las células de alumbre y MF59 aún se desconocen.

Ha sido propuesto
esa adsorción al alumbre aumenta la disponibilidad del antígeno en la inyección
sitio que permite una absorción eficiente de las células presentadoras de antígenos
(APC) (10). El alumbre también podría aumentar la absorción de antígenos por los países en desarrollo
in vitro, apoyando además una función de administración de antígeno (11).
Sin embargo, varios estudios sugirieron que, además del antígeno
entrega, alumbre podría tener actividades inmunoestimulantes in vivo.
Alum i.m. administración resultó en eventos de reclutamiento celular en
el sitio de inyección (12, 13). Más recientemente, se ha demostrado
que i.p. inyección de alumbre indujo el reclutamiento de
monocitos, que podrían absorber el antígeno de la vacuna, migrar a
los nódulos linfáticos que drenan, y se diferencian en completamente competentes
CD inflamatorias (14).
De manera similar al alumbre, MF59 podría promover la absorción de antígenos por
células dendríticas in vivo (15). Además, se ha demostrado que,
después de la i.m. inyección, MF59 es internalizado por APC que migran
al nódulo linfático (16). Además de promover el suministro de antígenos, MF59 también podría actuar como un adyuvante
proinflamatorio local.
De hecho, se observó que MF59: i.m. inyección induce la
influjo de células mononucleares sanguíneas (16).
Varios estudios en ratones informaron que MF59 aumenta la inmunogenicidad
de antígenos solubles mejor que alumbre y CpG (17-
20). Además, los datos clínicos recientes han demostrado que
vacunas contra la gripe pandémica formuladas con emulsiones de aceite en agua
inducir seroconversión superior y neutralización cruzada en comparación
con vacunas no adyuvadas o con vacunas formuladas
con alumbre (21-23). La capacidad de adyuvancia del alumbre y MF59 es
modulado por la adición de CpG (17, 19). En particular, el
Además de CpG a MF59 o alumbre induce un cambio dramático de
una respuesta Th2 a Th1 en ratones BALB / c (17, 20). Para comprender mejor el mecanismo de acción molecular de

emulsiones de aceite en agua y su potencia relativa en comparación

con otros adyuvantes, inicialmente realizamos análisis de microarrays
de células mononucleares de sangre periférica humana estimuladas in vitro.
En este ensayo, MF59 mostró efectos muy modestos en la transcripción
perfiles (datos no mostrados). Por lo tanto, realizamos microarrays
análisis de todo el músculo inyectado con MF59, alumbre,
CpG, y con una combinación de MF59 y CpG. Genes seleccionados
mediante análisis de datos de microarrays se utilizaron en inmunofluorescencia
experimentos para identificar células objetivo MF59 y para controlar la célula
eventos de reclutamiento provocados por adyuvantes de vacunas en la inyección
sitio. Finalmente, los efectos sistémicos de todos los adyuvantes probados fueron
investigado midiendo la concentración de citocina en el suero.
Aquí, mostramos que, mientras que todos los adyuvantes probados indujeron una
conjunto común de 168 genes, MF59 indujo aproximadamente tres
veces más genes que el alumbre y CpG. MF59 fue el más fuerte
inductor de citoquinas, receptores de citoquinas y genes implicados en
migración de leucocitos y presentación de antígenos. Inmunofluorescencia
análisis mostró que MF59 promovió una más rápida
reclutamiento de células CD11b-positivas. Además, biomarcador temprano
expresión sugiere que las fibras musculares son el objetivo principal
de MF59.

Resultados

Modulación diferencial de la expresión génica en el sitio de inyección por humanos

Adyuvantes de vacunas. Para analizar los efectos locales sobre la expresión génica

inducido por MF59, alumbre, CpG y una combinación de MF59 y

CpG, ratones cuadriceps fueron inyectados con 50 l de cada adyuvante

diluido en PBS y procesado a las 3, 6, 12, 24, 48 y 96 h para

análisis de microarrays de genoma de ratón completo, como se describe en Materiales

y métodos. El mismo volumen de PBS se usó como control. Un total

de 1.260 genes han sido seleccionados con una razón log2 promedio 2
en comparación con el cuádriceps no tratado y un valor de P 0.05 calculado

en las tres réplicas de al menos un punto de tiempo [de apoyo

información (SI) Tabla S1]. Entre estos genes, 79 fueron modulados

por todos los adyuvantes y por PBS. La lesión producida por la aguja y

la inyección de un volumen relativamente grande de líquido en el músculo

podría ser responsable de regular este grupo de transcripciones, que

incluido Ccl7, Timp1, Socs3, Mt1 y Mt2. Todos los otros genes

seleccionados con los criterios de umbral descritos anteriormente fueron

regulado por al menos un adyuvante pero no por la inyección de PBS

y por lo tanto se consideraron genes que responden a adyuvantes. MF59

regulado un mayor número de genes (891) en comparación con otros

adyuvantes, y entre estos, 489 fueron selectivos para MF59. Alumbre regulado

312 genes, y solo 24 fueron selectivos al alumbre. CpG modulado

387 genes, de los cuales 85 fueron selectivos (Fig. 1A). Curiosamente, 168

los genes fueron sensibles a todos los adyuvantes; por lo tanto, fueron definidos

como '' genes de respuesta del núcleo adyuvante ''. Análisis funcional de este grupo

de genes identificaron tres categorías significativamente enriquecidas: citocinatoquina

interacción del receptor [Enciclopedia de Kioto de genes y

Base de datos Genomes (KEGG); Valor P 0.00127], huésped-patógeno

Interacción [Gene Ontology (GO): 0030383, P value 1.07

10 18], y la actividad de la proteína de inmunidad de defensa (GO: 0003793, P

valor 9.58 10 4

) También identificamos 19 genes relacionados con el tipo

I Respuesta de IFN (Tabla S2).

Como se esperaba, la mayoría (542) de los genes regulados por

coadministrado MF59 y CpG también fueron modulados por MF59

o CpG solo (Fig. 1B). Sin embargo, algunos genes (176), incluidos

IFN tipo I Ifnab, Stat6, y Il16, fueron regulados solo cuando MF59

y CpG fueron coadministrados (Fig. 1B y Tabla S1). Otro

Los genes de la vía IFN que responden tanto a MF59 como a CpG, tales como

Irf1, Irf7, Irf8, Stat1 y Stat2, se regularon aún más en el

tratamiento combinado (Fig. S1). Encontramos que CpG regulado

el perfil de expresión de un gran número de respuestas MF59

genes. De hecho, 366 genes modulados por MF59 no estaban regulados

por el tratamiento combinado (Fig. 1B). En particular, CpG

inhibió la activación de muchos genes inflamatorios, incluyendo

Tnf, Il1b, Ltb, Ccr1, Ccr3 e Il1r2 (Fig. 1 C y D).

