UNIVERSIDAD NACIONAL DE SAN MARCOS

Facultad de Farmacia y Bioquímica

E.P. de Farmacia y Bioquímica

Proyecto: Producción, purificación y caracterización de

bacitracina

ASIGNATURA:

Microbiología General

DOCENTE:
Mg. Mirtha Roque

INTEGRANTES:
 Aliaga Hoyos María del Carmen
 Alvarado Barzola, Fernanda
 Clares Yauri, Estela
 Colán Torres, Herbert Martín
 Cuya Lopez, Karina
 Diaz Diaz, Ervin Ruben

LIMA-PERU
2018

INTRODUCCIÓN
OBJETIVOS

ANTECEDENTES
La bacitracina zinc es un antibiótico bactericida producido por el Bacillus subtilis, que
actúa inhibiendo la síntesis de la pared celular de las bacterias (mediante interferencia en
la biosíntesis de los peptidoglicanos) produciendo alteraciones con la subsiguiente lisis de
las bacterias sensibles, haciéndolas además más susceptibles a la acción de los sistemas
de defensa del organismo y otros agentes antimicrobianos.
Johnson et al, 1945, nos dice que se ha recuperado un nuevo antibiótico llamado
“bacitracin” de una cepa del grupo de organismo B. subtilis. Es neutral, soluble en agua,
no toxico y con relativamente estable al calor. In vitro es activo principalmente contra
organismo Gram positivos, pero el gonococo y el meningococo son susceptible a su
acción. También es activo in vivo contra infecciones estreptocócicas hemolíticas
producidas experimentales en ratones e infecciones por gangrena gaseosa en conejillos
de Indias. El uso clínicos en las infecciones estreptocócicas hemolíticas y estafilocócicas
en el hombre ha dado resultados alentadores.1
Mascher et al nos dice que en la respuesta a las concentraciones subletales de
antibióticos, las bacterias a menudo inducen una respuesta adaptativa que puede
contribuir a la resistencia a los antibióticos. Divulgamos la respuesta de Bacillus subtilis a
la bacitricina, un inhibidor de la biosíntesis de la pared celular que se encuentra en su
entorno natural. El analisis del perfil transcripcional global de las células tratadas con la
bacitracina revela un respuesta orquestada por dos factores σ alternativos (σ B y σ M) y
tres sistemas de dos componentes (YvqEC, YvcPQ y BceRS).2
Cao explica en “Regulación del gen de resistencia a la bacitracina Bacillus subtilis bcrC
por dos factores σ de función extracitoplasmática” que la resistencia a la bacitricina
normalmente es conferida por cualquier de los dos mecanismos principales, el
transportador BcrABC, que bombea bacitricina, o BacA, una quinasa undecaprenol que
proporciona fosfato de isoprenilo C 55 mediante síntesis de novo. Demostrarnos que el
gen Bacillus subtilis bcrC (ywoA), que codifica una supuesta permeasa de transporte de
bacitricina, es un importante determinante de la resistencia a la bacitricina. Una cepa
mutante bcrC tenía una sensibilidad ocho veces mayor a la bacitricina.3
Según Rietkotter la presencia extracelular de antibióticos es unas amenazas común en la
vida microbiana. Su detección sensible y posterior inducción por mecanismos de
resistencia apropiados es, por lo tanto, un requisito previo para la supervivencia. La red de
Bacillus subtilis para la respuesta al estrés por bacitricina consiste en cuatro sistemas de
transducción de señales, los sistemas de componentes (TCS) BceRS, YvcPQ y LiaRS, y
la función extracitoplásmica (ECF) σ factor σ M.4
Los péptidos no ribosómicos se procesan en enzimas multifuncionales llamadas péptidos
sintetasas no ribosómicos (NRPS), cuya disposición modular multidominio permitió el
diseño racional de nuevos productos peptídicos. Sim embargos, la falta de competencia
natural y los métodos de transformación eficiente para la mayoría de las cepas
productoras de péptidos no ribosómicos impidieron la manipulación in vivo de estos
grupos de genes biosintéticos. En este estudio, Eppelmann et al presenta métodos para la
construcción de un huésped sustituto de Bacillus subtilis genéticamente modificado para
la integración y expresión heteróloga de genes NRPS extranjeros.5

