Anda di halaman 1dari 8

Artikel review ini memberi pengetahuan tentang metode pengembangan dan parameter

analisis berbasis HPTLC berdasarkan evaluasi praktis. Ini memenuhi standar dan
meminimalkan kesalahan dan penyelidikan. Artikel tinjauan ini membantu memilih fase
gerak terbaik dan memberikan panduan untuk praktik validasi yang baik dan memahami
langkah-langkah prosedur analitik. Kata kunci: metode pengembangan, validasi,
HPTLC

PENDAHULUAN
Kromatografi Lapis Tipis Tingkat Tinggi (HPTLC) adalah bentuk lanjutan Kromatografi
Lapis Tipis (TLC) yang paling kuat dan terdiri dari lapisan kromatografi dengan efisiensi
pemisahan terbaik dan penerapan instrumentasi yang canggih untuk semua langkah
dalam prosedur ini mencakup aplikasi sampel yang akurat, standar pengembangan
kromatogram yang dapat direproduksi dan evaluasi yang dikendalikan perangkat lunak
[1]. HPTLC adalah konsep yang mencakup metodologi yang terstandarisasi
berdasarkan fakta ilmiah dan juga penggunaan metode yang divalidasi untuk analisis
kualitatif dan kuantitatif [2]. HPTLC memenuhi semua persyaratan kualitas untuk
laboratorium analisis hari ini, untuk meningkatkan resolusi dan memungkinkan
pengukuran kuantitatif yang lebih akurat [3].
Metode HPTLC: Fase Stationary: HPTLC adalah bentuk TLC modern yang paling maju.
Menggunakan pelat HPTLC yang menampilkan partikel kecil dengan distribusi ukuran
sempit yang menghasilkan lapisan homogen dengan permukaan halus yang bisa
diperoleh. HPTLC menggunakan piring yang lebih kecil (10 × 10 atau 10 x 20 cm). Pelat
HPTLC memberikan resolusi yang lebih baik, sensitivitas pendeteksian yang lebih
tinggi, dan peningkatan kuantifikasi situ dan digunakan untuk analisis kuantitatif
densitometrik industri farmasi. TLC adsorpsi fase normal pada silika gel dengan fasa
gerak yang kurang polar, seperti kloroform-metanol, telah digunakan untuk lebih dari
90% analisis obat-obatan dan obat-obatan yang dilaporkan [4]. 1. Metode HPTLC yang
sederhana dan tepat dikembangkan untuk estimasi simultan dua obat anti-inflamasi
(curcuminand galangin). Metode ini disesuaikan untuk menganalisis kedua obat
tersebut dalam bentuk dosis komersialnya (kapsul) tanpa gangguan dari pasien.
Pemisahan kromatografi dilakukan pada pelat KLT precoated (60 F254, 20 cm × 10 cm,
ketebalan 250μm, Merck, Darmstadt, Jerman) melalui teknik ascending linier
menggunakan nhexane, etil asetat, asam asetat, dan metanol sebagai mobilephase.
Deteksi dan kuantifikasi dicapai pada 404 nm melalui spektrofensitometricanalysis [5].