Bases de datos de GenMapp. Los genes que pertenecen a los más significativos
categorías enriquecidas se han agrupado en función de la
perfil de expresión Todos los adyuvantes regulaban la expresión local
de citoquinas y receptores de citoquinas (Fig. 1 C-E). Un grupo de
citocinas (Ccl2, Ccl4, Ccl5, Ccl12, Cxcl10, Il1b e Il2) fue
regulado hacia arriba en los primeros tiempos por MF59 y CpG y más tarde
también por alumbre (Fig. 1 C y E). Varias otras citocinas, como
Tnf, Ccl17, Ccl24, Ltb y Tgfb1, fueron específicos para MF59; Cxcl9
y Cxcl13 fueron específicos para CpG, mientras que no logramos detectar
citocinas específicas para alumbre (Fig. 1 C y E). MF59 fue más
potente inductor de los receptores de quimioquinas en comparación con CpG y
alumbre, desencadenando la regulación ascendente secuencial de Ccr1 y Cxcr4
(6 h), Ccr5 (12 h), Ccr2 (1 d) y Ccr3 (4 d) (Fig. 1D). En
Además, se indujeron los receptores para Il1, Il2, Il4 e Il10
selectivamente por MF59. Varios factores de transcripción conocidos por
regular la expresión de citocinas, como Irf1, Irf7, Stat1 y Stat2,
fueron modulados por todos los adyuvantes (Fig. S2). Por análisis funcional,
identificamos otros grupos de genes significativamente enriquecidos preferentemente
activado por MF59, como los genes implicados en el complemento
activación, síntesis de prostaglandinas y señalización Il1, y genes
codificación de metaloproteinasas de matriz (figura S2).
MF59 induce el reclutamiento de células MHC de clase II y CD11b en
Sitio de inyección. La regulación positiva de los genes proinflamatorios en el
sitio de inyección sugiere que los adyuvantes de vacunas también podrían conducir la célula
reclutamiento del torrente sanguíneo al músculo. Esta hipótesis
fue respaldado por el enriquecimiento significativo de genes
implicado en la migración transendotelial leucocitaria (Fig. S2). Otro
grupo de genes seleccionados por el análisis funcional de datos de microarrays
están involucrados en el procesamiento y presentación del antígeno (Fig. 2A).
Dentro de este grupo, genes MHC de clase I (H2-Q, H2-K, H2-T, H2-D)
fueron regulados por todos los adyuvantes, aunque con diferentes cinéticas:
MF59 y CpG indujeron una regulación positiva ya a las 6-12 h después
tratamiento, mientras que el alumbre se indujo a 1-2 días. MHC clase II
los genes, incluidos H2-Aa, H2-Ea y H2-Eb1, se regularon por incremento
todos los adyuvantes a los 4 días. MF59 era un inductor más potente de MHC
transcripciones de clase II en comparación con CpG o alumbre. Interesantemente, en
puntos de tiempo anteriores, CpG regulado por disminución de genes MHC clase II ambos
cuando se administra solo y en combinación con MF59. Otro
genes implicados en el procesamiento y la presentación del antígeno, como las catepsinas
y B2m, también fueron regulados al alza. La regulación positiva del MHC
los genes de clase II pueden ser el resultado de la activación de APCs residentes
o del reclutamiento de APC impulsado por la expresión local de quimioatrayentes
y moléculas de adhesión. Para supervisar el reclutamiento de APC
eventos después de la inyección adyuvante, realizamos inmunofluorescencia
análisis de criosecciones musculares después de i.m. administración de
PBS, MF59, CpG y alumbre usando un anti-MHC clase II I-A / I-E
anticuerpo. La estructura del músculo se visualizó usando un
anticuerpo específico para Utrofina, una proteína citoesquelética que desempeña un papel
en el anclaje del citoesqueleto a la membrana plasmática y ubicado
en el sarcolema de las células musculares. Muy pocas células MHC clase II
se observaron en el músculo 12 y 24 h después del tratamiento (datos no
mostrado). Sin embargo, a los 4 días después de la inyección, todos los adyuvantes de vacunas
aumento de la concentración local de células MHC clase II en el músculo
tejido en comparación con el control PBS (figura 2B). Curiosamente, el
cinética del reclutamiento de células MHC clase II fue consistente con el
Datos de expresión génica MHC clase II (figura 2A). En contraste con MHC
genes de clase II, otro marcador de células sanguíneas, Itgam / CD11b, era
regulado hasta altos niveles por MF59 ya a las 12 h (figura S2). Nosotros
monitoreó el reclutamiento de células CD11b por inmunofluorescencia
análisis y encontró que al 1 día después de la inyección, solo MF59
entrada inducida de células CD11b en el músculo (Fig. 3 izquierda). Esta
el hallazgo es consistente con los datos previos obtenidos del músculo
suspensión de células individuales, que mostró que 1 día después de la inyección,
MF59 indujo un influjo de células mononucleares (16). Todos los adyuvantes
indujo el reclutamiento de células CD11b con una eficacia similar 4
días después de la inyección (Fig. 3 a la derecha).
MF59 activa la expresión de los primeros biomarcadores Ptx3 y JunB
en fibras musculares Los datos descritos anteriormente demuestran que MF59
actúa como un potenciador inmune fuerte en el sitio de inyección; sin embargo, el
se desconoce la célula diana de la actividad inmunoestimulante MF59. En el
intentar identificar la célula diana MF59, Pentraxin3 (Ptx3) y JunB,
inducido por MF59 y CpG 3 h después del tratamiento, fueron seleccionados como
biomarcadores para análisis de inmunofluorescencia en criosecciones musculares
(Fig. 4A y Fig. S3). El Pentraxin 3 largo (Ptx3) es soluble
receptor de reconocimiento de patrones que reconoce patógenos tales como
Aspergillus fumigatus, facilitando la interacción con mononucleares
fagocitos y DC (24). De acuerdo con los datos de microarrays, inmunofluorescencia
análisis mostró una mayor expresión de PTX3 en
fibras musculares a las 12 h en ratones tratados con MF59 y CpG, mientras que
no hubo diferencia significativa entre alumbre y control (Fig.
4B). Se obtuvieron resultados similares usando un anticuerpo contra
JUNB, que detectó una regulación positiva de la proteína en los núcleos
del músculo esquelético en respuesta a MF59 y CpG (Fig. S3). los
inducción de proteínas de respuesta temprana JUNB y PTX3 sugiere que
MF59 activa directamente las fibras musculares. Para estudiar la interacción de
