Full PDF
Full PDF
SKRIPSI
Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat
Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm)
Program Studi Ilmu Farmasi
Oleh :
Diana Erosita Pramesthi
NIM : 058114045
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS SANATA DHARMA
YOGYAKARTA
2008
ii
HALAMAN PERSEMBAHAN
v
PRAKATA
Puji Syukur kepada Tuhan Yang Maha Pengasih dan Penyayang atas
menyelesaikan laporan akhir ini dengan baik. Laporan akhir ini disusun untuk
laporan akhir ini. Namun dengan bantuan dari banyak pihak, akhirnya penulis
dapat menyelesaikan laporan akhir tersebut. Dengan kerendahan hati penulis ingin
1. Rita Suhadi, M.Si., Apt., selaku Dekan Fakultas Farmasi Universitas Sanata
Dharma Yogyakarta.
ini.
5. Sri Hartati Yuliani, M.Si., Apt., selaku dosen pembimbing yang telah
6. Erna Tri Wulandari, M.Si., Apt., selaku dosen penguji atas kesediaannya
meluangkan waktu untuk menjadi dosen penguji, serta kritik dan saran yang
diberikan.
vii
7. Ign. Yulius Kristio Budiasmoro M.Si., selaku dosen penguji yang telah
9. Papa, mama, dan adik-adik atas dukungan, kasih sayang, dan cintanya.
10. Teman-teman payung Steviosida sebagai teman satu tim atas bantuan,
11. Teman-teman angkatan 2005 terutama kelompok E atas suka dan duka yang
12. Teman-teman Kost Wisma Surya atas bantuan doa dan dukungannya.
13. Pak Kasiran, Mas Wagiran, Mas Sigit, Mas Ottok, serta laboran-laboran
14. Semua pihak yang tidak dapat disebutkan satu per satu yang telah
Untuk itu penulis mengharapkan saran dan kritik yang membangun dari semua
pihak. Akhir kata semoga laporan ini dapat berguna bagi pembaca.
Penulis
viii
DAFTAR ISI
HALAMAN SAMPUL.........................................................................................i
HALAMAN JUDUL........................................................................................... ii
HALAMAN PERSETUJUAN PEMBIMBING ................................................iii
HALAMAN PENGESAHAN............................................................................ iv
HALAMAN PERSEMBAHAN ......................................................................... v
PERNYATAAN PERSETUJUAN PUBLIKASI .............................................. vi
PRAKATA ........................................................................................................ vii
PERNYATAAN KEASLIAN KARYA ............................................................ ix
DAFTAR ISI ....................................................................................................... x
DAFTAR TABEL ............................................................................................xiii
DAFTAR GAMBAR ....................................................................................... xiv
DAFTAR LAMPIRAN ..................................................................................... xv
INTISARI......................................................................................................... xvi
ABSTRACT ...................................................................................................... xvii
BAB I. PENGANTAR.........................................................................................1
A. Latar Belakang...........................................................................................1
B. Perumusan Masalah...................................................................................3
C. Keaslian Penelitian....................................................................................3
D. Manfaat Penelitian.....................................................................................3
E. Tujuan Penelitian.......................................................................................4
BAB II. PENELAAHAN PUSTAKA.................................................................5
A. Stevia rebaudiana Bertoni. M...................................................................5
1. Keterangan botani.............................................................................5
2. Deskripsi tanaman............................................................................5
B. Glikosida Steviol.......................................................................................6
C. Maserasi....................................................................................................9
D. Etanol 96%................................................................................................10
E. Sokletasi....................................................................................................10
x
F. Ekstrak.........................................................................................................11
G. Kromatografi Lapis Tipis............................................................................11
H. KLT Densitometri.......................................................................................13
I.. Image J........................................................................................................14
J. Desain Faktorial............................................................................................15
K. Landasan Teori............................................................................................17
L. Hipotesis......................................................................................................18
BAB III. METODOLOGI PENELITIAN.............................................................19
A. Jenis Rancangan Penelitian.........................................................................19
B. Variabel Penelitian dan Definisi Operasional.............................................19
1. Variabel Penelitian.........................................................................19
2. Definisi Operasional......................................................................20
C. Materi Penelitian.........................................................................................21
D. Instrumen Penelitian....................................................................................22
E. Tahap-tahap Penelitian................................................................................22
1. Determinasi Tanaman Stevia rebaudiana Bertonii.M...................22
2. Pembuatan Simplisia Daun Stevia rebaudiana Bertonii.M..........22
a. Pengumpulan bahan............................................................22
b. Sortasi Kering.....................................................................22
c. Pengeringan........................................................................23
d. Pembuatan Serbuk..............................................................23
e. Pembuatan Ekstrak.............................................................23
1. Defatisasi Serbuk Simplisia....................................23
2. Ekstraksi Serbuk Simplisia....................................23
3. Analisis Kualitatif Ekstrak Tanaman Stevia..................................24
4. Analisis Kuantitatif Ekstrak Tanaman Stevia ...............................25
a. Pembuatan Kurva Baku dan analisis sampel ...................25
b. Analisis Hasil....................................................................26
BAB IV. HASIL DAN PEMBAHASAN.............................................................28
A. Determinasi Tanaman Stevia.....................................................................28
B. Pemilihan Simplisia dan Pembuatan Serbuk.............................................28
xi
C. Pembuatan Ekstrak Stevia Secara Maserasi...............................................32
D. Analisis Kualitatif Bercak Maserat Tanaman Stevia..................................35
E. Analisis Kuantitatif Bercak Maserat Tanaman Stevia................................39
1. Pembuatan Kurva Baku.................................................................39
2. Penetapan Kadar Sampel……………………………………………..42
3. Analisis Kadar Secara Desain Faktorial……………………...........44
4. Analisis Yate’s Treatment…………………………………………….46
BAB V. KESIMPULAN DAN SARAN...............................................................49
A. Kesimpulan.................................................................................................49
B. Saran...........................................................................................................49
DAFTAR PUSTAKA ....................................................................... ...................50
LAMPIRAN ......................................................................................................... 56
BIOGRAFI PENULIS ......................................................................................... 80
xii
DAFTAR TABEL
Tabel II. Variasi Kondisi Suhu dan Volume Etanol 96% ................................. 24
Tabel IV. Hubungan Jumlah Steviosida (µg) dengan AUC pada seri Baku ..... 41
Tabel V. Kadar Steviosida dalam ekstrak yang dibuat dari masing-masing kondisi
Tabel VI. Kondisi Desain Faktorial dan Respon yang dihasilkan ................... 44
Tabel VII. Nilai Efek dari faktor Suhu, Etanol 96%, dan Interaksinya ............ 44
Tabel VIII. Hasil Perhitungan Yate’s Treatment pada respon kadar Steviosida47
xiii
DAFTAR GAMBAR
Image J .............................................................................................. 40
Gambar 6. Grafik hubungan suhu maserasi (a) dan volume etanol (b) terhadap
xiv
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran 10. Tampilan Baku dan Sampel dalam Tahapan Image J ................ 74
xv
OPTIMASI SUHU DAN VOLUME ETANOL DALAM PROSES
MASERASI DAUN STEVIA (Stevia rebaudiana Bertonii .M.) DENGAN
APLIKASI DESAIN FAKTORIAL
INTISARI
Kata kunci : Stevia rebaudiana Bertonii. M., steviosida, maserasi, suhu, volume
pelarut etanol 96%, Kromatografi Lapis Tipis, Image J, Desain Faktorial.
