SEMINAR NASIONAL RISET INOVATIF II, TAHUN 2014

ISSN : 2339-1553

LIPASE ALKALI DAN STABIL ALKOHOL DARI BAKTERI ISOLAT

TANAHTERKONTAMINASI MINYAK DI PASAR ANYAR
SINGARAJA, BALI

I Putu Parwata1, Ni Wayan Martiningsih2

1*
Universitas Pendidikan Ganesha, Singaraja
2
Universitas Pendidikan Ganesha, Singaraja, Indonesia

email : iputuparwata@gmail.com

Abstrak

Penemuan dan pengembangan lipase yang stabil dalam lingkungan ekstrim menjadi fokus
penelitian saat ini. Penelitian bertujuan untuk memperoleh varian lipase yang unik dari bakteri
yang diisolasi dari tanah terkontaminasi minyak di Pasar Anyar Singaraja, Bali. Bakteri
sebelumnya telah ditumbuhkan pada media produksi lipase dengan komposisi: pepton (0,5%),
ekstrak ragi (0,5%), agar (2%), NaCl (0,5%), CaCl2 (0,05%), suspensi minyak zaitun (2,5%)
dalam tween 80 (1%) dan Rodamin B (2%). Satu koloni dengan potensi lipolitik baik diisolasi
dan diidentifikasi menggunakan teknik pewarnaan Gram. Lipase diproduksidari bakteri tersebut
dandimurnikan secara parsial dengan amonium sulfat pada tiga tingkat fraksi (0-40%, 40-60%,
60-80%), fraksi terbaik kemudian dikarakterisasi berdasarkan parameter pH, temperatur, dan
stabilitas dalam pelarut organik. Hasil pewarnaan gram menunjukkan bakteri memiliki bentuk
kokus dan termasuk kelompok gram negatif. Hasil pemurnian lipase terbaik diperoleh pada
fraksi amonium sulfat sebesar 40-60% dengan aktivitas spesifik sebesar 1,05 Unit/mg dan
tingkat perolehan 35,98%. Lipase yang diperoleh termasuk golongan lipase alkali, menunjukkan
aktivitas katalitik yang baik pada rentang pH basa (8-10,5) dengan aktivitas optimum pada pH
o
9,5. Lipase bekerja baik pada rentang temperatur 10-60 C dengan aktivitas optimum pada 50
o
C sebesar 1,06 Unit/mg. Selain itu, lipase yang diperoleh menunjukkan stabilitas yang sangat
baik dalam etanol dan n-propanol. Lipase yang ditemukan dapat dikembangkan dalam industri
detergen maupun sebagai biokatalis dalam produksi biodiesel.

Kata kunci: lipase alkali, stabil alkohol, bakteri, tanah terkontaminasi minyak, Pasar Anyar
Singaraja

Abstract
The discovery and development of lipases which are stable in extreme environments being the
focus of current research. The research aims to obtain an unique lipase variant from bacteria
isolated from oil contaminated soil in Pasar Anyar Singaraja, Bali. Bacteria have previously
been grown on lipase production media composed of: 0.5% peptone, 0.5% yeast extract, 2%
bacto agar, 0.1% NaCl, 0.05% CaCl2, 2.5% olive oil suspension in 1% tween 80, and 2%
rhodamine B. One colony with the lipolytic potency both isolated and identified using Gram’s
staining technique. Lipase produced from the bacteria and partially purified by ammonium
sulphate fraction at three levels (0-40%, 40-60%, 60-80%), the best fractions were then
characterized based on parameters of pH, temperature, and stability in organic solvents. Gram’s
staining results showed the cocci bacteria include in gram-negative group. The best results of
lipase purification obtained on ammonium sulfate fraction of 40-60% with a specific activity of
1.05 units/mg and a yield of 35.98%. Lipase obtained belonged to alkaline lipase, showed good
catalytic activity in the alkaline pH range (8 to 10.5) with optimum activity at pH 9.5. Lipase
works well in the temperature range of 10-60 °C with an optimum activity at 50 °C of 1.06
units/mg. In addition, lipase obtained showed excellent stability in ethanol and n-propanol.
Lipase were found to be developed in the detergent industry as well as a biocatalyst in biodiesel
production.

Keywords : alkaline lipase, alcohol-stable, bacteria, oil-contaminated soil, Pasar Anyar

Singaraja

1. Pendahuluan farmasi, kosmetika, pengolahan limbah dan

Lipase adalahsalah satu enzim yang air, tekstil (Eltaweel dkk., 2005). Lipase
banyak digunakan dalam berbagai industri mengkatalisis hidrolisis lipid (triasilgliserol)
seperti industri kimia, makanan, detergen, menjadi gliserol dan asam lemak bebas.

