 11.1. Entre otras aplicaciones se encuentra el secado

de proteínas, la secuenciación y análisis de aminoácidos y todos aquellos experimentos

donde la glicina puede actuar como interferente.

2. Consultar el uso de los siguientes equipos y menciónelos: termociclador de tiempo real, foto

documentador de geles, secuenciador automático y micro arreglos.

TERMOCICLADOR DE TIEMPO REAL:

La PCR a tiempo real permite cuantificar de forma relativa la expresión de nuestro gen de interés

en determinadas condiciones. Principio: utilizar un gen de referencia cuya expresión es constante

durante las condiciones del experimento (gen constitutivo). El proceso consta de dos partes: La

expresión del gen de interés será normalizada con la expresión del gen constitutivo. interés en las

condiciones

Fig15. Termociclador de tiempo real

FOTO DOCUMENTADOR DE GELES:

El equipo ChemiDoc XRS+ de Bio-Rad es un fotodocumentador que combina la tecnología de la

documentación de geles con la capacidad de detectar una señal quimioluminiscente mediante una

cámara CCD super-enfriada el ChemiDoc XRS+ le permite documentar geles de proteínas

teñidos con colorantes fluorescentes (p.e. Flamingo) y visibles (p.e. Coomasie) así como geles de

ácidos nucleicos.
 Fig16.Foto documentador de geles

SECUENCIADOR AUTOMATICO:

En otras palabras, pueden determinar el orden de las bases de nucleótidos en cualquier molécula

dada. La secuenciación de la molécula de ADN puede ser el primero de una serie de pasos

necesarios para averiguar cómo los nucleótidos específicos en una molécula de ADN interactúan

unos con otros y codifican características diferentes en un organismo.

Fig17. Secuenciador automatic

MICROARREGLOS:

Microarray es una superficie sólida a la cual se une una colección de fragmentos de ADN. Los
chips de ADN se usan para analizar la expresión diferencial de genes, y se monitorean de manera
simultánea los niveles de miles de ellos. Su funcionamiento consiste, básicamente, en medir el
nivel de hibridación entre la sonda específica (probe, en inglés), y la molécula diana (target).
Fig15. Termociclador de tiempo real

Fig18. Microarreglos
3. consultar acerca de las señales que se deben en el laboratorio de genética y biología molecular.

Tabla de señalización y etiquetado. (Maria elisa Baelo Alvarez, 2013)

Conclusione

El conocimiento adecuado de las normas de la bioseguraidad ayudan a tener un concepto basico

de todos los tipos de riesgos que pueden suceder en el laboratorio de biologia molecular y de el

buen manejo de practicas de laboratorio, es muy importante recalcar el uso de todos los

implementos basicos de laboratorio y el conocimiento de las sustancias u reactivos que se

utilizan en cada practica de laboratorio, fue importate conocer todos los diferentes equipos que

estan presentes en el laboratorio para tener un concepto basico y carcateristicas del mismo.

Bibliografia

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PCR_a_tiempo_real_con_el_termociclador_Mx3005P_y_MxPRO.pdf
 http://www.conicyt.cl/fondecyt/files/2012/09/articles-30555_recurso_1.pdf
 http://www.genomica.uaslp.mx/Protocolos/Bioseguridad/MBLIB-v5.pdf

Trabajos citados

 https://biologiamolecularinteractiva.files.wordpress.com/2013/01/practica-

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 Maria elisa Baelo Alvarez, F. m. (19 de 12 de 2013). universidad de leon . Obtenido de

http://servicios.unileon.es/gestion-de-residuos/wpcontent/blogs.dir/34/files/2014/03/guia-

de-seguridad-y-buenas-practicasen-el-laboratorio.pdf
 Sandoval, J. m. (2013). TALLER DE BIOSEGURIDAD EN EL LABORATORIO DE

BIOLOGIA MOLECULAR. Barranquil