Informe de laboratorio

Fecha de entrega: 27 de Marzo de 2016

Cuantificación colorimétrica de la concentración

Ángela M. Guevara y Miranda A. Mejía
Ingeniería Química
Facultad de Ingeniería
Universidad Nacional de Colombia

Resumen:

La colorimetría estudia las propiedades de los colores para desarrollar métodos que permitan su
cuantificación, basándose en que el color depende de las ondas electromagnéticas que inciden sobre
un cuerpo o sustancia con determinada longitud de onda. La luz es la parte de la radiación
electromagnética que puede ser percibida por el ojo humano. Cuando un rayo de luz a determinada
longitud de onda incide sobre una sustancia que absorba luz, una parte atravesara la sustancia
mientras que otra será absorbida por la misma. La absorbancia y transmitancia son las propiedades
que cuantifican la cantidad de luz absorbida o transmitida respectivamente. A partir de la relación
lineal entre la absorbancia y la concentración de una disolución indicada en la ley de Lambert-Beer,
se busca construir una curva de calibración que permita conocer la absorbancia o concentración de
una disolución desconocida conociendo alguno de los dos datos. Se comprobó la relación
directamente proporcional de la absorbancia y la concentración, relacionándolo con la intensidad de
color de diferentes diluciones y calculando a partir de la ecuación de la recta hallada mediante un
ajuste lineal de la curva de calibración, la concentración desconocida de una disolución de azul de
metileno.

Palabras clave: Colorimetría, absorbancia, concentración, diluciones, longitud de onda

