Anda di halaman 1dari 14

Benih, yang berisi embrio, adalah entitas utama reproduksi di angiosperma.

Pada tumbuhan
berbunga, seperti pada eukariota lainnya, embrio berkembang dari zigot dibentuk oleh fusi
gamet. Banyak spesies tanaman telah berevolusi dari embriogenesis aseksual untuk mengatasi
berbagai faktor lingkungan dan genetik yang mencegah terjadinya pembuahan (Sharma &
Thorpe, 1995; Raghavan, 1997). Embryogenesis somatik (SE), berasal dari (mikrospora) sel
somatik atau gamet yang terbentuk bukan dari persilangan, merupakan salah satu bentuk
reproduksi aseksual. Proses ini terjadi baik secara alami atau in vitro. Induksi eksperimental
(Dodemam et al., 1997) dan merupakan fenomena yang luar biasa unik untuk tanaman. Proses
ini layak karena tanaman memiliki totipotency seluler, dimana sel-sel somatik individu dapat
beregenerasi menjadi tanaman utuh (Reinert, 1959). SE telah diamati pada kultur jaringan dari
beberapa spesies angiosperma dan gymnosperm tanaman, dan melibatkan serangkaian perubahan
morfologi yang mirip, dalam beberapa aspek, untuk yang berhubungan dengan perkembangan
embrio zigotik. Kedelai ( Glycine max ( L.) Merrill), bagian histologis struktur embriogenik
dapat perkembangan embrio zigotik. Kedelai ( Glycine max ( L.) Merrill), bagian histologis
struktur embriogenik dapat ditemukan dalam beberapa laporan (Barwale et al, 1986;. Finer &
McMullen, 1991; Cium et al, 1991;. Liu et al, 1992;.. Sato et al, 1993). Sebuah karakterisasi
tahap perkembangan kedelai embrio somatik dilakukan oleh Christou & Yang (1989), Fernando
et al. (2002), Rodrigues et al. (2005), dan Santos et al. (2006). Pro-embrio, globular, berbentuk
hati, torpedo dan tahap embrio kotiledon ditemukan, sangat mirip ontogeni embrio zigotik.
Namun, tidak adanya suspensor karakteristik, serta keterlambatan dalam pembentukan organisasi
dalam adalah perbedaan utama antara zigotik dan proses embriogenik somatik (Santos et al.,
2006).
2. Kedelai proses embriogenik somatik
Secara umum, in vitro kedelai proses embriogenik somatik dapat dibagi menjadi fase yang
berbeda: induksi, Secara umum, in vitro kedelai proses embriogenik somatik dapat dibagi
menjadi fase yang berbeda: induksi, Secara umum, in vitro kedelai proses embriogenik somatik
dapat dibagi menjadi fase yang berbeda: induksi, proliferasi, histodifferentiation, pematangan,
perkecambahan dan konversi ke tanaman.
2.1 somatik embrio induksi
Menurut Sharp et al. (1982), induksi embriogenesis somatik (Gbr. 1 A1, B1, C1) dapat
dianggap sebagai penghentian pola ekspresi gen yang ada di eksplan jaringan, dan
penggantiannya untuk program ekspresi gen embriogenik dalam sel - sel tersebut jaringan
eksplan yang akan menimbulkan embrio somatik. Para penulis ini menggunakan istilah ini
"Induced embryogenic ditentukan cell" (IEDC) untuk menggambarkan sel embriogenik yang
dimilikinya berasal dari sel non-embriogenik. Sel-sel dari embrio zigotik yang sangat tidak
matang, yang sudah memiliki program ekspresi gen embriogenik mereka diaktifkan, disebut "Sel
ditentukan pra-embriogenik" (PEDCs). Untuk keperluan regenerasi, kedua istilah tersebut dapat
disebut sebagai "sel embriogenik" (ECs) (Carman, 1990; Merkle et al., 1995). Ada perbedaan
perkembangan utama di antara eksplan sehubungan dengan ontogeni dari embrio somatik.
Diperolehnya embriogenesis somatik pada kacang-kacangan apakah jaringan eksplan terdiri dari
PEDC (misalnya, embrio zigotik yang sangat tidak matang) atau non-EC (misalnya, jaringan
tanaman yang terdifferensiasi). Dalam kasus pertama, stimulus ke eksplan mungkin cukup untuk
menginduksi pembelahan sel untuk pembentukan embrio somatik, yang tampaknya muncul
langsung dari jaringan eksplan dalam proses yang disebut langsung embriogenesis (Gbr. 1 A1,
B1). Sebaliknya, jaringan non-EC harus menjalani beberapa mitosis divisi di hadapan auksin
eksogen untuk induksi ECs. Sel dihasilkan dari divisi mitosis ini dimanifestasikan sebagai kalus,
dan istilah embriogenesis tidak langsung digunakan untuk menunjukkan bahwa fase kalus
mengintervensi antara eksplan asli dan penampilan embrio somatik (Gbr. 1 C1) (Merkle et al.,
1995). Dengan demikian, proses induksi embrio somatik dapat dicapai dengan menggunakan
pendekatan yang berbeda, seperti diilustrasikan pada Gambar 1. Embrio somatik diinduksi dari
embrio zygotic yang sangat tidak matang (tahap torpedo) setelah terpapar dengan sitokinin hanya
diperoleh dalam semanggi (Trifolium ssp.) (Maheswaran & Williams, 1984) (Gbr. 1 A). Dalam
kedelai, embrio somatik dapat diinduksi masuk respons terhadap auksin, dan diregenerasi
langsung dari tahap zygotik yang belum matang embrio tanpa fase kalus intervensi (Lazzeri et
al., 1985; Finer, 1988; Bailey et al., 1993; Santarém et al., 1997) (Gbr. 1 B). Akhirnya, beberapa
legum, terutama alfalfa (Medicago sativa), dapat diregenerasi dari kalus yang berasal dari daun
(Bingham et al., 1988). Dalam hal ini, jaringan merespons kombinasi auksin dan sitokinin (Gbr.
1 C). Jenis pengatur pertumbuhan dan eksplan, serta kemampuan genotipe untuk merespons
secara in vitro Stimulus, adalah faktor utama yang mempengaruhi induksi embriogenesis
somatik. Peran dari sitokinin eksogen selama fase induksi tergantung pada apakah somatic
embriogenesis adalah langsung atau tidak langsung. Ketika SE berasal dari kalus, frekuensi
pembentukan embrio somatik ditingkatkan oleh sitokinin. Namun, dalam sistem langsung,
seperti di kedelai, di mana embrio somatik terbentuk langsung dari embrio zygotik yang belum
matang, penambahan sitokinin mengurangi frekuensi pembentukan embrio (Merkle et al., 1995).
Kedelai SE diinduksi oleh dua auksin: α-naphthaleneacetic acid (NAA) dan Asam 2,4-
diklorofenoksiasetat (2,4-D), tetapi yang paling umum digunakan adalah 2,4-D.