xvi
ABSTRACT
Stevia is a plant which used as a sweeterner that have zero calorie so it’s
suitable for diabetic patient. Stevioside is much contains in leaves. One step in
isolation process of stevioside is extraction. In this experiment used maceration
method of extraction stevia leaves powder with different of temperature and
ethanol 96% volume. In this experiment used to know the dominant factor
influence in maceration process of stevia leaves powder which produced optimum
concentration of stevioside. Solvent that use in this process is ethanol 96%.
Determination of concentration stevioside use the Thin Layer
Chromatography with stationary phase is silica gel and mobile phase is cloroform
: methanol : water (10 : 15: 2 v/v ) and than the wide of spot analysed with Image
J software. This study was experimental research use factorial design method with
two factor maceration temperature-volume of etanol 96% and two level high
level-low level. The maceration process were optimized on their concentration of
stevioside. The data were analyzed statistically using Yate’s treatment with 95%
level of confidence.
The result show that the maceration temperature, volume of ethanol 96%,
and its interaction influence with concentration of stevioside. Volume of ethanol
96% was dominant on determining concentration of stevioside, while maceration
temperature and the interaction between maceration temperature and volume of
ethanol 96% not influence on determining concentration of stevioside. The
contour plot showed the optimum area of concentration of stevioside. The area
was estimated as optimum maceration process of stevia extract on the level
studied.
xvii
BAB I
PENGANTAR
A. Latar Belakang
bahan pemanis buatan dengan kalori yang lebih rendah yang terbuat dari senyawa-
senyawa kimia, sebagai contoh natrium sakarin, natrium siklamat, dan lain
sebagainya. Pemanis pengganti tersebut memiliki rasa yang mirip dengan sukrosa
(Moraes dan Machado, 2001), akan tetapi ternyata penggunaan dalam jumlah
yang besar akan menimbulkan rasa pahit (Achyar, 2005) dan penggunaan dalam
Oleh karena itu digunakan alternatif pemanis lainnya, yang berupa bahan
pemanis alami yang berasal dari ekstrak tanaman. Salah satu tanaman yang
besarnya kurang lebih 200-300 kali kemanisan gula jika dilarutkan dalam air
(Wallin, 2007) dan tidak berkalori (Moraes dan Machado, 2001). Selain itu dari
aktivitas toksik yang berarti bagi sistem biologi. Ekstrak yang mengandung
1
2
steviosida yang optimum maka perlu dicari kondisi optimum dalam maserasi.
(Anonim, 1986). Dalam penelitian ini akan dioptimasi faktor suhu dan faktor
volume etanol 96% pada proses maserasi daun stevia, dimana suhu dan volume
menurut Wallin (2007), steviosida mudah larut dalam etanol. Berdasarkan hasil
(Alupului dan Lavric, 2008). Hal ini juga didukung dari data menurut Pasquel
A.(2008) yang menyebutkan bahwa dengan adanya peningkatan suhu dari 16°C
menjadi 45°C dihasilkan peningkatan massa glikosida yang dihasilkan dari 0,1 x
103 kg menjadi 0,15 x 103 kg. Penggunaan etanol sebagai cairan penyari akan
Dalam Penelitian ini akan dicari area optimum kondisi proses maserasi
dengan variasi suhu dan volume etanol 96% yang digunakan sehingga dapat
yang optimum.
3
1. Perumusan masalah
sebagai berikut :
1. Apakah perbedaan suhu dan volume etanol 96% yang digunakan pada
diperoleh ?
proses maserasi daun stevia dengan variasi suhu dan volume etanol
96%?
3. Manakah faktor antara suhu dan volume etanol 96% yang paling
2. Keaslian Penelitian
dengan melihat pengaruh suhu dan volume etanol 96% terhadap kadar
peneliti lain.
3. Manfaat Penelitian
a. Manfaat Teoritis
4
b. Manfaat Praktis
Dari penelitian ini akan diketahui kondisi suhu dan volume pelarut
paling optimum.
4. Tujuan Penelitian
1. Tujuan umum
stevia.
2. Tujuan khusus
BAB II
PENELAAHAN PUSTAKA
A. Stevia
a. Keterangan botani
tumbuh hingga ketinggian 65 cm. (Brandle dan Rosa, 1992). Tanaman Stevia
telah sukses ditanam di Jepang, Korea, Taiwan dan di negara-negara lain di dunia.
1986).
Stevia ditemukan oleh orang Eropa Dr. M.S. Bertoni pada tahun 1898 di
pada tanaman tersebut. Terdapat lebih dari 150 spesies yang telah dikenal tetapi
hanya satu yang secara signifikan mempunyai rasa manis (Midmore D.J., and
diantara 150 spesies lain yang ada. Stevia mengandung seluruh glikosida di
terkandung yaitu 3% - 10% dari berat serbuk kering daunnya (Gardana, Simonetti,
b. Deskripsi tanaman
beruas, bercabang, hijau. Daun; tunggal, berhadapan, bulat telur, ujung tumpul,
5
6
pangkal runcing, tepi rata, panjang 2-4 cm, lebar 1-3 cm, pertulangan meyirip,
berbulu, tangkai pendek, hijau. Bunga: majemuk, bentuk malai, di ujung dan di
ketiak daun, bentuk cawan, kelopak bentuk tabung, berbulu, berbagi lima, hijau,
tangkai benang sari dan tangkai putik pendek, kepala sari kuning, putik bentuk
silindris, putih. Buah: kotak, berambut, coklat. Biji; bentuk jarum, putih kotor.
Akar: tunggang, putih kotor (Backer dan bakhuizen van de Brink Jr., 1968).
B. Glikosida Steviol
Glikosida tersusun dari dua macam bagian yaitu gula yang disebut glikon dan non
gula yang disebut aglikon (Tyler, 1988). Terdapat dua kelas glikosida, yaitu C-
glikosida dimana gula yang terikat pada aglikon melalui ikatan karbon-karbon dan
O-glikosida dimana gula yang terikat pada aglikon melalui ikatan oksigen-karbon
(Wallin, 2007).
Wujud dari glikosida steviol ini berupa serbuk berwarna putih atau putih
kekuningan yang mudah larut dalam air dan etanol. Tingkat kemanisan dalam air
dari glikosida steviol ini 200 sampai 300 kali kemanisan sukrosa (Wallin, 2007).
