International Journal of Food Microbiology 43 (1998) 1–5

Tipe E botulisme yang terkait dengan paket bandengHering putih

asap

,, babcd * ̈ H. Korkeala, G. Stengel, E. Hyytia, B. Vogelsang, A. Bohl, H .

Wihlman, ea P. Pakkala, S. Hielm

Departemen Makanan dan KebersihanLingkungan, University ofHelsinki, P.O. Kotak 57, FIN-00014 Helsinki,

Finlandia b Institute Institut Makanan dan Kedokteran Hewan Schleswig-Holstein, Neumunster, Jerman cKantor

Hewan dan Makanan, Itzehoe, Jerman dDepartemen Kebersihan Daging, Lembaga Penelitian Hewan dan

Makanan Nasional, Helsinki, Finlandia danMakanan Nasional Administrasi, Helsinki, Finlandia

Menerima 6 Maret 1998; diterima 27 Mei 1998

Abstrak

Pada tanggal 16 Januari 1997, dua orang Jerman menderita botulisme setelah mengonsumsi ikan putih Kanada yang dihisap
panas yang diproduksi di Finlandia. Sampel serum dari salah satu pasien mengandung 6 MLD / ml toksin botulinum. Jenis racun
diidentifikasi sebagai E dengan uji toksin netralisasi dan botulinum tipe neurotoxin E (Bont / E) gen juga diperkuat dari serum
dengan polymerase chain reaction (PCR), tapi C. botulinum tidak dapat diisolasi dari sampel serum positif. Sisa-sisa ikan putih
asap yang dimakan oleh pasien mengandung toksin botulinum yang terdeteksi oleh bioassay tikus dan gen BoNT / E
sebagaimana ditentukan oleh PCR. C. botulinum diisolasi dari sampel ikan dan dikonfirmasi menjadi tipe E oleh tikus bioassay
dan PCR. Sebelas sampel ikan lain dari lot yang sama tidak mengandung toksin botulinum atau gen BoNT. Makanan yang
dicurigai diproses pada tanggal 9 dan 10 Januari 1997 dari bandeng, Hering beku yang diimpor ke Finlandia dari Kanada. Pola
elektroforesis gel medan-berdenyut dariterisolasi C yang. botulinum strainmenyerupai strain referensi yang berasal dari
Amerika Utara. Ini tidak dapat ditemukan pada C. botulinum straindiisolasi dari Laut Baltik-bawah atau dari ikan yang
ditangkap di daerah menunjukkan bahwa ikan itu terkontaminasi oleh C. botulinum di Kanada. Kondisi yang mengakibatkan
produksi toksin tidak dapat diidentifikasi. Masalah keamanan yang terkait dengan ikan asap panas kemasan vakum tampaknya
menjadi perhatian utama dan produk ini merupakan salah satu kendaraan makanan botulisme paling penting yang diproses pada
skala industri. Pemantauan suhu dan penggunaan indikator waktu-suhu direkomendasikan untuk memastikan suhu penyimpanan
yang memadai dari pemrosesan hingga konsumsi. Membiarkan penggunaan nitrat dan nitrit bersama dengan konsentrasi NaCl
yang cukup tinggi dalam produk khusus ini juga harus dipertimbangkan. © 1998 Elsevier Science BV Semua hak dilindungi
undang-undang.

Kata kunci: Clostridium botulinum tipe E; Botulisme; Pecahnya; Ikan, merokok panas; Paket vakum
 1. Pendahuluan botulinum wabahtelah dilaporkan setiap tahun dalam literatur internasional; 12% dari wabah
Dalam beberapa tahun terakhir rata-rata 450 Clostridium disebabkan oleh tipe E (Hatheway, 1995). C. botulinum
tipe E adalah organisme akuatik (Huss, * Penulis yang sesuai. 1980) dan sedimen dasar serta ikan sering kali

0168-1605 / 98 / $ 19.00 © 1998 Diterbitkan oleh Elsevier Science BV Semua hak dilindungi
undang-undang. PII: S0168-1605 (98) 00.080-4
2 H. Korkeala et al. / International Journal of Food Microbiology 43 (1998) 1-5 yang