2. Laporan metode densitometrik TLC, yang telah dikembangkan dan divalidasi untuk
kuantifikasi stigmasterol dari ekstrak petroleum eter daun dan batang
Bryophyllumpinnatum. Pemisahan dilakukan pada pelat aluminium KLT yang didahului
dengan silika gel 60 F254. Pemisahan yang baik dicapai pada fase gerak
menggunakan Kloroform: Etanol (9.8: 0.2 v / v). Penentuan dan kuantisasi dilakukan
dengan pemindaian densitometri pada 490 nm dalam mode refleksi / absorbansi [6]. 3.
Ini menggambarkan metode HPTLC sederhana, tepat dan akurat untuk estimasi
sebagai bulk dan dalam bentuk dosis tablet. Pemisahan kromatografi dilakukan pada
pelat aluminium silika gel 60 F254 precoated menggunakan campuran metanol dan
toluena (4: 3% v / v) karena fase gerak dan evaluasi densitometrik pada titik dilakukan
pada 235nm [7]. Lipophilic C-18, C-8, C-2; fase silika gel diubah secara fenil; dan pelat
gel silika yang diresapi hidrokarbon yang dikembangkan dengan fasa gerak berair yang
lebih polar, seperti air metanol atau dioksan, digunakan untuk fase terbalik TLC. 1.
Metode kromatografi lapis tipis berkinerja tinggi baru (HPTLC) telah ditetapkan untuk
penentuan minosiklin dalam plasma manusia. Kromatografi dilakukan pada pelat
aluminium yang dilapisi dengan silika gel 60F254; fase gerak adalah metanol:
asetonitril: isopropanol: air 5: 4: 0.5: 0.5 (v / v). Analisis densitometri dilakukan pada 345
nm [8]. 2. Metode kromatografi lapis tipis yang sederhana, tepat, akurat dan berkinerja
tinggi telah dikembangkan dan divalidasi untuk estimasi Olmesartanmedoxomil dan
hydrochlorthiazide bersamaan dengan kombinasi bentuk sediaan. Fasa diam
menggunakan gel silika 60F254 yang dilekatkan. fase gerak adalah campuran
asetonitril: kloroform: asam asetat glasial (7: 2: 0.5, v / v / v). Deteksi bintik-bintik
dilakukan pada 254nm [9]. 3. Metode kromatografi lapis tipis tipis yang sederhana,
tepat, akurat dan cepat telah dikembangkan dan divalidasi untuk estimasi tenoxicam d

