UNIVERSIDAD AGRARIA DEL ECUADOR

FACULTAD DE CIENCIAS AGRARIAS

Período 2018 – 2019: Ciclo II

Guía de laboratorio
Enzimología
Tercer Semestre A, B
Docente: Luis Zuñiga

Práctica Nº2

Tema: Funcionamiento de la catalasa en tejidos vegetales

Objetivos:

 Demostrar la actividad de la enzima catalasa presente en la papa, espinaca y zanahoria

 Demostrar como diversos factores del medio pueden inactivar su función

Introducción:

La catalasa es una enzima que se encuentra en las células de los tejidos animales y vegetales.
La función de esta enzima en los tejidos es necesaria porque durante el metabolismo celular,
se forma una molécula tóxica que es el peróxido de hidrógeno, H2O2 (agua oxigenada).
Esta enzima, la catalasa, lo descompone en agua y oxígeno, por lo que se soluciona el
problema.
La catalasa es una enzima antioxidante presente en la mayoría de los organismos aerobios.
Cataliza la dismutación del peróxido de hidrógeno (H2O2) en agua y oxígeno. La mayoría de
estas enzimas son homotetrámeros con un grupo Hemo en cada subunidad. Se ha
determinado la estructura cristalográfica de nueve catalasas. Algunas catalasas tienen
subunidades pequeñas (masa molecular = 60KDa) y otras grandes (Masa moléculas >80 KDa).
Entre éstos dos grupos de catalasas existen diferencias estructurales importantes. Las
catalasas pequeñas son menos resistentes a la desnaturalización, unen NADPH, tienen hemo b
y se inhiben e inactivan por sustrato. En cambio, las catalasas grandes tienen un dominio extra
en el C- terminal que es semejante a la flavodoxina, son muy resistentes a la desnaturalización,
tienen hemo d, presentan enlaces covalentes inusuales cercanos al sitio activo y son
resistentes a concentraciones molares de H2O2.En algunas especies de enzimas se contiene
moléculas nicotinamín adenín dinucleótido fosfatado en su forma reducida (NADPH) ligadas
estrechamente a la enzima, así se ha demostrado que la CAT humana entre algunas y la de res
están ligadas a moléculas de NADPH, 1 en cada subunidad y que no existe interacción directa
entre el grupo hemo y NADPH.
Materiales:

Peróxido de hidrógeno

Papa

Limón

Pipeta

Mortero

Tubos de ensayo

Vaso de precipitado

Termómetro

Procedimiento:

1. Colocar en el vaso de precipitado un pedazo de papa, zanahoria y espinaca de forma

separada

1. Colocar unas gotas de peróxido de hidrógeno a cada muestra

2. Anotar los resultados

2. Cortar la papa en pedazos pequeños para que puedan ser introducidos en tubos de ensayo

1. Rotular cinco tubos de ensayo del 1 al 5

2. Añadir pedazos de papa a cada tubo. 

3. Mantener los tubos a las siguientes temperaturas: 

Tubo 1 = 80 °C por 15 minutos

Tubo 2 = 37 °C por 15 minutos

Tubo 3 = Temperatura ambiente
Tubo 4 = En el congelador por 15 minutos
4. Al tubo 5 añadir zumo de limón hasta cubrir la muestra, esperar 15 minutos
5. Añadir 2 ml de peróxido de hidrógeno a cada tubo
6. Medir el tiempo aproximado transcurrido desde que se añadió el peróxido hasta que
comienza a producir burbujas, y anotar.

Bibliografía

 Acuña, F. 2006. Química orgánica. EUNED. Costa Rica. 312.

 Brown, T., Bursten, B. y LeMay, H.2004. Química.La ciencia central. Pearson.
México. 559-560