UNIVERSIDAD NACIONAL “JORGE BASADRE GROHMANN” - Tacna Facultad de Ciencias Agropecuarias

Curso de Microbiología Ambiental Docente: Dr. César Julio Cáceda Quiroz

PRÁCTICA 03
MEDIOS DE CULTIVO

I. INTRODUCCIÓN
En la actualidad se pueden cultivar, fuera de su hábitat normal la mayoría de
microorganismos heterótrofos (a cuyo grupo pertenecen los gérmenes patógenos). Por eso
hay que destacar la importancia de la preparación y selección adecuada de los medios de
cultivo.
Un medio de cultivo es un sustrato o solución de nutrientes, en la que crecen y se
multiplican los microorganismos en el laboratorio, con el objeto de aislar las diferentes
especies bacterianas, para luego proceder con su identificación y llevar a cabo una serie
de estudios complementarios.
Los medios de cultivos empleados para la propagación de microorganismos, deben
prevalecer en condiciones adecuadas de humedad para un buen crecimiento de las células
vegetativas.
De igual manera el pH del cultivo es extremadamente importante para el crecimiento de los
microorganismos. La mayoría de éstos se desarrollan en medios que sean
aproximadamente neutros, mientras que otros prefieren un medio que sea más o menos
ácido.
La temperatura normalmente adecuada para el crecimiento de microorganismos mesófilos
está entre los 15 y 43ºC. En cambio, los microorganismos, psicrófilos se desarrollan a 0ºC,
y otros como los termófilos pueden crecer a 80ºC. Los microorganismos, patógenos en
general, están limitados por una escala de temperatura, comparativamente estrecha,
alrededor de los 37ºC, mientras que los saprófitos normalmente la tienen mucho más
ancha.
Medios de cultivo granulados:
Los medios de cultivo deshidratados se preparan, salvo excepciones, como granulados.
A partir de las correspondientes materias primas y mediante molienda y mezclado se
prepara en primer lugar una mezcla homogénea, finamente pulverizada. Esta mezcla se
somete después a procesos de granulación. Ello supone aglutinar la mezcla polvorienta en
pequeños grumos, consiguiendo simultáneamente reducción de un gran contenido de
humedad.
Los medios de cultivo de forma granulada ofrecen una serie de ventajas frente a los
tradicionales medios de cultivo en polvo:
- La escasísima liberación de partículas (producción de polvo) durante la manipulación,
reduciendo considerablemente a la alergenización o respiración de sustancias tóxicas.
- La mayor fluidez del producto impide su adherencia a las paredes del recipiente o
aparatos. La pesada resulta más fácil.
- Buena humectabilidad del granulado con agua, lo cual acelera el proceso de
humectación o de disolución. No se forman grumos difícilmente solubles.
- La distribución física homogénea de los componentes de la fórmula y el mantenimiento
de dicha distribución en el granulado también es valiosa cuando el almacenamiento
haya de ser prolongado. Gracias a ello no se producen en ellos efectos indeseables de
“desmezclamiento”.
- Mejor conservación, favorecida por:
 El escaso contenido de humedad
 El envase de vidrio como protección frente a la entrada de vapor de agua.
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 La distribución uniforme y constante de los componentes de la fórmula.

