Tujuan penting dalam penyelidikan alkaloid adalah isolasi alkaloid yang ada dalam bahan yang akan

diselidiki dalam bentuk asli mereka tanpa ada pembentukan artefak. Banyak kegiatan di bidang
penyelidikan alkaloid telah diarahkan pada pengembangan metode optimal untuk isolasi a1 kaloid dan
campuran alkaloid dengan menghindari perubahan yang tidak diinginkan untuk mereka. Karena alkaloid
biasanya terjadi pada tanaman sebagai garam asam tanaman organik dan asam anorganik bersamaan
dengan campuran kompleks senyawa yang larut dalam air, seperti gusi, protein, garam mineral, tanin,
lipid (lemak dan minyak) dan resin, seringkali masalah besar untuk menghilangkan semua senyawa non-
alkaloid selama isolasi dan pemurnian alkaloid.

Jenis masalah yang sama ditemui dalam penyelidikan farmakologis dan toksikologis, di mana alkaloid
biasanya ditemukan sebagai garam dalam campuran kompleks senyawa yang larut dalam air dari semua
jenis lipid.

Ekstraksi dan isolasi alkaloid dapat dilakukan dengan berbagai cara tergantung pada sifat alkaloid yang
dimaksud dan bahan di mana mereka ditemukan. Dengan bahan tanaman ekstraksi utama biasanya
dipengaruhi dengan pelarut yang tidak dapat larut dalam air organik setelah pembebasan basa alkaloid
dari garamnya dengan perlakuan dengan basis mineral, sebagai kontak yang berkepanjangan dengan kuat
basa dapat menyebabkan perubahan pada banyak alkaloid, seperti hidrolisis alkaloid ester, dan karena
basa kuat juga menyebabkan pembentukan sabun, jika ada lemak, amonia paling umum digunakan,
Amnonia cukup basa untuk membebaskan sebagian besar alkaloid biasa tanpa banyak risiko reaksi yang
tidak diinginkan. Juga, karena amnonia mudah menguap, maka dapat dengan mudah dihilangkan
setelahnya.

Dalam bahan tanaman yang kaya akan tanin, garam tannat alkaloid kadang-kadang harus diurai dengan
perlakuan awal dengan memanaskannya dengan asam klorida encer. Dalam kasus lain natrium hidroksida
cukup untuk membelah garam tannat alkaloid.

Namun, karena masalah yang mungkin terjadi ketika basa alkaloid dibebaskan dengan pengobatan
dengan alkali dan diekstraksi dengan pelarut organik, seperti perubahan ke a1 kaloid di bawah pengaruh
diklorometana atau kloroform, ekstraksi lipid hadir dalam bahan yang akan diselidiki harus dilakukan
dengan pelarut organik yang tidak larut dalam air lainnya,

Ekstraksi alkaloid sebagai garam melalui campuran air-alkohol sering lebih disukai. Risiko perubahan pada
alkaloid asli yang ada dalam alkaloid jarang trjadi dalam kondisi seperti itu. Sedangkan ekstraksi dengan
sebagian besar pelarut organik, seperti benzena, kloroform dan dietil eter, memberikan ekstrak yang
mengandung semua jenis lipid dan resin, ekstraksi yang dibuat dengan campuran air dan alkohol akan
memberikan ekstrak yang mengandung berbagai senyawa polar, seperti protein, gusi dan garam mineral.

Dalam kedua kasus pemurnian lebih lanjut dari ekstrak a1 kaloidal biasanya diperlukan sebelum
kromatografi dapat diterapkan. Seringkali pemurnian dicapai dengan mengekstraksi alkaloid yang ada
dalam pelarut organik dengan air dan asam encer, dan selanjutnya alkaloid hadir dalam larutan berair
sebagai garam dengan pelarut organik setelah membebaskan basa mereka dengan alkali. Mengubah
pelarut pada titik ini mungkin menguntungkan dalam mencegah ekstraksi beberapa konstituen yang tidak
diinginkan masih ada dalam fase berair.

Ekstraksi dan pemurnian basa alkaloid menggunakan kolom silika gel atau aluminium oksida dapat
menguntungkan dalam banyak hal. Basa dibebaskan dengan perlakuan bahan yang mengandung alkaloid
dengan alkali dan diekstraksi dengan kolom adsorpsi. Banyak senyawa non-alkaloidal hadir dalam bahan
diserap pada kolom. Untuk menghilangkan lemak dan resin, yang diekstraksi bersama-sama dengan basa
alkaloid, ekstrak yang mengandung alkaloid dapat disaring melalui kolom gel silika yang mengandung
asam fosfat. Alkaloid akan diikat pada kolom sebagai garam, sedangkan lipid netral dapat dicuci keluar
dari kolom, Selanjutnya basa alkaloid dapat dielusi dengan pelarut organik yang ditambahkan alkali.

