METODE PEMISAHAN

BAHAN ALAM
 Pendahuluan
Silabus UAS :
1.Pendahuluan (Ruang lingkup metode
pemisahan bahan alam, pengertian)
2.Uji Kemurnian Isolat
3.Karakterisasi Isolat
4.Identifikasi Senyawa dengan Spektrum
5.Identifikasi senyawa dengan MS dan NMR
 Referensi
1. Fransworth,N.R., (1966), Biological and
Phytochemical Screening of Plants, J. Pharm.
Sci.55
2. Schriner, The Systematic Identification of
Organic Compounds, John Willey&Sons Inc.
3. Gritter, R.J., Schwarting, A.E., (1991), Pengantar
Kromatografi, PenerbitITB, Bandung
4. Harbone, J.B., (1987),Metode Fitokimia,
Penerbit ITB, Bandung
 Pengertian
• Ilmu Pemisahan (Separation Science) :
Ilmu yang mempelajari gejala fisika dan kimia
yang terlibat dlm proses atau pencapaian
pemisahan, pengembangan dan penggunaan
berbagai proses pemisahan.
 Tujuan MK Metode Pemisahan
• Mahasiswa memahami teknik isolasi senyawa
bahan alam
• Mahasiswa memahami prinsip dan
melakukan berbagai tekhnik pemisahan bahan
alam, yang meliputi ekstraksi, fraksinasi dan
identifikasi
 Ruang lingkup
Diperlukan:
• Metode pemisahan
• Pemurnian
• Identifikasi kandungan senyawa yang terdapat
dalam tumbuhan
 Kandungan kimia Tumbuhan
Kandungan kimia tumbuhan dapat
digolongkan menurut beberapa cara, yaitu
berdasarkan:
- Asal biosintesis
- Sifat kelarutan
- Gugus fungsi kunci tertentu
 Sistem pemisahan
Proses Fase 1 Fase 2
Kromatografi Fase diam Fase gerak

Ekstraksi Rafinat (pelarut yang Ekstraktan (pelarut untuk

mengandung zat) mengekstraksi)

Dialisis Retentat (yg tertahan di Difusat (yg keluar tabung –

tabung – BM besar) BM kecil)

Hukum Partisi Nernst

Ketika sistem pemisahan mencapai kesetimbangan, maka rasio
konsentrasi setiap komponen dalam 2 fase akan tetap,
dinyatakan sebagai tetapan kesetimbangan  Koefisien partisi
atau Koefisien Distribusi
Kp (A) = KD(A) = CA rafinat/CA ekstraktan
 Penggolongan Metode Pemisahan

1. Berdasarkan wujud fase

Fase 1 Fase 2 Contoh

Gas Cair Krom. gas-cair
Padat Krom. Gas-padat
Padat Cair Leaching
Gas Sublimasi
Cair Cair ECC, krom. Cair-cair
Padat Krom. Cair-padat
Gas Destilasi
 Penggolongan Metode Pemisahan

2.Berdasarkan asal fase 2

a. Ditambahkan (fase 2 bukan mrpkn perubahan
bentuk fase 1)  ECC, Kromatografi, Dialisis
b. Terbentuk (fase 2 mrpkn perubahan bentuk fase
1) destilasi, pengendapan, penghabluran

3. Berdasarkan lama kontak

a. sinambung  kromatografi, ECC Craig
b. bertahap  ECC corong pisah

4. Berdasarkan arah fase berkontak

a. Cross current (lintas arus)  ECC corong pisah
b. Counter current (lawan arus) ECC craig
 Penggolongan Metode Pemisahan

5. Berdasarkan proses
a.Proses Kimia : Pengendapan, kromatografi
penukar ion
b.Proses Fisika : sublimasi, kromatrografi cair-
cair, gas-padat, gas-cair, ECC
c.Proses mekanis : sentrifugasi, filtrasi,
pengayakan

6. Berdasarkan gaya dorong pada pemisahan

a.Kesetimbangan : Kromatografi, ECC, Destilasi,
Sublimasi, Pengendapan
b. Kinetika : dialysis, sentrifugasi
 Bagan Metode Pemisahan Senyawa Bahan Alam

Simplisia
Ekstraksi dengan pelarut ,misalnya pelarut universal etanol
Ekstrak cair
dipekatkan
Ekstrak pekat

+ MeOH 20%
ECC dengan pelarut non polar

Fraksi polar Fraksi non polar

ECC dengan pelarut semi polar dipekatkan

Fraksi non polar pekat
Fraksi polar Fraksi semi polar
dipekatkan dipekatkan
Fraksi polar pekat Fraksi semi polar

Pemantauan dengan KLT/KKt, dilihat dengan penampak bercak spesifik

 Bagan Metode Pemisahan Senyawa Bahan Alam
Fraksi yang mengandung senyawa yang
dicari

Fraksinasi lanjut dengan KCV atau Kromatografi Kolom

Sub fraksi 1, 2, 3, …, 13
Pemantauan dengan KLT, fase diam silika gel GF254 pra salut, dengan pengembang dan penampak bercak tertentu
Jika diperlukan dilakukan Fraksinasi lanjutan dengan kromatografi kolom klasik

Sub fraksi 1, 2, 3, …, 18

Pemurnian subfraksi tertentu yang mengandung senyawa yang dimaksud

Uji kemurnian dengan KLT pengembangan tunggal dengan tiga macam pengembang yang berbeda dan KLT dua dimensi

Isolat murni
Identifikasi dengan
Spektrofotometri UV-sinar tampak
dan Spektrofotometri inframerah

Isolat teridentifikasi
 Langkah-langkah Penentuan Struktur (Identifikasi)
ISOLAT

Uji Kemurnian ISOLAT MURNI Metode Pemisahan

SUSUNAN KIMIA
Analisa Unsur
(RUMUS EMPIRIS)

Bobot Molekul RUMUS MOLEKUL MS Resolusi Tinggi

KESETARAAN IKATAN Sp.UV
Penentuan Gugus RANGKAP Sp.IR
Fungsi GUGUS FUNGSI Sp. NMR
Sp. Massa
Penentuan Golongan
KERANGKA STRUKTUR CAD (Computer Aided
Kerangka Molekul
Damplication)
Dereplikasi Sintesis STRUKTUR MOLEKUL

Penentuan elemen kimia KONFIGURASI MOLEKUL HNMR, CNMR, NMR

Stereokimia -Nisbi (relatif) 2D
Absolut)

STRUKTUR MOLEKUL LENGKAP