MAKALAH PEMISAHAN KIMIA

Kromatografi Lapis Tipis dan Zona Elektroforesis

Dosen Pembina :

Ibu Hayuni

Oleh : Kelompok 6 Off H

1) Siti Anisah (170332614521)

2) Yuni Puspitasari (170332614508)

UNIVERSITAS NEGERI MALANG

FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM

JURUSAN KIMIA

April 2019
 BAB I

PENDAHULUAN

1.1 Latar belakang

Metode pemisahan merupakan aspek penting dalam bidang ilmu kimia karena
kebanyakan materi yang terdapat di alam berupa campuran. Ada banyak teknik
pemisahan seperti kromatografi yang merupakan teknik yang sederhana dan paling
banyak digunakan. Dalam kromatografi komponen-komponen terdistribusi dua fase,salah
satu fase adalah fase diam.
Kromatografi mencakup berbagai proses yang berdasarkan pada perbedaan dari
penyusunan cuplikan dua fasa diantaranya fasa diam dan fasa gerak. Kromatografi dibagi
beberapa macam salah satunya adalah kromatografi lapis tipis.
Selain menggunakan kromatografi teknik pemisahan bisa dilakukan dengan cara
elektroforesis, dimana metode ini didasarkan dengan migrasi partikel partikel yang
bermuatan dalam medan listrik. Partikel partikel ini bisa berupa ion ion makromolekular
seperti protein.
Metode elektroforesis ditemukan dan dipakai untuk menganalisa berbagai kegiatan
penelitian baik dibidang kimia maupun biologi ( Genetika, Taksonomi, dan Bio-
sistematik). Elektroforesis ini ada berbagai macam seperti yang dibahas dalam makalah
ini diantaranya zona elektroforesis dan elektroforesis kertas.

1.2 Rumusan Masalah

1.2.1 Bagaimana prinsip kromatografi lapis tipis ?
1.2.2 Bagaimana kelebihan dan aplikasi kromatografi lapis tipis ?
1.2.3 Bagaimana kinerja zona elektroforesis ?

1.3 Tujuan
1.3.1 Menjelaskan prinsip kromatografi lapis tipis.
1.3.2 Memaparkan kelebihan dan aplikasi kromatografi lapis tipis.
1.3.3 Menjelaskan kinerja zona elektroforesis.
 BAB II

PEMBAHASAN

2.1. Kromatografi lapis tipis.

Operasi yang dilakukan dalam kromatografi lapis tipis sangat penting sama seperti
dalam kromatografi kertas, dan sebagian besar pembahasan sebelumnya berlaku untuk bentuk
kromatografi yang sangat sederhana juga. Sebagai gantinya selembar kertas, lapisan tipis
adsorben halus dibagi didukung pada gelas atau piring plastik yang digunakan.

2.1.1 Sifat Lapisan Tipis

Adsorben yang paling umum digunakan adalah gel silika,alumina, tanah diatom, dan
bubuk selulosa, tetapi bahan lainnya seperti Sephadex, resin penukar ion, atau anorganik
telah digunakan untuk kromatografi partisi tujuan khusus. Silika gel disini bersifat asam dan
memiliki kapasitas yang tinggi, hal ini berguna untuk kromatografi adsorpsi dan partisi.
Alumina adalah dasar dan digunakan terutama untuk adsorpsi. Tanah diatom hampir netral
dan digunakan sebagai pendukung untuk partisi fenomena. Bahan-bahan ini dapat digunakan
dalam bentuk murni, tetapi lebih baik menggabungkannya dengan bahan pengikat (adiesif)
seperti plester Paris membuat lapisan yang lebih kohesif.

2.1.2 Persiapan Lapisan.

Pelat kaca biasanya rata dan halus, atau sesekali ditumbuk ringan atau bergerigi.
Ukuran dan bentuk dapat ditentukan oleh peralatan yang akan digunakan─slide mikroskop
tidak mahal, tersedia, dan memadai untuk pekerjaan skala kecil. Dalam hal apa pun,
permukaan kaca harus dikeraskan. Segera dibersihkan dengan deterjen dan / atau pelarut
organik untuk menghilangkan lemak. Ketebalan lapisan akan menentukan kapasitas sistem.
Lapisan ketebalan sekitar 0,15 hingga 2,0 mm. Perhatian utama adalah untuk mendapatkan
lapisan ketebalan seragam. Sebagian besar lapisan tipis diproduksi dengan menyebarkan
sebuah film bubur berair dari adsorben di atas seluruh permukaan. Bubur itu harus tidak
terlalu tebal (kental) atau terlalu tipis, atau tidak akan menyebar dengan baik. Silica Gel G,
yang mengandung 10 hingga 15% kalsium sulfat terkalsinasi, dicampur dengan sekitar dua
kali lipatnya berat air, membuat bubur yang sangat bagus.