Debido a su particular composición, algunos medios de cultivo se presentan como
granulado muy fino. También para estos medios de cultivo se aplican las ventajas ya
citadas, en especial las relativas a la fluidez y distribución homogénea de sus
componentes.
Almacenamiento:
Dentro de lo posible, los medios de cultivo deshidratados deberán conservarse en lugar
seco, protegido contra la luz, a una temperatura de entre 15 – 30°C, y en envases siempre
bien cerrados. Inmediatamente después de haber retirado de los envases la cantidad de
medio de cultivo que se necesite, deberán cerrarse éstos de nuevo, firmemente. Bajo
condiciones óptimas de almacenamiento, los medios de cultivo deshidratados –mantenidos
cerrados en sus envases originales- conservan sus cualidades durante cinco años, como
mínimo, a partir de su fabricación.
Si tras periodos de almacenamiento más prolongados se presenta una alteración del pH,
puede ajustarse su valor.
Preparación
Disolución del medio de cultivo deshidratado
Para la preparación de medios de cultivo se utiliza agua limpia, recién destilada o
desmineralizada y cuya reacción sea lo mas cercana posible al pH neutro.
Los recipientes destinados a la preparación (por lo general matraces Erlenmeyer) se
limpiarán escrupulosamente con agua potable, y luego con agua destilada, con el fin de
eliminar totalmente residuos eventuales de otras sustancias. Los recipientes destinados a
la preparación de los medios de cultivo deben ser los suficientemente grandes para que el
medio de cultivo que se prepara pueda ser agitado con facilidad y concienzudamente. A
ser posible no se preparan más de 1 ó 2 litros por recipiente. Al medio de cultivo
deshidratado y pesado se añade aproximadamente la mitad de la cantidad necesaria de
agua y se agita suficientemente para conseguir una suspensión homogénea. Después se
incorpora la cantidad de agua restante, aprovechando esta adición para desprender e
incorporar el conjunto de partículas del medio de cultivo que hubieran quedado adheridas a
la pared interna del recipiente.
Todo tipo de medio de cultivo es sensible al calentamiento. Por este motivo, no debe
calentarse más de lo estrictamente necesario.
Los medios nutritivos que no contienen agar ni gelatina se pueden disolver ya, por lo
general; en agua fría o ligero calentamiento. A fin de obtener una preparación adecuada se
recomienda hacer uso de estos indicadores.
Los medios de cultivo que contienen agar o gelatina deben ser calentados para conseguir
su disolución. Este calentamiento se realiza en baño María o en marmita de vapor (por
ejemplo, autoclave sin sobrepresión). En casos de medios de cultivo que no deban ser
sometidos a ulterior esterilización en autoclave es imprescindible prestar atención a su
disolución completa. Puede reconocerse que se ha alcanzado ese grado cuando al agitar,
no se adhiere a la pared interna del recipiente partícula alguna de agar y la solución
viscosa, resbala libremente.
Algunos medios de cultivo muestran una turbidez inevitable (entre otros, por ejemplo, el
agar bismuto sulfito). Para estos medios hay que procurar una turbidez homogénea,
distribuyendo lo mejor posible las partes insolubles.
Si es imprescindible la preparación de más de 2 litros, es recomendable proseguir de
acuerdo a la siguiente norma:
- Diluir el medio de cultivo en 1/10 aproximadamente de la cantidad de agua y dejarlo
remojar durante 15 min.
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- Calentar a ebullición el agua restante.

- Reunir esta agua hirviente, bajo constante agitación, con el medio de cultivo remojado.
- Calentar adicionalmente hasta su completa disolución.

Ajuste del pH
Cuando se usa agua neutra para su preparación los medios de cultivo deshidratados
muestran el valor de pH indicado para cada uno de ellos, a la temperatura de incubación
prescrita para cada caso. A pesar de todo, se recomienda comprobarlo, sobre todo en
casos de lotes no recientes, y proceder a su corrección en caso de ser necesario.
El valor del pH depende mucho de la composición del medio de cultivo, de la temperatura
que tenga este medio de cultivo en el momento de su medición y al tratamiento a que se
haya sometido dicho medio de cultivo para su obtención (disolverlo, esterilizarlo). Por este
motivo la medición del pH se hace después de la esterilización. Para realizar esta medida,
lo mejor es utilizar un aparato medidor de pH (“peachímetro”) (sin olvidar la compensación
de temperatura en el aforo del electrodo), o bien utilizar el indicador especial en varillas de
pH 4,0 – 7,0 y el de pH 6,5 – 10.0
En los medios de cultivo sólidos, la medición del pH (y eventualmente la corrección que
fuese precisa) se realiza a 45 – 50 °C (medio de cultivo líquido) y en los medios nutritivos
líquidos se hace a temperatura ambiente.
El pH se ajusta al valor indicado para cada medio de cultivo. A la temperatura de
incubación, el valor del pH quedará dentro de los límites de oscilación previstos. La
corrección se logra por adición de solución 1 N o 1/10 N de HCl o de NaOH, a una muestra
de medio de cultivo exactamente medido. La cantidad de solución correctora necesaria
para la totalidad del producto preparado se calcula fácilmente a partir de la cantidad de
solución correctora empleada para la muestra del medio de cultivo.
Realización de un ajuste de pH
1. Esterilizar el medio de cultivo.
2. Extraer estérilmente una muestra.
3. Medir el pH de esta muestra y, si fuera necesario, ajustar por titulación el pH al valor
correcto.
4. Si procede a hacer la corrección, añadir al medio de cultivo preparado la cantidad
calculada de solución de HCl o de NaOH según el caso; estos líquidos han de ser,
lógicamente estériles. (Las soluciones de HCl y de NaOH pueden hacerse estériles
por filtración, haciéndole pasar a través de filtros adecuados de vidrio o de filtros
especiales de membrana).