gel microemulsion. Tenoxicam dikromatografi pada lempeng plat silika gel 60 F254,
sebagai fase diam. Fase gerak adalah toluena: etil asetat: asam format (6: 4: 0,3 v / v /
v) yang digunakan [4]. Metode kromatografi lapis tipis sederhana, tepat, spesifik dan
akurat telah dikembangkan untuk penentuan simultan. dari Cinitapride dan Omeprazole
dalam bentuk sediaan farmasi. Pemisahan dilakukan pada pelat aluminium MerckTCC
dari silika gel G60 F254, (20 × 10 cm) dengan ketebalan 250μm menggunakan
kloroform: etil asetat: metanol (7,3: 2: 0,7, v / v / v) sebagai fase gerak. Pemisahan
HPTLC dari kedua obat yang diikuti dengan pengukuran densitometrik dilakukan pada
mode absorbansi pada 277 nm [11]. 5. Ini menjelaskan metode kromatografi cair
lapisan tipis yang dikembangkan dan divalidasi untuk perkiraan simultan telmisartan
dan ramipril dalam bentuk dosis gabungan. Prosedur tidak memerlukan pemisahan
komponen sebelumnya dari sampel. Telmisartan dan Ramipril ditentukan dengan
metode kromatografi Lapis Tipis Kinerja Tinggi (HPTLC) dalam bentuk sediaan tablet.
Metode ini dilakukan dalam silika gel preklamasi TLC pada pelat aluminium 60 F 254,
(10 cm x 10 cm, dicuci dengan metanol dan diaktifkan pada suhu 60 ° C selama 5 menit
sebelum kromatografi). Sistem pelarut adalah Acetone: Benzene: Ethyl acetate: Asam
asetat glasial dalam proporsi 5: 3: 2: 0,03, (v / v / v / v) [12] Lapisan precoated lainnya
yang digunakan meliputi aluminium oksida, magnesium silikat , magnesium oksida,
poliamida, selulosa, kieselguhr, penukar ion, dan lapisan gel silika termodifikasi polar
yang mengandung gugus amino, siano, diol, dan tiol terikat. Pemisahan isomer isomer
yang dilakukan pada lapisan kiral yang dihasilkan dari C-18
MobilePhase: Pemilihan fasa gerak didasarkan pada bahan adsorben yang digunakan
sebagai fase diam dan sifat fisik dan kimia analit. Sistem fase gerak yang digunakan
berdasarkan sifat selektivitasnya beragam adalah dietil eter, metilena klorida, dan
kloroform yang digabungkan secara terpisah atau bersama heksana sebagai pelarut
strengthadjusting untuk KLT fase normal dan metanol, asetonitril, dan tetrahidrofuran
yang dicampur dengan air untuk penyesuaian kekuatan. dalam KLT fase terbalik.
Pemisahan dengan pasangan ion pada lapisan C-18 dilakukan dengan fase gerak
seperti buffer asetat metanol 0,1 M (pH 3,5) yang mengandung 25 mM natrium
pentanesulfonat (15,5: 4.5). 1. Metode HPTLC yang sederhana dan tepat
dikembangkan untuk estimasi simultan dua obat anti-inflamasi (curcuminandgalangin).
Metode ini disesuaikan untuk menganalisis kedua obat tersebut dalam bentuk dosis
komersialnya (kapsul) tanpa gangguan dari pasien. Pemisahan kromatografi dilakukan
pada pelat KLT precoated (60 F254, 20 cm x 10 cm, ketebalan 250 mm, Merck,
Darmstadt, Jerman) melalui teknik ascending linier menggunakan n-heksana, etil
asetat, asam asetat, dan metanol sebagai mobilephase [ 5].
2. Kuantifikasi kuantitatif Lamivudine dan Zidovudine pada tablet dengan metode
HPTLC dikembangkan dan divalidasi. Kromatogram dikembangkan menggunakan fase
gerak toluena: etilasetat: metanol (4: 4: 2, v / v / v) pada lempeng berlapis aluminium
pelat GF silika gel GF dan dihitung dengan mode absorbansi densitometri pada 276 nm
[13 ]. 3. Metode kromatografi lapis tipis berkinerja tinggi (HPTLC) baru telah ditetapkan
untuk penentuan minosiklin dalam plasma manusia. Kromatografi dilakukan pada pelat
aluminium yang dilapisi dengan silika gel 60F254; fase gerak adalah metanol:
asetonitril: isopropanol: air 5: 4: 0.5: 0.5 (v / v) [8]. 4. Metode HPTLC baru dan
sederhana dikembangkan dan divalidasi untuk estimasi kuantitatif Eugenol pada otot
dan obat pelemas nyeri sendi. Pelat aluminium KLL yang didahului dengan silika gel
60F-254 (ketebalan 0,2 mm) digunakan. Perkembangan ascending linier dilakukan di
ruang gelas kembar dengan rasio fase gerak Tolune: Ethyl acetate (9.3: 0.7) yang
diikuti oleh penentuan densitometrik dilakukan oleh pemindai TLC (CAMLC) pada 560
nm dalam mode reflektansi / absorbansi [14] . 5. Metode kromatografi lapis tipis kinerja
tinggi yang sensitif, cepat, dan dapat direproduksi telah dikembangkan untuk analisis
diosgenin dan kuersetin secara simultan dari biji fenugreek, dengan menggunakan pelat
aluminium KLT yang didahului dengan silika gel G60F254. Diantara kombinasi fase
gerak yang berbeda yang digunakan, pemisahan terbaik dicapai pada asam format
Toluena-etil asetat (5: 4: 1, v / v / v). Pemindaian densitometrik pelat secara langsung
pada 275nm digunakan untuk analisis kuersetin [15]. 6. Metode kromatografi lapis tipis
baru, sederhana, dan cepat berkinerja tinggi dikembangkan dan divalidasi untuk
penentuan kadar karbamazepin secara kuantitatif. Carbamazepin dikromatografi pada
plat silika gel 60 F254 dengan etil asetat: toluena: metanol (5.0: 4.0: 1.0 v / v / v)
sebagai fase gerak. Carbamazepine diukur dengan analisis densitometrik pada 285 nm
[16]. 7. Metoda kromatografi lapis tipis sederhana, tepat, akurat, spesifik, dan selektif
dengan kinerja tinggi (HPTLC) telah dikembangkan untuk estimasi terus menerus dari
Terbinafine hydrochloride (TH) dan Mometasonefuroate (MF) dalam bentuk dosis krim.
Pemisahan kromatografi dicapai pada pelat aluminium silika gel Merck precoated 60
F254 menggunakan Toluene: Ethyl acetate: asam asetat glasial (8: 4: 0,1 v / v) sebagai
fase gerak [17]. 8 Metode Kromatografi Lapis Tipis (KLT) untuk analisis kualitatif dan
kuantitatif tablet natrium diklofenak dikembangkan dan divalidasi menurut pedoman ICH
dan USP. Metode ini dikembangkan dengan menggunakan fasa gerak yang dibuat
dengan pelarut yang ramah lingkungan: toluena, aseton dan asam asetat glasial (10:
15: 0.2 v / v / v), pada pelat gelas silika gel 60 F254 berlapis pra dengan dilapisi dengan
waktu jenuh dari 25 menit dan panjang gelombang pendeteksian densitometer 284 nm
dalam mode absorbansi absorbansi [18]. 9. Metode yang akurat, sensitif, tepat, andal,
dan cepat untuk penentuan kadar kolesterol dengan kromatografi lapis tipis berkinerja
tinggi dikembangkan.