MF59 con células musculares, inyectamos una 3,3-dioactadeciloxacarbocianina
Forma (DIO) de MF59. A las 3 h, MF59 localizado dentro
fibras musculares, apoyando aún más la hipótesis de que MF59 directamente
se dirige al músculo (Fig. 4 C y D).
Respuesta Sistémica a los Adyuvantes de la Vacuna. Diseccionar lo local y
efectos sistémicos de los adyuvantes de vacunas, recogimos los sueros de
los mismos ratones utilizados para el análisis de microarrays y midieron la citocina
concentración. CpG fue el inductor más potente de un gran número
de citocinas, incluidas IL12 (p40), CCL5, CCL2 y CXCL1,
mientras que MF59 regulaba por incremento IL5. El alumbre no indujo ninguna de las
citocinas probadas (figura 5 y datos no mostrados). La expresión sistémica
de IL12 (p40) e IL5 está de acuerdo con Th1 y Th2
respuestas inmunes provocadas por CpG y MF59, respectivamente, en
Ratones BALB / c (17, 20). Además, Il12p40 y Il5 mRNAs fueron
no regulado en el sitio de inyección, lo que sugiere que el aumento en
niveles de citocina en el suero derivados de la activación de las células de
los ganglios linfáticos que drenan o de las células sanguíneas circulantes.
Discusión
Aunque las emulsiones de aceite en agua se consideran los mejores adyuvantes
para la gripe y candidatos prometedores para nuevas vacunas humanas,
su modo de acción aún no está claro. Aquí, mostramos que el petróleo en
emulsiones de agua, similar a alumbre y CpG, activadas innatas
reacciones inmunes en el sitio de inyección. El grupo de genes
modulada por todos los adyuvantes llamados '' respuesta adyuvante del núcleo
gen '' se caracterizó por la regulación positiva de las citoquinas,
quimiocinas y moléculas de adhesión, lo que sugiere que el establecimiento
de un entorno local inmunocompetente asociado a
un proceso inflamatorio no patogénico generalmente se asocia a
adjuvanticity de la vacuna. De hecho, podríamos monitorear el reclutamiento
en el músculo de las células sanguíneas CD11b y MHC clase II 4 días
después de la administración de todos los adyuvantes. Estos datos están de acuerdo
con informes anteriores que muestran que la inyección de alumbre
produce inflamación local (12, 13) y con datos más recientes
que muestra que el reclutamiento de monocitos inducido por alumbre en el peritoneo
(14) Además, dos de las respuestas centrales adyuvantes
genes identificados en el músculo del ratón, CCL2 e IL1b, también fueron
regulado por incremento en el peritoneo después de la inyección de alumbre (14). MF59
fue un activador más potente de genes relacionados con el sistema inmune que el alumbre
y CpG y promovió un reclutamiento más rápido de CD11b
células sanguíneas en el músculo. Este hallazgo es consistente con el anterior
datos obtenidos de la suspensión muscular unicelular, que mostró
que al día 1 después de la inyección, MF59 indujo una afluencia de mononucleares
células (16). El mismo estudio demostró que MF59-
el reclutamiento celular mediado fue parcialmente impulsado por CCR2. En consecuencia,
en nuestro análisis de microarrays, MF59 indujo Ccr2 en 1-2
dias. Además, MF59 regulaba positivamente los ligandos de Ccr2 Ccl2 y
Ccl7 a las 3 hy Ccl8 a las 12 h.
Se ha informado que los oligonucleótidos CpG pueden modular
la respuesta inmune adaptativa provocada por MF59 en ratones (17, 20).
Aquí, mostramos que CpG regula el perfil de expresión de un
gran cantidad de genes sensibles a MF59 en el sitio de inyección,
que puede contribuir a la modulación de la respuesta adaptativa.
Además, encontramos que CpG indujo un sistema sistémico más fuerte
de MF59 en el tejido muscular en el análisis histológico (datos no
mostrado). Curiosamente, CpG también podría activar PTX3 y JUNB
expresión en las células musculares, lo que sugiere que podrían responder directamente a
Agonistas TLR9. Sin embargo, no podemos descartar que las primeras citoquinas
expresión inducida por MF59 o CpG en células hematopoyéticas contribuye
a la activación muscular. Es bien sabido que el músculo esquelético
puede participar activamente en reacciones inmunes locales al expresar
citoquinas proinflamatorias, quimiocinas, moléculas de adhesión y
TLR (25). Nuestros datos sugieren que el músculo esquelético podría jugar un
papel importante en la mejora de la eficacia de la administración intramuscular
vacunas humanas. A diferencia de MF59 y CpG, alumbre no pudo
activar las fibras musculares, y se debe realizar más trabajo para
identificar la célula diana responsable de la inmunoestimulación local dependiente del alumbre
en el músculo
Nuestra hipótesis es que MF59 es un adyuvante muy eficiente, porque
combina la función de entrega del antígeno con un fuerte efecto inmunestimulante
actividad en el sitio de inyección. Proponemos que MF59
induce, en fibras musculares, la producción de mediadores inmunes,
que a su vez activan DC residentes en tejidos. MF59 también puede promover
un proceso sostenido de presentación de antígeno después de la vacunación desencadenando
el reclutamiento de monocitos CD11b, lo que podría diferenciar
en CD inflamatorias funcionales que expresan altos niveles de
MHC clase II, como se describe para alumbre (14). Nuestros hallazgos fuertemente
sugieren que el mecanismo de acción de los adyuvantes de vacunas debe ser
dirigido in vivo donde diferentes tipos de células cooperan para establecer
un entorno inmunocompetente integrado.
Métodos
Ratones. Se obtuvieron ratones BALB / c hembras sin patógenos de 6 - 8 semanas de edad
de Charles Rivers Laboratories. Todos los animales fueron alojados y tratados de acuerdo
al comité ético interno de los animales y las directrices institucionales.
Los ratones fueron inyectados a la i.m. en ambos cuadriceps con 50 l por cuadriceps de PBS
solo (experimento de control) o suplementado con MF59 (dilución 1: 1); 10 g
de CpG; 10 g de CpG y MF59 diluidos 1: 1; o 100 g de Al (OH) 3 (Pierce). Nosotros
elegir la cantidad de adyuvante que proporcionó una capacidad de adyuvancia óptima en anteriores
estudios realizados con diversos antígenos (17-20). Músculos y sueros fueron tomados
de tres ratones por grupo a las 3, 6 y 12 hy 1, 2 y 4 días después del tratamiento.