Esterilización:
Antes de su esterilización y dentro de lo posible, es conveniente repartir el medio de cultivo
en porciones más pequeñas, por ejemplo, en los recipientes definitivos o en el que
ulteriormente se lleve a cabo el trabajo de investigación de que se trate (excepto placas de
Petri.
Si las normas de preparación no indican otra cosa, la esterilización se lleva a cabo en
autoclave, a 121 °C, durante 15 minutos. Los periodos de calentamiento y enfriamiento,
dependen del tipo de aparato y del volumen del preparado a esterilizar, no se han tenido
en cuenta al indicar la cifra anterior. La esterilidad sólo se consigue con seguridad cuando
se ha desalojado correctamente el aire de la cámara de vaporización de la autoclave y de
los recipientes en ellos contenidos. Con este fin ser deja fluir ampliamente la corriente de
vapor manteniendo abierta la válvula de purga durante el comienzo de la fase de
calentamiento de la autoclave. Tras la esterilización y después de haber alcanzado el
equilibrio de presiones (entre el interior y el exterior de la autoclave) y para evitar la
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sobrecarga térmica del medio de cultivo, deben sacarse enseguida de la autoclave los
recipientes y enfriarlos rápidamente, por ejemplo, a la temperatura de “vertido”. Se
recomienda para ello bañar los recipientes con agua corriente fría.
Temperaturas más altas y calentamiento más prolongado de lo previsto, perjudican la
calidad del medio de cultivo.
La autoclave es la forma de esterilización más segura para los medios de cultivo. Si no se
dispone de autoclave, se puede utilizar una olla grande de cocina.

Vertido en placas
Para evitar considerablemente la formación de gotitas de condensación de agua en la tapa
de las placas de Petri, deben verterse en ellas los medios de cultivo a una temperatura de
45 - 55 °C. Previamente hay que remover bien el medio de cultivo haciendo oscilar en
sentido circular su recipiente, para garantizar el entremezclamiento uniforme de dicho
medio de cultivo. Las burbujas de aire en la superficie de la placa se eliminan abanicando
brevemente la superficie con la llama no luminosa de un mechero Bunsen. Antes de
sembrar las placas puede secarse la superficie húmeda del Agar agar (que podría
favorecer al desplazamiento de microorganismos o el desmembramiento de las colonias)
en estufa a 30 – 40 °C. Para ello se coloca la parte inferior de la placa de Petri con su cara
interna hacia abajo, algo desplazada sobre la tapa que ahora le sirve de apoyo. Este
tiempo de secado alcanza entre 20 y 30 minutos como mínimo. En estufas con circulación
de aire se precisa menos tiempo.