I. INTRODUCCIÓN electromagnética además de la luz visible, un

Gran parte del conocimiento actual sobre
la estructura electrónica de los átomos provino del
análisis de la luz que emiten o absorben las
sustancias. La luz que podemos apreciar con
nuestros ojos, luz visible, es un ejemplo de
radiación electromagnética. La radiación
electromagnética es la emisión y transmisión de
energía en forma de ondas electromagnéticas que
se propagan en el vacío a la velocidad de la luz;
dependiendo de la longitud de onda y frecuencia
se determina si una onda es visible o no, y de
color es esta. La longitud de onda es la distancia
total que recorre una onda en determinado tiempo
mientras que la frecuencia es la cantidad de veces
que la onda alcanza su punto máximo por
segundo. Existen muchos tipos de radiación
ejemplo son las ondas de radio, la radiación
infrarroja, los rayos X y los rayos gamma. 1
La luz visible posee dos propiedades
importantes conocidas como transmitancia y
absorbancia. Cuando un rayo de luz de una
determinada longitud de onda de intensidad Io
incide perpendicularmente sobre una disolución
de un compuesto químico que absorbe luz, el
compuesto absorberá una parte de la radiación
incidente y dejará pasar el resto. La transmitancia
es la relación entre la cantidad de luz transmitida
y la cantidad de luz que incide sobre ella,
mientras que la absorbancia nos indica la cantidad
de luz absorbida por la misma. Estas dos
propiedades permiten determinar la concentración
de una solución, a esto se le conoce como
cuantificación colorimétrica, la cual se basa en la
intensidad del color de una disolución para
conocer la concentración de la misma.2 Ésta
técnica se fundamenta en la Ley de Lambert-Beer
(A = log I/Io = ε·c·l ), pues relaciona en una
ecuación la concentración de una solución y la
absorbancia en una longitud de luz fija, teniendo
como base el hecho de que La ley de Lambert-
Beer se aplica para las radiaciones
monocromáticas y es válida exactamente para
disoluciones diluidas (≤ 0.01 M). También hay
que tener en cuenta que la ley no se cumple
cuando la especie absorbente participa en un
equilibrio que depende de su concentración. 3
En la práctica se utilizó un
espectrofotómetro de haz simple para determinar
la transmitancia y absorbancia de una muestra
problema. La luz procedente de una fuente
continua pasa a través de un monocromador, que
selecciona una banda estrecha de longitudes de
onda del haz incidente. Esta luz monocromática
atraviesa una muestra de paso y mide la potencia
radiante de la luz que emerge. El
espectrofotómetro de haz simple utiliza un único
haz de luz y no mide directamente la potencia
radiante incidente, sino que mide la potencia
radiante de la luz que pasa a través de una celda
con el disolvente (Po) luego se retira y se
reemplaza por otra celda que tiene la muestra (P).
Conociendo P y Po se pueden determinar la
absorbancia y la transmitancia. El inconveniente
que tiene el espectrofotómetro de haz simple es
que es poco adecuado para medir la absorbancia
en función de tiempo pues se debe colocar
alternadamente en el haz de luz de muestra y en el
de referencia. 3
La práctica tuvo como objetivo conocer la
concentración de una muestra desconocida
utilizando la ecuación de la recta hallada
mediante un ajuste de datos de la curva de
calibración. Esta curva se halló utilizando una
solución coloreada con azul de metileno de
concentración conocida, la cual se diluyó
repetidas veces y mediante un espectrofotómetro
Mapada V1200 de haz simple determinar su
absorbancia a determinada longitud de onda y así
realizar la gráfica de calibración . A partir de esto
se concluye que la colorimetría es un proceso
físico que permite conocer la concentración de
una disolución gracias a la cantidad de luz que es
absorbida por el soluto disuelto en ella.
II. MATERIALES Y MÉTODOS
La práctica se divide en tres partes
importantes, primero se realiza la curva espectral
para conocer la longitud de onda adecuada, luego
se realiza la curva de calibración y por último se
calcula la concentración de una disolución
problema. Los materiales necesarios para realizar
la práctica fueron: Un vaso de precipitado de 100
mL, un balón aforado de 250 mL, dos pipetas
graduadas de 10 mL, un frasco lavador, una
pipeta Pasteur, una bureta de 25 mL, un
espectrofotómetro, once celdas para el
espectrofotómetro, una gradilla y nueve tubos de
ensayo
Figura 1 Montaje de gradilla con tubos de
ensayo 4 y espectrofotómetro Mapada V12005
5
La práctica comenzó por la determinación
de la longitud de onda que se va a manejar a partir
de los datos de absorbancia de la disolución Stock
dados por un espectrofotómetro a distintas
longitudes de onda y se realizó la gráfica del
espectro de absorción para calcular la longitud a
usar. La longitud adecuada es la que tenga la
mayor absorbancia, más no la que absorba
completamente el haz de luz.
Posteriormente, se realizaron distintas
diluciones de determinadas concentraciones, a
partir de la disolución Stock, y se midió la
absorbancia de cada una de ellas, incluyendo la de
la muestra problema. Según los datos, se compara
la absorbancia de las disoluciones con sus
respectivas concentraciones en una gráfica de
calibración y utilizando una ecuación lineal para
la recta de la gráfica se obtiene el intervalo en el
2
 cual debe estar la concentración de la muestra a. Absorbancia y transmitancia
problema (procedimiento descrito en la figura 2).
Se realizó la gráfica del espectro de
absorción de la disolución Stock y se obtuvo que
la longitud de onda con mayor absorción por
parte de la sustancia fue de 680 nm con 2.898 de
Tomar solucion Medir con la pipeta absorbancia. Los datos que daban 0% de
stock de azul aforada el volumen transmitancia no fueron tenidos en cuenta
de metiieno deseado (Consultar apéndice A para mayores detalles).

Con la longitud de onda de 680 nm se halló la

Completar volumen
con agua destilada
absorbancia y transmitancia de una serie de
diluciones de azul de metileno realizadas durante
la práctica a partir de la disolución Stock, como
se ve a continuación:
Transferir a balon
aforado

Repetir
Transferir a tubo de procedimiento con
ensayo diferentes
volumenes
Figura 3 Diluciones de azul de metileno

La intensidad del color va disminuyendo

Graficar los valores al tiempo en que disminuye la absorbancia, sin
Medir absorbancia
de absorbancia vs embargo, el color percibido de una solución es
de cada disolucion
concentracion causado por las longitudes de onda que son
transmitidas y no por las absorbidas por el soluto.
Cuando la luz incide sobre un objeto, su
superficie absorbe ciertas longitudes de onda y
transmite otras. Sólo las longitudes de onda que
atraviesan el objeto o disolución podrán ser vistas
Determinar la por el ojo y por tanto en el cerebro sólo se
Ajustar datos a una
ecuacion de la percibirán esos colores. En el caso del azul de
linea recta
recta metileno (el primero de derecha a izquierda),
absorbe algunas de las longitudes de onda que
componen la luz blanca, reflejando sólo aquellas
Figura 2 Proceso para realizar una curva de calibración
que el humano ve como azules.