responses compared with MF59 and alum, probably reflecting

the capability of oligonucleotides to directly activate circulating
blood cells such as DCs and B cells.
By using two early biomarkers identified by microarray analysis,
JunB and Ptx3, we could identify the skeletal muscle as a target of
MF59 immunostimulating activity. Furthermore, we detected labeled
MF59 in muscle fibers, supporting a direct activation of the
muscle by MF59. However, we never observed a pathological effect

Adyuvantes. Se preparó MF59 (5% de escualeno, 0,5% de Tween 80, 0,5% de Span 85). en agua destilada con un
Microfluidizer 110S (MFIC), como se describe (26, 27). los La secuencia de oligonucleótidos CpG utilizada fue 5 -TCC ATG
ACG TTC CTG ACG TT-3 con todas las cadenas principales de fosforotioato (CpG1826). MF59-DIO fue preparado por diluir
DIO resuspendido con cloroformo (Invitrogen) en MF59, concentración final 0,25 g / ml. Extracción y purificación del ARN
muscular. Los músculos enteros se homogeneizaron en 7.5 ml de TRIzol (Invitrogen) con Ultra-Turrax T25 (IKA), y el ARN
total era extraído del tejido siguiendo el protocolo del fabricante. Cien microgramos de ARN de cada par de músculos fueron
purificados mediante el uso de las columnas de purificación de ARN RNeasy (Qiagen) siguiendo el protocolo del productor.
El ADN residual se eliminó mediante una digestión adicional con DNasa en columna paso usando el conjunto de DNasa libre
de Qiagen RNase. La calidad del ARN fue evaluada por utilizando el sistema automatizado de electroforesis Experion (Bio-
Rad) junto con el kit RNA StdSens siguiendo el protocolo del productor.

Etiquetado de ARN, hibridación de microarreglos y adquisición de datos. Microarray cDNA

las sondas se prepararon a partir del ARN total obtenido de los músculos tratados (prueba) o
de un conjunto de RNA extraídos de los músculos de 15 ratones naïve (referencia)
utilizando colorantes Cy5 y Cy3, respectivamente. Veinticinco microgramos de total purificado
ARN fue retrotranscrito a 42 ° C durante 2 h en una mezcla de reacción de 40 l que contiene
0,625 ng / l de oligo (dT) (Invitrogen), 1 unidad / l de RNAsin (Promega), 10 mM de DTT,
DNTPs-dCTP 2 mM y dCTP 1 mM (mezcla dNTP, Amersham), 2 nmoles de Cy3- o
Cy5-etiquetados dCTP (Amersham), y 30 unidades / l Super Script II Reverse Transcriptase
enzima (Life Technologies). El ARN se degradó en un 60 l
mezcla de reacción que contiene 0.3 unidades / l de RNase One (Promega) y 0.6 unidades / l
Enzimas RNaseH (Invitrogen) durante 30 min a 37 ° C, y luego el ADNc marcado
se purificó usando el kit de purificación de PCR QIAquik (Qiagen) después de la
protocolo del fabricante La eficacia de la incorporación de Cy5 o Cy3
los tintes se midieron por análisis Nanodrop. Cantidades iguales de Cy5 marcado y
Los cDNA de Cy3 se hibridaron con el genoma de ratón entero Agilent 44k
Microarray, que detecta 40,000 transcripciones, durante 17 ha 60 ° C después de Agilent
protocolo. Las imágenes se adquirieron mediante el uso del microarray ScanArray Express
escáner (Perkin-Elmer).
Microarray Data Analysis. Microarray imágenes primero se analizaron mediante el uso de la
Software GenePix 6.0 (Molecular Devices), y los datos fueron luego transferidos a
la base de datos BASE 1.2 / software de análisis (28). Para cada punto, los antecedentes locales
sustraído, y las intensidades puntuales fueron normalizadas por la fluorescencia media
intensidad para cada canal Puntos con una relación señal / ruido 3 en ambos canales
o se marcó manualmente por mala calidad se filtraron. Cuatro hibridaciones adicionales
utilizando el mismo ARN de referencia marcado con Cy5 y Cy3 se procesaron en el
De la misma manera para determinar el sesgo de incorporación de tinte y para corregir la línea de base de
cada punto La relación de intensidad promedio de cada punto de las repeticiones experimentales
fue estimado por geometricmean, y la precisión y la significación estadística de
las razones observadas se determinaron mediante el uso de Student'sttest. Spots sin menos de
dos valores en el mismo punto de tiempo se consideraron '' no encontrados '' y se asignaron
una razón de log2 de cero. Solo los genes que tienen valores ttest P de 0.05 e intensidad promedio
se seleccionaron relaciones 4 (razón de log2 2) en al menos un punto de tiempo. Los genes eran
se considera sensible a cada estímulo si se modula con un cambio doble de log2
relación 2 en comparación con los músculos no tratados. Se realizó una agrupación jerárquica
con el software TMEV 3.1 (29) en el conjunto de datos transformado de razón log2
aplicando la matriz de distancia euclidiana y el agrupamiento promedio de ligamiento
método. Algunos genes aparecen más de una vez en grupos, porque son