Tubos de Agar inclinado

Para algunas aplicaciones microbiológicas se ha mostrado como muy interesante, realizar
siembras superficiales en tubos de cultivo (por ejemplo, conservación de cepas). Para ello
se precisa una superficie grande de medio de cultivo, que se puede obtener mediante
“agar inclinado”.
Los tubos llenos con medio de cultivo esterilizado, todavía líquido, se colocan en una
posición inclinada, de tal forma que se forme una capa de aproximadamente 3 cm y una
superficie inclinada de iguales dimensiones. El medio de cultivo se deja solidificar en la
posición lograda.
Medios de cultivo ácidos
Los medios de cultivo a base de agar y que tienen un pH inferior a 5,0 deben prepararse
con sumo cuidado pues el agar - agar se hidroliza al ser calentado en medio ácido, y por
tanto, disminuye la estabilidad del gel del medio de cultivo. Por ese motivo, debe evitarse
lo más posible el tener que volver a fundirlos de nuevo. Si no fuera posible la forma de
preparación oportuna o si fuera inevitable una nueva fusión con la consiguiente reducción
de la estabilidad del gel, puede añadirse eventualmente agar - agar al medio de cultivo
antes de proceder a disolverlo. Por lo general es suficiente aproximadamente 5.0 g/l.
Composición de los medios de cultivo:
Algunas sustancias nutritivas muestran ciertas oscilaciones en sus propiedades en función
del lote de fabricación.
Estas oscilaciones tienen que equilibrarse en los medios de cultivo deshidratados
modificando eventualmente las cantidades para obtener resultados reproducibles en el
cultivo de microorganismos. Para ellos se declaran composiciones típicas para los medios
de cultivo deshidratados.
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POSIBLES DEFECTOS EN LA PREPARACIÓN Y MANIPULACIÓN

Apelmazamiento de los medios de cultivo deshidratados

- Conservación en atmósfera excesivamente húmeda.
- El envase ha permanecido abierto demasiado tiempo.
- El envase no quedó lo suficientemente bien cerrado después de su uso.
- El medio de cultivo deshidratado está muy pasado de fecha (viejo).

Desviación del valor de pH

- Agua no neutra
- Envase no suficiente bien lavado.
- Medio de cultivo sobrecalentado durante su preparación.
- Medio de cultivo deshidratado, muy pasado de fecha (viejo).

Turbidez, precipitación
- Una turbidez en el medio de cultivo preparado hay que considerarlo como defecto, si
en los recipientes (placas de Petri, tubos, etc.) provocan observaciones deficientes.
Una turbidez que aparezca como consecuencia de un mayor espesor de capa del
medio de cultivo, no hay que considerarlo como un defecto.
- Las precipitaciones que forman pasos hay que considerarlas, por lo contrario, como
defectos de preparación.
- Excepciones: algunos medios de cultivo son inevitablemente turbios. Ejm: Caldo
Tetrationato de Kauffman, Caldo Selenito Cistina
- Agua insuficientemente desionizada.
- Los recipientes en los que se hizo la preparación no estaban lo suficientemente limpios.
- pH incorrecto o desajustado (véase desviación del valor de pH).
- Sobrecalentamiento del medio de cultivo durante la preparación.
- Si los medios de cultivo han sido confeccionados por el usuario la(s) sustancia(s)
empleada(s) contiene(n) impurezas formadoras de precipitado.
- Ocasionalmente por el material de muestra.
- Pérdida de agua por evaporación en el medio de cultivo preparado.

Punto de solidificación demasiado elevado

De importancia, sobre todo, cuando hay que mezclar material de ensayo o sustancias en el
medio de cultivo todavía líquido.
- Excesiva preparación de medio de cultivo deshidratado.
- Agar agar deshidratado.

Escasa estabilidad del gel

- Preparación demasiado pequeña de medio de cultivo deshidratado.
- Medio de cultivo deshidratado no disuelto completamente.
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- Medio de cultivo sobrecalentado durante su preparación; eventualmente, en los casos

de pH demasiado bajo (véase desviación del valor de pH).
- El medio de cultivo no se agitó, o lo fue insuficientemente, en su recipiente de
preparación, cuando fue vertido en las placas.
- En el caso de medios de cultivo confeccionados por el propio usuario Agar agar
demasiado escaso o inadecuado.
- Medios de cultivo ácidos (véase medios de cultivo ácidos) preparados sin suficiente
cuidado.

Desviación del color

- Valor erróneo del pH, en el caso de medios de cultivo que contengan indicador de pH
(véase desviación del valor de pH).
- Sobrecalentamiento del medio de cultivo durante su preparación, lo que da lugar a:
 medio de cultivo oscuro,
 pigmentos alterados,
 azúcar caramelizado.
- El recipiente en que se hizo la preparación no estaba lo suficientemente limpio.