900

Pada kondisi tertentu lipase juga mampu
mengkatalisis reaksi kebalikannya, yaitu
sintesis ester dari asam lemak bebas dan
gliserol atau substrat lainnya (Peradkk.,
2006).
Dewasa ini lipase banyak dimanfaatkan
sebagai biokatalis untukreaksi-reaksi organik
seperti transformasi kemo-, regio-, dan
stereoselektif, sintesis ester, dan
transesterifikasi. Salah satu yang menarik
saat ini adalah pemanfaatan lipase untuk
produksi biodiesel dari minyak nabati melalui
reaksi transesterifikasi (Sharma dkk., 2001).
Reaksi transesterifikasi dalam produksi
biodiesel terjadi dalam lingkungan organik
karena menggunakan sejumlah besar
alkohol (metanol atau etanol) sebagai
pendonor gugus alkil. Untuk itu, lipase yang
digunakan harus memiliki stabilitas yang baik
dalam pelarut organik.
Saat ini, isolasi lipase yang memiliki sifat
unik dan toleransi tinggi terhadap lingkungan
ekstrim khususnya lingkungan organik
menjadi fokus para peneliti. Lipase yang
stabil terhadap lingkungan ekstrim umumnya
diisolasi dari berbagai mikroorganisme yang
hidup di lingkungan ekstrim (ekstrimofilik).
Tanah yang terkontaminasi oleh minyak
menjadi salah satu habitat bagi
mikroorganisme ekstrimofilik. Dalam tanah ini
dapat ditemukan mikroba-mikroba yang
mampu menghasilkan enzim-enzim yang
stabil terhadap lingkungan ekstrim. Sebagai
contoh, lipase hasil kloning dari bakteri
Staphylococcus epidermis yang diisolasi dari
tanah terkontaminasi minyak di bengkel
mobil menunjukkan ketahanan terhadap
berbagai pelarut organik seperti toluena,
oktanol, p-xylena, dan n-hexana (Abdul
Rahman dkk., 2010). Sementara itu, Parwata
dan Sukarta (2013) melaporkan lipase yang
diisolasi dari tanah terkontaminasi minyak di
Pasar Anyar Singaraja, Bali menunjukkan
stabilitas yang baik dalam pelarut organik
polar (metanol dan etanol) maupun pelarut
non polar (n-heksana).
Pada penelitian ini lipase diisolasi dari
koloni potensial lainnya yang diperoleh dari
tanah terkontaminasi minyak di Pasar Anyar
Singaraja, Bali (Parwata dan Sukarta, 2013).
Lipase yang diperoleh memiliki sifat yang
berbeda dan unik dari sebelumnya dalam hal
stabilitasnya dalam pelarut organik dan pH
optimumnya.
2. Metode
2.1 Alat dan Bahan Penelitian
Alat-alat yang digunakan dalam
penelitian ini meliputi:cawan petri,
Erlenmeyer, shaker (IKA KS 260),
901
SEMINAR NASIONAL RISET INOVATIF II, TAHUN 2014
ISSN : 2339-1553
autoclave(Hirayama HVE-50), oven
(Carbolite R38), water bath(Memmert), pH
Meter (Thermo Orion model 710 A+),
mikroskop (Olympus CX21),
Spektrofotometer (Genesys 20), Inkubator
bergoyang (New Brunswick Scientific Edison
C25KC), alat sentrifugasi (Thermo scientific
SL 16R, dan Beckman J2-HS centrifuge),
neraca analitik (Mettler Toledo AG 204,
USA).
Bahan-bahan yang digunakan dalam
penelitian ini meliputi: ekstrak ragi, pepton,
NaCl, CaCl2, bacto agar,minyak zaitun,
tween 80, rhodamine B,buffer fosfat (pH 6,0–
8,0), buffer glisin-NaOH (pH 8,5-10,5),
metanol, etanol, n-propanol, n-butanol,
isoamil alkohol, kloroform, p-nitrofenil
palmitat, p-nitrofenol, reagen Bradford, bovin
serum albumin (BSA). Semua bahan yang
digunakan kecuali minyak zaitun dan glisin
memiliki spesifikasi pro analisis (p.a).
2.2 Isolasi dan Uji MorfologiBakteri dari
Koloni dengan Potensi Lipolitik
Pada penelitian sebelumnya telah
diperoleh beberapa koloni bakteri yang
menunjukkan aktivitas lipase yang baik
(Parwata dan Sukarta, 2013). Koloni-koloni
tersebut ditumbuhkan dari sampel tanah
terkontaminasi minyak di Pasar Anyar
Singaraja, Bali menggunakan media produksi
lipase dengan komposisi: pepton (0,5%),
ekstrak ragi (0,5%), CaCl 2 (0,05%), NaCl
(0,5%), bacto agar (2%) yang mengandung
suspensi substrat (2,5% minyak zaitun dan
1% tween 80) dan 2,0% indikator warna
rodamin B.
Bakteri dari koloni yang menunjukkan
potensi lipolitik kemudian diisolasi mengikuti
teknik yang dikemukakan oleh Prescott
(2002). Koloni diisolasi menggunakan teknik
gores (streak) menggunakan media produksi
lipase. Teknik ini diulangi beberapa kali
hingga diperoleh koloni yang seragam (isolat
tunggal).Isolat tunggal yang diperoleh
diidentifikasi untuk mengetahui morfologi dan
jenis gram bakteri melalui uji pewarnaan
Gram.
2.3 Produksi Lipase dari Isolat Tunggal
Bakteri Potensial
Lipase diproduksi dari isolat tunggal
mengikuti prosedur yang dikemukakan oleh
Kumar dkk.(2005). Satu ose kultur isolat
tunggal ditumbuhkan dalam 10 mL media
produksi lipase dengan komposisi pepton
0,5%, ekstrak ragi 0,5%, CaCl 2 0,05%, NaCl
0,1%, diinkubasi dalam inkubator kocok pada
o
suhu 37 C dengan kecepatan 150 rpm
selama 12 jam. Sebanyak 0,1% inokulum