Dalam metode ini, gel silika terdegradasi yang didukung aluminium 60


Pelat F254 digunakan sebagai fase diam dan
Sampel disemprot dengan bantuan contoh CAMAG
aplikator Linomat 5. Kromatogram dikembangkan
dengan fasa gerak yang terdiri dari kloroform: metanol
(9.5: 0.5, v / v) [19].
10. Lapisan tipis baru yang sederhana dan berkinerja tinggi
metode kromatografi untuk penentuan
mycophenolate mofetil dalam bentuk sediaan bulk dan tablet. Itu
Obat dipisahkan pada piring aluminium yang didahului dengan
silika gel 60 F254 dengan toluena, aseton, dan metanol di
rasio 6: 2: 2 (v / v / v) sebagai fase gerak. Kuantitatif
Analisis dilakukan dengan pemindaian densitometrik pada 254
nm [20].
11. Metode HPTLC yang sederhana, tepat dan akurat
Duloxetine Hydrochloride untuk estimasi sebagai bulk dan in
bentuk sediaan tablet. Pemisahan kromatografi itu
dilakukan pada pelat aluminium silika 60F254 precoated gel
menggunakan campuran Chloroform: metanol (8: 1 v / v) sebagai ponsel
tahap dan evaluasi densitometrik titik dilakukan
di 235nm [21].
Prewashing: Pelat ditangani di tepi atas untuk menghindari kontaminasi. Pelat
digunakan tanpa pretreatment kecuali kromatografi menghasilkan impurity front karena
kontaminasi dari piring Untuk reproduktifitas dan Analisis kuantitatif, lapisan sering
dicuci dengan menggunakan 20 ml metanol Metanol digunakan sebagai prikething
pelarut, campuran metanol dan etil asetat atau bahkan Fasa gerak digunakan, per
palung dalam celah 20 × 10 cm ruang (TTC). Dua 20 × 10 cm atau empat 10 × Pelat 10
cm bisa dikembangkan back-to-back di setiap palung dari TTC. Lepaskan piring dan
keringkan selama 20 menit di a oven pengeringan bersih pada suhu 120 ° C. Equilibrate
plate dengan atmosfer laboratorium (suhu, kelembaban relatif) a wadah yang sesuai
memberikan perlindungan dari debu dan uap. 3 Persiapan piring: Pelat KLT dapat
dibuat dengan peralatan yang sesuai. seperti itu lapisan tidak menempel baik ke kaca
dukungan. Precoated piring menggunakan jumlah kecil dengan berat molekul sangat
tinggi Polimer sebagai pengikat mengatasi sebagian besar keterbatasan buatan sendiri
layer.Precoated layers cukup abrasi tahan, sangat seragam di ketebalan lapisan, bisa
diulang, preactivated, dan siap pakai. Mereka tersedia dengan kaca atau aluminium
atau poliester. Alumunium foil Pelat yang lebih murah untuk dibeli, lebih murah, bisa
dipotong, dan Oleh karena itu mudah dibawa kemana-mana atau transportasi atau
surat. Kaca piring adalah yang terbaik untuk kualitas hasil tertinggi. Paling sering,
lapisan yang berisi indikator fluorescent F 254 digunakan. Hal ini memungkinkan
visualisasi sampel dalam kabinet UV sangat sederhana, seketika, dan nondestruktif
cara. Biasa digunakan ukuran pelat di TLC adalah 20 × 20 cm dan di HPTLC 20 × 10
cm atau 10x10 cm tersebar luas. Langkah-langkah yang terlibat dalam prosedur HPTLC
 Contoh Aplikasi  Pengembangan Chromatogram