Karena kemungkinan pembentukan artefak ketika diklorometana atau kloroform digunakan dalam
ekstraksi, dan karena kuartener a1 kaloid biasanya hanya sedikit larut dalam pelarut non-polar, pelarut
polar sering lebih disukai ketika alkaloid kuaterner dan tersier hadir dalam bahan.

Untuk mendapatkan pemurnian terbaik dari kaloid a1 dari senyawa kaloid non-a1 yang ditemukan dalam
ekstrak yang diperoleh dengan pelarut polar, prosedur pemurnian sering dilakukan dengan
mengendapkan alkaloid dengan cara asam pikrat, garam Reinecke atau reagen Mayer, Melarutkan the
mengendapkan dan menjalankan larutan melalui kolom penukar anion dalam bentuk klorida
menghasilkan a1 kaloid sebagai klorida.

Penggunaan adsorben penukar ion untuk isolasi alkaloid sering menguntungkan. Resin penukar ion dapat
dianggap terdiri dari jaringan tiga dimensi dengan luas permukaan bagian dalam yang besar, yang
bermuatan listrik karena gugusnya yang terpisah. Pori-pori jaringan ditentukan oleh tingkat pengikatan
silang, dan mereka dapat bertindak sebagai ayakan untuk ion besar. Oleh karena itu, adsorpsi permukaan
sering terjadi dan tidak hanya interaksi kimia antara kelompok fungsional. Saat menggunakan resin
penukar ion untuk isolasi alkaloid dari larutan yang mengandung kaloid a1, seperti ekstrak bahan
tanaman, penting untuk menggunakan resin dengan tautan silang yang sesuai. Resin dengan ikatan silang
rendah biasanya lebih disukai untuk mencapai pemulihan kuantitatif alkaloid yang difiksasi pada partikel
resin penukar ion. Namun, banyak faktor yang mengatur adsorpsi dan elusi dari alkaloid yang berbeda
dengan resin yang berbeda. Kapasitas resin tertentu untuk kelompok alkaloid tertentu, oleh karena itu,
harus diselidiki dengan hati-hati untuk mendapatkan hasil optimal, lipid (lemak dan minyak) dan resin,
seringkali merupakan masalah besar untuk menghilangkan semua non-alkaloidal ini. senyawa selama
isolasi dan pemurnian alkaloid.

Masalah yang sama juga dihadapi dalam penyelidikan farmakologis dan toksikologis, di mana alkaloid
biasanya ditemukan sebagai garam dalam campuran kompleks senyawa yang larut dalam air dari semua
jenis lipid.

Ekstraksi dan isolasi alkaloid dapat dilakukan dengan berbagai cara tergantung pada sifat alkaloid yang
dimaksud dan bahan di mana mereka ditemukan. Dengan bahan tanaman ekstraksi utama biasanya
dipengaruhi dengan pelarut yang tidak dapat larut dalam air organik setelah pembebasan basa alkaloid
dari garamnya dengan perlakuan dengan basa mineral, Karena kontak yang lama dengan basa kuat dapat
menyebabkan perubahan pada banyak alkaloid, seperti hidrolisis dari alkaloid ester, dan karena basa kuat
juga menyebabkan pembentukan sabun, jika ada lemak, amonia paling umum digunakan, Amnonia cukup
mendasar untuk membebaskan sebagian besar alkaloid umum tanpa banyak risiko reaksi yang tidak
diinginkan. Juga, karena amnonia mudah menguap, maka dapat dengan mudah dihilangkan setelahnya.

