 Extracción casera de DNA.

1) Materiales

 500 ml de agua embotellada

 3 vasos de plástico o de cristal limpios
 Jabón líquido para lavar los platos
 1 cucharada de sal
 100 ml de alcohol isopropílico (utilizar sólo en presencia de adultos)
 Colorante azul alimentario líquido

Cómo se hace

1. Mezclar en uno de los vasos el agua embotellada con la sal. Remover hasta que la
sal se disuelva.
2. Pasar tres cucharadas del agua salada que hemos preparado anteriormente a otro
vaso.
3. Beber (sin tragar) las tres cucharadas de agua salada y removerla en la boca durante
un minuto.
4. Escupe el agua de vuelta en el vaso (esto se hace para coger células epiteliales de la
boca y así poder extraer el ADN de ellas)
5. Añadir una gota del detergente para platos líquido en el agua salada que hemos
escupido. Remover despacio para no hacer burbujas (así rompemos las membranas
celulares y podemos extraer el ADN de las mismas)
6. En un vaso separado, mezclar los 100ml de alcohol isopropílico con tres gotas de
colorante alimentario.
7. Con cuidado verter el contenido del vaso con alcohol y colorante alimentario en el
vaso de agua salada inclinando el vaso de agua para que el alcohol genere una capa
sobre el agua salada.
8. Esperar 2,5 minutos, deberías ver cómo se forman grumos y cadenas blancas.

Las cadenas y grumos blancos, son el ADN

Como el ADN no es soluble en alcohol, forma un sólido en la interfase de la capa de alcohol

y agua salada (donde las capas se juntan). La mayor parte de las partes de las células de las
mejillas se verán disueltas en el agua salada, mientras que las cadenas blancas serán miles de
moléculas de ADN unidas unas contra la otra formando posiblemente grumos. Las moléculas
de ADN individuales son demasiado pequeñas para ser vistas a simple vista.

2) Materiales

 Vasos de precipidos o vasitos de plático.

 Tubos de ensayo
 Un cuchillo
  Palitos de pinchos
 Una batidora

Productos

 Cebolla grandes frescas

 Kiwis
 Agua destilada
 Detergente lavavajillas
 Sal
 Zumo de piña o de papaya
 Alcohol de 96º muy frío

Realización práctica

 1.- Cortamos la zona central de la cebolla en dados

 2.- En un vaso de agua echamos 3 cucharaditas de detergente lavavajillas y una de
sal y añadimos agua destilada hasta llenar el vaso.
 3.- Mezclamos esta solución con los trozos de cebolla
 4.- Licúamos el conjunto, con la batidora, a velocidad máxima durante 30 segundos
 5.- Filtramos el líquido obtenido con un filtro de café.
 6.- Llenamos un cuarto de un tubo de ensayo con la disolución filtrada.
 Añade otro tanto de zumo de piña y mezclamos bien.
 7.- Añadimos un volumen de alcohol muy frío equivalente al del filtrado,
cuidadosamente, haciéndolo resbalar por las paredes del vaso para que forme una
capa sobre el filtrado.
 8.- Dejamos reposar durante 2 ó 3 minutos hasta que se forme una zona turbia entre
las dos capas. A continuación introducimos la varilla y extraemos una maraña de
fibras blancas de ADN.

Explicación científica
La extracción de ADN requiere una serie de etapas básicas. En primer lugar tienen que
romperse la pared celular y la membrana plasmática para poder acceder al núcleo de la
célula. A continuación debe romperse también la membrana nuclear para dejar libre el
ADN. Por último hay que proteger el ADN de enzimas que puedan degradarlo y para
aislarlo hay que hacer que precipite en alcohol.
La solución de lavavajillas y sal ayudada por la acción de la licuadora es capaz de romper
la pared celular y las membranas plasmática y nuclear.

Los zumos de piña y papaya contienen un enzima, la papaína, que contribuye a eliminar las
proteínas que puedan contaminar el ADN.