Derivatisasi
 Evaluasi: Deteksi
Evaluasi: Dokumentasi
Contoh Aplikasi:
Aplikasi sampel memainkan peran penting dan perannya
Teknik adalah aplikasi spot dan penyemprotan - on
Contoh. Contoh aplikasi adalah langkah pertama masuk
kromatografi dan mempengaruhi kualitas hasilnya di
akhir proses.Pilihan teknik aplikasi
dan perangkat tergantung pada persyaratan. Spot bijaksana
Aplikasi sampel menggunakan kapiler volume tetap adalah
cara termudah. Volume sampel 0,5 sampai 5 μL bisa jadi
Diaplikasikan sebagai bintik-bintik ke lapisan konvensional tanpa pengeringan,
pada lapisan HPTLC sampai 1 μL per spot.
Penyemprotan sampel sebagai pita sempit dengan volume lebih besar
resolusi terbaik yang bisa diraih dengan
sistem kromatografi dipilih. Volume sampel besar atau
Sampel dengan kandungan matriks tinggi bisa disemprotkan pada
bentuk persegi panjang dan fokus ke pita sempit.
Pengembangan Chromatogram
Dalam teknik ini selain stasioner dan mobile
fase, fasa gas ada. Fase gas ini bisa
secara signifikan mempengaruhi hasil pemisahan.
Gambar 1. proses dalam mengembangkan ruang1

3. Tidak seperti (1) proses ini tidak diatur oleh uap tekanan seperti kekuatan adsorpsi.
4. Selama migrasi, komponen fase gerak dapat dipisahkan oleh fase diam di bawah
tertentu kondisi, menyebabkan terbentuknya front sekunder. Aspek berikut harus diikuti:
Pelarut dan fase gerak yang berkembang sama saja. Komposisi mereka berubah
dengan kromatografi. Syarat Mengembangkan pelarut, fase gerak sering digunakan
sama, cairan dalam ruangan harus disebut berkembang pelarut, sedangkan cairan
bergerak melalui lapisan merupakan fase gerak. Hanya komposisi dari
mengembangkan pelarut pada saat ditempatkan ke dalam ruang positif diketahui.
Proses (1) dan (2) bisa secara eksperimental dipengaruhi oleh:  Memasangkan
baterainya kurang lebih sama sekali dengan kertas saring direndam dengan pelarut
yang sedang berkembang.  Menunggu waktu antara pengenalan mengembangkan
pelarut ke dalam ruang dan awal kromatografi - kejenuhan ruang.  Mengizinkan piring
berinteraksi dengan fasa gas sebelum pengembangan kromatografi, yaitu tanpa kontak
dengan pelarut - prasyarat pelarut. Langkah 2 dan 3 dapat dicegah dengan
menempatkan sebuah counter piring pada jarak satu atau beberapa milimeter ke arah
lapisan kromatografi Ini disebut sandwich konfigurasi. Equilibriumexists untuk langkah 1
dan 2 dan kurang berbeda komponen fase mobile yang masuk Sehubungan dengan
perilaku adsorpsi mereka, untuk langkah 4 itu kurang Diucapkan dalam formasi front
sekunder. Di sumur jenuh ruang dan pada lapisan preconditioned sekunder Bagian
depan sering tidak diamati. Selama kromatografi, komponen pelarut yang sedang
berkembang, yang telah dimuat ke lapisan kering melalui fasa gas sesuai dengan (2),
didorong maju dari depan pelarut yang benar namun tak terlihat. Pengecualian adalah
komponen yang sangat polar seperti air, metanol, asam, atau basa. Ini menghasilkan
nilai RF lebih rendah di kamar jenuh dan terutama pada kondisi preconditioned lapisan,
dari pada ruang tak jenuh dan Konfigurasi sandwich Karena kemungkinan
dimusnahkannya pelarut dan kemungkinan front beta, pengembangan di sandwich
konfigurasi atau dalam pengembangan horizontal tak jenuh ruang bekerja paling baik
dengan pelarut komponen tunggal atau pelarut multi komponen berperilaku seperti
komponen tunggal pelarut

Konsekuensi: Kromatografi lapisan tipis dalam banyak kasus berlangsung dalam a non-
ekuilibrium antara fase stasioner, mobile, dan gas. Untuk alasan ini sangat sulit untuk
menggambarkan dengan benar kondisi di ruang berkembang. Direproducible Hasil
kromatografi diharapkan bila semua parameternya dijaga setepat mungkin. Bentuk
kamar dan saturasi memainkan peran utama dalam hal ini. Sayangnya Ini berarti hasil
kromatografi berbeda setiap kamar

Anda mungkin juga menyukai