terkontaminasi oleh organisme ini (Hielm et al., 1998b; 2.3. Metode laboratorium
̈Hyytia et al., 1998).
Botulisme bawaan makanan jarang dikontrak sekarang- Clostridium botulinum terdeteksi oleh PCR beberapa
hari dari produk komersial dan sekitar metode (Hielm et al., 1996) dan bakteri itu 90% dari kasus disebabkan
oleh olahan atau diisolasi dari rumah dengan menggabungkan Metode PCR dengan makanan yang diawetkan
(Hatheway, 1995). Vacuum-packag- the NCFA (1991). Toksisitas klinis dan ing bandeng, Hering putih telah
terbukti menyebabkan sampel makanan dan kemampuan strain yang terisolasi untuk mengetik botulisme E pada
manusia (Koenig et al., Menghasilkan toksin botulinum ditentukan oleh 1964). Konsumsi bioassay tikus yang
diproses secara industri (Kautter et al., 1992). Produk ikan aerobik - termasuk jumlah produk dalam kemasan
vakum ditentukan dengan metode saluran NCFA - telah meningkat dalam beberapa tahun terakhir. Hal ini dapat
menyebabkan (1986) menggunakan plate count agar (Merck, Darmstadt, ke C. Botulinum tipe wabah E
disebabkan oleh commer- Jerman). produk resmi. Di Swedia dua C. botulinum type E Karakterisasi genom strain
adalah pelepasan yang berhubungan dengan panas vakum yang dikemas dengan analisis makrorestriksi dan trout
rainbow-field smoked rainbow trout telah dicatat baru-baru ini gel electrophoresis (PFGE). Isolasi DNA in situ ̈

(Anonim, 1991; Oberg, 1994). Informasi lebih lanjut dilakukan dengan menggunakan metode Maslow et al.
pada jenis wabah ini diperlukan untuk (1993), dimodifikasi oleh fiksasi formaldehida sel meningkatkan
keamanan produk ikan. sebelum lisis (Hielm et al., 1998a). Dua belas strain dari Pada tanggal 16 Januari 1997
dua orang Jerman jatuh sakit setelah sebagian besar berasal dari Amerika Utara (Hielm et al., 1998a) memakan
ikan bandeng asap panas yang diproduksi di Finlandia dan 42 isolat dari peternakan ikan trout Finlandia
menggunakan tanah. Sebuah investigasi segera diluncurkan sebagai C. botulinum strain referensi tipe E. temukan
penyebab wabah itu.

3. Hasil

3.1. Pasien 2. Bahan dan metode

Suami dan istri dan cucu mereka makan 2.1. Investigasi pasien ikan putih, merokok pada tanggal 15 Januari.

Ikanitu tidak dipanaskan sebelum makan. 39 tahun Tiga anggota keluarga - dua di antaranya wanita makan

sekitar dua pertiga dari ikan (botulisme tipe E yang dikontrak sekitar, satu di antaranya tetap 600 g) dan pria

berusia 41 tahun itu memakan sisanya. Yang tidak terpengaruh - diwawancarai tentang jenis dan rasa ikan

yang dianggap baik oleh mereka. Jumlah makanan yang dikonsumsi, penyimpanan makanan, cucu tipe dua

tahun memiliki tulang yang tersangkut di dalamnya dan waktu timbulnya gejala. Sampel serum tenggorokan

dan selesai makan setelah dua potong kecil dan isi lambung diambil dari dua pasien adalah ikan. Baik

wanita maupun pria mengembangkan botul-dipelajari. isme tetapi anak itu tidak. Wanita itu mengalami
 gejala pusing, penglihatan kabur, dispnea, sakit kepala, dan disartria tanpa diare, dan 2.2. investigasi makanan
Masa inkubasiadalah 7,5 jam. Masa inkubasi pada laki-laki itu adalah 13,5 jam dan gejalanya adalah Sampel dari
bagian dari paket panas-merokok mual, kram perut, sakit kepala, pusing, ikan putih tua yang dikonsumsi oleh
orang yang menderita muntah, dan diare. Sang istri ditempatkan pada dipelajari, seperti juga 11 ikan dari banyak
yang sama. bantuan pernapasan pada 16 dan 17 Januari. Informasi tentang bahan baku, metode pengolahan, Pada
30 Januari kedua pasien dipulangkan dan transportasi produk diperoleh dari rumah sakit. mewawancarai orang
yang bertanggung jawab dan dengan mempelajari Sampel serum istri berisi 6 MLD / catatan HACCP mereka. ml
toksin botulinum yang ditentukan oleh mouse
H. Korkeala et al. / International Journal of Food Microbiology 43 (1998) 1-5 3