Metode isolasi dan pemurnian yang akan dipilih untuk penyelidikan alkaloid sangat tergantung pada
teknik kromatografi yang akan diterapkan. Sistem kromatografi dapat dibagi menjadi sistem "terbuka"
dan "tertutup". Sistem kromatografi terbuka, seperti kertas dan kromatografi lapis tipis, bernilai tinggi
ketika ekstrak kasar atau campuran dari komposisi yang tidak diketahui harus dianalisis dan sedikit
informasi yang tersedia tentang komponen yang ada. Banyak masalah mengenai analisis a1 kaloid telah
diselesaikan dengan menggunakan teknik ini. Penggunaan sistem "tertutup", seperti gas-cair dan
kromatografi cair kinerja tinggi, terbatas pada komponen-komponen dalam campuran yang dapat dielusi
dari sistem. Komponen yang tidak dielusi dapat secara bertahap mengubah sifat pemisahan kolom dan
bahkan merusaknya sepenuhnya. Oleh karena itu, keterbatasan penerapan sistem kromatografi tertutup
harus selalu diingat.

Sovent and artefac formation

Selama ekstraksi, isolasi dan analisis alkaloid harus diingat bahwa stabilitas alkaloid sangat bervariasi.
Beberapa alkaloid peka terhadap cahaya, lainnya untuk pH dan panas dan beberapa bahkan untuk
berbagai pelarut organik. Beberapa pelarut organik dapat mempengaruhi laju dekomposisi alkaloid
sensitif, tetapi reaksi juga dapat terjadi antara berbagai pelarut, atau kontaminan dalam pelarut, dan
alkaloid. Karena penggunaan ekstensif pelarut organik dalam ekstraksi, isolasi dan analisis alkaloid,
beberapa interaksi yang mungkin antara pelarut organik dan a1 kaloid dibahas di bawah ini.

Pelarut organik yang paling umum digunakan dalam penelitian kaloid a1 milik berbagai kelompok kimia:

hidrokarbon alifatik dan aromatik (benzena, toluena, sikloheksana);

alkohol (etanol, metanol);

eter (dietil eter, dioksan, tetrahidrofuran);

ester (etil asetat);

keton (aseton, metil etil keton);

senyawa yang mengandung halogen (kloroform, diklorometana).

Dalam semua kelompok ini (kecuali untuk hidrokarbon) pembentukan artefak dapat terjadi.

Dekomposisi dapat terjadi di semua jenis pelarut. Khususnya dalam larutan kloroform dekomposisi
fotokimia dapat dipercepat. Dalam larutan alkohol alkaloid biasanya lebih stabil 17s23-25. Reichelt3
'menemukan C-8 epimerisasi alkaloid ergot dalam larutan alkohol lebih cepat daripada dalam larutan
aseton, 12 kloroform atau benzena. Alkohol juga dapat bereaksi dengan karbinolamin

pseudostrychnine16 (Gbr. 4.1) dan akag ~ ine ~~ (Gbr. 4.2). Reaksi dengan hemiasetal, mis., Wieland-
Gumlich aldehyde11s18s36, (Gbr. 4.3), dan turunannya sangat mungkin.

Fig 4.1

Fig 4.2
Eter sering terkontaminasi dengan peroksida, yang dapat menyebabkan oksidasi a1 kaloid. Beckett et a1,
34 menemukan kerugian yang signifikan selama ekstraksi sejumlah kecil efedrin dari media berair dengan
dietil eter. Kerugian disebabkan, setidaknya sebagian, oleh pengotor aldehida dalam dietil eter
(formaldehida, asetaldehida, propionaldehida).

Keton adalah pembentuk artefak yang terkenal dan mereka dapat bereaksi dengan alkaloid seperti 1,2-
dehydrobeninine19 dan berberi ne1 * 2s12. Selama kromatografi kolom, keton dapat menghasilkan
produk kondensasi dengan amonia, membentuk senyawa dengan a1 kaloidal karakteristik 15. Kondensasi
diri dari aseton selama kromatografi cair juga merupakan masalah yang mungkin dihadapi dengan pelarut
ini

Fig 4.3

Pelarut yang mengandung halogen banyak digunakan dalam penelitian alkaloid. Kloroform khususnya
adalah salah satu pelarut yang paling cocok karena sifat donor protonnya yang relatif kuat2 *. Namun,
pelarut yang mengandung halogen sangat aktif dalam hal pembentukan artefak. Bahkan dekomposisi
alkaloid dipercepat dilarutan kloroform. Dekomposisi reserpin dalam larutan tersebut telah dipelajari oleh
beberapa kelompok 4,6,7,8,14,17,20,22. Produk utama yang terbentuk adalah 3,4-dehydro-dan 3,4,5,6
tetradehydroreserpine (lumires'erpine). Menurut Fri jns20, dekomposisi jauh lebih sedikit pada kloroform
analitis-reagen grade, asalkan solusinya disimpan dalam gelap. Phillipson dan BissetE6 melaporkan
pembentukan senyawa pseudo dan N-oksida strychnine pada refluks dalam larutan kloroform.