kemudian dipindahkan secara aseptik ke
dalam 500 mL media produksi lipase dengan
komposisi yang sama, diinkubasi dalam
inkubator kocok dengan kecepatan 150 rpm
pada suhu 37 oC selama 20 jam.Sel
dipisahkan dari ekstrak kasar enzim melalui
sentrifugasi dengan kecepatan 10.000 x g
pada suhu 4 oC selama 15 menit.
2.4 Fraksinasi Ekstrak Kasar Lipase
Fraksinasi lipase dilakukan
menggunakan ammonium sulfat mengikuti
prosedur yang dikemukakan oleh Scopes
(1994). Fraksinasi dilakukan pada tiga
tingkat, yaitu fraksi 0-40%, 40-60%, dan 60-
80%. Di dalam ruang dingin (4oC),amonium
sulfat yang telah dihaluskan ditambahkan
secara perlahan ke dalam ekstrak kasar
enzim sambil diaduk. Setelah didiamkan
selama 30-60 menit, selanjutnya
disentrifugasi dengan kecepatan 10000 x g
selama 20 menit pada temperatur 4 oC.
Supernatan dipisahkan dari endapan yang
terbentuk dan ditampung untuk fraksinasi
pada tingkat berikutnya. Endapan protein
pada masing-masing fraksi kemudian
dilarutkan dalam 50 mM buffer fosfat pH 8,0
untuk selanjutnya didialisis menggunakan 20
mM buffer yang sama. Masing-masing fraksi
enzim yang diperoleh kemudian diuji aktivitas
lipase dan kadar proteinnya.
Aktivitas lipase diuji menggunakan
teknik spektrofotometri (Lee dkk., 1999).
Emulsi substrat dibuat dengan
mencampurkan larutan p-nitrofenil palmitat
(pNPP) 10 mM dengan buffer dan etanol
dengan perbandingan 1:95:4 (v/v/v). Reaksi
dimulai dengan menambahkan4 µL lipase ke
dalam 450 µL emulsi substrat, kemudian
diinkubasi pada temperatur tertentu selama
15 menit. Absorbansi produk katalisis diukur
pada panjang gelombang 405 nm. Sebagai
standar, digunakan senyawa p-nitrofenol.
Aktivitas lipase dinyatakan dalam satuan
unit/mg yang didefinisikan sebagai µmol
produk (p-nitrofenol) yang dihasilkan oleh
lipase per menit per mg enzim.
Kadar protein diukur menggunakan
metode Bradford. Larutan enzim direaksikan
dengan reagen Bradford dengan
perbandingan 1:1 (v/v). Campuran diinkubasi
selama lima menit pada suhu ruang, dan
absorbansi larutan diukur pada
panjanggelombang 595 nm menggunakan
spektrofotometer. Hasilnya dibandingkan
dengan standar bovin serum albumin (BSA).
2.5 Karakterisasi Lipase
Lipase dikarakterisasi berdasarkan
parameter pH, temperatur, dan stabilitas
902
SEMINAR NASIONAL RISET INOVATIF II, TAHUN 2014
ISSN : 2339-1553
dalam pelarut organik. Karakterisasi pH
dilakukan dengan mengukur aktivitas lipase
pada 40oC menggunakan 50 mM buffer
dengan rentang pH 6,0-10,5. Karakterisasi
temperatur ditentukan dengan mengukur
aktivitas enzim pada berbagai temperatur
dalam rentang 10–80 oC.
Stabilitas lipase terhadap pelarut
organik ditentukan dengan mengukur
aktivitas sisa enzim setelah diinkubasi dalam
pelarut organik dengan perbandingan 1:1
pada suhu 40 oC selama 30 menit (Abdul
Rahman dkk., 2010). Pelarut organik yang
digunakan meliputi: metanol, etanol, n-
propanol, n-butanol, isoamil alkohol, dan
kloroform.
3. Hasil dan Pembahasan
3.1Hasil Isolasi dan Pewarnaan Gram
Bakteri Dari Koloni Potensial
Hasil penumbuhan dan penapisan
bakteri dari sampel tanah terkontaminasi
minyak yang diambil di Pasar Anyar
Singaraja, Bali (Parwata dan Sukarta, 2013)
menghasilkan beberapa koloni yang
menunjukkan potensi menghasilkan lipase,
dilihat dari perpendaran berwarna merah
kekuningan di sekitar koloni (Gambar 1).
Satu koloni (tanda panah putus-putus pada
Gambar 1) telah diisolasi dan dikarakterisasi
sifat lipase yang dihasilkannya, menunjukkan
stabilitas yang baik dalam pelarut organik
metanol dan etanol (Parwata dan Sukarta,
2013).
Pada penelitian ini, satu koloni lain
(ditunjukkan oleh tanda panah penuh pada
Gambar 1) diisolasi dan dikarakterisasi lipase
yang dihasilkannya. Koloni yang dipilih
menunjukkan morfologi yang berbeda
dengan yang telah dikerjakan sebelumnya
dan menghasilkan lipase dengan sifat yang
unik dan berbeda.
Gambar 1. Koloni-koloni Penghasil Lipase dari Tanah
Terkontaminasi Minyak di Pasar Anyar
Singaraja. adalah koloni yang dipilih
dalam penelitian ini, sedangkan
adalah koloni yang diisolasi sebelumnya
 SEMINAR NASIONAL RISET INOVATIF II, TAHUN 2014
ISSN : 2339-1553

