Departamento de Ciencias de la Vida y la Agricultura

Ingeniería en Biotecnología

Diseño de procesos: Anticuerpos

monoclonales
Integrantes: : Almeida Susana, Briceño Josselyne,
Lee Sun, Palacios Geovanny,
Octubre 2018 – Febrero 2019
Saraguro Francisco
 OBJETIVOS

General
Conocer y comprender sobre el proceso industrial de obtención de anticuerpos monoclonales (Mab)y las
incertidumbres que influyen en este.

Específicos
• Conocer el modelo de proceso típico para la elaboración de anticuerpos monoclonales
• Realizar el análisis de la materia prima utilizada en la producción de Mabs, para conocer las
necesidades en el proceso de estandarización del proceso.
• Realizar una evaluación económica sobre los costos de producción de Mabs con el fin de conocer una
aproximación de la ganancia neta frente a la venta del producto.
• Utilizar el modelo de producción de Mab como base para las simulaciones Monte Carlo, tomando en
cuenta 5 parámetros diferentes.
• Identificar el impacto de los factores identificados en las simulaciones de Monte Carlo sobre el precio
de producción unitaria.
• Determinar el impacto del estudio de los índices de la evaluación ambiental.
• Conocer los prametros específicos, por el análisis de incertidumbre.
 INTRODUCCIÓN

Un tumor de células plasmáticas, como la

mayoría de los tumores de origen celular es
monoclonal y, por tanto, produce anticuerpos de
una sola especificidad.

es posible producir anticuerpos monoclonales

similares de cualquier especificidad deseada
inmortalizando células secretoras de anticuerpos
individuales a partir de un animal inmunizado
con un antígeno conocido.

Se espera que la cantidad de Mabs terapéuticos

en producción aumente en los próximos años y
que represente un segmento importante de
productos biofarmacéuticos.

Para superar las limitaciones se construirán

nuevas plantas y se optimizarán las
instalaciones existentes para aumentar la
producción.
 Aplicaciones

• Reconocimiento de poblaciones celulares individuales.

• Inmunodiagnóstico por la detección de antígenos o
anticuerpos particulares en sangre, orina o tejidos.
• Determinar el origen tisular de los tumores.
• Tratamiento
• Análisis funcional de la superficie celular y de las
moléculas secretadas.
Modelo de Proceso

• Se inicia con la preparación del inóculo, el método de

elección son las técnicas de cultivo de células animales. Es
necesario un tren de semillas.

• El tren de semillas incluye los matraces T-1,

• la botella de rodillos P-2,

• el biorreactor de bolsa P-3 (5 L),

• el biorreactor de bolsa de 40 L P-4,

• el primer biorreactor de semilla P-5.,

• y como último paso el segundo reactor de siembra P-10 (2

m3).

• El volumen aumenta en un factor 7.5 en cada paso y el tren

de semillas completo toma 24 días
• Las células se cultivan primero en un medio que
contiene suero. En el segundo reactor de siembra,
se adaptan a un medio sin suero. El medio para los
dos reactores de siembra se prepara en los tanques
P-6 y P-11, respectivamente, y se esteriliza por
filtración (P-7, P-12).

• La fermentación se realiza como un lote

alimentado. Se Usa fermentadores con un volumen
de trabajo de 15 m3, funcionaban en modo
escalonado. Se espera que el 5% de los lotes falle.

• Durante un período de 14 días, los componentes del

medio se convierten en biomasa (11 g / L), dióxido
de carbono, anticuerpos monoclonales (1 g / L) y
varios componentes orgánicos (proteínas, péptidos,
ácidos orgánicos y otros) que son descrito como
'impurezas' (1 g / L).
• la biomasa se separa mediante centrifugación (P-31) y los restos celulares
restantes en el filtro de profundidad (pulido) P-32. La solución del
producto se almacena en el tanque P-33.
• El siguiente paso en la purificación generalmente se lleva a cabo en varios
pasos de cromatografía. La cromatografía tiene cierta sensibilidad para la
fuerza iónica, la concentración de sal y el pH de la alimentación. En el
modelo, la solución del producto se pasa primero a través de una columna
de cromatografía de proteína A (P-40)
• El Mab se retiene, luego la columna se lava y el producto se
eluye con un tampón de citrato de sodio. La concentración del
producto aumenta en un factor de 7.5 en este paso. Se
necesitan cuatro ciclos para procesar la solución del producto
de una fermentación de un lote alimentado.
• El eluyente se filtra en P-41 y se almacena en el tanque P-42.
Allí, se agrega ácido acético (S-164) y la solución se mantiene
durante 1,5 h para desactivar los posibles contaminantes
virales
• En el siguiente paso, la solución se procesa a través de
cromatografía de intercambio iónico P-50. Después de la
carga, la columna se lava con una solución tampón y el Mab se
eluye con un gradiente de elución (concentración de cloruro de
sodio).
• El HIC se utiliza para eliminar la proteína A que
podría ser lixiviada de la columna de proteína A,
así como los agregados de anticuerpos y el ADN.