Mekanisme pasti yang mendasari pembentukan embrio somatik yang diinduksi auksin
tidak dipahami, tetapi beberapa penelitian dengan legum lain menyarankan proses seluler
tertentu yang diinduksi auksin seperti metilasi DNA spesifik embrio (Vergara et al., 1990),
gangguan integritas jaringan oleh mengganggu interaksi sel-sel (Smith & Krikorian, 1989) dan
pembentukan polaritas sel (Merkle et al., 1995). Namun, auksin bukan satu-satunya zat yang
dapat menyebabkan embriogenesis. Beberapa faktor lain yang mengubah program ekspresi gen
(mis., Stres) atau mengganggu interaksi sel-sel (gangguan fisik jaringan) juga dapat
mengarahkan transisi ini (Gharyal & Maheshwari, 1983; Dhanalakshmi & Lakshmanan, 1992)
Pilihan eksplan adalah faktor penting yang menentukan keberhasilan sebagian besar
percobaan kultur jaringan. Jaringan meristematik yang belum matang terbukti merupakan
eksplan yang paling cocok untuk embriogenesis somatik pada polong-polongan (Lakshmanan &
Taji, 2000). Misalnya, kotiledon embrio zygotik yang belum matang merupakan eksplan yang
paling banyak digunakan untuk induksi SE di Indonesia kedelai (Lazzeri et al., 1985; Finer,
1988; Bailey et al., 1993; Santarém et al., 1997; Droste et al., 2002). Namun, dalam spesies ini,
embrio somatik juga telah diperoleh dari daun dan batang (Ghazi et al., 1986), simpul kotiledon
(Kerns et al., 1986), anther (Santos et al., 1997; Rodrigues et al., 2005) dan sumbu embrionik
(Kumari et al., 2006). Faktor terakhir namun tidak kalah penting yang mempengaruhi induksi
embrio somatik adalah genotipe tanaman (Merkle et al., 1995). Dalam kedelai, variasi kapasitas
embriogenik ditemukan ada antara genotipe individu (Komatsuda et al., 1991; Bailey et al.,
1993a, b; Santos et al., 1997; Droste et al., 2001; Meurer et al., 2001; Tomlin et al., 2002; Hiraga
et al., 2007; Yang et al., 2009; Droste et al., 2010) seperti yang akan dibahas di bawah
(Genotipe-dependent respon dan penyaringan bagian kultivar yang sangat responsif).
Karakteristik umum dari jaringan embriogenik adalah bahwa ia dapat tetap embriogenik
tanpa batas. Proses proliferasi ini telah disebut berbagai istilah sekunder, berulang atau
embriogenesis berulang (Gbr. 1 B2). Pada kedelai, embrio somatik primer berasal dari
multiseluler, sedangkan embrio somatik sekunder (mis. berasal dari yang lain embrio somatik)
cenderung memiliki asal uniseluler (Merkle et al., 1995). Hartweck et al. (1988) menemukan
embrio somatik yang berasal dari kelompok sel dalam kotiledon zigotik kedelai, sementara Sato
et al. (1993) menemukan embrio berkembang biak dari somatik kedelai tahap globular embrio
yang berasal dari sel tunggal. Proliferasi sel embriogenik tampaknya dipengaruhi oleh berbagai
faktor, beberapa di antaranya yang dikendalikan selama proses budaya, dan beberapa di
antaranya belum ditentukan. Beberapa dari faktor-faktor yang telah diselidiki juga berhubungan
dengan fase induksi, seperti genotipe tanaman dan pengatur pertumbuhan (Merkle et al., 1995).
Faktor yang paling banyak didokumentasikan terkait dengan proliferasi terus menerus sel
embriogenik adalah auksin. Untuk kedelai, proliferasi embrio somatik sekunder dimungkinkan
jika dipertahankan dalam media yang mengandung auksin 2,4-D (Finer & Nagasawa, 1988). sel
tunggal epidermis telah terbukti menginisiasi embrio somatik sekunder kedelai (Sato et al.,
1993). Peran pasti auksin dalam memicu proliferasi tidak diketahui. Selanjutnya level dari auksin
yang diperlukan untuk mempertahankan embriogenesis berulang tergantung pada protokol kultur
diadopsi.
Penurunan konsentrasi regulator pertumbuhan yang terkait dengan induksi dan proliferasi
- turun ke tingkat yang memungkinkan pengembangan embrio yang tepat (Merkle et al., 1995).
Auksin menekan perkembangan meristem apikal, mungkin diatur oleh mekanisme yang sama
yang terlibat dalam pembentukan dominasi apikal (Parrott et al., 1995). Peran sitokinin selama
histodifferentiation lebih sulit untuk dinilai. Aung et al. (1982) mengamati penurunan kadar
sitokinin endogen selama perkembangan embrio zygotic kedelai. Di sisi lain, dimasukkannya
sitokinin selama fase histodifferensiasi dapat mengkompensasi efek merugikan yang diinduksi
auksin pada pengembangan meristem. Embrio somatik kedelai tahap-globular, ketika terpapar
sitokinin, menurunkan laju perkembangan sementara meristem apikal memanjang sehingga
membentuk beberapa tunas (Wright et al., 1991). Karena fakta bahwa protokol embriogenesis
tradisional biasanya menggunakan media yang sama untuk histodifferentiation dan fase
pematangan berikutnya, sulit untuk meninjau literatur dan menentukan apakah pengobatan yang
diberikan mempengaruhi tahap histodifferentiation atau tahap pematangan (Merkle et al., 1995 ).
Setelah histodifferentiation, periode perkembangan embrio di mana ekspansi sel dan deposisi
cadangan terjadi dianggap fase pematangan (Gambar 1 B3) (Bewley et al., 1985). Waktu yang
diperlukan untuk embrio somatik untuk mencapai kematangan fisiologis adalah spesifik,
mencerminkan periode pematangan embrio zigotik di planta (Parrott et al., 1995). Analisis
akumulasi cadangan dalam pengembangan embrio somatik telah mengungkapkan persamaan dan
perbedaan dibandingkan dengan embrio zygotik. Perbedaan-perbedaan ini terutama disebabkan
oleh kondisi pematangan in vitro yang digunakan. Banyak laporan tentang akumulasi cadangan
embrio somatik belum dilakukan dengan protokol pematangan optimal. Oleh karena itu,
manipulasi kondisi kultur untuk memperpanjang dan meningkatkan pematangan embrio, dan
untuk mencegah perkecambahan sebelum waktunya, mungkin akan menambah kesamaan yang
diamati antara embrio zygotik dan somatik (Merkle et al., 1995). Saat ini, tren diamati dalam
spesifikasi berbagai protokol untuk menyediakan berbagai regulator pertumbuhan dalam medium
selama pematangan embrio. Namun, ada banyak informasi yang menunjukkan bahwa baik
auksin eksogen maupun sitokinin sebenarnya tidak diperlukan untuk pematangan embrio normal,
sebagaimana dibuktikan oleh perkembangan normal zygotic kedelai (Hsu & Obendorf, 1982)
atau embrio somatik (Parrott et al., 1988) di media tanpa pengatur pertumbuhan. Memang,
meristem yang berkembang buruk atau hipokotil yang membengkak mungkin merupakan hasil
yang tidak diinginkan dari aplikasi auksin dan sitokinin eksogen, masing-masing. Akibatnya,
perawatan yang mengikat dan menghilangkan auksin, dengan menambahkan arang aktif ke
media pematangan (Ebert & Taylor, 1990), misalnya, dapat meningkatkan perkembangan embrio
dan meningkatkan perkecambahan (Buchheim et al., 1989). Berbeda dari auksin dan sitokinin,
asam absisat (ABA) mungkin diperlukan selama embriogenesis untuk memulai sintesis protein
penyimpanan dan protein yang terlibat dalam toleransi pengeringan (Galau et al., 1990).