Hasil pewarnaan Gram isolat tunggal terorientasi dengan daerah hidrofobik

dari koloni yang dipilih ditunjukkan pada molekul protein, menyebabkan protein
Gambar 2. Berdasarkan hasil pengamatan berinteraksi satu sama lain melalui interaksi
menunjukkan bakteri tersebut termasuk hidrofobik (Scopes, 1994).
dalam kelompok bakteri gram negatif, Protein yang memiliki lebih banyak
ditunjukkan oleh warna pink dengan bentuk residu-residu non polar (hidrofobik) pada
morfologi kokus. permukaannya akan mengendap pada
konsentrasi ammonium sulfat rendah,
sedangkan protein dengan jumlah residu
hidrofobik yang sedikit (lebih banyak residu
hidrofilik) akan memerlukan konsentrasi
ammonium sulfat yang lebih banyak untuk
mengendapkannya (Scopes, 1994). Bila
dilihat dari hasil fraksinasi (Tabel 1), lipase
yang diperoleh dalam penelitian ini lebih
banyak mengendap pada penambahan
ammonium sulfat dari 40% sampai 60%. Hal
ini menunjukkan jumlah residu-residu
hidrofobik pada permukaan lipase tersebut
Gambar 2. Hasil Pewarnaan Gram Bakteri Isolat Koloni hampir setara dengan jumlah residu
Dengan Potensi Lipolitik hidrofiliknya. Diperlukan cukup banyak
ammonium sulfat (hingga 60%) untuk
3.2 Hasil Fraksinasi Lipase Dari Bakteri menarik molekul-molekul air yang
Lipase yang diproduksi dari bakteri isolat
mensolvasi molekul lipase tersebut agar
tanah terkontaminasi minyak di Pasar Anyar berinteraksi satu sama lain membentuk
Singaraja Bali tersebut dimurnikan secara agregat (mengendap).
parsial menggunakan ammonium sulfat. Hasil
fraksinasi lipase ditunjukkan pada Tabel 1. 3.3 Karakter Lipase yang Dihasilkan Oleh
Bakteri Potensial
Berdasarkan data tersebut, hasil fraksinasi
terbaik diperoleh pada fraksi ammonium 3.3.1 Pengaruh pH Terhadap Aktivitas
Lipase
sulfat 40-60% dengan aktivitas spesifik lipase
sebesar 1,05 unit/mg dan tingkat perolehan Aktivitas spesifik lipase pada berbagai
sebesar 35,98%. Sementara fraksi pH ditunjukkan pada Gambar 3. Berdasarkan
ammonium sulfat lainnya memberikan data tersebut, lipase yang diperoleh
aktivitas spesifik lipase dan tingkat perolehan menunjukkan aktivitas yang baik pada
yang jauh lebih rendah. Untuk itu, fraksi 40- rentang pH tinggi (8-10,5). Aktivitas optimal
60% ini digunakan untuk tahap karakterisasi lipase tercapai pada pH 9,5 dengan nilai
lipase. aktivitas spesifik sebesar 0,94 Unit/mg.
Berdasarkan rentang pH tersebut, lipase
Tabel 1. Hasil Fraksinasi Lipase yang diperoleh dalam penelitian ini termasuk
Protei Aktivita Aktivita Peroleha lipase alkali (bekerja optimal pada suasana
Tahap n s s n
Pemurnian Total Total Spesifik
basa). Aktivitas lipase langsung turun secara
(Unit/mg drastis pada pH 7,5 ke bawah, dan menjadi
(mg) (Unit) ) (%) tidak aktif pada pH 6,5 dan 6.
Ekstrak
44,38 8,20 0,18
Kasar 01
Aktivitas spesifik (Unit/mg)