• .En el tanque P-52, se agrega sulfato de amonio para aumentar

• El Mab se retiene en la columna, luego se eluye y
la fuerza iónica de la solución. Cómo se varía exactamente la se filtra en P-62. Los residuos líquidos se
fuerza iónica antes de que la cromatografía de interacción neutralizan en P-61 (HCl).
hidrófoba (HIC) dependa del tipo de Mab producido.
• el volumen de la solución del producto se reduce por diafiltración en P-71, donde
el producto se transfiere a solución salina tamponada con fosfato (PBS).

• Se agrega glicina para estabilizar el producto (S-194). Después de una filtración

de pulido final (P-72), el producto se enfría antes de la formulación final y el
empaque (P-73). En el procesamiento posterior, se asumió un rendimiento del
90% en cada paso para la centrifugación y los tres pasos de cromatografía.
Análisis de inventario
41 días de inventario, 14 días de
fermentación y 1,5 días adicionales
entre lotes consecutivos

La producción anual de anticuerpos

monoclonales es de 307 Kg producidos
en 34 lotes y rendimientode 63%

El análisis global muestra el uso de 14

800 Kg de materia prima por Kg de
producto final

Se consideran los procesos de preparación, fermentación/ biorreacción

del inóculo, procesos de limpieza en el lugar, inactivación viral,
componentes usados en los buffer, y las fuentes energéticas.
Materia prima Uso
Medios con y sin sueros Proceso de fermentación: preparación del inóculo

Cloruro de sodio Diferentes tampones para las etapas de cromatografía y

diafiltración.
Hidróxido de sodio Procedimientos de limpieza en el lugar y para la regeneración
de las columnas de cromatografía de intercambio iónico y
cromatografía de interacción hidrófoba.

Cloruro de hidrógeno Neutralizar las corrientes de desechos que contienen

concentraciones más altas de naoh y procesos de limpieza

Sulfato de amonio Antes de la cromatografía de interacción hidrófoba para

aumentar la fuerza iónica de la solución del producto.

Ácido acético Inactivación viral.

Otros compuestos Parte de los tampones utilizados en las etapas de
cromatografía y diafiltración.
 Evaluación económica
Se debe considerar el costo total del proceso, para lo cual se realiza
el análisis global de inversión
Los costos Consumibles
operativos anuales Costo de la Costo de la mano • Resina de Proteína A
materia prima de obra • resina de las
son de son de $44 cromatografías
millones

El costo total del

equipo (CEC) Biorreactores de Reactores de
Centrífuga
comprado es de producción semilla
$9.3 millones.

Una inversión de
capital de $ 133 Costos operativos Tratamiento de
millones anuales, costos residuos, servicios
(biorreactor de 30 totales de equipos públicos
m3)
Cálculo de ganancias

Sobre la base de una producción anual de 307 kg, el costo unitario de producción en el modelo es de $ 143 por
gramo de anticuerpo monoclonal producido

Se supone que el precio de venta es de $ 800 por gramo

El precio real depende en gran medida del anticuerpo monoclonal específico y del tipo de aplicación para el que
se destina.

Se puede calcular un precio promedio para anticuerpos monoclonales de $4500 por gramo
Cálculo de ganancias

El análisis realizado no considera: formulación final, el empaque, costos adicionales de comercialización,

transporte del producto, ni los costos iniciales de inversión y desarrollo

El análisis supone un precio de venta relativamente bajo y esto da como resultado ingresos anuales de $246
millones, lo que lleva a una ganancia bruta de $202 millones por año.