Embrio yang dihilangkan dari kondisi pematangan untuk pengembangan lebih lanjut
sering menunjukkan perkecambahan, pertumbuhan dan kekuatan yang buruk atau menyimpang
setelahnya (Parrott et al., 1988). Pengamatan ini menunjukkan bahwa perawatan pasca-maturasi
lebih lanjut diperlukan. Salah satunya aspek mendasar dari perkembangan embrio zigotik yang
biasanya tidak dijumpai selama pengembangan embrio somatik adalah pengeringan (Gambar 1
B4), yang mengarah pada ketenangan embrio. Telah diusulkan bahwa pengeringan diperlukan
untuk transisi yang benar dari program pematangan embrio ke program perkecambahan
(Kermode, 1990). Periode pengeringan telah dikaitkan dengan sintesis protein yang terkait
dengan kemampuan untuk berkecambah (Rosenberg & Rinne, 1986, 1988). Pengeringan
sebagian telah terbukti meningkatkan konversi embrio somatik kedelai (Hammatt & Davey,
1987; Parrott et al., 1988; Buchheim et al., 1989). Sementara sebagian besar penelitian
melaporkan perkembangan akar dan perkecambahan embrio somatik, sedikit perbedaan yang
dibuat antara perkecambahan dan konversi. Menurut Ranch et al. (1985), perkecambahan kedelai
mengacu pada pengembangan akar dan pucuk pada embrio dengan hipokotil utuh (Gbr. 1 B5).
Walker & Parrott (2001) menggambarkan konversi kedelai sebagai pengembangan trifoliolat
yang diperluas dan akar bercabang dalam kondisi in vitro (Gambar 1 B6). Namun, menurut
penulis, definisi konversi aktual mengacu pada kelangsungan hidup setelah pemindahan ke
tanah. Sementara kapasitas perkecambahan dapat dipengaruhi oleh beberapa komponen medium
kultur atau manipulasi lingkungan, salah satu aspek yang tidak dapat dimanipulasi dengan
mudah adalah latar belakang genetik embrio (Merkle et al., 1995). Studi dengan tanaman kedelai
menunjukkan bahwa daya kecambah / konversi juga sangat dipengaruhi oleh genotipe
(Komatsuda & Ohyama, 1988; Bailey et al., 1993; Santos et al., 1997; Droste et al., 2001, 2010).
3. Respon tergantung genotipe dan penyaringan kultivar yang sangat responsif
Semakin dekat pola ekspresi gen embrio somatik cocok dengan embrio zygotic, semakin
besar peluang untuk memperoleh sistem regenerasi yang sangat efisien. Normalisasi pola
ekspresi gen tersebut akan dicapai melalui optimalisasi protokol media dan kultur untuk setiap
tahap perkembangan embrio. Menurut Meurer et al. (2001), ada dua cara untuk mengoptimalkan
regenerasi kedelai melalui kultur embriogenik. Yang pertama adalah menyaring sejumlah besar
kultivar baru untuk mengidentifikasi mereka yang memiliki potensi embriogenik. Karena SE
adalah sifat yang diwariskan (Parrott et al., 1989), potensi embriogenesis juga dapat ditingkatkan
melalui persilangan konvensional antara kultivar yang tidak responsif dan kultivar yang sangat
kompeten (Kita et al., 2007). Pendekatan alternatif dan aditif adalah untuk mengoptimalkan
protokol embriogenesis untuk meningkatkan hasil kultivar yang menarik. Beberapa penelitian
telah mengungkapkan perbedaan antara genotipe kedelai dalam kapasitas mereka untuk
menanggapi berbagai langkah embriogenesis somatik (Bailey et al., 1993; Santos et al., 1997;
Simmonds & Donaldson, 2000; Droste et al., 2001; Meurer et al., 2001; Tomlin et al., 2002;
Hiraga et al., 2007; Yang et al., 2009; Droste et al., 2010). Efisiensi ditunjukkan berbeda di
antara kultivar pada setiap fase SE: induksi, proliferasi, histodifferensiasi / pematangan,
perkecambahan dan konversi (Bailey et al., 1993; Santos et al., 1997). Karena setiap fase harus
di bawah kontrol genetik independen, kinerja kultivar terbaik dalam satu tahap tidak harus yang
terbaik di fase lain. Dalam konteks ini, Bailey et al. (1993a) melaporkan bahwa PI 417138 adalah
di antara genotipe yang paling tidak dapat diinduksi yang diteliti, meskipun ia memang memiliki
daya kecambah dan kapasitas konversi tertinggi. Dengan cara yang sama, kultivar IAS-5
memiliki hasil embrio terendah tetapi kapasitas konversi tertinggi (Santos et al., 1997).
Tomlin et al. (2002) dan Hiraga et al. (2007) menyatakan bahwa perbedaan efisiensi induksi
embrio somatik di antara kultivar kedelai kemungkinan disebabkan oleh perbedaan tingkat
auksin endogen atau sensitivitas auksin. Salah satu tantangan utama dalam kedelai adalah untuk
mengidentifikasi genotipe yang sangat responsif terhadap induksi SE, proliferasi embrio dan
konversi menjadi tanaman. Perbandingan langsung antara laporan sebelumnya sulit karena
masing-masing kelompok penelitian telah mengadopsi protokol yang berbeda untuk SE dan
metode evaluasi. Dalam beberapa penelitian hanya fase pertama seperti induksi dan / atau
proliferasi dianalisis, sedangkan dalam studi lain genotipe disaring pada regenerasi tanaman.
Simmonds & Donaldson (2002) menskrining 18 dari 20 genotipe kedelai musim pendek di
Kanada untuk kapasitas embriogenik proliferatif. Hanya lima genotipe yang menghasilkan kultur
embriogenik yang berproliferasi setidaknya selama enam bulan. Sembilan kultivar kedelai yang
mewakili wilayah AS yang berbeda dievaluasi di masing-masing dari tiga lokasi menggunakan
protokol induksi dan proliferasi embriogenik yang seragam. Beberapa kultivar diidentifikasi
sebagai embriogenik seragam pada fase induksi primer di semua lokasi, di antaranya Jack adalah
yang terbaik (Meurer et al., 2001). Dua puluh enam genotipe termasuk kerabat liar kedelai dan
kultivar Jepang disaring untuk perbedaan kompetensi baik dalam embriogenesis somatik dan
pembentukan tunas berikutnya. Semua genotipe mampu menginduksi embrio somatik tetapi
dengan variasi yang luas. Glycine gracilis, G. gracilis T34, Masshokutou (kou 502) dan
Masshokutou (kou 503) varietas disajikan kompetensi perkecambahan tinggi dari embrio
somatik (Komatsuda & Ohyama, 1988). Hiraga et al. (2007) meneliti kapasitas regenerasi
tanaman melalui embriogenesis somatik pada tanaman kedelai Jepang. Induksi embrio somatik
dari kotiledon yang belum matang, proliferasi embrio dalam media cair dan diferensiasi menjadi
embrio tahap kotiledon dievaluasi. Kultivar Yuuzuru dan Yumeyutaka ditemukan memiliki
potensi regenerasi tanaman yang tinggi melalui SE, lebih unggul atau sebanding dengan kultivar
Amerika Utara Jack. Dari percobaan awal menggunakan 98 genotipe kedelai Cina, 12 varietas
dipilih untuk studi lebih lanjut untuk meningkatkan efisiensi embriogenesis somatik dan
regenerasi tanaman. Perbedaan signifikan dalam embriogenesis somatik ditemukan di antara
genotipe. Varietas N25281, N25263, dan N06499 terbukti memiliki kapasitas embriogenik
somatik tertinggi. Jumlah rata-rata terbesar planlet yang diregenerasi per eksplan diamati pada
N25281 (Yang et al., 2009). Mengenai genotipe Brasil, Bonacin et al. (2000) menunjukkan
pengaruh pengaruh genotipe dalam kemampuan embriogenik somatik dari lima kultivar, di mana
BR-16, FT-Cometa dan IAS-5 adalah yang paling embriogenik. Studi itu hanya menilai tahap
induksi embrio somatik. Studi lain juga melaporkan kapasitas tinggi IAS-5 untuk menghasilkan
embrio somatik (Santos et al., 1997; Di Mauro et al., 2000; Droste et al., 2001). Baru-baru ini,
Droste et al. (2010) mengidentifikasi genotipe kedelai Brasil dengan potensi untuk menanggapi
rangsangan kultur in vitro untuk induksi embrio somatik, proliferasi embrio dan regenerasi
tanaman. Embrio somatik diinduksi pada semua delapan genotipe yang diuji, tetapi perbedaan
diamati pada setiap tahap. IAS-5 dan BRSMG 68 Vencedora memiliki frekuensi induksi embrio
yang tinggi, proliferasi embriogenik berulang, perkecambahan embrio prekoks rendah, embrio
yang lebih baik diferensiasi dan regenerasi tanaman. Dengan demikian, pekerjaan ini
mengidentifikasi BRSMG 68 Vencedora dan mengkonfirmasi IAS-5 sebagai genotipe dengan
potensi tinggi untuk embriogenesis somatik dan regenerasi tanaman.

