PERSIPITASI KASEIN

Larutan stok : dH2O; 0,2N HCl atau AcOH; Etanol; Dietil Eter

1. Susu utuh disentrifuse 4000rpm selama 20 menit hingga terbentuk lapisan krim di bagian
atas.
2. Ambil larutan di bawah lapisan krim lalu encerkan 1:1 dengan H2O.
3. Tambahkan 0,2N HCl atau AcOH sampai pH 4,6 lalu disentrifuse 4000rpm 5 menit, buang
atau ambil sampel supernatan untuk perhitungan protein.
4. Bersihkan pelet dengan H2O, vortex dan sentrifuse, lalu buang supernatan.
5. Bersihkan pelet dengan etanol untuk menghilangkan lemak, vortex dan sentrifuse lalu
buang supernatan.
6. Bersihkan pelet dengan dietil eter, vortex dan sentrifuse lalu buang supernatan.
7. Untuk SDS PAGE Tambahkan 50% AcOH, vortex hingga pelet kasein larut kembali.
8. Untuk perhitungan kasein dapat dilakukan dengan uji kadar protein kjeldahl / bradford pada
susu skim (langkah 2) dan supernatan (langkah 3). Selisih antara kadar protein langkah 2 dan
3 yang di menjadi berat kasein terpersipitasi.

Sodium Dodecyl Sulphate-Polyacrylamide Gel Electrophoresis (SDS-

PAGE)
 Separating Buffer 1,5M (2X) sejumlah 1000ml :
o Tris base 90,75gr + SDS 2,0gr + dH2O 800ml, kondisikan pH 8,8 menggunakan 6M HCl,
tambahkan dH2O hingga menjadi 1000ml.
 Stacking Buffer 0,5M (2X) sejumlah 1000ml :
o Tris base 30,25gr + SDS 2,0gr + dH2O 800ml, kondisikan pH 6,8 menggunakan 6M HCl,
tambahkan dH2O hingga menjadi 1000ml.
 Running Buffer (1X) 1000ml (bisa digunakan 2 kali) :
o Tris base 1,51gr + Glycine 7,5gr + SDS 0,5gr. Larutkan dengan dH2O 1000ml.
 Sample Buffer sejumlah 10 ml:
o 1M Tris-HCl pH 7,0 = 1,5ml + Glycerol 2,5ml + SDS 1,2gr + Bromophenol Blue 0,005gr +
2Mercaptoethanol 0,6ml + dH2O 4,2ml. Vortex.
 10% Ammoniumpersulphate (APS), 5ml :
o APS 0,5gr + dH2O 5ml, vortex
 30% Acrylamide-Bis Acrylamide solution (29,1:0,9) 100ml:
o Acrylamide 29,22gr + Bis Acrylamide 0,78gr + 100ml H2O, stirring, saring dengan
whatmann, masukkan botol amber dan simpan suhu 4C.
o