bioassay. Jenis toksin diidentifikasi sebagai Eing pada malam hari antara tanggal 9 dan 10 oleh tes netralisasi
toksin dan botulinum Januari. Ikan awalnya didehidrasi pada suhu 408C untuk gen neurotoxin tipe E (BoNT / E)
juga am-30 menit dan kemudian dihisap dalam empat langkah (30 menit pada plifikasi dari serum dengan PCR
tetapi kami tidak mampu 608C, 30 menit pada 708C , 40 menit pada 758C dan 40 menit pada mengisolasi C.
botulinum dari 708C serum positif). Setelah merokok, ikan tersebut didinginkan hingga sampel 2,58C. Sampel
serum suami adalah selama 90 menit. Menurut pabrikan NaCl negatif pada kedua tes. Sampel konsentrasi
lambung ikan adalah 1,8% (b / b). 452 kg cairan lambung dari kedua pasien adalah PCR negatif. bets dikemas
secara vakum dalam paket ikan tunggal dengan berat masing-masing sekitar 600 g dan diberi label pada awal 3.2.
Analisis makanan dan regangan pagi hari tanggal 10 Januari. Pengangkutan batch dilakukan pada hari yang sama
antara 11 dan 12. Sisa-sisa ikan putih yang dihisap panas dimakan pada pagi hari. Sejumlah 352 kg ikan putih
diekspor, pasien dibawa ke laboratorium. Label ke Jerman dan sisa batch dikirim pada paket vakum menunjukkan
produsen ke pasar Finlandia. dan batch. Ikan mengandung toksin botulinum. Suhu selama pengangkutan batch
yang diukur dengan bioassay tikus dan BoNT / E ke Jerman dicatat dan sebagian besar antara 1 gen sebagaimana
ditentukan oleh PCR. C. botulinum dulu dan 38C, kadang-kadang naik ke 58C. Batch diisolasi dari sampel dan
dikonfirmasi akan tiba di Jerman pada 12 Januari pukul 8.30 tipe E oleh tikus bioassay dan PCR. Am dan
dipertahankan dalam ruang penyimpanan strain terisolasi dan strain kontrol tipe E Beluga importir. Pada tanggal
13 Januari jam 3 pagi, ikan menghasilkan toksin 400 MLD / ml selama 3 dimuat ke dalam truk dan dikirim ke
pengayaan hari ritel dalam kaldu TPGY pada suhu 268C. berbelanja pada jam 8.30 pagi. Pasangan yang sudah
menikah membeli ikan Sebelas sampel ikan lain dari tempat yang sama melakukan hari yang sama. Tidak ada
suhu yang tercatat tidak mengandung toksin botulinum. Tidak mengandung data, tetapi suhunya diperiksa
kemudian. Mereka adalah gen BoNT / E. Sampel masih PCR- 58C di ruang penyimpanan importir, 28C negatif
setelah inkubasi 1 dan 3 minggu pada 20 dan awal pengiriman truk, 58C di toko ritel, 48C, masing-masing. Piring
aerobik menghitung sam- dan 48C di lemari es pasien. ples berada di bawah 200 cfu / g selain dua sampel dengan
4 APCs dari 700 cfu / g dan 9,2? 10 cfu / g.
Analisis Macrorestriction dari terisolasi galur 4. Diskusi menunjukkan kemiripan lebih dekat dengan beberapa
Ameri- Utara bisa C. botulinum strain referensi kelompok II, selain temuan klinis dan laboratorium menunjukkan
bahwa yang Finlandia. Strain 31-2570 E, diisolasi pada tahun 1974 dalam bandeng, Hering kemasan adalah
kendaraan AS, berbagi delapan fragmen pembatasan dari wabah botulisme tipe E. Karenaserupa lainnya C. tiga
belas dengan strain wabah. Hal ini memberikan Dice botulinum wabahpada 1990-an (Anonymous, ̈ koefisien

kemiripan dari 62%, sebagai lawan dari 1991; Oberg, 1994) kita harus memperhitungkan koefisien 36%
antara strain wabah dan risiko yang disebabkan oleh C. botulinum tipe E terkait dengan kerabat terdekatnya yang
terisolasi di luar Amerika Utara. produk ikan asap panas dalam kemasan vakum. Ikan asap panas dalam kemasan
adalah salah satu yang paling 3.3. Pemrosesan ikan dan kondisi pengangkutan kendaraan botulisme makanan
penting diproses pada
skala industri. Makanan yang dicurigai diproses pada
tanggal 9. Hasil PCR positif dari sampel serum adalah dan 10 Januari. Bandeng, Hering beku tidak terduga.
Setelah inkubasi, tabung TPGY diimpor ke Finlandia dari Kanada pada tanggal 20 bukan keruh, yang
menunjukkan sterilitas. Fragmen DNA Desember itu. Ikan dicairkan dalam air dingin selama 3 disajikan sebagai
template PCR untuk primer BoNT / E. Brining berlangsung dalam wadah selama 10 jam. Tampaknya ada dalam
serum. Kemungkinan penggunaan konten NaCl dari air garam adalah 9,5% dan suhu PCR dalam mempelajari
sampel serum dan signifikansi mendatang 5-68C. Merokok dimulai segera setelah pengamatan memerlukan
penelitian lebih lanjut.
4 H. Korkeala et al. / International Journal of Food Microbiology 43 (1998) 1-5