Meskipun embriogenesis somatik telah dideskripsikan sejak lama dan dapat dianggap sebagai
prosedur rutin untuk spesies tanaman lain, catatan pertama kejadian dalam kedelai dibuat oleh
Beversdorf & Bingham (1977), ketika tidak lebih dari beberapa embrio diproduksi. Barulah pada
tahun 1983 Christianson et al. (1983) meregenerasi, untuk pertama kalinya, tanaman kedelai
melalui SE. Selanjutnya, beberapa makalah telah melaporkan perkembangan embrio somatik dari
kotiledon embrio yang belum matang. Tetapi sampai hari ini frekuensi yang diukur di mana
embrio ini dikonversi menjadi tanaman secara signifikan lebih rendah dari yang diharapkan
(Parrott et al., 1988; Meurer et al., 2001; Walker & Parrott, 2001; Droste et al., 2001, 2010) Oleh
karena itu, upaya telah diarahkan pada pengembangan dan perbaikan protokol untuk inisiasi,
proliferasi, dan histodifferensiasi / pematangan embriogenesis somatik kedelai.

Sebagian besar protokol yang dijelaskan dalam penelitian awal gagal mempromosikan induksi
embrio somatik yang memuaskan. Keterbatasan ini diatasi ketika embrio diinduksi dari kotiledon
kedelai yang belum matang dengan menempatkan eksplan pada tingkat tinggi 2,4-D (40 mg / l)
(Finer, 1988). Membandingkan kapasitas untuk menginduksi kedelai SE, jumlah rata-rata embrio
yang dihasilkan pada 2,4-D secara signifikan lebih tinggi daripada yang diproduksi di hadapan
NAA (Hoffmann et al., 2004). Perlu dicatat bahwa jenis auksin yang digunakan dalam medium
juga memengaruhi morfologi budaya. Embrio somatik yang diinduksi pada 2,4-D bersifat rapuh,
tembus cahaya, berwarna hijau kekuning-kuningan, dan berbentuk bundar ke bentuk torpedo.
Embrio somatik yang diinduksi pada NAA berbentuk padat, buram, berwarna hijau pucat,
dengan morfologi canggih, membentuk struktur seperti kotiledon (Lazzeri et al., 1987; Hoffmann
et al., 2004). Selanjutnya, Lazzeri et al. (1987) menggambarkan bahwa embrio somatik yang
diprakarsai pada NAA memiliki morfologi embrio yang lebih normal. Efek sinergis dari pH, zat
pemadat, konsentrasi 2,4-D, orientasi eksplan dan luka juga telah dilaporkan untuk
meningkatkan efisiensi induksi embrio somatik (Santarém et al., 1997). Inisiasi embrio lebih
tinggi ketika eksplan dikultur dengan sisi abaxial menghadap media induksi yang mengandung
konsentrasi tinggi 2,4-D, pH disesuaikan menjadi 7,0 dan dipadatkan dengan Gelrite. Efek pH
tidak diamati atau lebih lambat ketika embrio somatik diinduksi di hadapan regulator
pertumbuhan lainnya (Lazzeri et al., 1987; Komatsuda & Ko, 1990; Hoffman et al., 2004;
Bonacin et al., 2000). Telah disarankan bahwa efek pH pada inisiasi embrio somatik mungkin
terkait dengan pengambilan auksin menjadi eksplan yang dikultur, dan bahwa pH 7,0 dapat
memfasilitasi penyerapan 2,4-D yang lebih lambat dan bertahap pada tingkat yang relatif tinggi.
Perawatan luka tidak meningkatkan jumlah embrio, meskipun pada eksplan yang terluka embrio
somatik diinduksi lebih awal daripada pada yang tidak terluka (Santarém et al., 1997). Selain itu,
efisiensi pada induksi SE paling tinggi ketika dalam media yang mengandung sukrosa 2-3%.
Kultur yang diprakarsai dengan konsentrasi sukrosa yang lebih rendah cenderung menghasilkan
jumlah embrio yang mudah pecah, sementara peningkatan konsentrasi gula ini mengganggu
induksi embrio (Lippmann & Lippmann, 1984; Lazzeri et al., 1987, 1988; Hoffmann et al.,
2004).

Setelah diinduksi, embrio somatik tahap awal dapat dipertahankan dan diperbanyak dengan
mensubkultur jaringan pada media semi-padat (Finer, 1988) atau media kultur suspensi cair
(Finer & Nagasawa, 1988). Sebagai media cair memungkinkan kontak yang lebih besar dari
jaringan tanaman dengan komponen medium, proliferasi dalam cairan biasanya lebih efisien
daripada pada media semi-padat (Samoylov et al., 1998a). Di sisi lain, kultur suspensi
embriogenik kedelai bisa sangat sulit untuk dibangun dan dipelihara (Santarém et al., 1999).
Meskipun pemeliharaan kultur embriogenik kedelai dalam medium cair difasilitasi oleh
pengembangan medium FN (Finer & Nagasawa, 1988), efisiensinya tetap rendah. Perubahan
komponen medium individu, seperti jenis dan konsentrasi karbohidrat, nitrogen total, amonium,
nitrat, dan zat gizi makro lainnya, meningkatkan proliferasi kultur suspensi kedelai dalam
medium cair dan menghasilkan pengembangan medium yang dioptimalkan, yang disebut sebagai
FN Lite (Samoylov) et al., 1998a). Embrio somatik yang diinkubasi dalam media yang
mengandung NAA tidak berkembang biak dengan baik seperti yang diproduksi pada media yang
mengandung 2,4-D (Liu et al., 1992). Seperti dibahas di atas, embrio somatik yang diprakarsai
pada NAA lebih maju dalam morfologi embrio daripada yang diinduksi pada 2,4-D. Akibatnya,
mereka juga tidak cocok untuk digunakan dalam membangun budaya berulang (Lazzeri et al.,
1987; Hoffmann et al., 2004). Kultur embriogenik yang diinduksi dari kotiledon yang belum
matang pada media yang mengandung 40 mg / l membutuhkan kadar 2,4-D yang lebih rendah
untuk proliferasi yang efisien (Bailey et al., 1993; Santarém & Finer, 1999). Diperlukan dua
puluh mg / l 2,4-D untuk secara efisien mempertahankan embriogenesis berulang pada media
semi-padat (Santarém & Finer, 1999), sedangkan 5 mg / l 2,4-D cukup pada media kultur
suspensi cair (Samoylov et al. ., 1998a). Lebih lanjut, berbeda dengan pengaruh pH pada inisiasi
embrio, kultur yang dipertahankan pada medium semipadat pada pH 5,8 atau 7,0 tidak
menunjukkan perbedaan dalam tingkat proliferasi, menunjukkan bahwa begitu embriogenesis
telah diinduksi, jaringan tidak perlu dipertahankan di bawah yang sama. kondisi (Santarém et al.,
1997).