representado por múltiples sondas no relacionadas en el Agilent 44k Whole Mouse Genome Array. El análisis funcional del
conjunto de datos se realizó con GeneSpring Software GX versión 7 (Agilent Technologies) utilizando GO, GenMAPP y KEGG.
Experimentos de inmunofluorescencia. Las secciones musculares cortadas con criostato (14 m) fueron montado, fijado en
PBS y 3% de p-formaldehído durante 10 minutos, y luego incubado durante otros 10 minutos en solución de bloqueo y
permeabilización (PBS, BSA al 3%, 1% de saponina). La estructura del músculo se visualizó mediante el uso de un anticuerpo
específico para Utrofina, una proteína del citoesqueleto ubicada en el sarcolema de células musculares. Secciones de tejido
se incubaron durante 1 h con los siguientes principales anticuerpos: Utropina antihumana de cabra (Santa Cruz
Biotechnology), conejo anti-ratón PTX3 (Santa Cruz Biotechnology), conejo anti-ratón JUNB (Santa Cruz Biotechnology), I-A
/ I-E anti-ratón de rata conjugada con FITC (BD PharMingen), y rata anti-ratón CD11b (AbD Serotec). Después del lavado, las
secciones fueron incubados 30 min con los siguientes anticuerpos secundarios: burro anti-cabra IgG-Alexa Fluor 647 (Sondas
moleculares), burro anti-conejo IgG-Alexa Fluor 488 (Sondas moleculares), pollo anti-cabra IgG-Alexa Fluor 488 (Molecular
Sondas), y IgG anti-rata de cabra Alexa Fluor 555 (Sondas moleculares). Los núcleos eran teñido con yoduro de propidio (PI)
en todos los experimentos, con la excepción de Tinción CD11b en la que se utilizó ToPro3 (Invitrogen). Secciones fueron
lavadas y montado en medio de montaje Vectashield (Vector Laboratories) y visto por microscopía confocal (Bio-Rad).
Concentración de citoquinas en el suero. Concentraciones de citoquinas en el suero se han determinado usando el ensayo
Bio-Plex Cytokine Assay (23-Plex, Bio-Rad) siguiendo el protocolo del productor. Determinamos la concentración de citocina
como un promedio de tres réplicas por punto de tiempo. Tres ratones naïve fueron utilizados para detectar el nivel de fondo
para cada citocina. EXPRESIONES DE GRATITUD. Agradecemos a M. Tortoli y a Animal Care Facility por tratamiento con
ratones; B. Baudner (Novartis Vaccines and Diagnostics) por proporcionar MF59 con etiqueta DIO; D. Piccioli para asistencia
con el ensayo Bioplex; G. Galli, M. Pizza, U. D'Oro, E. Soldaini, N. Valiante, A. Wack, A. Seubert y F. Castellino para análisis
crítico de los datos; y A. Covacci y la unidad de bioinformática para apoyo. Este trabajo fue apoyado parcialmente por Grant
MUVAPRED del European Comisión (LSHP-CT-2003-503240). F.M. es el receptor de un Novartis compañerismo del Ph.D.
programa en Biología Celular, Molecular e Industrial de la Universidad de Bolonia.
Fundamentos de la Inmunología de Vacunas
INTRODUCCIÓN
Ya en el siglo XV, tanto los chinos como los turcos intentaban inducir inmunidad contra la viruela utilizando costras secas de
lesiones de viruela inhalando las lesiones trituradas o insertándolas en pequeños cortes. Estos crudos intentos iniciales de
inmunización llevaron a una mayor experimentación con la inmunización de Lady Mary Wortley Montagu en 1718 y Edward
Jenner en 1798. Los experimentos de Edward Jenner con la viruela vacuna para estimular la inmunidad contra la viruela son
más conocidos que estos intentos anteriores de inmunización. [1]
Estos esfuerzos iniciales han llevado a la gran cantidad de vacunas que están disponibles en la actualidad. Aunque estos
intentos tuvieron éxito en proporcionar inmunidad, los procesos subyacentes requeridos para producir esta inmunidad eran
desconocidos.
A partir de una revisión bibliográfica de la literatura actual, este artículo proporcionará una introducción a la inmunología de la
vacuna que incluye una guía sobre los componentes del sistema inmune, inmunización pasiva frente a activa, el mecanismo
por el cual las inmunizaciones estimulan la inmunidad y los tipos de vacunas disponibles.

COMPONENTES DEL SISTEMA INMUNE

El sistema inmune se puede dividir en dos subsistemas principales, el sistema de resistencia innato / general y el sistema
adaptativo. Tanto el sistema innato como el sistema adaptativo interactúan continuamente entre sí para proporcionar una
respuesta inmune efectiva.
El sistema inmune innato o la resistencia general incluye una variedad de medidas de protección que funcionan continuamente
y proporcionan una primera línea de defensa contra los agentes patógenos. Sin embargo, estas respuestas no son específicas
de un agente patógeno en particular. En cambio, las células inmunitarias innatas son específicas para los patrones
moleculares conservados que se encuentran en todos los microorganismos. Esto evita que el sistema inmune innato
reconozca inadvertidamente las células del huésped y las ataque. Sin embargo, esto evita que las respuestas inmunes innatas
mejoren sus reacciones con la exposición repetida al mismo agente patógeno. En otras palabras, el sistema inmune innato
no tiene memoria.
Las defensas protectoras del sistema inmune innato comienzan con las barreras anatómicas, como la piel intacta y las
membranas mucosas, que impiden la entrada de muchos microorganismos y agentes tóxicos. La piel también tiene un
ambiente ácido de pH 3-5 que retarda el crecimiento de microorganismos. Además, los microorganismos o flora normales
que habitan en la piel y las membranas mucosas compiten con otros microorganismos por nutrientes y sitios de fijación.
Además, el moco y los cilios en las membranas mucosas ayudan a atrapar a los microorganismos y expulsarlos del cuerpo.
[1]
A continuación, el sistema inmune innato incluye barreras fisiológicas tales como la temperatura corporal normal, fiebre, acidez
gástrica, lisozima, interferón y colectinas. El rango de temperatura corporal normal inhibe una variedad de microorganismos;
y, el desarrollo de fiebre puede inhibir aún más muchos de estos organismos patógenos. La acidez gástrica del estómago
también es bastante efectiva para eliminar muchos microorganismos ingeridos. La lisozima, que es una enzima hidrolítica que
se encuentra en las lágrimas y las secreciones mucosas, puede escindir la capa de peptidoglucano de la pared celular
bacteriana y así lisar el microorganismo. [1] Interferón (s), que incluye (s) un grupo de proteínas que se producen por las
células infectadas por virus, puede unirse a las células no infectadas y producir un estado antiviral generalizado. [1] Las
colectinas son proteínas surfactantes que están presentes en el suero, las secreciones pulmonares y en las superficies de la
mucosa. Pueden matar directamente a ciertos microorganismos patógenos al alterar sus membranas lipídicas o
indirectamente aglutinando microorganismos para aumentar su susceptibilidad a la fagocitosis. [1,2]
Las vías del complemento también forman parte de las medidas defensivas del sistema inmune innato. Hay tres vías de
complemento. La vía clásica se desencadena cuando los anticuerpos IgM o ciertas subclases de anticuerpos IgG se unen a
los marcadores / antígenos de superficie en los microorganismos. La ruta alternativa o properdina se desencadena por la
deposición de la proteína del complemento, C3b, sobre las superficies microbianas y no requiere anticuerpos para la
activación. La tercera ruta, la vía de lectina, se desencadena por la unión de lectina de unión a manosa de plasma (MBL) a
los microbios y no requiere anticuerpos para la activación. Estas tres vías se funden en una ruta común que conduce a la
formación del complejo de ataque a la membrana que puede formar poros en la membrana de las células diana. Las vías del
complemento también son integrales en la opsonización (o mayor susceptibilidad) de los antígenos particulados a la
fagocitosis y en el desencadenamiento de una respuesta inflamatoria localizada. [3]
La respuesta inflamatoria es otra parte esencial de la respuesta inmune innata. La respuesta inflamatoria es la reacción del
cuerpo a la invasión por un agente infeccioso, desafío antigénico o cualquier tipo de daño físico. La respuesta inflamatoria
permite que los productos del sistema inmune se conviertan en áreas de infección o daño y se caracteriza por los signos
cardinales de enrojecimiento, calor, dolor, hinchazón y pérdida de la función. [1]
Además de los mecanismos anatómicos y fisiológicos, también hay receptores de reconocimiento de patrones o PRR que
contribuyen a la respuesta inmune innata. Los receptores de reconocimiento de patrones no son específicos para ningún
patógeno o antígeno dado, pero pueden proporcionar una respuesta rápida a los antígenos. Los PRR se clasifican como
proteínas de membrana porque están asociados con la membrana celular; y, se pueden encontrar en todas las membranas
de las células en el sistema inmune innato. Aunque hay varios cientos de variedades, todos los genes de los PRR están
codificados en la línea germinal para asegurar una variabilidad limitada en sus estructuras moleculares. Los ejemplos de PRR
incluyen MBL, proteína surfactante pulmonar, proteína C-reactiva, receptores tipo toll (TLR), lectina tipo C, NOD y MX. Los
PRR reconocen patrones moleculares asociados con patógenos o patógenos que pueden desencadenar la liberación de
citoquinas. Los ejemplos de PAMP incluyen LPS (endotoxina), peptidoglicano (paredes celulares), lipoproteínas (cápsulas
bacterianas), ADN hipometilado (CpG encontrado en bacterias y parásitos), ADN bicatenario (virus) y flagelina (flagelos
bacterianos). Estos antígenos son producidos por células microbianas y no por células humanas. El reconocimiento de PAMP
por PRR conduce a la activación del complemento, la opsonización, la liberación de citoquinas y la activación de fagocitos.
[1,4-6]
Finalmente, los fagocitos mononucleares y las células granulocíticas también son importantes para la respuesta innata y
ayudan a vincular la respuesta inmune innata a la respuesta inmune adaptativa. Los fagocitos mononucleares incluyen
monocitos que circulan en la sangre y macrófagos que están en los tejidos. Los monocitos y los macrófagos son muy
importantes en la presentación del antígeno, la fagocitosis, la producción de citoquinas y las actividades antimicrobianas y
citotóxicas. [7]
Al madurar los monocitos, los monocitos circulan en la sangre durante aproximadamente 8 h, luego migran a los tejidos y se
diferencian en macrófagos tisulares específicos o en células dendríticas. Hay varios tipos de células dendríticas que están
involucradas en diferentes aspectos de las funciones inmunes. Muchas células dendríticas son importantes para presentar el
antígeno a las células T auxiliares. Sin embargo, las células dendríticas foliculares se encuentran solo en los folículos linfáticos
y están involucradas en la unión de complejos antígeno-anticuerpo en los ganglios linfáticos. [1,6,7]
Las células granulocíticas incluyen neutrófilos, eosinófilos y basófilos / mastocitos. Los neutrófilos son células fagocíticas muy
activas y generalmente llegan primero a un sitio de inflamación. Los eosinófilos también son células fagocíticas; sin embargo,
son más importantes en la resistencia a los parásitos. Los basófilos en la sangre y los mastocitos en los tejidos liberan
histamina y otras sustancias y son importantes en el desarrollo de las alergias. [1,7]
El sistema innato puede erradicar el agente patógeno sin la ayuda adicional del sistema adaptativo; o, el sistema innato puede
estimular el sistema inmune adaptativo para involucrarse en la erradicación del agente patógeno. [1,4]