7
Menurut anonim (1995) untuk istilah mudah larut diartikan bahwa untuk
reseptor protein spesifik pada sel di lidah yaitu T1r3. T1r3 mempunyai “
kantong”, dimana molekul kecil dapat masuk dan mungkin berikatan. Ikatan yang
terjadi berhubungan dengan bentuk molekul yang sesuai dan adanya gugus fungsi
yang berinteraksi untuk menstabilkan ikatan. Rasa manis yang ditimbulkan tidak
Larutan steviosida stabil dalam pH 3-9 dan pada pH tersebut serta pada
suhu 1000C stabil selama 1 jam. Selain itu apabila disimpan pada suhu 800C
selama 5 jam maka tidak akan ditemukan dekomposisi dari senyawa ini. Senyawa
ini akan terdekomposisi pada pH 10, sedangkan dalam larutan asam akan
memiliki kestabilan yang tinggi (Nabors, 1986). Berikut ini adalah rumus molekul
8
Glu
Glu
(Dulkosida B) Glu
Glu
pada saluran pencernaan karena ikatan glukosa pada steviosida adalah ikatan b-
glukosidik. Steviosida didegradasi menjadi steviol dan glukosa oleh bakteri pada
9
pada kolon. Glukosa yang dihasilkan ini, sepertiga bagian dimetabolisme oleh
bakteri kolon, sepertiga bagian diekskresi, dan sepertiga bagian (± 80 mg) diserap
sehingga jumlah glukosa tersebut dapat diabaikan. Steviol yang dihasilkan dari
400 mg steviosida adalah sebanyak 160 mg. sekitar 90% dari bentuk steviol ini
diekskressi bersama dengan feses. Sejumlah kecil steviol diserap kolon dan
C. Maserasi
dengan cara merendam serbuk simplisia dalam cairan penyari. Cairan penyari
akan menembus dinding sel dan akan masuk ke dalam rongga sel yang
mengandung zat aktif, zat aktif akan larut dan karena adanya perbedaan
konsentrasi antara larutan zat aktif di dalam sel dengan yang diluar sel, maka
larutan encer masuk ke dalam sel. Peristiwa tersebut berulang sehingga terjadi
keseimbangan konsentrasi antara larutan di luar sel dan di dalam sel (Anonim,
1986).
Cairan penyari yang digunakan dapat berupa air, etanol, air-etanol, atau
pelarut lain. Bila cairan penyari digunakan air maka untuk mencegah timbulnya
kapang, dapat ditambahkan bahan pengawet, yang diberikan pada awal penyarian
(Anonim, 1986).
menggunakan air panas atau alkohol. Serbuk daun stevia sebelum diekstraksi
atau heksan yang bertujuan untuk mengurangi kandungan minyak atsiri, lipid,
10
klorofil, dan senyawa non polar lainnya (Wallin, 2007). Berdasarkan hasil
(Alupului and Lavric, 2008). Selain itu juga disebutkan bahwa peningkatan
D. Etanol 96%
Etanol mengandung tidak kurang dari 92,3% b/b dan tidak lebih dari
93,8%b/b, setara dengan tidak kurang dari 94,9%v/v dan tidak lebih dari 96%v/v
,C2H5OH, pada suhu 15,560C. Pemerian: Cairan mudah menguap, jernih, tidak
berwarna. Bau khas dan menyebabkan rasa terbakar pada lidah. Mudah menguap
walaupun pada suhu rendah dan mendidih pada suhu 780C. Bercampur dengan air
alasan berikut, antara lain: lebih selektif, kapang dan kuman sulit tumbuh dalam
etanol 20% ke atas, tidak beracun, netral, absorbsinya baik, etanol dapat
bercampur dengan air dalam segala perbandingan, panas yang diperlukan untuk
E. Sokletasi
sokletasi, cairan penyari diisikan pada labu, serbuk simplisia diisikan pada tabung
11
dari kertas saring atau tabung yang berlubang-lubang dari gelas, baja tahan karat
atau bahan lain yang cocok. Cairan penyari akan dipanaskan hingga mendidih.
Uap penyari akan naik ke atas melalui serbuk simplisia. Uap penyari mengembun
karena didinginkan oleh pendingin balik. Embun turun melalui serbuk simplisia
sambil melarutkan zat aktifnya dan kembali ke labu. Cairan akan menguap
kembali berulang proses sebelumnya, uap penyari akan naik ke atas melalui
serbuk simplisia, kemudian uap penyari mengembun dan embun turun melalui
serbuk simplisia sambil melarutkan zat aktifnya dan kembali ke labu. (Anonim,
1986). Kelebihan dari sokletasi adalah jumlah pelarut yang dibutuhkan sedikit,
dan penyarian terjadi dengan pelarut yang selalu baru secara terus-menerus.
(beberapa jam) sehingga dibutuhkan energi listrik yang tinggi (Voigt, 1994).
F. Ekstrak
Ekstrak adalah sediaan kering, kental, atau cair dibuat dengan menyari
tanaman atau hewani menurut cara yang cocok di luar pengaruh cahaya matahari
langsung. Cairan penyari yang biasa digunakan adalah air, eter, atau campuran air
dan etanol. Penyarian simplisia dengan air dapat dilakukan dengan cara maserasi,
komponen atas dasar perbedaan adsorpsi atau partisi atas fase diam di bawah
12
dipengaruhi oleh macam dan polaritas zat-zat kimia yang dipisahkan. Fase diam
yang umum dan banyak dipakai adalah silika gel, sedangkan jenis yang lain dapat
dipakai alumina, kieselguhr, celite, serbuk sellulosa, serbuk poliamida, kanji, dan
sephadex. Penyangga untuk fase diam dapat berupa plastik, logam, ataupun kaca.
(Mulja, 1995).
(F254) sehingga senyawa alam yang mengabsorbsi sinar UV dekat (254 nm) akan
Fase diam yang berupa silika gel dapat digunakan untuk memisahkan
lemak, anion dan kation anorganik, dan terpenoid melalui mekanisme pemisahan
secara partisi (Stock, 1974). Baik silika gel, kieselguhr maupun alumina,
semuanya bersifat polar, dengan adanya atom O dan gugus hidroksi pada
harga Rf.
