INFORME DE PRACTICAS PRE-PROFESIONALES

Lugar: Laboratorio de Citogenética y Radiobiología, Dirección de Servicios, Instituto

Peruano de Energía Nuclear.
Elaborado por: Steven Silva Godoy
Período: Del 4 de junio al 4 de agosto del 2016
1. Introducción.

El presente informe da a conocer las actividades desarrolladas como parte del

adiestramiento en el Laboratorio de Citogenética y Radiobiología. Se ha realizado el
cultivo de linfocitos en sangre periférica como un medio determinar anormalidades
presentes en los cromosomas en metafase producto del efecto de la radiación
ionizante y también análisis microbiológicos de interés.

Se ha realizado cuatro cultivos en los que se ha podido apreciar células en metafase

verificando que los insumos y reactivos están en buen estado.
Se ha preparado documentación sobre el uso y manejo de equipos así como la
verificación de balanza y las condiciones de esterilización de los materiales
utilizados en las diferentes pruebas que se realizan en el laboratorio.
El objetivo de la presente capacitación es adiestrar al practicante en las actividades
desarrolladas en el Laboratorio de Citogenética y Radiobiología.

2. Análisis Microbiológico de aguas.

2.1. Introducción:
La calidad del agua se define como el conjunto de caracteres físicos químicos y
biológicos que deben satisfacerse con el fin de que el agua que se suministra sea segura
para el fin destinado. La contaminación del agua por materia fecal es un factor de
importancia sanitaria debido a que las heces contienen una gran variedad de
microorganismos, pudiendo contener inclusive microorganismos enteropatógenos como
bacterias del género Salmonella, Shigella y Vibrio; protozoarios como Entamoeba
histolytica; virus como enterovirus o de la hepatitis A.

La calidad del agua se define como: el conjunto de caracteres físicos químicos y

biológicos que deben satisfacerse con el fin de que el agua que se suministra sea segura
para el fin destinado. Para que el agua sea de calidad potable debe de reunir ciertos
factores:

a) Físicos. Color, olor, sabor, temperatura, conductividad específica, sólidos,

pH.
b) Químicos. Alcalinidad, metales, nutrimentos, sulfatos, OD (Oxígeno
Disuelto), DBO (Demanda Bioquímica de Oxígeno).
 c) Biológicos. El método microbiológico para detectar la presencia de
microorganismos coliformes en el agua contempla tres fases: Prueba
Presuntiva, Prueba Confirmativa, Prueba Completa.
2.2. PROCEDIMIENTO.
Todo se realiza con material estéril y bajo condiciones de seguridad bajo la campana de
flujo laminar y entre mecheros de gas tipo bunsen.
a) PRUEBA PRESUNTIVA
Se lava la mesa de trabajo y se aplica una solución de hipoclorito de sodio al 1%
para reducir la carga microbiana, trabajar en la campana de flujo laminar o en el
cuarto de siembra bacteriológico con mecheros tipo bunsen.

1. Etiquetar perfectamente cada uno de los tubos de manera que no haya

posibilidad de confusiones posteriores.
2. Inocular tres tubos con caldo lauril sulfato doble concentración con 10 mL de
muestra cada uno.
3. Inocular tres tubos con caldo lauril sulfato concentración simple con 1 mL de
la muestra de cada uno.
4. Inocular tres tubos con caldo lauril sulfato concentración sencilla con 0.1 ml.
De la muestra de cada uno.
5. Incubar todos los tubos a 37°C durante 48 horas.
6. Transcurrido el tiempo de incubación observar si hubo producción de gas se
detecta por el desplazamiento del medio de cultivo en la campana de Durham.
La ausencia de gas en los tubos hace negativa la prueba.

Figura 1. Prueba presuntiva. Tubos conteniendo caldo lauril sulfato doble concentración,
izquierda tres tubos negativos, derecha tres tubos mostrando gas en la campana de Durham
lo que se interpreta como resultado positivo.
b) PRUEBA CONFIRMATIVA

A partir de los tubos positivos de la prueba presuntiva.

1. Inocular con dos series de tubos con caldo bilis lactosa verde brillante (BLVB).
2. Para determinar coliformes totales incubar una serie de tubos a 37°C y
examinarlos a las 48 horas para ver si hubo producción de gas.
3. Para confirmar la presencia de organismos coliformes termotolerantes,
incubar otra serie de tobos a 44°C durante 48 horas para ver si hubo producción
de gas.
4. Para confirmar la presencia de Escherichia coli presuntiva, a partir de caldo
lactosado bilis verde brillante inocular los tubos de agua de triptona que sean
necesarios. Incubar a 44°C durante 24 horas. Después añadir de 0.2 a 0.3mL de
reactivo de Kovacs. El desarrollo de un anillo de color rojo después de agitar
suavemente denota la presencia de indol. La detección de Escherichia coli
presuntiva se considera una evidencia satisfactoria de contaminación fecal.

Figura 2. Prueba confirmativa. Tubos Figura 3. Caldo triptona para ver la

conteniendo caldo lactosa bilis verde brillante, producción de Indol. Escherichia coli da esta
izquierda tres tubos negativos, derecha tres prueba positiva.
tubos mostrando gas en la campana de
Durham lo que se interpreta como resultado
positivo
3. Observación y entrenamiento Citogenético.
Se observaron un total de 200 metafases de prueba de la página WHO
BioDoseNet, un repositorio alemán con casos citogenéticos de aberraciones
cromosómicas causadas por radiación a dosis aleatorias.
El vaciado de datos se siguió con el modelo de la página WHO BioDoseNet en
Excel.

Figura 4: Metafase con 46 cromosomas, un dicentrico y un fragmento acéntrico. Foto

tomada de WHO BioDoseNet.

Figura 5: Metafase normal con 46 cromosomas. Foto tomada de WHO BioDoseNet.

 Fragmento

Dicentrico

Figura 6: Metafase con 46 cromosomas, un cromosoma dicentrico y un fragmento

acéntrico. Foto tomada de WHO BioDoseNet.

Figura 7: Metafase normal con 46 cromosomas. Foto tomada de WHO BioDoseNet.

Figura 8: Metafase normal con 46 cromosomas. Foto tomada de WHO BioDoseNet.

Figura 9: Metafase con 47 cromosomas, 3 cromosomas dicentricos, 3 fragmentos

acéntricos y un Minute (considerado un fragmento acéntrico especial). Foto tomada de
WHO BioDoseNet.
* Puntos amarillos hacen referencia a la posición el centrómero
Figura 10: Metafase con 46 cromosomas, un cromosoma dicentrico y su fragmento
acéntrico. Foto tomada de WHO BioDoseNet.

4. ESTANDARIZACIÓN DE LAS DOSIS DE RADIACIÓN PARA LA MUESTRA DE

SANGRE EN EL LABORATORIO DE CITOGENÉTICA Y RADIOBIOLOGÍA DEL
INSTITUTO PERUANO DE ENERGÍA NUCLEAR, PARA LA ELABORACIÓN DE
LA CURVA DE CALIBRACIÓN.

Dosis Para la curva de calibracion

Contar como minimo , de 100

a 500 celulas
Contar como minimo 1500

0 0.1 Gy 0.25 Gy 0.5 Gy 0.75 Gy 1 Gy 2 Gy 3 Gy 4 Gy 5 Gy

Dosis