Amonium sulfat 01
01
Fraksi 0-40% 2,84 0,35 0,12 4,32 01
Fraksi 40- 01
2,81 2,95 1,05 35,98
60% 01
Fraksi 60- 00
2,98 0,30 0,10 3,61
80% 00
00
Pengendapan protein oleh ammonium 00
00
sulfat terjadi akibat interaksi antara residu- 6 6,5 7 7,5 8 8,5 9 9,5 10 10,5
residu hidrofobik pada permukaan protein. pH
Sebelum penambahan ammonium sulfat,
molekul protein dikelilingi oleh molekul-
Gambar 3. Pengaruh pH Terhadap Aktivitas Lipase
molekul air yang membuat protein tersebut
dalam keadaan larut. Penambahan Lipase yang diperoleh menunjukkan
ammonium sulfat dapat menarik molekul- karakter yang berbeda dengan lipase yang
molekul air yang membentuk struktur

903

diperoleh sebelumnya (Parwata dan Sukarta,
2013) yang menunjukkan rentang pH dari 5-
10 dengan aktivitas optimal pada pH 8.
Lipase yang diperoleh pada penelitian ini
lebih stabil dalam suasana basa
dibandingkan lipase yang diperoleh
sebelumnya. Pada pH netral dan asam,
aktivitasnya langsung turun secara signifikan.
Lipase yang memiliki toleransi yang baik
terhadap suasana basa sangat baik
dikembangkan untuk industri detergent.
Sebagai bahan campuran dalam detergent
diperlukan lipase yang memiliki stabilitas
yang baik dalam kondisi pencucian yang
ekstrim seperti pH 8-11, dan suhu 20-50 oC
(Kasana, dkk., 2008).
Hasil penelitian Wang, dkk. (2011)
memperoleh lipase yang memiliki karakter
mirip dengan lipase hasil penelitian ini bila
dilihat dari rentang pH aktivitasnya. Lipase
tersebut diisolasi dari Acenitobacter johnsonii
strain LP28 menunjukkan aktivitas baik pada
rentang pH 8-11 dengan nilai optimum pada
pH 9. Lipase tersebut menunjukkan potensi
yang baik sebagai bahan aditif untuk
detergent. Lipase yang diperoleh dalam
penelitian ini bahkan memiliki pH optimum
sedikit lebih tinggi (9,5) dibandingkan lipase
yang dihasilkan dari A. johnsonii tersebut,
jadi sangat baik bila digunakan untuk
campuran detergent.
Lipase alkali lainnya yang diisolasi dari
berbagai sumber rata-rata memiliki pH
optimum 9 ke bawah, namun memiliki
toleransi yang cukup lebar hingga ke daerah
pH rendah (Limpon dan Minakshi, 2012;
Wang, dkk., 2012; Bisht, dkk., 2013; Bouaziz,
dkk., 2011). Jadi lipase yang diperoleh dalam
penelitian ini memiliki sifat unik karena
rentang pH aktivitasnya berada pada daerah
basa (8-10,5) dengan aktivitas optimum pada
pH tinggi (9,5). Lipase dengan sifat lebih
ekstrim telah ditemukan oleh Cherif, dkk.
(2011) dari Staphylococcus sp. strain ESW,
menunjukkan range aktivitas pada pH 9-13