13
Angka Rf berjarak antara 0,00 sampai 1,00 dan hanya dapat ditentukan
dua desimal, sedangkan hRf ialah angka Rf dikalikan faktor 100 dan
H. KLT Densitometri
Kuantitatif. Penetapan kadar suatu senyawa dengan metode ini dilakukan dengan
mengukur kerapatan bercak senyawa yang dipisahkan dengan cara KLT. Pada
Ada dua cara penetapan kadar dengan alat densitometer, pertama, setiap
kali penetapan ditotolkan sediaan baku dari senyawa yang bersangkutan dan
dielusi bersama dalam suatu lempeng, kemudian AUC (luas daerah di bawah
kurva) sampel dibandingkan dengan harga AUC zat baku. Yang kedua, dengan
membuat kurva baku hubungan antara jumlah zat baku dengan AUC. Kurva baku
diperoleh dengan membuat totolan zat baku pada pelat KLT dengan bermcam-
dicari AUCnya dengan alat densitometer. Dari kurva baku diperoleh persamaan
14
garis lurus Y=Bx+A, dimana x adalah kadar zat yang ditotolkan dan Y adalah
I. Image J
memproses banyak gambar mulai dari bentuk 3 dimensi sel hidup hingga
Windows, Mac OS, Mac OS X, Linux, dan Sharp Zaurus PDA (Jahnen, 2008).
15
12. Daerah dari plot lane kemudian diukur dengan magic wand tool,
J. Desain Faktorial
yang diteliti. Penelitian desain faktorial yang paling sederhana adalah penelitian
level yang digunakan dalam penelitian, dipangkatkan dengan jumlah faktor yang
digunakan. Jumlah percobaan untuk penelitian dengan 2 level dan 2 faktor adalah
16
Pada desain faktorial dua level dan dua faktor diperlukan empat
faktor), yaitu (1) A dan B masing-masing pada level rendah, (a) A pada level
tinggi dan B pada level rendah, (b) A pada level rendah dan B pada level tinggi,
Besarnya efek dapat dicari dengan menghitung selisih antara rata-rata respon pada
level tinggi dan rata-rata respon pada level rendah. Konsep perhitungan efek
17
menentukan respon. Keuntungan utama desain faktorial adalah bahwa metode ini
interaksi antar faktor. Metode ini ekonomis dapat mengurangi jumlah penelitian
K. Landasan Teori
steviosida atau yang disebut glikosida steviol yang berguna sebagai pemanis
alami. Steviosida sangat mudah larut dalam etanol (Wallin, 2007). Oleh karena itu
dengan cara merendam serbuk simplisia dalam cairan penyari. Cairan penyari
akan menembus dinding sel dan akan masuk ke dalam rongga sel yang
mengandung zat aktif, zat aktif akan larut dan karena adanya perbedaan
konsentrasi antara larutan zat aktif di dalam sel dengan yang diluar sel, maka
larutan encer masuk ke dalam sel. Peristiwa tersebut berulang sehingga terjadi
Optimasi dalam penelitian ini pada faktor suhu maserasi dan faktor
volume etanol 96% yang digunakan sebagai cairan penyari, hal ini karena kedua
faktor tersebut merupakan faktor yang berpengaruh dan dapat dikendalikan dalam
18
optimum. Hal ini juga didukung dari data menurut Pasquel A. (2008) yang
menyebutkan bahwa dengan adanya peningkatan suhu dari 16°C menjadi 45°C
akan dihasilkan peningkatan massa glikosida yang dihasilkan dari 0,1 x 103 kg
menjadi 0,15 x 103 kg. Menurut Jaroslav Pol. dkk (2007), penggunaan etanol
dibandingkan dengan air. Selain itu juga disebutkan bahwa peningkatan volume
Lavric, 2008).
L. Hipotesis
dalam ekstrak.
BAB III
METODE PENELITIAN
1. Klasifikasi Variabel
a. Variabel Bebas
suhu (300C dan 500C) dan volume etanol 96% (20 ml dan 50 ml)
b. Variabel Tergantung
etanol.
19
20
e. Definisi Operasional
menit.
21
dan faktor.
C. Materi Penelitian
Bahan atau materi yang digunakan dalam penelitian ini antara lain:
(Balai Besar Penelitian dan Pengembangan Tanaman Obat dan Obat Tradisional)
(Merck), Metanol p.a (Merck), Etanol 96% teknis (Brataco Chemika), n-hexan
teknis (Brataco Chemika), Aquabidest (aqua bidestilata steril) pro injection 500ml
22
D. Instrumen Penelitian
Alat atau Instrumen yang digunakan dalam penelitian ini antara lain:
Oven (Memmert), Labu Ukur (10 ml,25 ml,50 ml, 100 ml,500 ml,1 lt) (Pyrex-
no mesh 50, Timbangan Analitik (Metler Toledo), Alat Scanner (Canon MP 160),
Software Image J.
E. Tahap-tahap Penelitian
a. Pengumpulan bahan
b. Sortasi Kering
Sortasi kering dilakukan dengan cara di pisahkan dari benda-benda asing seperti
bagian tanaman yang tidak diinginkan dan juga dari pengotor lain yang masih
tertinggal.
23
c. Pengeringan
selama 1 hari.
d. Pembuatan serbuk
serbuk yang telah jadi diayak dengan ayakan nomer mesh 50.
setiap 10 menit dengan range suhu pelarut heksan pada Labu Alas
24
pengendapan.
(Kieselgel 60 F254 atau silika gel 60 F254) begitu juga dengan baku
pada plat panas untuk menampakkan bercak dan dihitung harga Rf untuk
digunakan dioven terlebih dahulu pada suhu 1000C selama 1-3 jam.
25
masing 2µl, 3µL, 4µL, 5µL, 6µL, dan 7µL dimana masing-masing totolan
8µg, 10µg, 12µg, dan 14µg. Pada lempeng yang sama ditotolkan pula
muncul. Dari luas bercak yang diperoleh (sebagai nilai Y) dan jumlah seri
Dan nilai AUC dari bercak sampel dimasukan sebagai nilai Y dalam
jumlah steviosida (µg) dalam maserat. Dari jumlah steviosida (µg) yang
dalam sampel.
26
b. Analisis Hasil
Kadar steviosida (%b/b) dalam sampel dari setiap kondisi dan setiap
Desain faktorial untuk melihat pengaruh suhu dan volume etanol 96%
kondisi perlakuan antara suhu dan volume etanol 96% yang digunakan.
menentukan kombinasi antara suhu dan volume etanol 96% manakah yang
analisis statistik ini maka dapat ditentukan ada tidaknya hubungan dari
setiap faktor dan interaksi terhadap respon . Hal ini dapat dilihat dari harga
27
diterima dan Ho ditolak apabila harga F hitung lebih besar dari F tabel,
28
BAB IV
mencocokkan ciri-ciri yang ada pada tanaman dengan kunci determinasi yang ada
dalam buku acuan menurut Backer (1968). Hasil determinasi menunjukkan bahwa
Stevia yang digunakan sebagai bahan penelitian ini diambil pada bulan
juli dari hasil panen para petani di daerah Tawangmangu yang telah diserahkan
pada Balai Besar Penelitian dan Pengembangan Tanaman Obat dan Obat
merupakan tanaman hasil budidaya sehingga faktor-faktor seperti umur, asal, dan
stevia hasil panen setelah berumur ± 2 bulan. Sampel stevia yang diperoleh
berupa simplisia kering, yang kemudian dilakukan sortasi kering terhadap sampel
tersebut, adapun tujuan dari sortasi kering ini adalah untuk memisahkan benda-
29
benda asing seperti bagian-bagian tanaman yang tidak diinginkan dan pengotor-
pengotor lain yang masih ada dan tertinggal pada simplisia kering.
