SEPARACIÓN DE AMINOACIDOS DE EXTRACTOS VEGETALES POR

CROMATOGRAFIA EN PAPEL
Angie T. Hermida, Natalia Aroz
Estudiantes de química, Facultad de Ciencias Básicas, Universidad de la Amazonia.
Florencia (Caquetá)

Resumen

En la práctica de laboratorio se realizó cromatografía de papel que es una prueba de identificación de

compuestos, en nuestro caso queríamos identificar el tipo de aminoácidos presentes en una muestra
problema, los resultados obtenidos no fueron los esperados, ya que no se logró la identificación de la
muestra.

Palabras claves: Cromatografía de papel, solvente, solubilidad, aminoácidos y adsorción.

Abstract

In the lab chromatography paper is proof identification of compounds was performed in our case we
wanted to identify the type of amino acids present in a test sample, the results were not as expected,
since no identification was achieved the sample.

Keywords: paper chromatography, solvent solubility, amino acids and adsorption.

Introducción. identifican mediante diversos procedimientos

físicos o químicos 1 El uso de papel de filtro
La cromatografía en papel es un proceso muy
como base de soporte fue demostrado por
utilizado en los laboratorios para realizar
Consden, gordo y Martin en 1941. La celulosa en
análisis cualitativos ya que pese a no ser una
forma de hojas de papel constituye un medio de
técnica potente no requiere de ningún tipo de
soporte muy útil, donde el agua es adsorbida
equipamiento. La fase estacionaria está
entre las fibras de celulosa y forma la fase
constituida simplemente por una tira de papel
hidrofilia estacionaria. 2 La utilizada es
de filtro. La muestra se deposita en un extremo
cromatografía ascendente: el disolvente se
colocando pequeñas gotas de la disolución y
encuentra en el fondo del recipiente que
evaporando el disolvente. Luego el disolvente
sostiene al papel y va subiendo atreves del papel
empleado como fase móvil se hace ascender por
filtro. Se deja actuar el disolvente un tiempo
capilaridad. La separación se realiza en función
determinado, se seca el papel y se observan las
de la afinidad de los solutos con las dos fases,
sustancias separadas si tienen color, o en caso de
las más solubles en agua se quedarán cerca del
no tener color se procede al revelado por una
punto donde se aplicó la muestra, y las menos
reacción química apropiada. Esta técnica se
solubles en agua y más solubles en el disolvente
conoce como cromatografía monodimencional y
llegarán más lejos. Las sustancias separadas se
el papel resultante recibe el nombre de
cromatograma monodimencional.3 La razón
entre la distancia que ha migrado un compuesto
y la distancia recorrida por el solvente, se
conoce como el valor Rf y es más o menos
constante para condiciones cuidadosamente
controladas de concentración de soluto,
temperatura y pH. 4

Metodología

Se trabajó con una mezclar los solventes según Figura 1. Resultados.