Considera un impuesto sobre la renta asumido del 35% y una depreciación de $ 12 millones

La ganancia neta es de $143 millones y el retorno de la inversión es del 108% indica que el tiempo de
recuperación de la inversión es de 1 año
 Evaluación Ambiental

Ambientalmente relevantes debido a su

NaOH y HCl dominan
toxicidad aguda (por ejemplo, puede
el lado de entrada.
causar quemaduras químicas severas).

Se basa en gas / petróleo

(disponibilidad de MP)
(NH4)2SO4 se usa
antes del paso HIC
Alto contenido de nitrógeno
(eutrofización).

Demás componentes tienen una pequeña IE, en el lado de

salida, la biomasa producida y el fosfato de sodio utilizado en
los tampones y el “resto" incluye componentes de medio no
EIin = 43 IP / kg P, EIout = 7 IP / kg P.
utilizados, dióxido de carbono, subproductos orgánicos,
pérdida de producto y sales inorgánicas.
La entrada es más relevante que la salida, por el
NaOH y HCl que se neutralizan en sales dañinas
(principalmente NaCl) en la salida
 Análisis de incertidumbre
Se examinan configuraciones de proceso alternativas
Hay una serie de configuraciones de proceso diferentes, que
Conduce a una mejor comprensión del proceso.
incluyen cambios
Para apreciar los riesgos y las necesidades, se
• En el diagrama de flujo del proceso
necesita una comprensión más profunda de
• En el número o tamaño de las unidades.
cómo los parámetros de diseño y operación
impactan los resultados.
Como ejemplo, se modelan escenarios que consideran pasos
• Se examinan configuraciones de proceso de cromatografía alternativos.
alternativas en un análisis de escenario.
• El impacto de los parámetros técnicos y de
mercado clave se evalúan en un análisis de
sensibilidad.
• La incertidumbre general se cuantifica en
varias simulaciones de Monte Carlo.
 Análisis de sensibilidad

Tiempo de fermentación y la concentración del

producto son los parámetros de fermentación más
importantes.
En el caso base, se supone un tiempo de fermentación
de 14 días, que entra en el rango de 8-20 días
Los costos de inversión específicos, UPC e ingresos
anuales varían. Muestran una dependencia más o
menos lineal del tiempo de fermentación.

Los demás parámetros, especialmente la

concentración del producto, se mantienen constantes
La duración de la fermentación no influye en el costo
total de la inversión ni en el impacto ambiental,
El tiempo de fermentación define el número de lotes
por año y, en consecuencia, la cantidad anual de
producto.
• La cantidad anual de producto entre 362 kg (8 días)
y 226 kg (20 días)
• Genera ingresos anuales de $ 290 millones y $ 181
millones.
• La UPC aumenta de $ 126 / g (8 días) a $ 181 / g (20
días) principalmente porque el costo (inversión)
constante
 la concentración del producto varía entre 0.5 y 3 g / L
Por lo tanto, el costo dependiente específico de la instalación
y, en menor medida, el costo laboral específico, disminuyen al
aumentar la concentración de Mab, lo que provoca la forma
exponencial de la curva UPC. El ROI sigue siendo claramente
positivo para todos los casos. Incluso a una concentración de
0,5 g / l, el retorno de la inversión sigue siendo del 51%.
Producción de IE sigue siendo pequeño.
Estos resultados indican que las mejoras del
proceso deben dirigirse para alcanzar una
concentración de producto de alrededor de 2 g /
L. A concentraciones más altas, solo se pueden
esperar mejoras significativas si la concentración
más alta conduce a una simplificación de la
sección de separación y purificación.
Simulaciones de Monte Carlo para diferentes parámetros
Variables y funciones objetivo

Uno de los problemas específicos

del proceso de cultivo celular es la
variabilidad asociada tanto con la
biología como con el proceso en sí

Utilizar el modelo de producción

como base para una MCS,
permite explorar cómo la varianza
se propaga a través de todo el
proceso impactando a los
resultados económicos y
ambientales.

