Anda di halaman 1dari 2

MATERI METODE

Materi

Materi yang digunakan pada praktikum kali ini yaitu tabung reaksi, kertas
saring, vortex, sentrifuge, dan spektofotometer. Bahan yang digunakan pada
praktikum ini yaitu larutan standar BSA, buffer asetat pH 5, SDS-TEA, larutan
FeCl3 dalam HCl 0,01 M, asam tanat, dan methanol.

Metode

Persiapan sampel
Langkah pertama yang harus dilakukan yaitu alat dan bahan disiapkan.
200 mg sampel yang telah disaring dengan saringan 0,4 mm ditimbang dan
dimasukan kedalam tabung reaksi. Setelah itu diekstraksi dengan metanol 50%
sebanyak 10ml selama 3 menit dengan vortex. Setelah itu disentrifuge dengan
kecepatan 3000 rpm selama 15 menit. Setelah itu, 1 ml supernatan sampel
ditambahkan 1 ml larutan standar BSA (2mg/ml) setelah itu dibiarkan selama 20
menit di ruangan pendingin (5oC) dan disentrifuge selama 15 menit dengan
kecepatan 3000 rpm. Cairan dibuang dan endapannya dicuci dengan larutan buffer
asetat pH 5 sebanyak 3x dengan diteteskan secara perlahan ke dinding tabung
reaksi. Endapan dilarutkan dengan 4 ml SDS-TEA dan ditambahkan 1 ml larutan
FeCl3 dalam HCL 0,01 M, campurannya dihomogenkan dengan vortex selama 10
detik lalu dibiarkan di temperatur kamar. Langkah terakhir yaitu serapannya
diukur menggunakan spektofotometer pada panjang gelombang 510 nm.

Pembuatan larutan standar


Larutan standar dibuat dengan melarutkan 50 mg asam tanat dengan
metanol absolut (konsentrasi 2 mg/ml). Deret standar dibuat dengan cara dipipet
larutan induk sebanyak 0,1,2,3,4, dan 5 ml lalu dijadikan 10 ml. Larutan standar
ini mempunyai konsentrasi 0, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, dan 0.5 mg/ml. Lalu masing-
masing dipipet sebanyak 1 ml ke dalam tabung reaksi dan ditambahkan 1 ml
larutan standar BSA (2mg/ml) selanjutnya dilakukan cara kerja seperti sampel.
Lalu kadar tanin dihitung dengan rumus
mg
Faktor pengenceran x a 𝑥 100%
%Tanin = ml
200 𝑚𝑔

Pembuatan pereaksi
Larutan SDS-TEA dibuat dengan cara larutan Natrium dodesilhidrogen
sulfat 1% dan Trietanolamin 5% di dalam air suling, kemudian masing-masing
dicampur dengan perbandingan 1:1. Larutan standar BSA (Bovin serum albumin)
dibuat dengan cara larutan BSA ditimbang sebanyak 100 mg lalu dilarutkan
dengan larutan buffer asetat pH 5 yang telah dipersiapkan sampai volumenya
menjadi 50 ml didalam labu takar, larutan standar BSA ini berkonsentrasi 2
mg/ml. Larutan buffer asetat pH 5 dibuat dengan cara ditimbang 27,2 gram
CH3COONa.3H2O dicampur dengan NaCl dan dilarutkan dengan air suling.
Larutan FeCl3 dalam larutan HCl 0,01 M dibuat dengan cara ferriklorida
ditimbang sebanyak 0,4055 gram lalu dilarutkan dengan HCl 0,01 M sampai
volumenya menjadi 250 ml