la siguiente proporción, de butanol 14, acetona
14, ácido acético 4 y agua 8. Se aplicó la muestra
problema (numero 6) y los patrones (tirosina,
glicina, acido glutámico, cisteína, metionina,
arginina, lisina, fenilalanina) en 4 placas de
papel filtro de 20 cm de largo por 10 cm de
ancho, se utilizó para este procedimiento los
capilares para agregar poca cantidad, se colocó
3 mL de la mezcla de solventes en la cámara de
cromatografía, luego de terminar la corrida se
dejó secar hasta no sentir el olor de los solventes.
Posteriormente se agregó 1,8 mL de sustancia
reveladora (Ninhidrina) a la mezcla de
solventes y coloca de nuevo hasta que el
solvente llegue al extremo superior. Se sacó de
la cámara y lleva a un horno a 40 °C.
Análisis
En los resultados obtenidos no se pudo
identificar la mezcla de aminoácidos problemas
ya que no se observó la corrida de los
aminoácidos en dos placas y en las otras dos
solo se observó dos corridas de las tres que se
colocaron en la placa y estaban cruzadas (figura
1).
El resultado de la práctica se pudo ser
ocasionado por varios factores, como la
selección del papel, la selección de solvente, el
revelado, la cantidad de hacer el montaje de la
muestra en el papel. En la selección del papel, el
papel más frecuentemente usado para efectos
analíticos es el Whatman No. 1. El Whatman 3
MM es un papel grueso y se emplea
preferencialmente para separar grandes
cantidades de material; sin embargo, la
resolución es inferior a la obtenida con
Whatman No. 1. Para una separación rápida, se
recomiendan los papeles Whatman Nos.4y 5,
aunque en este caso las manchas no son tan
definidas. En cualquiera de los casos, el flujo es
más rápido en la dirección. El papel puede
impregnarse con una solución amortiguadora
antes de usarse o puede ser modificado
químicamente por acetilación. También se
encuentran en el comercio papeles de
intercambio iónico Para la separación de
Lípidos y otras moléculas hidrofóbicas, se
venden láminas impregnadas de sílica.5 Por esto
es muy importante identificar el papel filtro con
el que se está trabajando, ya que de acuerdo el
calibre se debe suministrar la cantidad de
muestra y patrón para obtener una corrida
buena y que se pueda observar con facilidad,
por esto se atribuye que corrida en dos placas no
se observara, ya que se plantó poca muestra.
Otro factor muy importante es la selección del
solvente, es bastante empírica y depende de la
mezcla que se quiere investigar. Si los
compuestos migran hasta muy cerca al frente
del solvente A, es porque son muy solubles,
mientras que si se agrupan alrededor del origen
en el solvente B, entonces no son
suficientemente solubles. Se requiere, por lo
tanto, buscar las proporciones adecuadas de A
y B para que los Rt de componentes de la mezcla
se distribuyan a todo lo largo del papel. El pH
puede ser también importante en una
separación dada, y muchos solventes contienen
ácido acético o amoniaco para producir un
medio fuertemente acido o básico. 6 Revelado es
esencialmente, el aparato consiste en una hoja
de papel sostenida en un marco de tal manera
que uno de los extremos esté en contacto con un
recipiente que contiene el solvente. Para
cromatografía ascendente, el papel se introduce
verticalmente en el solvente. El conjunto se mete
a un tanque herméticamente cerrado en el cual
se ha colocado papel con el solvente para
producir una atmosfera constante, y el proceso
se lleva a cabo en un cuarto de temperatura
constante. Las variaciones en la temperatura
producen migración dispareja del solvente y
pueden alterar los valores Rr. 7 Un error que se
observó muy claro a la hora de la corrida, los
solvente no subían por el papel de una forma
pareja, y esto hizo que las muestras se
atravesaban.
Bibliografía.
1. Técnicas cromatografías, universidad
nacional autónoma de México.
2. Smith, I., Chromatographic and
Electrophoretic techniques. 4a ed.
Londres, William Heinemann Ltd. Vol 1
Chromatography.
3. Cromatografía sobre papel y capa fina.
Electroforesis. (I. Smith y J. Feinberg).
4. Metodos de separación,
https://www.google.com.co/webhp?s
ourceid=chrome-
instant&ion=1&espv=2&ie=UTF8#q=cr
omatografia+de+papel+extraccion+de+
aminoacidos+pdf ( Consultado el 18 de
septiembre de 2016)
5. Metodos de
separación,http://www.bioquimica.do
gsleep.net/Laboratorio
/Plummer/Chp03b.pdf
6. Aminoácido,
http://www.bioquimica.dogsleep.net/
Laboratorio/Plummer/Chp05a.pdf.
7. Universidad central de Venezuela,
http://www.ciens.ucv.ve:8080/genera
dor/sites/
LIApregrado/archivos/Guia%20para%
20cromatografia.pdf

Conclusiones.

 La cromatografia de papel es una

tecnica de identificacion, con muchos
factores que pueden afectar los
resultados, por eso no es fatible.
 Es muy importante tener una mezcla y
concentración adecuada de los
solventes, de acuerdo a lo que se desea
identificar.