Medios de cultivo (listos para el uso) contaminados

- Esterilización insuficiente
- Contaminación accidental ulterior a la esterilización. Por ejemplo, impericia en el
vertido en placas; placas de Petri no estériles o contaminadas.

Crecimiento demasiado pobre en gérmenes

- Residuos de sustancias inhibidoras del crecimiento:
 en los recipientes de preparación o medio de cultivo (por ejemplo, detergentes),
 en el agua de preparación,
 en el material de ensayo.
- Gérmenes ya alterados en el material de ensayo.
- pH incorrecto.
- En el caso de medios de cultivo mezclados. Adición de la muestra efectuada a
temperatura demasiado elevada.

Crecimiento demasiado intenso de gérmenes

- Medio de cultivo sobrecalentado durante su preparación con la consiguiente
destrucción de sustancias inhibidoras selectivas.
- En el caso de medios de cultivo basales; aditivos defectuosamente dosificados.
- Medio de cultivo sembrado con demasiado material de ensayo.

Colonias incorrectas o desleídas

- Superficie del medio de cultivo demasiado húmedo.
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- Superficie del medio de cultivo sembrado con demasiado material de ensayo.

- Medio de cultivo sobrecalentado durante su preparación con la consiguiente
destrucción de sustancias inhibidoras.

Crecimiento atípico
- Medio de cultivo erróneo, o defectuosamente preparado.
- Medio de cultivo deshidratado muy pasado de fecha (viejo).
- El medio de cultivo utilizado ha permanecido almacenado durante tiempo excesivo,
envejeciendo o deteriorándose.
- Condiciones de cultivo no conforme con las normas.
- Residuos de sustancias extrañas en los recipientes de preparación o de cultivo (por
ejemplo, detergentes), en el agua o en el material de ensayo.
I. OBJETIVOS
 Lograr el adiestramiento de los estudiantes en la preparación de los medios de cultivo.
 Capacitar al estudiante en la selección del medio de cultivo específico según la
necesidad: aislamiento, cuantificación o diferenciación bioquímica.

II. FUNDAMENTO TEÓRICO

Los microorganismos de acuerdo a sus requerimientos nutricionales, en general se
clasifican en:
- Autotróficos
- Heterotróficos
A. Microorganismos Autotróficos: Son aquellos que obtienen su energía de la
oxidación de sustancias inorgánicas simples como: C, CO2, N y S; dentro de este grupo
tenemos a los microorganismos:
- Litoautotróficos, quimioautotróficos o quimiosintéticos y;
- Autotróficos o fotosintéticos: los que obtienen su energía de reacciones
fotoquímicas o reacciones químicas de óxido-reducción.
B. Microorganismos Heterotróficos: Son aquellos que requieren de compuestos
“orgánicos” más completos como fuente de carbono y nitrógeno; requieren del
suministro de proteínas, carbohidratos, lípidos, vitaminas, sales inorgánicas y otros
factores de crecimiento para la síntesis de sus compuestos estructurales y
citoplasmáticos en su desarrollo.
Pueden ser: Lito-organotróficos, y Quimio-organotróficos

CLASIFICACIÓN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

A. DE ACUERDO A SU NATURALEZA:
Pueden ser:
a) De origen animal
b) De origen vegetal (orgánicos)
c) De origen mineral (inorgánicos)
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B. SEGÚN SU COMPOSICIÓN Y OBJETIVOS:

Se clasifican en:
1. MEDIOS COMUNES:
Son aquellos que contienen los mínimos componentes nutricionales para organismos
heterotróficos no exigentes. Estos pueden ser:
a) Líquidos: Aquellos que tienen nutrientes disueltos en solución acuosa. Ejm.
- Caldo nutritivo
- Caldo peptonado
- Caldo triptosa
- Caldo de carne
b) Sólidos: Los que tienen como base un medio líquido al que se le agrega
sustancias de escaso o poco valor nutritivo, como agar agar o gelatina para darle al
medio consistencia de gel. Ejm:
- Agar nutritivo o común
- Medio de gelatina
- Agar almidón

c) Semisólidos: Aquellos medios líquidos a los que se le agrega una

concentración de agar suficiente para obtener un estado de gel blando (0,5%).
Generalmente se usa para estudios de motilidad macroscópica en columna.