suhu 400C selama 1 hari yang bertujuan untuk mendapatkan simplisia yang tidak
mudah rusak sehingga dapat disimpan dalam jangka waktu yang lebih lama
(Anonim, 1985).
kontak antara cairan penyari dengan serbuk juga akan bertambah. Pada umumnya,
penyarian akan semakin baik jika permukaan serbuk simplisia yang kontak
dengan cairan penyari semakin luas (Anonim, 1986), sehingga semakin halus
serbuk simplisia maka penyarian akan semakin baik. Serbuk yang diperoleh
kemudian diayak dengan menggunakan ayakan dengan nomer mesh 50. Menurut
penelitian Alupului dan Lavric (2008), diketahui bahwa dengan diameter ukuran
serbuk sebesar 0,315 mm dapat menghasilkan kadar steviosida yang lebih tinggi
dibandingkan dengan diameter ukuran serbuk sebesar 2 mm dan 6,3 mm. Dari
hasil perhitungan, diameter ukuran serbuk sebesar 0,315 mm dapat dicapai dengan
30
senyawa yang bersifat non polar yang dapat mengganggu proses ekstraksi, karena
secara teori etanol dapat melarutkan senyawa non polar (Anonim, 1986). Adapun
senyawa non polar yang terkandung dalam tanaman stevia dapat berupa: minyak
non polarnya akan berkurang dan serbuk inilah yang kemudian akan diekstraksi
heksan merupakan pelarut organik yang bersifat sangat non polar (Cannel, 1998),
sehingga proses penarikan senyawa non polar pada serbuk stevia dapat optimal.
Alat yang digunakan dalam defatisasi ini adalah sokhlet yang dapat menyari
menggunakan pelarut yang selalu baru sehingga terjadi ekstraksi kontinu dengan
kantung, kemudian di soklet menggunakan cairan penyari heksan selama 2x8 jam
(Martono dkk., 2007), dimana setiap 8 jam, dilakukan pergantian penyari yang
polar. Sedangkan waktu 2x8 jam diperoleh berdasarkan hasil orientasi yang
31
waktu tersebut sudah cukup untuk mengurangi sebagian besar senyawa non polar
kali sirkulasi, hal ini bertujuan untuk mencegah habisnya pelarut dalam Labu Alas
Bulat sehingga LAB tersebut ketika terus dipanaskan tidak pecah dan juga agar
proses ekstraksi dapat berjalan terus tanpa adanya penambahan pelarut lagi.
panas, maka faktor suhu hendaknya perlu diperhatikan. Hal ini karena steviosida
yang terkandung dalam serbuk dapat dengan mudah terdekomposisi pada suhu
yang tinggi (±1000C, hanya stabil selama 1 jam, dan pada suhu 80°C stabil selama
5 jam) (Nabors, 1986). Dalam penelitian suhu pelarut heksan yang dipanaskan
pada Labu Alas Bulat saat soklet diatur pada rentang suhu antara 550C-660C
terdekomposisi. Hal ini karena ketika suhu pelarut heksan yang dipanaskan pada
LAB berkisar pada range 550C-660C, maka suhu pada tabung soklet dimana
terdapat serbuk daun stevia akan berada dibawah range suhu tersebut.
pada suhu 500C untuk menguapkan semua sisa pelarut heksan agar diperoleh
serbuk kering. Heksan yang masih tersisa dalam serbuk dapat mengganggu proses
dahulu.
32
campuran air dan etanol. Air yang digunakan dengan volume sama untuk setiap
kondisi yaitu sebanyak 20 ml. Tujuan penggunaan volume air dalam jumlah kecil
(Anonim, 1986), sehingga untuk meminimalisir hal tersebut maka digunakan air
dalam jumlah sedikit. Penggunaan cairan penyari dalam penelitian ini berupa
campuran air dan etanol, karena campuran tersebut bersifat polar yang sesuai
dengan zat aktif steviosida yang juga bersifat polar, campuran tersebut juga umum
dalam tanaman Stevia rebaudiana Bertonii. M., hal ini karena dalam penyarian
yaitu pada suhu 300C dan 500C serta adanya penggojogan, itu semua akan
33
Koefisien difusi juga berbanding lurus dengan suhu absolut dan berbanding
kecepatan difusi. Umumnya kelarutan zat aktif akan meningkat bila suhu dinaikan
(Anonim, 1986).
variasi kondisi yaitu suhu dan volume etanol 96% yang digunakan. Setiap kondisi
dilakukan replikasi sebanyak 2 kali. Variasi kondisi suhu dan volume etanol yang
Pemilihan variasi suhu saat ekstraksi yaitu 300C dan 500C bertujuan
untuk melihat pengaruhnya dalam level tinggi dan level rendah pada proses
dengan kadar steviosida yang optimum. Pemilihan suhu 500C dikarenakan pada
maserasi dalam penelitian ini dilakukan modifikasi maserasi yaitu secara digesti
yang merupakan metode maserasi dengan pemanasan pada range suhu 400C-500C,
dari situ maka dipilih suhu 500C sebagai level tinggi. Sedangkan pemilihan suhu
yaitu 300C adalah karena suhu tersebut dapat diasumsikan sebagai suhu kamar
kamar, dan dengan pemilihan suhu 300C maka akan memudahkan dalam
pengontrolannya.
34
ml begitu juga dengan variasi suhu, bertujuan untuk melihat pengaruhnya dalam
level tinggi dan level rendah pada proses ekstraksi steviosida yang diperlukan
steviosida pada proses maserasi dengan variasi suhu dan volume etanol 96%.