dengan aktivitas optimal pada pH 12.
3.3.2 Pengaruh Temperatur Terhadap
Aktivitas Lipase
Gambar 4 menunjukkan aktivitas
spesifik lipase pada berbagai temperatur.
Dari gambar tersebut, lipase yang diperoleh
bekerja baik dan stabil pada rentang
temperatur 20-50 oC dengan aktivitas
optimum tercapai pada temperatur 50 oC
sebesar 1,06 Unit/mg. Pada temperatur yang
lebih dingin (10 oC), lipase masih mampu
mempertahankan aktivitas katalitiknya
hingga 45,7% dari nilai optimum (50 oC).
Pada temperatur yang lebih panas (60 oC),
904
SEMINAR NASIONAL RISET INOVATIF II, TAHUN 2014
ISSN : 2339-1553
lipase masih mampu menunjukkan aktivitas
katalitiknya hingga 55,9% dari aktivitas
optimum. Setelah 60 oC, aktivitas lipase turun
secara signifikan.
1,2
Aktivitas spesifik (Unit/mg)
1
0,8
0,6
0,4
0,2
0
10 20 30 40 50 60 70 80
Temperatur (oC)
Gambar 4. Pengaruh Temperatur Terhadap Aktiivitas
Lipase
Bila dibandingkan dengan lipase hasil
penelitian sebelumnya (Parwata dan
Sukarta, 2013), lipase yang diperoleh
memiliki karakter temperatur kerja yang
berbeda. Lipase yang diperoleh sebelumnya
juga menunjukkan aktivitas optimum pada
temperatur 50 oC, namun pada temperatur di
bawah ataupun di atasnya aktivitas lipase
langsung turun secara signifikan. Hal ini
menunjukkan lipase tersebut kurang tolerant
terhadap perubahan temperatur. Sementara
lipase yang diperoleh dalam penelitian ini
memiliki toleransi yang sangat baik pada
rentang temperatur dari 20 oC hingga 50 oC.
Lipase dengan toleransi terhadap temperatur
20-50 oC ini sangat mendukung untuk
aplikasinya dalam industri detergen (Kasana,
dkk., 2008), juga untuk aplikasi-aplikasi
lainnya yang memerlukan temperatur kerja
tidak terlalu panas.
Temperatur optimal lipase alkali lainnya
dari beberapa sumber berada pada kisaran
30-60 oC (Cherif, dkk., 2011; Wang, dkk.,
2012; Limpon dan Minakshi, 2012; Wang,
dkk., 2011; Bisht, dkk., 2013; Bouaziz, dkk.,
2011). Karakter lipase yang diperoleh dalam
penelitian ini cukup unik. Stabilitas aktivitas
katalitiknya sangat baik dalam rentang
temperatur yang cukup lebar (20-50 oC).
Pada temperatur 30, 40, dan 50 oC
aktivitasnya hampir mirip, sedangkan pada
pada temperatur 20 oC aktivitasnya hanya
turun sebesar 15,2% dari aktivitas
optimumnya pada temperatur 50 oC.
3.3.3 Stabilitas Lipase Terhadap Pelarut
Organik
Aktivitas lipase diuji setelah enzim
tersebut diinkubasi selama 30 menit pada
temperature 40 oC dalam beberapa pelarut
organik dengan perbandingan 1:1 (Tabel 2).