El alcohol se utiliza para precipitar el ADN que es soluble en agua pero, cuando se
encuentra en alcohol se desenrolla y precipita en la interfase entre el alcohol y el agua.

 Que pesa más el ADN o una proteína

Cada aminoacido pesa en promedio 110 Daltons (Da), entonces se multiplica 110 Da x el
número de aminoácidos. Ejemplo 110 Da x 682 = 75020Da, es decir aproxiamdamente
75KDa.
El ADN se presenta como una doble cadena (de cerca de 1 mm de longitud), circular y
cerrada, que toma el nombre de cromosoma bacteriano. Esta gigantesca molécula circular
tiene un peso de 3 X 10 9d (Daltons).

 Utilidad de la proteinasa K en la extracción del ADN

La proteinasa K: es una proteasa no específica, no se inactiva por iones metálicos o
agentes quelantes. Su actividad es estimulada por agentes denaturantes como el SDS. esta
proteasa libera el DNA nuclear al medio y digiere y desnaturaliza las proteínas
 Reactivos precipitantes:
Etanol: precipita los acidos nucleicos
Fenol: desnaturalizador activo de las proteínas que suprime la solubilidad de las proteínas
en la preparación y las precipita.
En la fase de precipitación, cual es el precipitante? Isopropanol o NaCl
Isopropanol: precipita el DNA. El isopropanol precipita el DNA porque compite con este
por el agua, deshidratándolo y llevándolo al fondo del tubo.
NaCl: hace parte de la solución lisante. Produce el estallido de los nucleos para que queden
libres de las fibras de cromatina
 Función de cada reactivo
SDS: es un detergente aniónico y desnaturaliza proteínas. Ayuda a disociar complejos de
DNA-proteína.
NaCl: hace parte de la solución lisante. Produce el estallido de los nucleos para que queden
libres de las fibras de cromatina

EDTA: Acrónimo de EthyleneDiamine TetraAcetic acid, ácido etilendiamino tetraacético

(a veces AEDT en español). En sus formas desprotonadas (2− y 4−), es un conocido agente
quelante de cationes divalentes, en especial Ca2+ y Mg2+. Dado que el Mg2+ es un cofactor
requerido por la mayoría de nucleasas, su secuestro por el EDTA evita la degradación del
DNA durante la preparación y la electroforesis.

Tris-HCl: se prepara con Tris base a la concentración indicada y con el HCl necesario para
ajustar el pH al valor indicado. En la electroforesis, es el agente tamponante que mantiene
el pH.
MgCl: es un cofactor necesario para la actividad enzimática de las DNA polimerasas. La
concentración óptima de MgCl2 Debe determinarse empíricamente para cada polimerasa,
secuencia y par de cebadores. Demasiado poco o mucho pueden reducir la eficiencia de
amplificación o generar productos inespecíficos, respectivamente.

buffer tris: es el encargado de regular el pH de la reacción

KCl: Moderadas concentraciones de KCl pueden incrementar la actividad de la enzima de
un 50 a un 60% por encima de la activivdad en ausencia de esta sal, cuya concentración
óptima a emplear es de 50mM. Hasta 50 mM de KCl puede ser incluido en la mezcla de
reacción para facilitar elalineamiento de los primers. NaCl a 50 mM o KCl arriba de 50
mM inhibe la actividad de la Taq polimerasa.
Triton X-100: es un detergente no ionico usando para desnaturalizar membranas de celulas
sin desnaturalizar la proteina. Este detergente rompe los conglomerados de proteinas para
promover la actividad enzimática.

Inserto nanodrop 2000

http://www.nanodrop.com/productnd2000overview.aspx
https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/ND-2000

http://datateca.unad.edu.co/contenidos/203027/MODULO_Y_PROTOCOLO_EXE/leccin_
_14_extraccin_de_adn.html