METODOLOGÍA
MATERIALES
 Muestra del suelo
 Placa Petri con Agar TSA
 Mechero de Bunsen
 Asa de siembra en aro
 Medio de cultivo para producción de antibiótico
 Placa Petri con Agar Mueller Minton

PROCEDIMIENTO
Aislamiento de Bacillus subtilis

Recolectar una muestra del Colocar en un matraz con

Extraer 10 mL y colocarlo
suelo aproximadamente de 90 mL de agua destilada
en un tubo
10 gr. estéril

Extraer 1mL y colocar en un

Llevar a baño maría entre tubo con 9mL de agua Mediante método de
80-90°C, ebullición por 15 peptonada, Realizar esto superficie sembrar cada
min. hasta obtener 3 diluciones dilución en agar TSA
(10-1, 10-2, 10-3)

Incubar a 37°C por 48 horas

Producción de antibiótico de Bacillus subtilis

 Previamente sembrar en Del aislamiento, extraer
Agar TSA a partir del con un hisopo una colonia
aislamiento de una de las y colocar en Medio de
diluciones cultivo Luria Bertani

Vaciar todo el contenido

del tubo en el matraz con
Incubar a 37°C por 7 díass
Medio de cultivo para
producción de antibiótico

Evidenciar la producción del antibiótico

Extraer del Centrifugar a Hacer 2 pocillos

matraz 1mL de 3000RPM por en el Agar
líquido 10 min. Mueller Hinton

Sembrar 100uL
Incubar a 37°C
del centrifugado
por 24 horas
en los pocillos

FUNDAMENTO
Caldo Luria Bertani (LB): contiene peptona de caseína y extracto de levadura que
proporcionan al medio los nutrientes necesarios para el desarrollo óptimo de la mayoría
de los microorganismos. El cloruro de sodio ayuda a mantener el equilibrio osmótico6.
Mueller Hinton Agar: Medio de cultivo utilizado para la realización de la prueba de
sensibilidad a los antimicrobianos. Tiene varias propiedades, en primer lugar es un medio
no selectivo y no diferencial, lo que permite el crecimiento de todos los microorganismos,
por otra parte, permite una mejor difusión de los antibióticos por lo que se observarán las
zonas de inhibición verdaderas. Además, contiene almidón, que absorberá las toxinas
liberadas por las propias bacterias, de modo que no interfieran con los antibióticos7.

RESULTADOS
DISCUSIÓN

CONCLUSIONES

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS:
1. Johnson B. Anker H. Meleney F. Bacitracin: un nuevo antibiótico producido por un
miembro del grupo B. subtilis. Science 102 (2650), 376-377, 1945
2. Mascher T. Margulis N. Wang T. Ye R. Helmann J. Respuestas al estrés de la
pared celular en Bacillus subtilis: la red reguladora del estímulo de bacitricina.
Microbiología molecular50 (5), 1591-1604, 2003
3. Cao M. Helman J. Regulación del gen de resistencia a la bacitracina Bacillus
subtilis bcrC por dos factores σ de función extracitoplasmática. Revista de
bacteriología 184 (22), 6123-6129, 2002
4. Rietkotter E. Hoyer D. Thorsten M. Detección de bacitricina en Bacillus subtilis.
Microbiología molecular 68 (3), 768-785, 2008
5. Eppelmann K. Doekel S. Marahlel M. Biosintesis de ingeniería del péptido
antibiótico bacitricina en el huésped sustituto Bacillus subtilis. Journal of Biological
Chemistry 276 (37), 34824-34831, 2001
6. CALDO LURIA (Luria Bertani LB) – PROBIOTEK [Citado el 29 de junio del 2018]
Disponible en: http://www.probiotek.com/productos/reactivos/caldo-luria-luria-
bertani-lb/
7. Mueller Hinton Agar - Britania [Citado el 29 de junio del 2018] Disponible en:
http://www.britanialab.com/back/public/upload/productos/upl_5a2843836ddd8.pdf
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