Se puede observar que en la disolución

II. RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Esta sección se dividirá con respecto a los
puntos que se consideraron importantes en cuanto
a los resultados de la práctica.
transparente (primera de izquierda a derecha), la
transmitancia debe ser del 100% y la absorbancia
de 0%, y esto es causal de su color transparente
ya que indica que la muestra no absorbe luz a una
determinada longitud de onda, sino que transmite
toda la luz que la atraviesa.

3
 Así mismo, las demás disoluciones van
disminuyendo su intensidad de color debido a que
disminuye su concentración. Cuando hay mayor
cantidad de moléculas de soluto, las disoluciones
absorben más luz y transmiten ciertas ondas que
percibimos como color azul intenso; mientras que
si aumentan las moléculas de agua, ésta al
transmitir toda la luz, las disoluciones se verán
cada vez más claras.
error debe ser mucho mayor debido a errores en la
experimentación. El equipo al ser manipulado por
tantas personas al mismo tiempo pudo
descalabrarse, igualmente, las celdas no estaban
en perfectas condiciones pues algunas estaban
rayadas, lo que pudo afectar la reflexión y
absorbancia de la luz, además de errores por
mediciones inexactas al momento de realizar las
diluciones.

A partir de los resultados se puede comprobar

Concen Volume Volume Absorb % T que la cantidad de luz absorbida por un cuerpo
tración n de la n de ancia (±0.1) depende de la concentración en la solución, ya
del solución agua (±0.001) que a mayor concentración de soluto las ondas
patrón stock (ml) electromagnéticas chocan contra un mayor
(mg/L) (ml) (±0.06) número de átomos o moléculas y son afectadas
(±0.075) por estos. Por otro lado, la transmitancia y la
concentración poseen una relación inversamente
50.0 1.000 0.00 2.898 0.1 proporcional, ya que a medida que aumenta la
concentración disminuye el porcentaje de
40.0 8.000 2.00 2.568 0.3 transmitancia.

30.0 6.000 4.00 2.031 0.9

b. Gráfica de calibración
25.0 5.000 5.00 1.780 1.7
En la tabla 1 se puede observar que los
20.0 4.000 6.00 1.444 3.6
datos tienen concordancia con la Ley de Lambert-
15.0 3.000 7.00 0.800 15.9 Beer al mostrar una proporcionalidad directa
entre la concentración y la absorbancia de las
10.0 2.000 8.00 0.780 16.6 disoluciones. Debido a que son directamente
proporcionales se puede realizar una gráfica que
5.0 1.000 9.00 0.441 36.3 relacione la concentración y la absorbancia cuyo
resultado debe ser una recta, sin embargo,
1.0 0.200 9.80 0.068 85.5 teniendo en cuenta que es una práctica
experimental y depende de variables con cierta
0.0 0.000 10.00 0 100 incertidumbre, la relación no es completamente
lineal, como se puede observar en la gráfica 1. No
Muestra problema obstante, el coeficiente de determinación, R², dio
muy cercano a 1 lo que demuestra la calidad del
22.0 ------ ----- 1.422 3.8
modelo para replicar los resultados, y la
Tabla 1 Absorbancia y transmitancia de proporción de variación de los mismos.
diluciones de azul de metileno
A partir de una regresión lineal, realizada
por medio del programa Excel, se puede obtener
una recta cuya ecuación permite predecir la
Los valores utilizados para realizar las absorbancia de una disolución a partir de su
diluciones y sus respectivos valores de concentración o viceversa. Utilizando la ecuación
absorbancia y transmitancia están consignados en mostrada en la Gráfica 1 (y=0.0603x+0.0983), se
la tabla 1. Ambos valores están consignados con halló que la concentración de la muestra problema
la incertidumbre dada por el fabricante, sin es de 22 mg/L o que es lo mismo, 6,878x10-5 M.
embargo, en posición a los valores consignados el

