Anda di halaman 1dari 3

TUGAS REVIEW JURNAL IMUNOLOGI

OLEH:

SYARIFAH LINDRA CITRA

1601054

DOSEN PENGAMPU:

DRS. MEIRIZA DJOHARI,M.KES,APT

PROGRAM STUDI S1 FARMASI

SEKOLAH TINGGI ILMU FARMASI RIAU

2019
PERTUKARAN KATION PERMUKAAN-DIMEDIASI DENATURASI
IMMUNOGLOBULIN AGLYCOSYLATED (IGG1)

LATAR BELAKANG:

denaturasi dan generasi HMW dari antibodI IgG1 yang dapat dikelola dengan mengurangi
kekuatan pengikatan, dengan meningkatkan stabilitas konformasi, atau dengan menekan
interaksi protein-protein non-asli. Yang berguna dalam mengembangkan proses pemurnian
antibody aglikosilasi.

METODE:
- Antibodi IgG1 monoklonal aglikosilasi (mAb A) diekspresikan dalam sel ovarium hamster
Cina (CHO) dan diproduksi oleh Amgen Inc. (Seattle, WA, USA). Situs N-glikosilasi di domain
CH2 dan dihapus oleh mutasi asparagine 297 menjadi glutamin (N297Q)
- mAb A dari kultur sel yang diambil cairan (HCCF) yang dilakukan pada MAb Select
protein A resin dengan perlakuan asam pH rendah yang diikuti oleh netralisasi ke pH 5.0
untuk membentuk filtered viral inactivated pool (FVIP).

- Langkah-langkah pemolesannya adalah kation tukar kromatografi menggunakan


Fractogel SO3− yang dioperasikan dalam mode flow-through. Dimana HIC kemudian
dipekatkan menjadi 70 g / L dan buffer ditukar menjadi larutan sukrosa 9% disangga
dengan 10 mM asetat pada pH 5,2 oleh filtrasi aliran tangensial (TFF).
- buffer ditukar ke kondisi beban CEX yang diinginkan oleh TFF menggunakan aMillipore
Pellicon330 kDa regeneratedcellulosemembrane.

- Kromatografi eksklusi ukuran analitik (SEC) untuk mengukur yakin berat molekul tinggi
terlarut dilakukan dengan menggunakan a 300 mm × 7,8 mm kolom . buffer dari 100 mM
natrium fosfat, 250 mM natrium klorida, pH 6,8. Mengalir dari tingkat adalah 0,5 mL /
menit. Sampel disuntikkan dengan rapi ke massa Massa HMW di fraksi elusi dihitung
menggunakan pengukuran A280 off-line dan nilai% HMW yang sesuai dari analisis SEC.
.
- MAb A yang sangat murni di 50 mM natrium asetat, pH 5,0 dimuat ke 20 g / L resin.
Dalam pemuatannya , kolom dicuci dengan 3 CV 50 mM natrium asetat, pH 5.0.
kemudian mAb A dielusi dengan gradien linier 20 CV dari 50 mM natrium asetat, pH
5,0 hingga 50 mM natrium asetat / 1,0 M natrium klorida, pH 5.0. Absorbansi protein
dipantau pada 280 dan 300 nm.

HASIL :
kromatografi pertukaran kationdari IgG1 aglikosilasi menghasilkan dua puncak yang
berbeda selama elusi gradien. Puncak eluting awal mengandung <1% berat molekul
tinggi (HMW) spesies, sedangkan puncak kemudian mengandung 23% spesies HMW.
Analisis dengan pertukaran hidrogen-deuterium dan Fourier transform infrared
spectroscopy (FTIR) menunjukkan bahwa pembentukan agregat dan pembentukan
puncak kedua disebabkan oleh denaturasi antibodi pada permukaan resin.