Jelas, suhu merokok diterapkan lakukan formasi dalam produk ikan (Pelroy et al, 1982; ̈ tidak membunuh semua
C1997a... botulinum sporahadir dalam ikan Hyytia et al, ). Namun, karena kemungkinan (Alderman et al., 1972).
Isolasi C. pembentukan senyawa nitrosamin karsinogenik botulinum jenisstrain E dari ikan yang diduga (Walters,
1992) penggunaan nitrit dan nitrat juga mendukung kesimpulan ini. Pola PFGE dari dilarang di banyak negara
(Pelroy et al, 1982;. Strain terisolasi menyerupai strain referensi dari Parlemen Eropa dan Komisi asal Amerika
Utara, tetapi tidak salahMasyarakat C1995.). Eropa Konsumsi botulinum yang straindiisolasi dari produk-produk
ikan asap-panas bawah-Laut Baltik yang dikemas dengan vakum adalah sama-sama sedimen atau dari ikan yang
ditangkap di daerah tersebut. Ini diasosiasikan dengan peningkatan risiko botulisme dan lebih lanjut
menunjukkan bahwa ikan itu sudah terkontaminasi oleh penelitian tentang metode pencegahan yang diperlukan
untuk C. botulinum di Kanada dan itu bukan postprocess meningkatkan keamanan produk. kontaminasi.
Konsentrasi NaCl yang digunakan tidak cukup tinggi untuk mencegah perkembangan dari C. botulinum sporatipe
E. Oleh karena itu, ikan harus memiliki Ucapan Terima Kasih pada suhu yang cukup tinggi untuk waktu

yang cukup lama setelah pemrosesan untuk strain menjadi ̈ Penulis ingin mengucapkan terima kasih kepada

Dr. Kammerer, Medis yang memproduksi toksin botulinum. ̈ Universitas, Lubeck, Jerman, untuk memasok

Menurut informasi yang diberikan, ikan itu adalah sampel pasien dan Dr. Schoo untuk informasi tentang

merokok hanya 5 hari sebelum dikonsumsi. Ini adalah importir. Ibu Kirsi Ristkari, Ibu Maria Stark dan

menyatakan bahwa produksi toksinnya cepat atau Ibu Birte Weitzel berterima kasih atas keunggulan

mereka, telah terjadi penyalahgunaan suhu yang nyata selama bantuan teknis. penyimpanan atau

pengangkutan ikan. produksi toksin Kapasitasdari C. botulinum tipe E ketegangan terisolasi dari ikan dicurigai
tidak berbeda dari yang C. botulinum tipe E strain Beluga. Data Referensi yang diperoleh tidak

mengungkapkan adanyasuhu yang ditandai penyalahgunaanselama pengangkutan dan mi- Alderman yang baik,
GG, King, GJ, Sugiyama, H., 1972. Faktor-faktor dalam kelangsungan hidup Clostridium botulinum sporatipe E spora melalui kualitas

krobiologis yang lain ikan dari banyaksama proses merokok ikan yang. J. Makanan Susu Technol. 35, 163–166. mengkonfirmasi

ini. Bisa jadi in the Anonymous, 1991. Botulism. Epid-aktuellt, 14 (6) 9. pembentukan yang diberikan pada

pemrosesan, transportasi atau Parlemen Eropa dan KomisiEropa penyimpanantidak sepenuhnya benar.

Kemungkinan lain adalah Communities, 1995. Parlemen dan Komisi Eropa bahwa suhu merokok tidak cukup tinggi

untuk Instruksi 95/2 / EC. Jurnal Resmi dari Perusahaan Eropa memusnahkan toksin botulinum yang mungkin

terbentuk sebelum manusia 61, 1-40. Graham, AF, Mason, DR, Peck, MW, 1996.model prediktif Pemrosesan. pengaruh suhu, pH

dan natrium klorida pada Kondisi yang menghasilkan produksi toksin dapat tumbuh dari sporanon-proteolitik Clostridium
botulinum. tidak diidentifikasi. Dalam wabah Swedia Int. J. Mikrobiol Makanan. 31, 69–85. kesalahan yang

mengakibatkan produksi toksin tidak mungkin Hatheway, CL, 1995. Botulism: Status penyakit saat ini. menunjukkan

baik. Kondisi penyimpanan yang salah adalah Curr. Teratas. Mikrobiol. 195, 55–75. ̈ Hielm, S., Hyytia, E., Ridell, J.,

Korkeala, H., 1996. Deteksi yang diusulkan (Anonim, 1991). Suhu Clostridium botulinum dalam ikan dansampel lingkungan

dokumentasi pemantauandan penggunaan waktu- menggunakan reaksi berantai polimerase. Int. J. Mikrobiol Makanan.