En contraste con el sistema inmune innato, las acciones del sistema inmune adaptativo son específicas del agente patógeno
particular. Esta respuesta llevará más tiempo que la respuesta innata. Sin embargo, el sistema inmune adaptativo tiene
memoria, lo que significa que el sistema inmune adaptativo responderá más rápidamente a ese patógeno particular con cada
exposición sucesiva. [4]
La respuesta inmune adaptativa se compone de las células B / anticuerpos y las células T. Estos son los dos brazos del
sistema inmune adaptativo. Las células B y los anticuerpos componen la inmunidad humoral o la inmunidad mediada por
anticuerpos; y, las células T componen la inmunidad mediada por células. Como nota, las células asesinas naturales también
son del linaje de linfocitos, como las células B y las células T; sin embargo, las células asesinas naturales solo están
involucradas en la respuesta inmune innata. [1,7]
El primer brazo del sistema inmune adaptativo es la inmunidad humoral, funciones contra agentes patógenos extracelulares
y toxinas. Las células B se producen en la médula ósea y luego viajan a los ganglios linfáticos. Dentro de los ganglios linfáticos,
las células B vírgenes continúan madurando y están expuestas a agentes patógenos atrapados en el ganglio linfático en
particular. A diferencia de las células T, las células B pueden reconocer antígenos en su forma nativa lo que significa que las
células B pueden reconocer antígenos sin requerir que el antígeno sea procesado por una célula presentadora de antígeno y
luego presentado por una célula T colaboradora. [4] Estos antígenos se llaman antígenos T-independientes porque la
activación de las células T no es necesaria para activar las células B. Los ejemplos de estos antígenos T-independientes
incluyen lipopolisacárido, dextrano y flagelina polimérica bacteriana. Estos antígenos son típicamente moléculas poliméricas
grandes con determinantes antigénicos repetitivos. Estos antígenos también pueden inducir numerosas células B para
activarse; sin embargo, la respuesta inmune es más débil y la inducción de la memoria es más débil que con la activación de
células T auxiliares. Por el contrario, la activación de las células B con la activación de células T auxiliares da como resultado
una respuesta inmune mucho mejor y una memoria más efectiva. Esta respuesta inmune efectiva a largo plazo es el tipo de
reacción que es el objetivo de las inmunizaciones. [1] Con la unión del antígeno a la región Fab en el receptor de células B y
la señalización secundaria de las citocinas liberadas por las células T cooperadoras, las células B comienzan la hipermutación
somática en la región Fab que aumenta aún más el ajuste correspondiente entre la región Fab y la antígeno. Este proceso
luego estimula a la (s) célula (s) B a madurar en una (s) célula (s) plasmática (s) que luego comienza la producción del
anticuerpo particular con el mejor ajuste correspondiente al antígeno. [1]

A partir de estas células B estimuladas, surgirán clones de células B con la especificidad para el antígeno particular. Estas
células pueden convertirse en células plasmáticas que producen anticuerpos o células de memoria que permanecerán en los
ganglios linfáticos para estimular una nueva respuesta inmune a ese antígeno particular. Esto ocurre durante la respuesta
inmune primaria cuando el sistema inmunitario se expone por primera vez a un antígeno particular. [4] Este proceso de
selección y expansión clonal tardará varios días en ocurrir; y, principalmente implica la producción de IgM. IgM es el primer
anticuerpo producido durante una respuesta inmune primaria. [7] A medida que la respuesta inmune progresa, las células
plasmáticas activadas comenzarán a producir IgG específica para el antígeno particular. Aunque IgM es el primer anticuerpo
producido y es un anticuerpo mucho más grande, IgG es un mejor anticuerpo neutralizante. IgG se une más eficazmente al
antígeno y ayuda a la opsonización. [1]