Bahkan setelah tiga dekade penelitian intensif, regenerasi kedelai melalui embriogenesis somatik
tetap rendah jika dibandingkan dengan tanaman lain. Keterbatasan perkembangan dalam embrio
somatik biasanya terkait dengan komposisi media kultur yang tidak memadai (Merkle et al.,
1994). Jadi, upaya untuk meniru lingkungan perkembangan embrio zygotic dengan lebih baik
dilakukan untuk lebih meningkatkan SE. Kekurangan pada tahap pematangan telah diidentifikasi
sebagai hambatan utama untuk konversi embrio somatik menjadi tanaman. Embrio somatik dan
zigotik telah terbukti menyimpang dalam gula, protein, dan akumulasi lipid total, menunjukkan
bahwa embrio somatik tidak berkembang dengan baik dan, sebagai konsekuensinya, membawa
kesulitan untuk regenerasi tanaman (Chanprame et al., 1998). Selain nutrisi embrio, akumulasi
gula yang tepat telah terbukti terlibat dalam toleransi pengeringan biji kedelai (Blackman et al.,
1992). Diferensiasi dan maturasi embrio somatik kedelai pada dasarnya telah dicapai melalui
penggunaan dua protokol. Yang pertama adalah proses dua langkah, dimana embrio pertama-
tama di-histodiferensiasi pada media MSM6AC (Bailey et al., 1993), yang terdiri dari garam
basal MS padat yang ditambah dengan maltosa 6% dan arang aktif 0,5%. Setelah 30 hari, embrio
dipindahkan ke media yang sama, tetapi tanpa arang, untuk memungkinkan pertumbuhan dan
pematangan berlangsung. Protokol kedua didasarkan pada medium cair yang disebut FNLS3,
yang terdiri dari garam Finer & Nagasawa “Lite” (FNL) basal ditambah dengan sukrosa 3%
(Samoylov et al., 1998b). Keuntungan utama dari media FNLS3 cair dibandingkan media semi-
padat MSM6AC / MSM6 adalah kemampuannya untuk menghasilkan sejumlah besar embrio
somatik matang dalam waktu singkat. Di sisi lain, protokol berbasis cairan membutuhkan
perawatan yang lebih besar selama penanganan. Pemulihan tanaman yang berhasil telah
dilaporkan menggunakan kedua protokol, meskipun banyak penelitian menyarankan modifikasi
pada media dasar ini untuk mengoptimalkan histodifferensiasi dan pematangan embrio somatik
kedelai, dengan tujuan akhir untuk memperoleh tingkat konversi yang lebih tinggi. Adaptasi
utama adalah: jenis dan konsentrasi sumber karbon, penambahan agen osmotik, agen pengatur
tumbuh dan / atau asam amino, jenis garam basal, serta suplementasi sedang dengan arang aktif
(Tabel 1 dan 2). Modifikasi di media kultur lain tidak dipertimbangkan dalam ulasan ini.

Sumber karbon sangat penting untuk kesehatan gizi embrio dan meningkatkan pematangan
embrio somatik. Karbohidrat umumnya digunakan sebagai sumber karbon untuk pengembangan
jaringan in vitro, dan maltosa dan sukrosa biasanya ditambahkan ke media kultur jaringan
kedelai dalam kisaran konsentrasi optimal 3% hingga 6% (Samoylov et al., 1998b; Körbes &
Droste, 2005; Schmidt et al., 2005). Jenis dan konsentrasi sumber karbon yang diperlukan untuk
histodifferentiation / maturation tampaknya berbeda antara media padat dan cair. Efek
karbohidrat pada histodifferensiasi embrio dan maturasi pada medium cair dianalisis oleh
Samoylov et al. (1998b). Media FNL ditambah dengan sukrosa 3% (FNL0S3) atau 3% maltosa
(FNL0M3) dibandingkan. Data menunjukkan bahwa sukrosa meningkatkan pertumbuhan embrio
dan secara signifikan meningkatkan jumlah embrio tahap kotiledon yang dipulihkan selama
histodifferensiasi dan pematangan. Namun, persentase tanaman yang dipulihkan dari embrio
yang dibedakan dan matang dalam FNL0S3 lebih rendah daripada yang tumbuh di FNL0M3
(Samoylov et al., 1998b). Keterbatasan ini sebagian diselesaikan dengan menambahkan sorbitol
3% ke media, yang menghasilkan peningkatan frekuensi perkecambahan dan konversi (Walker
& Parrott, 2001). Media yang dimodifikasi bernama media FNLS3S3. Disarankan bahwa sorbitol
bertindak sebagai agen osmotik dan / atau mempromosikan akumulasi trigliserida dalam embrio
somatik. Setelah penambahan sorbitol, efek menggunakan sukrosa 3% (FNL0S3S3) atau 3%
maltosa (FNL0M3S3) dibandingkan lagi (Schmidt et al., 2005). Tingkat konversi embrio yang
dibedakan dengan maltosa lebih tinggi bila dibandingkan dengan yang diperoleh pada sukrosa.
Namun, sukrosa dianggap sebagai sumber karbon yang paling tepat, karena penggunaannya
dalam media pematangan cair menghasilkan jumlah embrio yang lebih besar, yang
membutuhkan waktu lebih sedikit untuk mencapai kematangan fisiologis. Media yang telah
digunakan dalam proses histodifferensiasi / pematangan dua langkah (MSM6AC / MSM6)
mengandung 6% maltosa (Bailey et al., 1993). Körbes & Droste (2005) membandingkan
frekuensi konversi ketika 6% maltosa digantikan oleh 3% maltosa (MSM3) atau 6% sukrosa
(MSS6). Hasil menunjukkan bahwa pematangan dalam media MSS6 mengarah ke peningkatan
dalam tingkat embrio histodifferentiated dengan morfologi normal, serta dalam pemulihan
tanaman. Kualitas embrio somatik dapat secara positif dipengaruhi oleh potensi osmotik yang
rendah dalam medium maturasi (Walker & Parrott, 2001; Körbes & Droste, 2005). Karbohidrat
dapat bertindak sebagai agen osmotik (Li et al., 1998). Karena berat molekul maltosa dan
sukrosa sangat similar, no significant effect on the osmotic potential of the medium could be
expected (Schmidt et al., 2005). Nevertheless, differences observed in embryos matured in media
supplemented with maltose or sucrose have been related to these compounds’ osmotic potentials
(Samoylov et al., 1998b; Körbes & Droste, 2005). Influence of other osmotic agents (sorbitol,
mannitol and polyethylene glycol) has also been tested in soybean somatic embryogenesis
(Walker & Parrott, 2001; Körbes & Droste, 2005; Schmidt et al., 2005), but positive effects were
only reported for sorbitol (Walker & Parrott, 2001), as described above.