Dalam mesin penyebar komersial, palung berlubang melintasi kaca dan menyimpan
lapisan yang seragam. Atau dapat menggunakan selotip di sepanjang tepi yang berlawanan
kaca dan menggunakan batang kaca untuk sekop menghasilkan lapisan ketebalan tape. Untuk
penggunaan sesekali, sepasang mikroskop atau lampion dapat dicelupkan kembali ke
belakang ke dalam bubur yang tidak mengandung air tapi yang mengandung 35 g Sitica Gel
G dalam 100 ml kloroform, diangkat perlahan, dan dibiarkan mengalir dan dikeringkan.
Setelah menyebar, pengikat membutuhkan sekitar 30 menit untuk “diatur”. Untuk
kromatografi adsorpsi, lapisan diaktifkan dengan memanaskan pada 110o C selama beberapa
jam. Untuk kromatografi partisi, tidak diperlukan pengeringan dan air residu berperan
sebagai fase diam. Pada ujung harus dibersihkan dan pelat disimpan dalam sebuah desikator
atau kabinet yang sesuai. Ingatlah bahwa suatu lempeng yang diaktifkan dengan uap air yang
terserap dan uap lainnya dari udara, membuat perubahan drastis dalam perilaku kromatografi.
Piring TLC yang sudah dicetak (gelas atau plastik) tersedia dari beberapa perusahaan
penyedia laboratorium yang kuat. Untuk penggunaan sesekali, mereka jauh lebih nyaman dan
lebih mudah diproduksi daripada varietas buatan sendiri.

2.1.3 Berbagai Metode Pengembangan dan Deteksi.

Pilihan pelarut tergantung pada faktor-faktor seperti yang telah dibahas dalam
bentuk lain dari kromatografi cair dan metode elusi sama seperti untuk prosedur
kromatografi kertas. Maka prosedur harus dilakukan dalam ruang tertutup untuk
mencegah penguapan pelarut. Untuk mendeteksi bintik-bintik, uap yodium adalah
harus secara luas sebagai pereaksi “universal” untuk senyawa organik. Bintik yodium
menghilang dengan cepat tetapi bisa dibuat lebih permanen dengan menyemprotkan
sebanyak 0,5 larutan benzidin dalam etanol absolut. Reagen pendeteksi umum lainnya
adalah dengan menyemprotkan asam sulfat yang pada pemanasan chars komponen
sampel, meninggalkan bintik hitam. Ada sejumlah reagen yang lebih spesifik yang
tersedia, dan tentu dapat dihilangkan, dielusi, dan diselidiki oleh metode yang
tersedia.

2.1.4 Kelebihan dan aplikasi

Dibandingkan dengan kromatografi kertas, lapisan tipis lebih fleksibel

(rentang fase diam yang lebih luas dan pelarut) lebih cepat dan lebih mudah
direproduksi. Sering digunakan sebagai teknik percontohan untuk melihat sekilas
kerumitan campuran atau sebagai bantuan dalam menentukan kondisi terbaik untuk
kromatografi kolom skala besar. Karena kecepatan dan kesederhanaannya sering
digunakan untuk mengikuti rangkaian reaksi atau untuk memantau teknik pemisahan
yang lebih rumit dan kompleks. Kromatografi lapisan tipis sering berfungsi untuk
mengidentifikasi ekstrak tanaman obat, dan persiapan biokimia atau untuk mendeteksi
kontaminan atau pengotor.