Selain itu dengan 20 ml etanol 96% dan adanya air 20 ml sudah cukup membuat
serbuk terendam, hal ini sesuai dengan prinsip maserasi yang berupa perendaman
serbuk dalam cairan penyari (Anonim, 1986). Sedangkan pemilihan level tinggi
sebanyak 2,5 kali dari volume etanol yang ditentukan sebelumnya dapat menyari
cairan penyari untuk menembus dinding sel dan masuk ke dalam rongga sel yang
mengandung zat aktif, zat aktif akan larut dan karena adanya perbedaan
konsentrasi antara zat aktif di dalam sel dan di luar sel maka larutan yang terpekat
antara larutan didalam dan diluar sel. Selain perendaman dilakukan juga proses
35
larutan diluar sel (Anonim, 1986). Setelah 6 jam maserasi dilakukan proses
cairan penyari yang sesuai sampai batas labu ukur yang mendekati. Maserat cair
tersebut kemudian dibiarkan selama beberapa waktu tertentu (±30 menit). Waktu
tersebut diperlukan untuk mengendapkan zat-zat yang tidak diperlukan tetapi ikut
Rf yang dihasilkan antara bercak sampel dan baku. Tujuan dilakukan KLT adalah
bercak dari titik awal penotolan bercak dengan jarak rambat/elusi fase gerak,
senyawa yang termasuk golongan terpen, gula (Stock, 1974). Pada penelitian
digunakan penyangga logam dengan tujuan agar lempeng KLT tersebut tahan
dahulu selama ± 1-3 jam pada suhu 1000C, hal ini bertujuan untuk mengaktifkan
penjerap pada lempeng KLT. Dilakukan pengaktifan menggunakan oven hal ini
36
karena dalam penjerap normal yang tidak diaktifkan, maka pada permukaan
lempeng penjerap diduduki oleh molekul air yang sangat polar dan membentuk
ikatan hidrogen. Molekul air tersebut harus dihilangkan dengan pemanasan agar
dengan fase gerak yaitu kloroform : metanol : Air (10 :15: 2 v/v) kemudian
dikembangkan hingga mencapai batas jarak elusi yang telah ditentukan yaitu
sebesar 15cm. Dengan jarak elusi tersebut maka zat steviosida yang terkandung
dalam sampel sudah dapat terpisah dan dapat dielusi. Penggunaan perbandingan
fase gerak tersebut karena sifat fase gerak yang polar yang sesuai dengan sifat
steviosida yang diteliti, sehingga dengan sistem tersebut sampel dapat terelusi.
Fase gerak yang digunakan harus mempunyai kepolaran yang relatif sama dengan
senyawa yang akan dipisahkan, tetapi memiliki sifat yang tidak saling campur
asam sulfat (c) dan dilakukan pemanasan pada lempeng hingga bercak muncul.
Bercak yang dihasilkan akhirnya berwarna hitam, hal ini karena steviosida yang
semprot dan juga dengan adanya pemanasan. Dengan pereaksi semprot iodium,
maka akan dihasilkan bercak berwarna cokelat yang menunjukan bahwa pada
37
senyawa organik mengandung atom O (Gritter, 1985). Warna bercak cokelat lama
untuk pereaksi semprot vanilin asam sulfat yang dilanjutkan dengan pemanasan
pengarangan menjadi karbon pada senyawa organik yang diuji (Gritter, 1985).
Selain itu penggunaan pereaksi semprot vanilin asam sulfat juga dapat digunakan
harga Rf nya. Dalam penelitian dihasilkan rata-rata harga Rf antara sampel dan
baku yang mendekati (Tabel III), maka dapat dipastikan bahwa dalam sampel
terkandung steviosida.
38
A B C D E F G H I J K L M N O
39
Kurva baku steviosida dibuat dengan cara menotolkan suatu deret kadar
steviosida baku (dalam µg) melalui deret jumlah totolan pada plat Silika gel 60
F254 dan dikembangkan dalam fase gerak kloroform : metanol : air (10:15:2v/v).
Kadar larutan induk dari baku steviosida yang digunakan sebesar 2,028 mg/ml.
Dari larutan induk tersebut dibuat seri kurva baku dengan menggunakan deret
jumlah totolan (Gritter, 1985), sehingga didapatkan seri baku sebesar 4,056 µg;
6,084 µg; 8,112 µg; 10,14 µg; 12,168 µg; dan 14,196 µg. Selanjutnya, dilakukan
Kemudian plat yang telah terdapat bercak baik dari sampel maupun baku discan,
melalui perhitungan luas bercak yang tergambar dalam luas bercak dibawah kurva
tampilan kromatogram baik sampel dan baku sebagai bercak yang jelas dan
memisah sehingga akan didapatkan tepi bercak yang lebih tegas (lampiran 10a).
kromatogram baik dari sampel maupun baku (lampiran 10b). Kemudian masing-
fasilitas binary (hasil pada lampiran 10b), kemudian dihitung luasnya dengan
membuat plot kurva dari setiap kromatogram. Plot kurva yang dihasilkan
kemudian diukur luasnya (sebagai nilai AUC atau sebagai nilai luas area dibawah
kurva). Pengukuran luas hanya dapat dilakukan pada plot kurva tertutup.
40
A B C D E F G H I J K L M N O
41
Tabel IV. Hubungan Jumlah Steviosida (µg) dengan AUC pada Seri Baku
Jumlah AUC Jumlah (µg)
Totolan
2 11,188 4,056
3 15,927 6,084
4 23,61 8,112
5 28,539 10,14
6 39,371 12,168
7 48,372 14,196
Y= 3,6796 x-5,7459
lebih besar dari harga rtabel. Harga rtabel dengan taraf kepercayaan 95%, df=4
adalah 0,811. Karena nilai r hitung > nilai r tabel, maka menunjukan bahwa ada
hubungan yang linear antara jumlah steviosida (µg) dan AUC yang dihasilkan.
42
Kromatografi Lapis Tipis dengan sistem KLT yang sama, sehingga antara totolan
sampel dari masing-masing kondisi dan setiap replikasi dan juga totolan seri baku
dibuat pada 1 lempeng KLT yang sama. Hal ini bertujuan agar saat dianalisis
dengan software Image J antara sampel dan seri baku mendapat perlakuan yang
didapatkan AUC sampel, maka untuk menentukan kadar sampel dilakukan dengan
memasukan nilai AUC sampel sebagai nilai Y ke dalam persamaan kurva baku
43
Pada kondisi volume etanol 96% 50 ml (level tinggi) dan suhu 500C (level
tinggi) dihasilkan rata-rata kadar steviosida yang paling besar, yaitu sebesar
7,9355 %b/b (Tabel V). Sedangkan pada kondisi lainnya dihasilkan kadar
steviosida yang lebih rendah. Hal ini dikarenakan sifat steviosida yang mudah
larut dalam etanol (Wallin, 2007). Etanol 96% yang menghasilkan kadar
steviosida paling besar adalah dengan volume paling tinggi (50 ml),hal ini dapat
disebabkan karena pada jumlah pelarut yang besar membuat proses penyarian
menjadi lebih efektif. Proses penyarian terkait dengan penembusan cairan penyari
melewati dinding sel dan masuk ke dalam rongga sel (Anonim, 1986). Peristiwa
kejenuhan sehingga senyawa yang dapat terekstrak akan menjadi semakin besar,
hal ini karena dengan jumlah penyari yang besar dapat menyediakan perbedaan
konsentrasi yang sebesar-besarnya antara larutan zat aktif di dalam sel dengan
yang diluar sel sehingga proses penyarian akan tetap berlangsung sampai terjadi
keseimbangan konsentrasi.