2. MEDIOS ENRIQUECIDOS O SUPLEMENTADOS:

Preparados para reunir los requerimientos nutricionales de bacterias exigentes, se
compone de un medio basal común suplementado con factores de crecimiento como:
sangre, suero, líquido ascítico, extracto de levadura, bases nitrogenadas, sales
minerales, carbohidratos, vitaminas, líquido pleural, etc.; estos medios pueden ser
líquidos o sólidos. Ejemplos:

Medios Líquidos: Medios Sólidos:

- Caldo cerebro corazón - Agar sangre

- Caldo extracto de levadura - Agar chocolate
- Caldo triptosa soya - Suero coagulado de Loeffler
- Caldo suero - Agar cerebro corazón
- Caldo ascítico - Agar Extracto de levadura.

3. MEDIOS SINTÉTICOS DEFINIDOS O QUÍMICAMENTE

DEFINIDOS
Preparados exclusivamente de sustancias químicas:

a) Medios Sintéticos Simples: Contienen Carbono como fuente de

energía (glucosa o lactosa); una fuente “inorgánica de nitrógeno (ClNH 4)”, fosfato o
sulfato y varias otras sales inorgánicas, sustancias tampón y agentes quelantes
como el citrato. Ejm:
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- Medio mínimo de Falkow

- Medio mínimo de Davis.

b) Medios Especiales o Selectivos Indicadores: Incorporan

aminoácidos, purinas, pirimidinas y otros factores de crecimiento para cepas
exigentes.

4. MEDIOS SINTÉTICOS COMPLEJOS:

Son aquellos que además de contener los requerimientos nutricionales básicos, llevan en
su composición “sustancias inhibidoras” como carácter “selectivo” y compuestos
específicos o “indicadores” para poner de manifiesto los principales caracteres
bioquímicos esenciales para el diagnóstico específico.

Entre las “sustancias inhibidoras” que pueden contener los medios de cultivo se
encuentran:
- Sales biliares
- Antibióticos
- Colorantes
Estas sustancias que pueden afectar el metabolismo o sistema enzimático con carácter
de selección. Comprenden:

a) Medios de Enriquecimiento: que favorecen el crecimiento de uno o un

grupo de microorganismos en particular, e inhiben en lo posible otros de la microflora
acompañante. Ejm:
- Agua Peptonada Alcalina (A.P.A.) *
- Caldo Selenito de Leifson*
- Caldo Tetrationato de Kauffman*.
*: Estos medios no se autoclavan.

b) Medios Selectivos: Que favorecen el aislamiento de un determinado

grupo de microorganismos mediante la obtención de colonias (cepas puras). Todas
son utilizadas en condiciones sólidas. Ejemplos:
- Agar Chapman
- Agar Cetrimide
- Agar Mac Conkey
- Agar Eosina Azul de Metileno (E.M.B.)
- Agar Endo
- Agar Salmonella – Shigella (S.S.)
- Agar verde brillante
- Agar sulfito de bismuto
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c) Medios Diferenciales: Empleados para detectar reacciones bioquímicas,

con carácter “diferencial” de grupos de géneros o especies microbianas, a veces en
un solo medio diferencial se pueden interpretar dos o más pruebas bioquímicas.
Ejemplos:
- Agar Triple Azúcar Hierro (TSI)
- Agar Lisina Hierro (LIA)
- Agar Citrato de Simmons
- Caldo Cianuro de potasio (KCN)
- Caldo Malonato
- Medio de Hugh Leifson

III. MATERIALES Y REACTIVOS:

- Tubos 25 x 125 mm - Balanza
- Tubos 13 x 100 mm - Espátula
- Placas Petri estériles - Pizeta
- Matraces - Cinta pH
- Balones - Papel Kraft
- Baguetas - Pabilo
- Probetas - Algodón
- Pipetas 7ml, 5ml, 20ml - Marcador de vidrio
- Mecheros - Franela