Dichloromethane mudah bereaksi dengan atom nitrogen tersier, menghasilkan alkaloid kuaterner yang
tidak larut dalam pelarut organik. Dengan strychnine ditemukan bahwa kaloid a1 tersier dikonversi
sepenuhnya menjadi senyawa diklorometil kuaterner dalam 48 h26. Besselievres et a1. Saya benar-benar
mempertanyakan apakah diklorometana adalah pelarut atau pereaksi sehubungan dengan isolasi turunan
klorometil dari indol a1 kaloid tubotaiwine dan steroid alkaloid N-methyl paravallarine. Vincze dan
Gefen33 menemukan atropin dan beberapa amina tersier lainnya untuk segera dikuatkan dengan
diklorometana.

Kloroform dapat terkontaminasi dengan senyawa lain yang mengandung halogen (bromo-klorometana,
diklorometana) 3'5y9y10y13y26y31. Williams 9 melaporkan sebanyak 0,5% dari bromoklorometana dan
0,1% dari diklorometana; Hansen31 masing-masing ditemukan 0,04% dan 0,03%. Sejumlah kecil
diklorometana dan bromoklorometana juga dapat menyebabkan pembentukan senyawa klorometil
kuaterner dari amina tersier dalam larutan kloroform. lY2-Dichloroethane juga memiliki sifat kylating a1.\

Franklin et a1.32 menemukan sianogen klorida sebagai kontaminan dalam diklorometan. Dengan amina
primer dan sekunder, nitril yang sesuai terbentuk. menurut penulis, sianogen klorida hadir di sebagian
besar sampel yang diuji, jumlah bervariasi dari 0,2 hingga 11 pg / ml. Tidak ada bukti untuk pengotor ini
ditemukan dalam kloroform, karbon tetraklorida atau dikloroetana. diklorometana terbentuk.

Siek et a1.38 melaporkan reaksi amina sekunder dengan etil kloroformat, suatu pengotor dalam
kloroform. Ketika menggunakan kloroform untuk ekstraksi normeperidin, etil karbamat senyawa
terbentuk karena bereaksi dengan etil kloroformat. Etil kloroformat, yang dibentuk oleh reaksi fosgen,
(dibentuk oleh oksidasi kloroform) dan etanol, yang ditambahkan sebagai penstabil kloroform, ditemukan
dalam jumlah 0,1-1 ppm.

Tidak hanya kotoran dalam kloroform dapat menyebabkan pembentukan artefak, tetapi kloroform itu
sendiri juga dapat bereaksi dengan beberapa alkaloid, alkaloid protoberberin seperti berberin dan
palmatin dapat bereaksi dengan kloroform yang menghasilkan berberinechloroform dan palmatine-
chloroform

Fig 4.4

Senyawa dasar yang mengandung nitrogen seperti amnia, diethylamine dan triethylamine banyak
digunakan dalam analisis alkaloid. Amnia sering digunakan sehubungan dengan ekstraksi dan pemurnian
a1kaloids. Namun, juga dengan artefak amonia dapat dibentuk dalam beberapa kasus; sehingga gentianin
a1 kaloid dibentuk dari non-nitrogen-containle glikosida sweroside (Gbr. 4.5), angustine dari vincoside-
atau isovincoside-lactam dan tipe-a1kaloids tipe decussine dari alkaloid tipe akagerine37. Dalam dua
contoh terakhir amonia bereaksi dengan fungsi aldehida, mengubah dua-a1 yang mengandung nitrogen
kaloid menjadi tiga-nitrogen-con-menggunakan alkaloid.

Kesimpulan yang dapat ditarik dari hal tersebut di atas adalah bahwa pelarut harus didistilasi baru, eter
harus diperiksa untuk keberadaan peroksida, diklorometana tidak boleh digunakan dalam penyelidikan
alkaloid, dan perhatian besar harus diambil ketika kloroform digunakan. Dalam pemisahan kromatografi
kolom yang berkepanjangan, penggunaan kloroform dapat menyebabkan pembentukan artefak.
Sejumlah kecil bromoklorometana dan diklorometana dan kontaminan terkait dalam kloroform dapat
menyebabkan quaternisasi kaloid tersier a1. Hidrokarbon lebih disukai karena risiko kecil pembentukan
artefak.