Isolasi Cannabinoids

Setelah analisis 1H NM dari semua sampel (156) yang ada, kemudian dikelompokkan dan
dihasilkan ekstrak yang unik. Sampel yang terakhir (1,1702 g) dimasukkan ke kromatografi size-
exclusion menggunakan kolom gelas yang mengandung Sephadex LH-20 dan metanol sebagai
fase gerak. Pemisahan dicapai dengan kromatografi lapis tipis, di mana eluen yang digunakan
adalah campuran antara heksana dan etil asetat (8: 2).Sinar UV (λ = 254 nm) digunakan sebagai
pengembang. Akhirnya diperoleh 6 fraksi. Fraksi 4 dipilih dan dimasukkan ke HPLC, sehingga
menghasilkan sembilan kelompok kromatografi lainnya seperti yang ditunjukkan pada Gambar
3.

Gambar 3
Fraksi 4 dipisahkan oleh HPLC menggunakan adaptasi dari metode yang dikembangkan oleh
Peschel dan Politi (2015) dalam kromatografi Agilent Technologies 1260 tanpa preparasi,
dengan model pompa preparasi bom biner G1361A-1260, detektor UV 1260 MWD VL, model
G1365D, dan pecahan kolektor otomatis 1260 FC PS, model G1364B. Kolom yang digunakan
adalah Agilent ZORBAX SB-C18 Prep HT, yang berasal dari ukuran partikel 7 μm, 21,2 mm
diameter internal, dan 250 mm. Fase gerak yang digunakan adalah campuran air dan asetonitril
(65:35, TFA 0,1%) untuk pelarut A dan asetonitril untuk pelarut B. Mode gradien elusi: Pelarut
A - 0 mnt = 70%; 30 menit = 35%; 43 menit = 5%; dan 48 menit = 53,85%. Alirannya 14 mL
min-1 hingga 43 menit. Setelah 48 menit, diubah menjadi 9,1 mL min-1. Parameter lainnya
adalah waktu yang digunakan = 55 menit, panjang gelombang = 254 nm, volume injeksi = 200
μL, dan jumlah suntikan = 15. Pita kromatografik dikumpulkan secara manual. Semua sembilan
kelompok yang dikumpulkan dianalisis oleh 1H NMR dan GC-MS. Fraksi F1, F2, F3, F5, dan
F6 dan lima standar referensi cannabinoid (CBN, 9-THC, CBD, CBC, dan CBG) juga
dianalisis oleh GC-MS.