Sumber nitrogen juga merupakan komponen penting untuk pematangan embrio yang tepat.
Dengan tujuan untuk proliferasi embrio kedelai, 1 g / l asparagine dimasukkan dalam formulasi
media cair FN asli (Finer & Nagasawa, 1988), dan juga digunakan dalam media proliferasi FN
Lite (Samoylov et al., 1998a ) dan medium histodifferentiation / maturation FNL (Samoylov et
al., 1998b). Di sisi lain, media kultur yang dilengkapi dengan glutamin terbukti bermanfaat bagi
embrio kedelai zygotic (Thompson et al., 1977), dengan meningkatkan ukuran embrio
(Lippmann & Lippmann, 1993; Dyer et al., 1987), dan mendorong penyimpanan sintesis minyak
dan protein (Saravitz & Raper, 1995). Schmidt et al. (2005) membandingkan efek FNLS3S3
yang ditambah dengan asparagin atau glutamin pada histodifferensiasi / maturasi embrio. Hasil
penelitian menunjukkan bahwa embrio tahap kotiledon yang diperoleh dari glutamin yang
disterilkan dengan filter 30 mM lebih besar dan menunjukkan kualitas yang lebih tinggi secara
keseluruhan. Media yang dimodifikasi bernama media FNLS3S3G30. Suplementasi metionin
juga telah dilaporkan bermanfaat untuk stimulasi pertumbuhan (Coker et al., 1987). Dengan
demikian, penambahan 1 mM metionin ke dalam media FNL0S3S3 diuji dan efek positif yang
jelas terhadap histodifferensiasi dan maturasi embrio somatik kedelai, ditunjukkan terutama oleh
persentase konversi, ditunjukkan (Schmidt et al., 2005). Sekali lagi, media ini berganti nama
menjadi media FNLS3S3G30M1. Peningkatan efisiensi medium histodifferensiasi / pematangan
MSM6 padat juga diperoleh dengan menggunakan bahan-bahan dari resep media cair
FNLS3S3G30M1 yang dioptimalkan, khususnya glutamin dan metionin (Schmidt et al., 2005).
Sebuah perbandingan perkembangan embrio menunjukkan bahwa embrio berdiferensiasi
menjadi tahap kotiledon kuning-hijau lebih cepat ketika dikultur pada FNLS3 daripada ketika
dipelihara pada media cair MSM3 (Samoylov et al., 1998b). Di sisi lain, jumlah embrio
histodifferentiated dan frekuensi embrio berkecambah pulih dari MSM3 lebih tinggi daripada
yang diperoleh pada FNLS3. Studi lebih lanjut menunjukkan bahwa tingkat perkecambahan
meningkat ketika embrio histodifferentiated pada FNLS3 ditambah dengan sorbitol, glutamin
dan metionin (Walker & Parrott, 2001; Schmidt et al., 2005).
Abscisic acid (ABA) adalah pengatur pertumbuhan yang terlibat dalam pengembangan tanaman,
terutama selama perkembangan dan pematangan embrio dan sebagai respons terhadap tekanan
abiotik. Dalam biji, ABA menginduksi sintesis protein penyimpanan dan mempengaruhi induksi
dan pemeliharaan dormansi (Rock & Quatrano, 1995). ABA mencegah perkecambahan benih
sebelum waktunya dan dianggap berperan besar
ole dalam urutan peristiwa yang mengarah ke toleransi pengeringan (Hoekstra et al., 2001).
Suplementasi ABA dalam media kultur terbukti mempengaruhi embriogenesis somatik dari
berbagai tanaman. Dengan pemikiran ini, disarankan bahwa medium yang mengandung
konsentrasi ABA rendah (0,38 atau 1 μM) membantu embrio somatik kedelai yang belum
matang untuk mencapai kematangan dan lebih jauh mengembangkan meristem apikal (Ranch et
al., 1885; Lazzeri et al., 1987). Namun, terlepas dari protokol yang digunakan, tidak ada efek
signifikan yang diamati ketika ABA ditambahkan ke histodifferentiation atau medium
maturation (Tian & Brown, 2000; Schmidt et al.,
2005; Weber et al., 2007). Tian & Brown (2000) meneliti efek penambahan ABA pada media
kultur dalam berbagai tahap embriogenik: proliferasi, histodifferensiasi, dan maturasi. Efek
positif ABA diamati hanya ketika embrio pada tahap globular (proliferasi) dirawat sebelum
induksi histodifferensiasi. Penambahan 50 μM ABA meningkatkan pertumbuhan embrio
histodifferentiated, peningkatan proporsi embrio histodifferentiated normal morfologi,
meningkatkan viabilitas embrio setelah pengeringan dan peningkatan frekuensi perkecambahan.
Dalam perjanjian, Weber et al. (2007) menunjukkan bahwa kehadiran ABA selama proliferasi
atau selama tahap proliferasi dan pematangan meningkatkan persentase tanaman yang
dikonversi.
Activated charcoal (AC) adalah bahan berpori yang terdiri dari karbon. AC memiliki kapasitas
adsorpsi yang unik dan sering digunakan dalam kultur jaringan tanaman untuk meningkatkan
pertumbuhan dan perkembangan sel. Penerapan AC dikreditkan terutama untuk kapasitasnya
sebagai adsorben zat penghambat dalam media kultur (Thomas, 2008). Sebagaimana dibahas
sebelumnya (Induksi dan proliferasi bagian embrio somatik), konsentrasi tinggi 2,4-D diperlukan
untuk merangsang induksi dan proliferasi embrio somatik kedelai (Lebih Halus, 1988; Samoylov
et al., 1998a; Santarém & Finer, 1999). Di sisi lain, regulator pertumbuhan ini dapat
menyebabkan histodifferensiasi embrio yang abnormal atau pengembangan meristem apikal,
terutama dalam kultur jangka panjang yang terpapar 2,4-D. AC mungkin mampu mengadsorpsi
2,4-D atau auksin lain yang dilepaskan dari jaringan yang sedang berkembang, mempromosikan
morfologi embrio yang lebih normal dan meningkatkan kemampuan perkecambahan (Merkle et
al., 1995). AC hadir dalam media yang awalnya dijelaskan oleh Bailey et al. (1993) untuk
histodifferensiasi / pematangan embrio, tetapi belum diterapkan dalam penelitian lebih lanjut
(Samoylov et al., 1998b; Walker & Parrott, 2001; Körbes & Droste, 2005; Schmidt et al., 2005;
Weber et. Al. , 2007). Baru-baru ini, telah diamati bahwa penambahan arang aktif dan ABA ke
langkah histodifferentiation / maturation langkah pertama meningkatkan jumlah embrio
histodifferentiated (Droste et al., 2010). Karena efek positif tidak teridentifikasi ketika ABA
ditambahkan dalam histodifferentiation / maturation medium (Schmidt et al., 2005; Weber et.,
2007) (dibahas pada bagian tentang asam absisat), manfaat dijelaskan oleh Droste et al. (2010)
harus terkait dengan suplementasi AC. Penting untuk ditekankan bahwa penelitian dilakukan
dengan genotipe yang berbeda dan respons kedelai terhadap kondisi kultur in vitro tergantung
pada genotipe. Studi lebih lanjut, khususnya yang berfokus pada histodifferensi dan pematangan
embrio, adalah penting dan perlu untuk meningkatkan embriogenesis kedelai dari kultivar yang
sangat responsif. Setelah pematangan yang tepat, tahap pengeringan diperlukan. Konversi
embrio somatik kedelai parsial yang dideskripsikan terbukti berjalan lebih kuat daripada yang
tidak didiklikasi (Buchheim et al., 1989). Pengeringan parsial telah diadopsi oleh sebagian besar
tim peneliti (Bailey et al., 1993; Samoylov et al., 1998b; Tian & Brown, 2000; Walker & Parrott,
2001; Droste et al., 2002, 2010; Körbes & Droste, 2005; Schmidt et al., 2005; Yang et al., 2009;
Wiebke-Strohm et al., 2011). Meskipun ada sejumlah besar media yang tersedia untuk
histodifferensiasi / pematangan, MSO (garam dasar MS, vitamin B5, sukrosa 3%, dan 0,2%
Gelrite ™, pada pH 5,8) media telah hampir secara eksklusif digunakan untuk perkecambahan /
konversi embrio somatik kedelai. panggung (Finer & McMullen, 1991; Bailey et al., 1993;
Samoylov et al., 1998b; Tian & Brown, 2000; Walker & Parrott, 2001; Droste et al., 2002, 2010;
Körbes & Droste, 2005; Schmidt et al., 2005; Wiebke-Strohm et al., 2011).