Selain itu juga dengan adanya suhu yang tinggi (500C) maka akan
44
Data kuantitatif yang diperoleh berupa kadar rata-rata sampel dari setiap
menggunakan desain faktorial dapat dilihat bahwa faktor B yaitu etanol 96%
memberikan pengaruh yang paling besar. Hal ini ditunjukkan pada nilai efek
faktor B bernilai positif dan nilainya paling besar bila dibandingkan nilai efek
faktor A (suhu) dan faktor AB (interaksi). Hal tersebut dapat dilihat dari tabel
dibawah ini (Tabel IX)yang menunjukan nilai efek dari masing-masing faktor.
Tabel VII. Nilai efek dari faktor suhu, etanol 96%, dan interaksinya
Efek Respon
Suhu 1,7509
Volume etanol 96% 8,6051
Interaksinya 1,6263
Hal ini berarti etanol 96% yang berperan sebagai cairan penyari
dalam sampel, hal ini dikarenakan sifat steviosida yang mudah larut dalam etanol
45
(Wallin, 2007). Dan dengan penggunaan etanol maka lebih baik kemampuannya
dalam mengisolasi steviosida dibanding dengan air (Jaroslav Pol. dkk, 2007).
Gambar 6a Gambar 6b
Gambar 6. Grafik hubungan suhu maserasi (a) dan volume Etanol 96%(b)
terhadap kadar Steviosida
Dari grafik hubungan antara suhu maserasi dan kadar steviosida diatas
(Gambar 6), maka didapatkan bahwa dengan semakin meningkatnya suhu pada
volume etanol 96% level rendah akan terjadi peningkatan kadar steviosida. Begitu
pula dengan semakin meningkatnya suhu pada volume etanol 96% level tinggi
akan terjadi peningkatan kadar steviosida. Sedangkan dari grafik hubungan antara
volume etanol dan kadar steviosida maka didapatkan bahwa dengan semakin
meningkatnya jumlah volume etanol 96% pada suhu maserasi level rendah akan
jumlah volume etanol 96% pada suhu maserasi level tinggi akan terjadi
peningkatan kadar steviosida. Pada grafik suhu maserasi dan kadar Steviosida
(Gambar. 6a) dan grafik volume Etanol 96% dan Kadar Steviosida (Gambar. 6b)
garis yang terbentuk tidak sejajar yang berarti terjadi interaksi antara suhu
46
maserasi dan volume etanol 96%, namun hal ini masih harus dibuktikan dengan
kemudian dibuat grafik Contour Plot. Dari grafik Contour plot yang didapat
kondisi optimum baik dari faktor suhu maupun faktor jumlah volume etanol 96%
Gambar 7. Grafik Contour Plot Daerah Optimum hubungan antara suhu dan
volume etanol 96%
kadar ini masuk dalam rentang kadar yang steviosida yang secara teoritis terdapat
dalam tanaman Stevia rebaudiana Bertoni. M. yaitu sebesar 3%-10% dari berat
47
etanol 96% memberikan pengaruh yang bermakna secara statistik dalam hal
hitung lebih besar dari F tabel. Harga F hitung volume etanol 96% lebih besar dari
F tabel (1,3) yaitu 10,128, oleh karena itu Hi2 statistik (lampiran 6) diterima
sehingga terbukti bahwa faktor volume etanol 96% memberikan perbedaan respon
kadar steviosida yang dihasilkan (tabel VIII). Artinya, perbedaan volume etanol
96% yang digunakan pada level rendah (20 ml) dan level tinggi (50 ml)
memberikan respon kadar steviosida yang berbeda. Volume etanol 96% yang
terekstraksi (gambar 6b). Harga F hitung dari faktor volume etanol 96% adalah
paling besar, hal ini menegaskan bahwa etanol 96% merupakan faktor yang
Tabel VIII. Hasil perhitungan Yate’s Treatment pada respon kadar steviosida
Total 7 40,97981
48
Sedangkan harga F hitung suhu dan interaksi lebih kecil dari F tabel (1,3)
yaitu 10,128, oleh karena itu H01 dan H03 statistik (lampiran 6) diterima sehingga
terbukti bahwa faktor suhu dan interaksi tidak memberikan perbedaan respon
49
BAB V
A. Kesimpulan
1. Perbedaan suhu dan jumlah volume pelarut etanol 96% yang digunakan
daun stevia dengan variasi suhu dan volume etanol 96% adalah berkisar
B. Saran
50
DAFTAR PUSTAKA
Anonim, 2004, Stevia; 0% Calorie, 100% Sweet, 100% Nature, 1-7, Source
Science Tech, Entrepreneur, Vol. 12/ No. 10
Backer, C.A, and Van de Brink, 1968, Flora of Java, Volume I&II, Wolters
Noordhff, N.N, Groningen, the Nedherlands
Brandle, J.E., dan Rosa, N. 1992. Heritability for yield, leaf:stem ratio and
stevioside concentration estimated from a landrace cultivar of Stevia
rebaudiana. Can. J. Plant Sci. 72: 1263-1266
Bolton, 1997, Pharmaceutical Statistic Practical and Clinical Aplications, 3rd Ed,
Marcel Dekker Inc., New York, p.611-614
51
Gardana, C., Simonetti, P., Canzi, E., Zanchi, R., Pietta, P., 2003, Metabolism of
Stevioside and Rebaudioside A from Stevia rebaudiana Extracts by Human
Microflora, http:/www.steviainfo.com/research_articles/Gardana , diakses
tanggal 6 Desember 2008.