Parámetros de biorreacción
Variables y funciones objetivo

Distribuciones de probabilidad se
derivan:
 Proceso disponible y datos
estadísticos
 Información del proveedor
 Opiniones de expertos
 Estimaciones internas

Parámetro de fermentación típico

Dominan costos de materia prima y

servicios públicos, respectivamente

Parámetro de mercado (varía

mucho)
Resultados
Cinco conjuntos diferentes de parámetros

Simulación de Monte Carlo con parámetros técnicos (MCS-TP)

Simulación de Monte Carlo con parámetros de la cadena de suministro y del mercado (MCS-SCMP)
Simulación de Monte Carlo con parámetros que afectan a las secciones upstream y de fermentación (MCS-FP)
Simulación de Monte Carlo con parámetros que afectan a las secciones downstream (MCS-DSP)
Simulación de Monte Carlo utilizando todos los parámetros (MCS-AP)

Eligieron 10 000 intentos, con esto el error estándar

promedio se mantiene por debajo del 1% para todas las
funciones objetivo

Precio de venta desempeña un papel dominante y

aumenta sustancialmente la variabilidad

Todas las funciones objetivas muestran una variabilidad

relativamente alta, esto se debe a la amplia gama de
valores (distribuciones de probabilidad) que se definieron
Cantidad anual de producto
Se discute primero porque influye en todas las demás funciones objetivas

Parámetros que contribuyen a la variación de la cantidad anual

de producto
Define el número de lotes por año
y, de esta manera, la cantidad
anual de producto y los
rendimientos de los pasos de
cromatografía.

Parámetro mas importante, define

la cantidad total por lote. Se
amplifica por el amplio rango de
posibles concentraciones definidas
para este parámetro
Cantidad anual de producto
Comparación de los resultados de las Simulaciones
Monte Carlo

Resulta en una mayor pérdida

de producto y una menor
producción anual.

Concentración de Mab domina

la variación, resultando en una
media real diferente del valor
del caso base, lo que lleva a
más producto por lote.

Estos efectos casi se

compensan entre sí. La media
y la mediana son solo
ligeramente más altas que en
el caso base.
Costo unitario de producción (UPC)

Medida clave de la
economía

Valores desde
103 hasta 213 $/g

Alta variabilidad
 Ganancia bruta, ganancia neta y retorno de inversión

Variabilidad similar los parámetros que

los afectan

Un parámetro importante es precio

final de venta

El parámetro más importante es la

concentración de Mab

Retorno de inversión sobre 58%, con

ganancia neta sobre $80 mill
 Conclusiones

• La estructura del modelo de proceso general estudiado suele ser muy similar para la mayoría de los Mabs, y el diagrama de flujo de proceso
que se presenta aquí debería proporcionar una representación realista de los procesos de Mab.
• El análisis del inventario permite conocer qué cantidad de materia prima es necesaria para el proceso de producción de Mabs, a más de la
estandarización del proceso conociendo el destino de cada uno de los componentes, permite realizar un análisis de residuos y reutilización
de componentes, y determinar que el resultado de la producción anual de anticuerpos monoclonales es de 307 Kg producidos en 34 lotes y un
uso de 4560 toneladas de materia prima por año, equivalente al 14 800 Kg por Kg de producto final.
• La evaluación económica sobre los costos de producción de Mabs ayuda a desglosar el valor de inversión de cada proceso que interviene en
la producción y en función al análisis sobre el precio de venta por gramo de Mabs y la base de una producción anual de 307 kg, el resultado
del análisis arroja que el costo unitario de producción en el modelo es de $ 143 por gramo de anticuerpo monoclonal producido. De esta
manera, se puede conocer el valor de la ganancia neta y el tiempo de retorno de la inversión son: $ 143 millones y tiempo de 1 año.
• El uso del modelo de producción de Mab como base para una simulación de Monte Carlo (MCS), permite explorar cómo la varianza se
propaga a través de todo el proceso impactando a los resultados económicos y ambientales.
• La simulación de Monte Carlo utilizando los parámetros de cadena de suministro y mercado muestra una tendencia similar a las otras
simulaciones, siendo la concentración de Mab el parámetro que más afecta sobre el costo unitario de producción.
• La evaluación Ambienal.ha permitido evaluar tanto ates como luego las condiciones del selo y determinar si ser se entrega.
• El análisis de incertidumbre, permite una mejor comprensión del proceso, para apreciar los riegos y las necesidades, se necesita