Berdasarkan table tersebut, lipase yang
diperoleh memiliki stabilitas yang sangat baik
dalam pelarut polar etanol dan n-propanol.
Namun pada pelarut organik lainnya
(butanol, isoamil alkohol, kloroform),
aktivitas lipase turun secara signifikan.
Lipase menjadi hampir tidak aktif setelah
diinkubasi pada pelarut polar metanol,
dimana aktivitasnya hanya tinggal 0,1% dari
kontrol.
Tabel 2. Stabilitas Lipase Dalam Pelarut Organik
Pelarut Organik Log Po/w Aktivitas Relatif
(1 : 1) (%)
Kontrol
Metanol -0.76
Etanol -0.24
Propanol 0.29
Butanol 0.8
Isoamil alkohol 1.3
Kloroform 2 55.1
Log Po/w menunjukkan derajat polaritas pelarut,
Lipase yang diperoleh sebelumnya
(Parwata dan Sukarta, 2013) menunjukkan
karakter yang berbeda dalam hal
stabilitasnya dalam alkohol. Lipase tersebut
sangat stabil dalam dua jenis alkohol
(metanol dan etanol). Sementara lipase yang
diperoleh dalam penelitian ini stabil dalam
etanol (alkohol dengan dua atom karbon),
namun menjadi hampir tidak aktif dalam
metanol (alkohol dengan satu atom karbon).
Lipase yang diperoleh juga menunjukkan
stabilitas yang baik dalam alkohol dengan
tiga atom karbon (n-propanol).
Pelarut organik polarsecara umum
memberikan efek negatif terhadap enzim
karena dapat menarik lapisan molekul air
yang menyelubungi permukaan enzim yang
diperlukan untuk fungsi katalitiknya(Wehtje
dan Adlercreitz,1997). Semakin polar pelarut
tersebut, maka semakin kuat tarikannya
terhadap lapisan molekul air di permukaan
enzim tersebut. Berdasarkan kajian tersebut,
residu-residu yang membentuk struktur
permukaan lipase dalam penelitian ini tidak
dapat mempertahankan lapisan molekul air
di permukaannya ketika berada dalam
pelarut polar metanol. Namun, pelarut yang
kurang polar dari metanol, yaitu etanol dan n-
propanol kurang kuat menarik lapisan
molekul air tersebut, sehingga aktivitas lipase
pada kedua alkohol ini masih tinggi.
Alkohol dengan polaritas lebih rendah
dari n-propanol, yaitu n-butanol dan isoamil
alkohol menurunkan aktivitas lipase hingga
tersisa 5,1% dan 33,9% dari kontrol (Tabel
2). Efek yang sama dari kedua jenis pelarut
SEMINAR NASIONAL RISET INOVATIF II, TAHUN 2014
ISSN : 2339-1553
ini juga terjadi pada lipase dari
Pseudomonas stutzeri yang diisolasi dari
Kawah Lumpur “Bledug Kuwu” di Jawa
Tengah (Parwata, dkk., 2014). Hal ini dapat
disebabkan oleh masuknya pelarut organik
tersebut berkompetisi dengan substrat ke sisi
aktif enzim, merubah konformasi aktif enzim,
merubah struktur sekunder enzim (alpha-
heliks), dan bereaksi dengan enzim (Butler,
1997).
Dalam pelarut kurang polar kloroform,
lipase mampu mempertahankan aktivitas
katalitiknya hingga 55,1% dibandingkan
kontrol (Tabel 2). Pelarut organik non polar
100 umumnya tidak mampu menarik molekul air
0.1 dari permukaan enzim, sehingga tidak
mempengaruhi aktivitasnya (Eltawell dkk.,
94.9
2005). Namun, dari hasil yang diperoleh
98.8 aktivitas lipase turun hingga sekitar 45%
5.1 setelah diinkubasi dalam pelarut kloroform.
Hal ini kemungkinan disebabkan oleh
33.9
struktur kloroform yang relatif kecil dengan
sifat yang kurang polar menyebabkan
molekul ini mampu masuk ke sisi aktif enzim
yang bersifat non polar dan menghalangi
masuknya substrat.
4. Simpulan
Bakteri yang diisolasi dari tanah
terkontaminasi minyak di Pasar Anyar
Singaraja, Bali menghasilkan lipase alkali
yang stabil dalam etanol dan n-propanol.
Lipase menunjukkan aktivitas optimum pada
pH basa (9,5) dan temperatur optimum 50
o
C. Berdasarkan karakter yang dimiliki, lipase
tersebut potensial dikembangkan dalam
industri detergent maupun sebagai biokatalis
dalam produksi biodiesel.
5. Ucapan Terima Kasih
Ucapan terima kasih disampaikan
kepada Universitas Pendidikan Ganesha
yang telah memberikan bantuan dana untuk
penyelesaian penelitian ini.
6. Daftar Pustaka
Abdul Rahman, R. N. Z. R., Kamarudin, N. H. A.,
Yunus, J., Salleh, A. B., Basri, M. (2010).
Expression of an Organic Solvent Stable
Lipase From Staphylococcus epidermidis
AT2. International Journal of Molecular
Science, 11: 3195-3208
Bisht, D., Yadav, S.K., Darmwal, N.S. (2013). An
oxidant and organic solvent tolerant alkaline
lipase by P. aeruginosa mutant: Downstream
processing and biochemical characterization.
Brazilian Journal of Microbiology, 44(4):
1305-1314
905