Kumar J.K, N.W Megeji, Virendra Singh, V.K Kaul, P.S Ahuja, 2005,
Introducing Stevia rebaudiana; a Natural Zero-Calorie Sweeterner, Current
Science Vol. 88 No. 10, Institute of Himalayan Bioresource Technology, 1-
4, Palumpiur, India
Martono, Y., Kristopo, H., dan Sihasale, L.R., 2007, Recovery Produk Ekstrak
Steviosida sebagai Bahan Alternatif, Pengganti Gula dari Stevia rebaudiana
(Bert.), Laporan Penelitian, Fakultas Sains dan Matematika, Universitas
Satya Wacana, Salatiga
52
Midmore, D.J., and Rank, A.H.,2002, A New Rural Industry- Stevia to Replace
Imported Chemical Sweeterners, RIRDC Rural Industries Research &
Development Corporation
Moraes, Ĕlida de Paula., Machado, and Nádia Regina Camargo Fernandes, 2001,
Clarification of Stevia rebaudiana (Bert.) Bertoni extract by adsorption in
modified zeolites. Maringá, v. 23, n. 6, p. 1375-1380
Muth, J.E, 1999, Basic Statistic and Pharmaceutical Statistical Application, 265-
294, Marcel Dekker. Inc, All Right Revised, Madnison Avenue, New York
Nabors, Lyn’O Brien, and Robert C.Gelardi, 1986, Alternative Sweeteners, edited
by Abraham I. Bakal, 296-297, 302, Marcel Dekker. Inc, New York, USA
Pasquel, A., 2008, Extraction of Stevia Glycosides with CO2 + Water, CO2
+ Etanol, and CO2 + Water +Etanol, 1-15, Brazilian Journal of Chemical
Engineering, Brazil
53
Perret, .J, Berthon, .J, Moreno, .C, Tenin, .M, 2006, Frequently Asked Questions
and Answers (FAQs),
http://www.greensweet/stevia.com/publication/index.php?page=page&pere
=5 , diakses tanggal 28 Januari 2009
Pol,. Jaroslav, Elena Varadova Ostra, Pavel Karasek, Michal Roth, Karolinka
Benesova, Pavla Kotlarikova, and Josef Caslavsky, 2007, Comparison of
Two Different Solvents Employed for Pressurised Fluid Extraction of
Stevioside from Stevia rebaudiana : methanol versus water, Anal Bioanal
Chem, Czech Republic, 388: 1847-1857
Purves, W.K., 2006, How Can an Artificial Sweeterner Contain No Calorie?,
http://www.sciam.com/artikel.csm?id=how-can-an-artificial-swe, diakses
tanggal 28 Januari 2009
Silva, Flavia Ficira. dkk., 2007, Purification Process of Stevioside Using Zeolites
and Membranes, 1-7, International Journal of Chemical Reactor
Engineering, Vol 5 Article A40
Stock, R., and C.B.F. Rice, 1974, Chromatographic Methods, Third Edition, 283,
Chapman and Hall and Science Paper Backs, Great, Britain
Trease, William, and Charles Evan’s, 2002, Pharmacognosy 15th edition, 92,
W.B. Saunders, Nottingham, UK
Tyler, Varro E., Lynn R. Brady, and James E. Robbers, 1988, Pharmacognosy 9th
edition, Lea & Febiger, Philadelphia
54
Wagner H., S. Bladt, and E.M. Zgainski, 1984, Plant Drug Analysis; Thin Layer
Cromatography Atlas, diterjemahkan oleh Th. A. Scott, 125,304, Springer-
Verlag, New York.
55
LAMPIRAN DATA
56
= 10,14 mg add 5 ml
2 11,188 4,056
3 15,927 6,084
4 23,61 8,112
5 28,539 10,14
6 39,371 12,168
7 48,372 14,196
A= -5,7459
B= 3,6796
r = 0,9911
Y= 3,6796 X-5,7459
57
1. Data Sampel
Replikasi Air Suhu Etanol AUC Kadar (µg/3µl) Kadar Sampel Rata-rata
Sampel (mg/vol kadar
ekstrak) sampel(mg/4
gram serbuk)
58
23,5329 = 3,6796 x
x = 6,395504946 µg/3µl
25,1709 = 3,6796 x
x = 6,840662028 µg/3µl
59
26,5889 = 3,6796 x
x = 7,226030003 µg/3µl
b. Replikasi 2 (AUC=17,468)
- Jumlah steviosida dalam sampel
Y = 3,6796 x-5,7459
23,2139 = 3,6796 x
x = 6,30881074 µg/3µl
60
28,3739 = 3,6796 x
x = 7,71113708µg/3µl
26,7929 = 3,6796 x
x = 7,281470812 µg/3µl
61
38,0769 = 3,6796 x
x = 10,34810849 µg/3µl
32,0019 = 3,6796 x
x = 8,697113817µg/3µl
62
63
(1) - - + 2,7575
a + - - 2,8198
b - + - 6,2469
ab + + + 7,9355
Efek Etanol =
Efek Suhu =
Efek Interaksi =
64
b12 = 2,7105x10-3
1,0219 = -20 b1
b1 = -0,0511
65
-1,0499 = -30 b2
b2 = 0,0349
2,7575 = b0 + 0,7913
b0 = 1,9662
66
67
68
= 40,97981
= 0,465806
= 39,87911
= 0,634895
= 1,53265
69
= 37,02387
Source of Degrees of F
variation freedom Sum of Squares Mean Squares
Experimental
error 3 0,634895 0,211632
Total 7 40,97981
Hipotesis Statistik:
H01 = kadar steviosida pada suhu level tinggi tidak berbeda dengan suhu level
rendah.
Hi1= kadar steviosida pada suhu level tinggi berbeda dengan suhu level rendah.
H02 = kadar steviosida pada volume etanol 96% level tinggi tidak berbeda dengan
Hi2= kadar steviosida pada volume etanol 96% level tinggi berbeda dengan
70
H03 = kadar steviosida pada suhu level tinggi dan volume etanol 96% level tinggi
dan rendah tidak berbeda dengan respon kadar steviosida pada suhu level rendah
Hi3 = kadar steviosida pada suhu level tinggi dan volume etanol 96% level tinggi
dan rendah berbeda dengan respon kadar steviosida pada suhu level rendah dan
71
72
Pereaksi Semprot
a. Larutan Iodium
73
74
75
78
a. Hasil scan gambar kromatogram dari sampel maupun baku di atur dalam
b. Membuka program Adobe Photoshop, lalu buka file yang telah disimpan
pada (a) (Open > File). Gambar kromatogram tersebut dihitamkan dengan
menggunakan fasilitas Magic Wand Tool dan Paint Bucket Tool. Dengan
c. File yang telah disimpan pada (4) dibuka pada Image j (Open > File)
g. Setelah itu dibuat kurva kalibrasi dengan unit Gray value (Analyze >
79
kromatogram dan pemberian nomer (Analyze > Gels > Select First Lane),
penomeran selanjutnya (Analyze > Gels > Select Next Lane). Lalu pilih
80
BIOGRAFI PENULIS
Diana Erosita Pramesthi, lahir di Cirebon pada hari Selasa pon tanggal 22 Maret 1987,
merupakan anak sulung dari pasangan Anton Budiono dan Helena Usiati, memiliki 2 orang Adik
laki-laki bernama Daniel Ugik Permana dan David Irwan Prabowo. Pernah menempuh
pendidikan di TK Santa Maria Cirebon tahun ajaran 1990/1991 hingga 1992/1993, SD Santa
Maria Cirebon tahun ajaran 1993/1994 hingga 1998/1999, kemudian melanjutkan pendidikan di
SLTP Santa Maria Cirebon tahun ajaran 1999/2000 hingga 2001/2002, selanjutnya melanjutkan
pendidikan di SMA Santa Maria I pada tahun ajaran 2002/2003 hingga 2004/2005. Setamat dari
SMA, penulis memilih untuk melanjutkan pendidikannya di Fakultas Farmasi Universitas
Sanata Dharma Yogyakarta. Selama jadi mahasiswa, penulis aktif mengikuti berbagai kegiatan
kemahasiswaan, diantaranya menjadi panitia Donor Darah JMKI (2006), panitia Sumpahan
Apoteker (2007), panitia Dies Natalis (2007). Selain itu penulis juga pernah menjadi asisten
Praktikum Botani Dasar (2007) dan asisten Praktikum Farmakologi (2007).