Como nota, otros anticuerpos pueden ser producidos por células plasmáticas. Estos anticuerpos incluyen IgD, IgA e IgE. La
IgD se encuentra principalmente como un receptor unido a las superficies de las células B maduras. Mientras que, IgA es el
anticuerpo que se encuentra en secreciones tales como mucosas, saliva, lágrimas y leche materna; e IgE es el anticuerpo
involucrado en reacciones alérgicas e infecciones parasitarias. Sin embargo, el anticuerpo más importante para las vacunas
es la IgG. [7]
Con las células de memoria que se han producido con la respuesta inmune primaria, cualquier exposición posterior al antígeno
dará como resultado una respuesta inmune secundaria más rápida y efectiva. Con esta respuesta inmune secundaria, la
reacción será más rápida, más grande y principalmente compuesta de IgG. [7]
En cuanto al otro brazo de la inmunidad adaptativa, la inmunidad mediada por células, funciona principalmente contra
patógenos intracelulares. Las células T maduran en el timo y luego se liberan al torrente sanguíneo. Hay dos tipos principales
de células T, células CD4 y células CD8. [1,4]
Las células CD4 o las células T auxiliares tienen el correceptor CD4 y solo reconocen la proteína del complejo mayor de
histocompatibilidad (MHC) II. La proteína MHC II se encuentra en todas las células inmunitarias y actúa como un marcador
de células inmunes.
Las células CD4 son esenciales para la inmunidad mediada por anticuerpos y para ayudar a las células B a controlar los
patógenos extracelulares. Hay dos subconjuntos de células CD4, Th1 y Th2. Las células Th1 ayudan a promover la inmunidad
mediada por células; y, las células Th2 ayudan a promover la inmunidad mediada por anticuerpos. [1,4]
Las células CD8 o las células T-citotóxicas tienen el correceptor CD8 y solo reconocen la proteína del complejo mayor de
histocompatibilidad (MHC) I. La proteína MHC I se encuentra en todas las células del cuerpo nucleado, excepto en los
eritrocitos maduros y actúa como un marcador de las células del cuerpo. Las células CD8 son esenciales para la inmunidad
mediada por células y para ayudar al control de patógenos intracelulares. [1,4]
A diferencia de las células B, las células T solo pueden reconocer el antígeno que ha sido procesado y presentado por las
células presentadoras de antígenos. Hay dos tipos de procesamiento de antígenos. [4,7]
El primer tipo de procesamiento de antígenos implica la unión de antígenos intracelulares junto con proteínas MHC I a la
superficie de las células de procesamiento de antígenos. Esto ocurre con antígenos virales y células tumorales. [1]
El otro tipo de procesamiento de antígeno implica unir antígenos extracelulares junto con proteínas MHC II a la superficie de
células presentadoras de antígeno. Esto ocurre con antígenos bacterianos y parasíticos. [1]
Una vez que la célula presentadora de antígeno ha activado la célula T, comienza a llevar a cabo sus funciones dependiendo
de si es una célula CD4 o una célula CD8. Al igual que con las células B, las células T activadas también experimentan una
expansión clonal que produce células T efectoras adicionales para la infección actual y células T de memoria para futuras
infecciones con este antígeno. [1]
TIPOS DE INMUNIZACIÓN
La inmunización se puede derivar de medios pasivos o activos. Estos medios pueden ser de fuentes naturales o artificiales.
Las fuentes naturales se deben a la exposición al medio ambiente, los humanos y los animales. Por el contrario, las fuentes
artificiales se deben a intervenciones médicas.
La inmunización pasiva ocurre con la transferencia a anticuerpos preformados a un individuo no inmunizado. Este individuo
desarrollaría entonces una inmunidad temporal a un organismo o toxina particular debido a la presencia de estos anticuerpos
preformados. Una vez que estos anticuerpos preformados hayan sido destruidos, el individuo ya no tendrá inmunidad contra
este microorganismo o toxina. [8]
La inmunización pasiva puede ocurrir natural o artificialmente. Excelentes ejemplos de inmunización pasiva natural son el
paso de anticuerpos maternos a través de la placenta hacia el feto y el paso de estos anticuerpos maternos al bebé a través
del calostro y la leche. [1,9]
Excelentes ejemplos de inmunización pasiva artificial incluyen la administración de inmunoglobulina humana combinada y
antiveneno. Estas gammaglobulinas y antivenenos proporcionan inmunidad temporal a una enfermedad o veneno en
particular. Al mismo tiempo que estos efectos de esta inmunidad temporal de los anticuerpos preformados, es probable que
el propio cuerpo del individuo esté en las primeras etapas de desarrollo de su propia respuesta inmune activa. [1]
La inmunización activa ocurre con la exposición de un individuo no inmunizado a un agente patógeno. El sistema inmune de
este individuo entonces comienza el proceso de desarrollar inmunidad a este agente. A diferencia de la inmunización pasiva,
la inmunización activa generalmente produce inmunidad a largo plazo debido a la estimulación del sistema inmune del
individuo. El proceso de estimular el sistema inmune contra un agente patógeno será más discutido en este artículo. [9]
La inmunización activa puede ocurrir natural o artificialmente. Un excelente ejemplo de inmunización activa natural es la
exposición a la influenza. El cuerpo luego comienza el proceso de desarrollar inmunidad a largo plazo contra el virus de la
influenza.
Excelentes ejemplos de inmunización activa artificial incluyen los diferentes tipos de vacunas que se analizarán en este
artículo. Estas inmunizaciones imitan la estimulación necesaria para el desarrollo inmunológico, pero no producen una
enfermedad activa. [1,9]

ESTIMULACIÓN DE LA INMUNIDAD POR VACUNAS

Al igual que con cualquier desafío al sistema inmune, el cuerpo primero debe detectar la amenaza, ya sea un agente patógeno
o una inmunización. Esta detección inicial generalmente es realizada por el sistema inmune innato; aunque, las células B
también pueden realizar esta función. Este proceso de detección comienza cuando el sistema inmunitario reconoce epítopes
en antígenos. Los epítopos son pequeñas subregiones sobre los antígenos que simulan el reconocimiento inmunitario.
Múltiples componentes del sistema inmune innato responderán a este desafío. Estos componentes de la inmunidad innata se
opsonizarán o se unirán al agente y ayudarán a su envolvimiento por las células presentadoras de antígeno tales como
macrófagos o monocitos. Estas células presentadoras de antígenos procesarán los antígenos de este agente patógeno e
insertarán el antígeno procesado junto con la proteína MHC en la superficie de la célula presentadora de antígeno. [10]
Si se trata de un antígeno viral, el antígeno se unirá con la proteína MHC I y se presentará por la célula presentadora de
antígeno a una célula CD8 que probablemente desencadenará la inmunidad mediada por células. Si se trata de un antígeno
bacteriano o parasitario, el antígeno se unirá con la proteína MHC II y se presentará por la célula presentadora de antígeno a
una célula CD4 que probablemente desencadenará la inmunidad mediada por anticuerpos. [1]