Bouaziz, A., Horchani, H., Salem, N.B., Gargouri,
Y., Sayari, A. (2011). Expression, purification
of a novel alkaline Staphylococcus xylosus
lipase acting at high temperature.
Biochemical Engineering Journal, 54: 93–
102
Bradford, M. M. (1976). A Rapid and Sensitif
Method for The Quantitation of Microgram
Quantities of Protein Utilizing The Principle
of Protein-Dye Binding, Analytical
Biochemistry, 72: 248-254
Butler, L.G. (1997). Enzymes in Non-aqueous
Solvents. Enzyme and Microbial Technology,
1(4):253–259
Cherif, S., Sami Mnif, Hadrich, F., Abdelkafi, S.,
dan Sayadi, S. (2011). A newly high alkaline
lipase: an ideal choice for application in
detergent formulations. Lipids in Health and
Disease, 10:221
Eltaweel, M. A., Rahman, R. N. Z. R. A., Salleh, A.
B., Basri, M. (2005). An Organic Solvent-
Stable Lipase From Bacillus sp. Strain 42.
Annals of Microbiology, 55(3): 187-192
Parwata, I P. dan Sukarta, I N. (2013). Lipase
Stabil Pelarut Organik dari Bakteri Isolat
Tanah Terkontaminasi Minyak di Pasar
Anyar Singaraja, Bali. Prosiding Seminar
Nasional Riset Inovatif I, hal. 573-579,
Universitas Pendidikan Ganesha, Singaraja,
21-22 Nopember 2013
Parwata, I P., Asyari, M., dan Hertadi, R. (2014).
Organic Solvent-Stable Lipase from
Moderate Halophilic Bacteria Pseudomonas
stutzeri Isolated from the Mud Crater of
Bleduk Kuwu, Central Java, Indonesia.
Journal Of Pure and Applied Microbiology,
8(1): 31-40
Kasana, R.C., Kaur, B., Yadav, S.K. (2008).
Isolation and identification of a Calcoaceticus 1-7 Isolated From Bohai Bay
psychrotrophic Acinetobacter sp. CR9 and
characterization of its alkaline lipase, Journal
ofBasic Microbiology,48: 207–212
Kumar, S., Kokon, K., Upadhyang, A., Kanwar,
S.S., dan Gupta, R. (2005). Production,
Purification and Characterization of Lipase
from Thermophilic and Alkaliphilic Bacillus
906
SEMINAR NASIONAL RISET INOVATIF II, TAHUN 2014
ISSN : 2339-1553
coagulan BTS-3, Protein Expression and
Purification, 41: 38-44
Lee, D., Koh, Y., Kim, K., Kim, B., Choi, H., Kim,
D., Suhartono, M. T. dan Pyun, Y. (1999).
Isolation and Characterization of
Thermophilic Lipase from Bacillus
thermoleovorans ID-1, FEMS Microbiology
Letters, 179: 393-400
Limpon, B., Minakshi, B. (2012). Optimization Of
Extracellular Thermophilic Highly Alkaline
Lipase From Thermophilic Bacillus Sp
Isolated From Hotspring Of Arunachal
Pradesh, India. Brazilian Journal of
Microbiology, 43(1): 30-42
Pera, L. M., Romero, C. M., Baigori, M. D., Castro,
G. R. (2006). Catalytic Properties of Lipase
Extracts From Aspergillus niger. Food
Technol. Biotechnol, 44(2): 247-252
Prescott, H. (2002). Laboratory Exercises in
Microbiology (Fifth Edition). The McGraw-Hill
Companies
Scopes, R. K. (1994). Protein Purification:
Principles and Practice (Third Edition),
Springer Publisher, New York
Sharma, R., Chisti, Y., dan Banerjee, U. C. (2001).
Production, Purification, Characterization,
and Application of Lipases, Biotechnology
Advances, 19: 627-662
Wang, H.K., Shao, J., Wei, Y.J., Zhang, J., dan Qi,
W. (2011). A Novel Low-Temperature
Alkaline Lipase from Acinetobacter johnsonii
LP28 Suitable for Detergent Formulation.
Food Technology Biotechnology, 49(1): 96–
102
Wang, H., Zhong, S., Ma, H., Zhang, J., Qi, W.
(2012). Screening And Characterization Of A
Novel Alkaline Lipase From Acinetobacter
In China For Detergent Formulation.
Brazilian Journal of Microbiology, 148-156
Wehtje, E. dan Adlercreitz, P. (1997). Water
Activity and Substrat Concentration Effect on
Lipase Activity, Biotechnology
Bioengineering, 55: 798-806