IV. PROCEDIMIENTO:
- Los ingredientes de un medio de cultivo deberán ser medidos y pesados en forma
exacta, de acuerdo a las indicaciones que se encuentren en la etiqueta del medio de
cultivo, en recipientes limpios y adecuados. Teniendo cuidado de utilizar espátulas
perfectamente limpias. Siempre comenzar pesando los ingredientes menos
higroscópicos.
- El volumen de agua o diluyente a emplear, agregarlo en 2 partes: primero agregar la
mitad para disolver los ingredientes. Luego agregar el resto. Únicamente emplear agua
destilada o desmineralizada.
- Si el medio contiene agar, calentar en baño María, vapor de agua o sobre una rejilla de
asbesto, hasta su total disolución. Debe evitarse la formación de espuma que
conduzca a un derrame de medio de cultivo. Dejar enfriar y comprobar el pH final
retirando con la bragueta, una pequeña cantidad de medio y colocándolo en una cinta
de pH. De ser necesario corregir dicho pH, utilizando NaOH o HCl 1N según sea el
caso.
- Los medios de cultivo líquidos cuya formulación está completa, es decir, que no
requieren de otros aditivos. Dispersarlos en tubos de ensayo limpios, taponarlos y
prepararlos para esterilización. Realizar lo mismo para medios sólidos a ser contenidos
en tubos de ensayo o en viales de antibiótico.
- Los medios de cultivo a ser empleados en placas de Petri y aquellos líquidos, que
requieren aditivos, llevar a esterilización el matraz o balón en que fueran preparados,
colocándolos tapón de algodón y cubierta de papel kraft.
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- En todo material a esterilizar, indicar medio de cultivo, cantidad contenida, fecha de

preparación.
- Esterilizar en autoclave a 121.1ºC, 15 lb de presión por 15 minutos. Salvo aquellos
medios cuya especificación indica lo contrario u otro medio de esterilización. Los
medios dispensados en tubos deberán ingresar a la autoclave dentro de recipientes
metálicos forrados cubiertos con papel kraft y rotulados.
- Enfriar los medios ya estériles a 45ºC ó 50ºC. Aquellos medios que requieren aditivos,
agregar los mismos en condiciones asépticas. Servir o dispersar en tubos de ensayo o
en placa Petri según la necesidad.
- Dejar enfriar y/o solidificar. Los tubos con medio sólidos dejar enfriar en forma
perpendicular o con ligera inclinación para aquellos que se requieren con superficie
inclinada. Una vez solidificados guardar en recipientes. Las placas Petri con medio de
cultivo guardarlas en posición invertida forradas y rotuladas.

AGAR COMÚN o AGAR NUTRITIVO:

- Extracto de carne … 3,0 g. … 0,3 g.
- Peptona … 5,0 g. … 0,5 g.
- Agar – agar … 15,0 g. … 1,5 g. (1,8 gramos es lo mejor)
- Agua destilada … 1,0 litro … 100,0 ml.
- pH = 7,2 – 7,3
Para ajustar el pH se le agrega NaOH (si está muy ácida) o HCl 1 N (si está muy básico).

CALDO COMÚN o CALDO NUTRITIVO:

Son los mismos componentes que se usan para el agar común, EXCEPTO que no tiene agar.

AGUA PEPTONADA:
- Peptona … 1,0 g.
- NaCl … 0,5 g.
- Agua destilada … 100,0 ml.
- pH … 7,2 ± 0,1

MEZCLA SULFOCRÓMICA:
- K2CrO4 … 100,0 ml
- H2SO4 … 100,0 ml
- Agua destilada … 1 000,0 ml
Disolver el primer componente en el segundo y a esto agregar lentamente el agua destilada,
agitando o enfriando en forma continua (en agua helada).
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PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO:

II. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS:

 Manuel Mendo Rubio (1995) Lecciones de Microbiología y Medios de Cultivo. Manual

de Laboratorio. Cuarta Edición Editorial Laborales SRL. Lima Perú.
 Merck (2013). Manual de Medios de Cultivo. Alemania.

11/IV/2019