ACTUAL / BAJO EL DESARROLLO TIPOS DE VACUNAS

Hay una variedad de tipos de vacunas que están actualmente en uso o en desarrollo para la prevención de enfermedades
infecciosas. En condiciones ideales, las vacunas deben desencadenar el sistema inmune innato y ambos brazos del sistema
inmune adaptativo. [11] Sin embargo, cada tipo de vacuna tiene ventajas y desventajas que pueden afectar la estimulación
del sistema inmune y, por lo tanto, limitar la utilidad del tipo de vacuna. [12]
En primer lugar, las vacunas vivas atenuadas, ejemplificadas por las vacunas contra el sarampión, las paperas y la varicela,
contienen versiones debilitadas en laboratorio del agente patógeno original.
Por lo tanto, estas vacunas producen fuertes respuestas celulares y de anticuerpos y típicamente producen inmunidad a largo
plazo con solo una o dos dosis de vacuna. Típicamente, es menos difícil crear vacunas vivas atenuadas con virus en lugar de
bacterias porque los virus tienen menos genes por lo que es más fácil controlar las características virales. Sin embargo, debido
a que estas vacunas contienen microorganismos vivos, se requiere refrigeración para preservar la potencia; y, existe la
posibilidad de reversión a la forma virulenta original del agente patógeno. Además, las vacunas vivas no se pueden administrar
a personas con sistemas inmunes debilitados porque la vacuna produce una enfermedad real.
Las vacunas inactivadas como se ejemplifica con la vacuna inactiva contra la influenza se producen al destruir un agente
patógeno con productos químicos, calor o radiación. Esta inactivación del microorganismo hace que la vacuna sea más
estable. Estas vacunas no requieren refrigeración y se pueden liofilizar para el transporte. Sin embargo, estas vacunas
producen respuestas inmunes más débiles, por lo tanto, se requieren inyecciones de refuerzo adicionales para mantener la
inmunidad. [12]
En experimentos con ratones por Raz et al., Una vacuna hecha de bacterias Listeria monocytogenes irradiadas, en lugar de
bacterias muertas por calor, mostró protección contra un desafío con Listeria en vivo. La vacuna irradiada también estimuló
una respuesta protectora de las células T que previamente
solo se había demostrado que ocurría con vacunas hechas de bacterias de Listeria vivas y debilitadas. [11]
Las vacunas de subunidades como se ejemplifica por la vacuna recombinante contra la hepatitis B incluyen solo epítopos
(partes específicas de antígenos a los que los anticuerpos o células T reconocen y se unen) que estimulan más fácilmente el
sistema inmune. Debido a que estas vacunas solo usan algunos antígenos específicos, esto reduce la probabilidad de
reacciones adversas; sin embargo, esta especificidad aumenta la dificultad de determinar qué antígenos deben incluirse en
la vacuna.
Las vacunas de toxoide, como se ejemplifica en las vacunas contra la difteria y el tétanos, se producen inactivando las toxinas
bacterianas con formalina. Estos toxoides estimulan una respuesta inmune contra las toxinas bacterianas.
Las vacunas conjugadas como se ejemplifica con la vacuna Haemophilus influenzae tipo B (Hib) son un tipo especial de
vacuna de subunidad. En una vacuna conjugada, los antígenos o toxoides de un microbio se unen a los polisacáridos del
revestimiento externo de ese microbio para estimular la inmunidad (especialmente en los lactantes).
Las vacunas de ADN desnudo todavía están en las etapas experimentales de desarrollo. Estas vacunas usarían ADN
específico para antígenos microbianos para estimular la inmunidad. Este ADN se administraría por inyección y luego las
células del cuerpo tomarían el ADN.
Estas células del cuerpo comenzarían a producir el antígeno y lo mostrarían en sus superficies, lo que estimularía el sistema
inmunitario. Estas vacunas producirían una fuerte respuesta de anticuerpos al antígeno libre y una fuerte respuesta celular a
los antígenos microbianos que se muestran en las superficies celulares. Estas vacunas también se consideran relativamente
fáciles y económicas de crear y producir. Las vacunas desnudas de ADN para la gripe y el herpes aún se encuentran en las
etapas de desarrollo. [12]
Las vacunas de vector recombinante son vacunas experimentales que usan un virus o microbio atenuado para introducir ADN
microbiano en las células del cuerpo. Estas vacunas virales fácilmente imitarían una infección natural estimulando así el
sistema inmune.
Las bacterias atenuadas también podrían tener material genético para antígenos de un microbio patógeno insertado. Estos
antígenos del microbio patógeno se mostrarían entonces en el microbio inofensivo que imita al patógeno y estimula el sistema
inmunitario. Tanto las vacunas basadas en vectores recombinantes bacterianos como virales para el VIH, la rabia y el
sarampión se encuentran en etapas experimentales. [12]
Además de estas vacunas, se han realizado estudios que analizan la posibilidad de mejorar los adyuvantes de vacunas que
se dirigirían al sistema inmune innato. Estos adyuvantes podrían clasificarse en dos clases, ya sea sistemas de administración
(como micropartículas catiónicas) o potenciadores inmunitarios (como citoquinas o PRR). Los sistemas de administración
posiblemente se usarían para concentrar y visualizar antígenos en patrones repetitivos, para ayudar a localizar antígenos y
potenciadores inmunitarios, y para dirigir los antígenos en la vacuna a las células presentadoras de antígeno. Mientras, los
potenciadores inmunes se usarían para activar el sistema inmune innato directamente. [6]
RESUMEN
Tanto los subsistemas innato innato como adaptativo son necesarios para proporcionar una respuesta inmune efectiva ya sea
a un agente patógeno real o a una inmunización. Además, las inmunizaciones efectivas deben inducir la estimulación a largo
plazo de los brazos tanto humorales como mediados por células del sistema adaptativo mediante la producción de células
efectoras para la infección actual y células de memoria para futuras infecciones con el agente patógeno. Al menos siete tipos
diferentes de vacunas están actualmente en uso o en desarrollo que producen esta inmunidad efectiva y han contribuido en
gran medida a la prevención de enfermedades infecciosas en todo el mundo.