Transformasi genetik tanaman digambarkan sebagai pengenalan DNA rekombinan dalam sel
tanaman menggunakan metode rekayasa genetika. Tumbuhan transgenik merupakan alat yang
sangat berharga untuk studi molekuler, genetik, biokimia dan fisiologis. Transformasi genetik
tanaman juga menawarkan kemajuan yang signifikan untuk program pemuliaan kedelai, dalam
hal memungkinkan produksi bahan tanaman baru dan beragam genetik. Kemajuan dalam
penggunaan transgenesis tanaman telah dilaporkan untuk sejumlah besar spesies. Kemajuan
tersebut memerlukan adopsi protokol yang berbeda, yang meliputi transformasi genetik yang
dimediasi oleh polyethyleneglycol (PEG) dan liposom (dikenal di bawah judul metode kimia),
microinjection, electroporation dan bombardment partikel (disebut metode fisik), serta
penggunaan vektor virus dan / atau bakteri, seperti pada agroinfeksi dan sistem Agrobacterium
(dinamai metode biologis). Transformasi kedelai pertama kali dilaporkan pada tahun 1988 oleh
dua kelompok independen menggunakan metode yang berbeda (Hinchee et al., 1988; Christou et
al., 1988). Bahkan setelah lebih dari dua dekade, transformasi stabil kedelai belum dapat
dianggap sebagai rutin karena tergantung pada kemampuan untuk menyatukan teknik
transformasi dan regenerasi yang efisien. Dua metode telah berhasil digunakan: pemboman
partikel (McCabe et al., 1988; Christou et al., 1989; Finer & McMullen, 1991; Christou &
McCabe, 1992; Finer et al., 1992; Stewart et al., 1996; Aragão et al., 2000; Droste et al., 2002;
Homrich et al., 2008; Wu et al., 2008; Li et al., 2009; Hernandez-Garcia et al., 2009; Xing et al.,
2010 ; Viana et al., 2011) dan sistem Agrobacterium tumefaciens (Parrott et al., 1989; Trick et
al., 1997; Trick & Finer, 1998; Aragão et al., 2000; Yan et al., 2000; Ko dkk. ., 2003, 2004; Paz
et al., 2006; Hong et al., 2007; Miklos et al., 2007; Liu et al., 2008; Wang & Xu, 2008; Wiebke-
Strohm et al., 2011). Terlepas dari metode yang digunakan, asal uniseluler embrio somatik
sekunder kedelai membuatnya menjadi jaringan target yang berguna untuk transformasi,
memungkinkan produksi tanaman yang sepenuhnya berubah. Target pertama yang digunakan
untuk transformasi adalah embrio somatik primer, tetapi tanaman chimerical diperoleh (Parrott et
al., 1989) karena sifat multiseluler dari embrio primer (Sato et al., 1993). Finer (1988)
menunjukkan bahwa embrio somatik sekunder berkembang biak langsung dari bagian apikal
atau terminal dari embrio somatik primer yang lebih tua. Sato et al. (1993) membuktikan bahwa
proliferasi embrio somatik terjadi dari sel epidermis tunggal dari embrio somatik yang ada.
Menggunakan embrio proliferatif sebagai jaringan target banyak penelitian berhasil regenerasi
tanaman sepenuhnya berubah (Finer & McMullen, 1991; Finer et al., 1992; Stewart et al., 1996;
Trick et al., 1997; Trick & Finer, 1998; Droste et al., 2002; Homrich et al., 2008; Schmidt et al.,
2008; Wu et al., 2008; Li et al., 2009; Hernandez-Garcia et al., 2009; Xing et al., 2010; Wiebke -
Strohm et al., 2011).

Agrobacterium tumefaciens adalah bakteri fitopatogenik Gram negatif yang ditularkan melalui
tanah yang secara alami menginfeksi berbagai tanaman yang menyebabkan penyakit crown gall
disease (DeCleene & DeLay, 1976). Asal mula penyakit ini adalah transfer gen horizontal antar
kingdom. Ketika strain virulen Agrobacterium menginfeksi sel tanaman, mereka mentransfer
satu atau lebih segmen DNA (DNA atau T-DNA) yang ditransfer dari Ti (Tumor-inducing)
plasmid ke dalam sel tanaman inang (baru-baru ini diulas oleh Gelvin, 2010 a, b; Pitzschke &
Hirt , 2010). Dalam beberapa dekade terakhir, strain A. tumefaciens yang dilucuti (non-
tumorigenik) juga telah menyediakan sarana untuk memproduksi tanaman yang dimodifikasi
secara genetik. Untuk mendapatkan vektor biner hasil rekayasa yang berasal dari Ti plasmid,
onkogen yang ada di wilayah T-DNA digantikan oleh DNA asing yang diminati (Gelvin, 2010b).
Keuntungan dari transfer gen yang dimediasi bakteri Agro termasuk kemungkinan mentransfer
segmen DNA yang relatif besar, jumlah yang lebih rendah dari integrasi salinan transgen ke
dalam genom tanaman, penyusunan ulang transgen langka, frekuensi yang lebih rendah dari
interspersi DNA genom dan berkurangnya ekspresi transgen abnormal (Gelvin, 2003; Kohli et
al., 2003). Selain itu, sistem ini melibatkan biaya operasi yang rendah dan kesederhanaan
protokol transformasi. Di sisi lain, tanaman sangat berbeda dalam kerentanannya terhadap
transformasi Agrobacteriummediated. Perbedaan ini terjadi di antara spesies, kultivar atau
jaringan (Droste et al., 1994; Gelvin, 2010b). Selain itu, di laboratorium kami sistem
transformasi ini biasanya menghasilkan tingkat transformasi yang lebih rendah, jika
dibandingkan dengan pengeboman partikel. Sistem transformasi yang dimediasi Agrobacterium
adalah tren yang berkembang dalam program transformasi tanaman (Somers et al., 2003).