4

Grafica 1. Curva de calibración
La concentración obtenida es comprobada a
través de la ecuación dada por la ley de Lambert-
Beer (A = ε·c·l ), donde “A” es absorbancia, “ε” es
la constante de absortividad molar, y “l” la
distancia que recorre la luz por la solución, o la
longitud de la celda. Despejando la constante de
absortividad molar tenemos: ε= A/c·l
remplazando por los valores obtenidos: ε=
1,422/6,878x10-5 M · 1cm dando como resultado
ε=20674,61 L mol-1 cm-1 el cual se compara con la
constante de absortividad molar teórica calculada
a partir de la pendiente de la recta de la gráfica de
calibración: a 680 nm la absortividad molar de la
disolución desconocida debe ser de 19286,955 L
mol-1 cm-1, dato aproximado al obtenido y el cual
comprueba la fiabilidad de la práctica.
III. CONCLUSIONES
Al realizar la curva de calibración de una
disolución, la relación lineal entre la absorbancia
y la concentración, planteada en la Ley de
Lambert-Beer, permite conocer la absorbancia de
una solución conociendo su concentración o
viceversa. Sin embargo, cada disolución tiene una
curva de calibración diferente por lo que se debe
repetir el proceso si se desea conocer la
concentración de una disolución diferente a la de
azul de metileno.
La intensidad del color de una disolución
depende de la concentración de soluto, ya que a
mayor soluto mayor será la cantidad absorbida de
luz y menor la que se transmite. Sólo las
longitudes de onda que atraviesan el objeto o
disolución podrán ser vistas por el ojo y por tanto
en el cerebro sólo percibirá el color de
determinada longitud de onda.
Según los cálculos obtenidos de
absortividad molar para la concentración de la
disolución problema comparado con los datos
teóricos se dice que el experimento cuenta con
determinada fiabilidad
IV. REFERENCIAS
1.
Brown, T.; Lemay, H.; Murphy,C.; Bursten,
B.; Woodward, P. Química La ciencia central.
11ª ed., Pearson Education. pp 212-213. 2009
2.
y Nieves, A.;Bárcena, J.;Fernández, E.; Galván,
A. (2012). Espectrofometría: Espectros de
absorción y cuantificación colorimétrica de
biomoléculas. 24 de marzo de 2016, de
Departamento de Bioquímica y Biología
Molecular, Sitio web:
http://www.uco.es/dptos/bioquimica-biol-
mol/pdfs/08_ESPECTROFOTOMETR%C3%
8DA.pdf
3.
Harris, D.; Análisis Químico Cuantitativo. 2ª
ed., Reverte S.A.pp 502, 505, 506. 2002
4.
Figura 1 tomada de
http://www.materialesdelaboratorio.net/wp-
content/uploads/2012/02/GRADILLA-
PARA-TUBO-DE-ENSAYO.jpg
5.
Figura 2 tomada de:
http://www.labbrands.com/778-
large/espectrofotometro-visible-v1200-
mapada.jpg
Cubillos G., Separación de los componentes de la
mezcla destilación simple (2016). Guías de
Laboratorio para Laboratorio de técnicas básicas.
Documento de Trabajo – Departamento de
Química – Universidad Nacional de Colombia,
Bogotá.
5
Informe de laboratorio

APÉNDICE A

Espectro de absorción de Solución Stock

Tabla A1. Absorbancia analizadas de la Solución Stock de concentración 50 mg/L a través del
espectrofotómetro MAPADA V1200

Longitud de Onda [nm] Absorbancia (0.001)

350 0.002
400 0.135
450 0.160
500 0.416
550 1.167
600 3.000
620 3.000
630 3.000
650 3.000
660 3.000
670 3.000
680 2,898
690 1,465
700 0,773

Los datos de absorbancia y transmitancia del rango de longitud de onda de 600 a 670 nm no son tenidos en
cuenta para el análisis del espectro de absorción debido a que en éstas longitudes la sustancia alcanza una
absorbancia completa (pues su respectiva transmitancia es 0%) y esto no es posible en el experimento. A
partir de estos datos se crea una gráfica que permite conocer qué longitud de onda es adecuada para usar
con la determinada disolución.

Gráfica A 1. Espectro de absorción de la Solución Stock

Se puede observar que el pico de absorbancia al que llega la sustancia está en 680 nm, por lo tanto será la
longitud de onda que se usará para medir la absorbancia de las demás disoluciones con distintas
concentraciones.