2.2 Zona Elektroforesis

Elektroforesis adalah kemampuan berpindah dalam suatu partikel bermuatan listrik
ion koloid,ion makromolekular atau partikel partikel dalam medan listrik. Pada elektroforesis
tempat migrasi merupakan cara yang kuat untuk memisahkan biocolloid seperti
protein,polisakarida,dan asam nukleat. Migrasi differensial dalam fasa cair reaksi elektroda
harus terjadi untuk mempertahankan arus. Elektroforesis digunakan untuk memisahkan dan
memurnikan suatu makromolekul khususnya protein dan asam nukleat berdasarkan
perbedaan ukuran. Elektroforesis dalam skala besar memungkinkan digunakan untuk metode
pemisahan dalam menentukan komponen protein dan asam nukleat setiap individu.
 Elektroforesis batas gerak adalah Sebuah variasi tabung-U elektroforesis analisis yang
menggunakan solusi buffered sehingga semua spesies tertentu pindah pada tingkat yang sama
sehingga larutan yang ada dalam tabung-U menjadi berubah. Teknik sebelumnya
diperkenalkan Arne Tiselius pada tahun 1973 dengan menganalisis campuran protein. Dia
menempatkan sampel dibagian tengah tabung-U berbentuk persegi yang dilengkapi dengan
elektroda di ujungnya. Pada aliran arus spesies bermuatan mulai bermigrasi ke arah elektroda
yang sesuai. Batas gerak dapat diamati sebagai discontinuites dalam konsentrasi (perubahan
warna).

2.3 Elektroforesis kertas

Elektroforesis kertas adalah elektroforesis yang terdiri dari kertas sebagai fase diam
dan partikel yang terlarut sebagai fasa gerak, terutama ion ion kompleks. Pemisahan ini
terjadi akibat adanya gradasi konsentrasi sepanjang system pemisahan. Pergerakan partikel
dalam kertas tergantung pada muatan atau valensi zat terlarut , luas penampang,tegangan
yang digunakan,konsentrasi elektrolit, kekuatan ion,viskositas dan adsorbsivitas zat terlarut.

Sesuai dengan perkembangan ilmu bahan,elektroforesis kertas menjadi fasa pertama

dari perkembangan elektroforesis zona. Dengan menggunakan medium kertas, pemisahan
dan analisis terhadap asam amino,peptida dan nukleotida.

Mekanisme elektroforesis kertas, pertama film tipis dilapisi cairan pada kertas atau
bahan berpori. Peralatan dapat terdiri dari kertas saring yang didukung pada plat kaca
horisontal dengan ujung kertas dimasukkan dalam larutan buffer.Dalam hal ini elektroforesis
kertas,dimana media pendukung kertas saring bisa diganti dengan kertas selulosa asetat.
Media pendukung dapat divariasikan sebagai Gel,resin dan bahan bubuk. Imunoelektroforesis
dilakukan dengan lapisan agar gel setebal 1 sampai 2 mm,dibentuk pada mikroskop slide.
Setelah pemisahan elektroforesis campuran protein, palung dipotong sejajar dengan tepi plat
dan diisi dengan antiserum yang sesuai.Kemudian diinkubasi selama 24 sampai 48 jam dalam
suasana lembab memungkinkan antiserum untuk berdifusi melalui lapisan agar. Ketika
antiserum mencapai bintik bintik protein dan terbentuk busur yang terlihat sesuai dengan
pasangan protein antibodi-antigen.

2.3.1 Elektroforesis aliran berkelanjutan

Elektroforesisi aliran berkelanjutan adalah elektroforesisis pada kertas atau lapisan

tipis yang memungkinkan salah satu dari beberapa bentuk kromatografi elusi yang
berkelanjutan.

Secara bersamaan dari sumbu sampel di bagian atas kertas dan dielusi ke arah bawah.
Dengan tidak ada arus listrik yang mengalir, sampel akan bergerak dalam garis vertikal lurus
dan muncul tanpa dipisahkan, meskipun setiap komponen bergerak pada kecepatan yang
berbeda tergantung pada koefisien distribusinya. Dengan arus listrik yang mengalir partikel
yang bermuatan akan bergerak ke kiri atau ke kanan tergantung pada muatannya dengan
kecepatan horizontal tergantung pada mobilitasnya. Pergerakan arah yang dihasilkan adalah
jumlah vektor dari dua komponen tegak lurus. Dengan demikian setiap komponen yang terisi
daya harus muncul ditempat yang berbeda di bagian bawah kertas sementara komponen yang
tidak bermuatan akan muncul langsung di bawah titik aplikasi. Elektroforesis berkelanjutan
memungkinkan pengolahan jumlah substansi murni yang relatif besar dalam waktu singkat.
 BAB III

PENUTUP

3.1 Kesimpulan

- Kelebihan kromatografi lapis tipis yaitu lebih cepat dan lebih mudah diproduksi, sedangkan
aplikasinya digunakan untuk mengidentifikasi ekstrak tanaman obat.

- Elektroforesis terjadi migrasi partikel partikel bermuatan yang melibatkan arus listrik.

Daftar Pustaka

- Pescok. 1976. Modern Methods of Chemical Analysis. New York.