Kedelai telah lama dianggap bandel untuk Agrobacterium (DeCleene & DeLey, 1976), terutama
karena tingkat keberhasilan yang rendah dalam memulihkan tanaman transgenik. Studi dengan
strain Agrobacterium tumorigenik (Pedersen et al., 1983; Droste et al., 1994; Mauro et al., 1995)
dan uji sementara (Meurer et al., 1998; Droste et al., 2000) menunjukkan bahwa kedelai dapat
mudah diubah oleh bakteri ini. Saat ini, diketahui bahwa penambahan asetosirringon selama
infeksi bakteri, kombinasi strain Agrobacterium yang sesuai dan kultivar kedelai, serta
pengembangan strain bakteri super virulen dan plasmid yang sesuai meningkatkan efisiensi
transformasi kedelai (Somers et al., 2003; Ko dkk. ., 2003, 2004; Wiebke-Strohm et al., 2011).
Tumbuhan transgenik yang diregenerasi melalui embriogenesis somatik diperoleh dengan
menggunakan dua jaringan target yang berbeda: kotiledon zygotik yang belum matang dan
embrio somatik sekunder. Dalam kasus pertama, kotiledon zygotik imatur yang terluka
dibiakkan bersama dengan suspensi Agrobacterium, setelah itu pembentukan jaringan
embriogenik diinduksi dari permukaan kotiledon ini. Dalam kasus kedua, embrio somatik
sekunder proliferatif pertama kali diperoleh dan kemudian diserahkan ke eksperimen
transformasi. Transformasi kotiledon zigotik oleh A. tumefaciens dan regenerasi selanjutnya dari
tanaman kedelai yang ditransformasi pertama kali dilaporkan oleh Parrott et al. (1989).
Tumbuhan diregenerasi dari embrio somatik primer dan, karena embrio berasal dari multi-
seluler, tanaman bersifat chimeric. Sebagai akibatnya, transgen tidak ada dalam garis kuman dan
ditransmisikan ke progeni. Masih menggunakan kotiledon zygotik sebagai target, pendekatan
baru dikembangkan di mana pembentukan embrio somatik sekunder diizinkan di bawah sistem
seleksi lanjutan. Asal uniseluler embrio somatik sekunder memungkinkan pemulihan tanaman
transgenik lengkap, stabil dan subur, yang keturunannya juga menunjukkan karakteristik ini
(Yan et al., 2000; Ko et al., 2003). Transformasi embrio somatik sekunder proliferatif melalui A.
tumefaciens telah terbukti menantang dan hanya berhasil ketika dikombinasikan dengan metode
fisik yang menghasilkan titik masuk ke penetrasi bakteri. Alih-alih sistem transformasi
konvensional, dua metode alternatif telah diusulkan untuk jaringan target ini: Transformasi yang
Dimediasi oleh Agrobacterium-mediated (SAAT) Sonication-Assisted (Trick et al., 1997; Trick
& Finer, 1998), dan kombinasi bebas-DNA bombardemen partikel dan sistem Agrobacterium
(bombardemen / sistem terpadu Agrobacterium) (Droste et al., 2000; Wiebke et al., 2006,
Wiebke-Strohm et al., 2011). Perbedaan antara metode-metode ini terletak pada teknik yang
digunakan untuk menginduksi cedera jaringan: sedangkan yang pertama menggunakan
sonication, yang kedua mengandalkan pemboman. Meskipun metode-metode ini terbukti layak,
kedua sistem tersebut menggunakan waktu, melelahkan, dan bergantung pada ketersediaan
peralatan khusus untuk aplikasi rutin. Penting untuk ditekankan bahwa keberhasilan transformasi
dan regenerasi yang dimediasi oleh Agrobacterium kedelai melalui embriogenesis somatik
tergantung pada ketersediaan kultivar dengan respons superior terhadap rangsangan kultur in
vitro dan kerentanan tinggi terhadap bakteri ini. Sejauh ini, regenerasi tanaman transgenik
dicapai dengan menggunakan kotiledon zygotik yang belum matang dari kultivar Jack, Williams
dan Dwight (Yan et al., 2000; Ko et al., 2003) atau embrio somatik sekunder proliferasi kultivar
Chapman, Bragg, IAS5 & BRMG 68 Vencedora (Trik et al., 1997; Trick & Finer, 1998; Droste
et al., 2000; Wiebke-Strohm et al., 2011).

Transformasi genetik oleh pengeboman partikel (Sanford, 1988), juga disebut percepatan partikel
atau proyektil, biolistika atau biobalistik, terdiri dari pengenalan DNA dalam sel dan jaringan
yang utuh oleh mikroproyekil yang dipercepat yang digerakkan dengan kecepatan tinggi.
Proyektil ini mampu melintasi dinding dan membran sel dan nukleus, tempat fragmen DNA
dibebaskan (Trick & Finer, 1997). Dalam organel ini, DNA eksogen kemudian dapat
diintegrasikan ke DNA kromosom melalui proses rekombinasi yang tidak sah atau homolog yang
secara eksklusif tergantung pada komponen sel (Sanford, 1990; Kohli et al., 2003). Pengeboman
partikel memberikan masukan DNA dalam sel tanaman dengan menggunakan plasmid (Hadi et
al., 1996; Homrich et al., 2008) atau kaset gen (Fu et al., 2000; Breitler et al., 2002). Dalam
metode ini, DNA melekat pada partikel logam yang disebut mikrokarrier. Logam yang
digunakan dalam proses tersebut harus lembam, seperti emas atau tungsten, untuk mencegah
partikel bereaksi dengan DNA atau komponen sel (Christou et al., 1990). Kompleks DNA-
partikel dipercepat menuju sel-sel target menggunakan perangkat yang berbeda berdasarkan
beragam mekanisme akselerasi. Pengeboman partikel dapat dicapai melalui senjata gen tekanan
helium tinggi atau rendah. Jadi, penetrasi dalam jaringan target dapat dikontrol dengan sangat
akurat, mengarahkan mayoritas partikel yang membawa DNA ke lapisan sel tertentu. Ini adalah
fitur yang sangat penting, karena eksplan yang berbeda mungkin memerlukan kondisi akselerasi
yang berbeda untuk penetrasi partikel optimal (Christou et al., 1990). Karena sel-sel epidermis
tunggal bertanggung jawab atas inisiasi embrio somatik sekunder (Sato et al., 1993), penetrasi
yang dangkal akibat pembombardan tekanan helium rendah memastikan transformasi yang
efisien (Sato et al., 1993). Finer et al. (1992) mengembangkan akselerator partikel tekanan
helium rendah yang disebut Particle Inflow Gun (PIG). Keuntungan utama dari pemboman
partikel terletak pada kemungkinan untuk mentransfer gen ke sel atau tipe jaringan apa pun
secara independen dari genotipe dan tanpa harus mempertimbangkan kompatibilitas antara inang
dan bakteri, seperti yang dipersyaratkan oleh sistem Agrobacterium. Di sisi lain, menggunakan
teknik ini, beberapa salinan DNA diperkenalkan yang dapat bergabung kembali atau
terfragmentasi (Hadi et al., 1996; Kohli et al., 2003). Beberapa penelitian tentang transformasi
kedelai melalui pengeboman partikel menggunakan jaringan embriogenik telah diterbitkan (Finer
& McMullen, 1991; Finer et al., 1992; Stewart et al., 1996; Droste et al., 2002; Homrich et al.,
2008; Schmidt et al., 2008; Wu et al., 2008; Li et al., 2009; Hernandez-Garcia et al., 2009; Xing
et al., 2010).