31, indikatorharus direkomendasikan untuk memastikan peratur357-365. suhu penyimpanan yang memadai dari

pemrosesan ke ̈ ̈ Hielm, S., Bjorkroth, J., Hyytia, E., Korkeala, H., 1998a.genomik Konsumsi. Konsentrasi NaCl yang

cukup tinggi dalam analisis Clostridium botulinum kelompok II olehgel medan-pulsed elektroforesis. Appl. Mengepung. Mikrobiol.
64, 703–708. produk akan mencegah perkembangan dari C. ̈ Hielm, S., Hyytia, E., Andersin, A., Korkeala, H., 1998b.tinggi

botulinum Spora Etipe E(Pelroy et al., 1982; prevalensi Clostridium botulinum tipe E dalam bahasa Finlandia segar-

Graham et al., 1996). Karena aspek kesehatan masyarakat air dan sampel sedimen Laut Baltik. J. Appl. Mikrobiol. 84,

industri makanan, bagaimanapun, mencoba untuk mengurangi jumlah 133-137. NaCl dalam makanan. Nitrat

dan nitrit juga dikenal Huss, HH, 1980. Distribusi Clostridium botulinum. Appl. untuk memiliki sifat penghambatan

pada botulinum toxin Environ. Mikrobiol. 39, 764-769.

H. Korkeala et al. / International Journal of Food Microbiology 43 (1998) 1-5 5

yHyytia, E., Eerola, S., Hielm, S., Korkeala, H., 1997. Natrium Persing, DH, Smith, TF, Tenover, FC, White , TJ (Eds.), Nitrit dan kalium nitrat dalam
kontrol nonproteolytic Diagnostik Mikrobiologi Molekul: Prinsip dan Aplikasi- Clostridium botulinum hasil pertumbuhan dan toksigenesis dalam
vakum, ASM Press, Washington, DC, hal. 563–572. dikemas trout pelangi asap-dingin. Int. J. Mikrobiol Makanan. 37, NCFA, 1986. Mikroorganisme
aerob. Penghitungan pada 308C dalam 63-72. daging dan produk daging. Metode no. 86. Komite Nordic tentang ̈Hyytia, E., Hielm, S., Korkeala, H.,
1998. Prevalensi ClosAnalisis-Food, edisi ke-2. Espoo.
tridium botulinum tipe E pada ikan dan produk perikanan Finlandia. NCFA, 1991. Clostridium botulinum. Deteksi makanan dan Epidemiol lainnya.
Menulari. 120, 245–250. bahan uji. Metode no. 80. Komite Nordik tentang Makanan Kautter, DA, Solomon, HM, Luke, DE, Bernard, DT, Mills,
Analysis, 2nd ed. Espoo.

̈ DC, 1992. Clostridium botulinum dan toksinnya. Dalam: Van- Oberg, S., 1994. Botulism. Epid-aktuellt 17 (8), 5. derzant, C., Splittstoesser,

DF (Eds.), Kompendium Methroy, GA, Eklund, M., Paranjpye, RN, Suzuki, EM, Peter untuk Mikrobiologis Pemeriksaan Makanan.

Anak Amerika, ME, 1982. Penghambatan Clostridium botulinum type A Public Health Association, edisi ke-3, hlm. 605-621. dan

pembentukan E toksin oleh natrium nitrit dan natrium klorida Koenig, MG, Anderson, S., Cardella, MA, Rogers, DE, 1964. dalam

salmon proses panas (merokok) J. Proteksi Makanan. 45, 833–841. Pengamatan klinis dan laboratorium pada botulisme tipe E di

Walters, CL, 1992. Reaksi nitrat dan nitrit pada makanan dengan pria. Obat 43, 517–545. referensi khusus untuk penentuan N-nitroso

com- Maslow, JN, Slutsky, AM, Arbeit, RD, 1993. Penerapan pound. Tambahkan Makanan. Lanj. 9, 441-447. elektroforesis

lapangan berdenyut untuk epidemiologi molekuler. Di: