Artikel ini diunduh oleh: [Universitas Negeri Michigan] Pada: 30 Januari 2015, Di: 14:10 Penerbit: Taylor &

Francis Informa Ltd

Terdaftar di Inggris dan Wales Nomor Terdaftar: 1072954 Kantor terdaftar: Mortimer House, 37-41 Mortimer Street, London
W1T 3JH, UK

Journal of Liquid Chromatography, ​Publikasi detail, termasuk

instruksi untuk penulis dan informasi berlangganan: ​http://www.tandfonline.com/loi/ljlc19
Metode HPLC untuk Studi Degradasi Anaerobik dari
Polyethylene Glycols ​Z. Moldovan ac​ ​, J . Lebrato Martinez b,​ ​MV Delgado
​
Luque b​ & E. umlah Salaverri b​ a​ ​Institut isotop dan Teknologi Molekuler 3400 Cluj-Napoca,
​
Rumania ​b ​Universitas Politeknik Sekolah Universitas Seville Str.
​ Virgen de Africa, 7 41011

Seville, Spanyol ​c Sekolah

​
Politeknik Universitas, Universitas Seville, Str.
​ Virgen de Africa, 7,
41011, Seville, Spanyol Diterbitkan online: 23 Sep 2006.

Untuk mengutip artikel ini: ​Z. Moldovan, J. Lebrato Martinez, MV Delgado Luque & E. Otal Salaverri (1995) Metode
HPLC untuk Studi Anaerob Degradasi Polyethylene Glycols, Jurnal Liquid Chromatography, 18: 8, 1633-1646, DOI:
10.1080 / 10826079508009300

Untuk menautkan ke artikel ini: ​http://dx.doi.org/10.1080/10826079508009300

SILAHKAN GULIR UNTUK ARTICLE

Taylor & Francis melakukan segala upaya untuk memastikan keakuratan semua informasi ("Konten") yang terkandung dalam
publikasi di platform kami. Namun, Taylor & Francis, agen kami, dan pemberi lisensi kami tidak membuat pernyataan atau
jaminan apa pun tentang keakuratan, kelengkapan, atau kesesuaian untuk tujuan Konten apa pun. Segala pendapat dan
pandangan yang diungkapkan dalam publikasi ini adalah pendapat dan pandangan penulis, dan bukan merupakan pandangan
atau dukungan dari Taylor & Francis. Keakuratan Konten tidak boleh diandalkan dan harus diverifikasi secara independen
dengan
sumber informasi utama. Taylor dan Francis tidak akan bertanggung jawab atas kerugian, tindakan, klaim, proses, tuntutan,
biaya, pengeluaran, kerusakan, dan kewajiban lainnya apa pun atau entah bagaimana yang disebabkan timbul secara
langsung atau tidak langsung sehubungan dengan, sehubungan dengan atau timbul dari penggunaan Konten.

Artikel ini dapat digunakan untuk tujuan penelitian, pengajaran, dan studi pribadi. Dilarang keras mereproduksi,
mendistribusikan, menjual kembali, meminjamkan, mensublisensikan, memasok secara sistematis, atau mendistribusikan
segala bentuk apa pun kepada siapa pun kepada siapa pun secara tegas dilarang. Syarat & Ketentuan akses dan penggunaan
dapat ditemukan di ​http://www.tandfonline.com/page/terms-and-conditions
J​ URNAL ​CAIR, ​KROMATOGRAFI 18 (8), 1​ 633-1646 (​ 1995)
 METODE HPLC UNTUK ​STUDI ​DEGRADASI ANAEROBIK
GLIKOL POLYETHYLENE

z. ​Moldova ^^, ​J. ​LEBRATO ​MARTINEZ ~, ​M. ​v. ​DELGADO LUQUE ~, ​DAN ​E. ​OTAL
SALAVERRI ~ ​ ​'Institut ​isotop dan Molekuler Teknologi 3400 Cluj-Napoca, Rumania
​ eville Str. Eigen de Afnca ​7 ​41 ​01 ​1 Seville, Spanyol
2University Sekolah Politeknik ​Universitas S

ABSTRAK

Makalah ini menjelaskan metode kromatografi cair kinerja tinggi fase

terbalik terbalik untuk karakterisasi PEGS, HO- (CH2-CH2-O) n-HI dalam air.
Metode ini memungkinkan analisis rutin campuran ​dari ​senyawa ini, di kisaran n
= 1-50 ​(hingga ​PEG 1
​ 500) ​dalam sampel teresterifikasi, pada suhu kamar. Metode
ini telah digunakan untuk ​studi ​pencernaan anaerobik dari PEG-200 dan PEG-300
dalam digester laboratorium satu liter.

* Hadir alamat: Universitas Politeknik Sekolah, ​Universitas ​Seville, ​Str. ​Virgen ​de ​Africa
7, 41011 ​Seville, ​Spanyol.

1633

Hak Cipta ​0 1​ 995 ​oleh Marcel Dekker, Inc.

MOLDOVAN ​1634
ET A
​ L. PENDAHULUAN

Polyethylene Glycols digunakan dalam produksi surfaktan, pelumas dan

kosmetik (1-3). Karenanya, mereka hadir dalam limbah atau air permukaan sebagai
produk katabolik dari senyawa ini ​(4). ​Banyak senyawa polar tidak dapat
dihilangkan dengan berbagai langkah perawatan seperti: biokimia, kimia dan
fisika-kimia tratment (penyaringan tanah, pengolahan ozon ​atau ​proses karbon
aktif) (5,6). Sifat bandel PEG oleh degradasi aerobik mendorong para peneliti
untuk menyelidiki biodegrabilitas dalam kondisi anaerob (1,7-9). Informasi
mengenai biodegradasinya langka dan saling bertentangan (​ 2, a). ​Studi ​tentang
proses degradasi didasarkan terutama pada pengamatan pertumbuhan bakteri ​(a),
permintaan oksigen kimia (COD) (1) atau analisis GC dari produk akhir ​(2,7,9).
Mekanisme degradasi anaerob dalam medium dengan PEG ​sebagai ​satu-satunya sumber
karbon dan energi tidak ditetapkan. Dalam bidang ini, penentuan ukuran polimer
tertinggi ​PEG, yang biodegradable, serta bakteri dengan kapasitas merendahkan
yang lebih tinggi sangat penting.
Analisis langsung distribusi molekul pasak' dalam digestor anaerobik
sangat ​berguna untuk mempelajari aspek-aspek fundamental dari proses ini.
Metode GC atau GC / MS memiliki penerapan yang sangat terbatas dengan masalah
ini, dengan mempertimbangkan bahwa senyawa ini polar dan termolabil ​(6). ​Sebuah
metode HPLC yang baru didirikan akan cocok untuk memecahkan banyak aspek
analitis.
Penggunaan detektor indeks bias (10, ll) terbatas pada metode isokratik
dan oleh karena itu untuk berbagai limitated ​polimer. ​Metode gradien elusi yang
dilaporkan menggunakan deteksi hingga 185nm (12)dapat diakses ​, ​yang ​merupakan
nilai yang tidakuntuk banyak detektor, atau penggunaan kolom yang digabungkan
(13).
ANAEROBIK ​DEGRADASI ​polietilen glikol ​1635

metode HPLC lain bekerja dengan suhu tinggi (14), sampel derivatizated
(15,16) atau spektrometer massa sebagai detektor (17). Penggunaan spektrometer
massa dapat meningkatkan batas deteksi dengan dua urutan (18) tetapi lebih
tinggi dari suhu kamar yang digunakan dan karenanya dapat menghasilkan
degradasi termal dari polimer.
Kromatografi Ukuran-eksklusi (SEC) metode memberikan ​pemisahan ​PEG ke
dalam kelompok perkiraan (19).
Kami telah menemukan bahwa ​penggunaan ​asam nitrat ​(12) ​untuk pemerataan
absorbansi pelarut pada 190 nm, gradien asetonitril 2-36% dan penggunaan kolom
RP-C18 (15 cm) memungkinkan pemisahan cepat PEGS hingga 1500 (n = 1-50) pada
suhu kamar. Batas deteksi adalah 0,5 ug dan waktu elusi 40 menit. Metode ini

telah digunakan dalam studi digester anaerob laboratorium. ​EKSPERIMENTAL

Semua bahan kimia dan pelarut memiliki tingkat analitis. Untuk filtrasi
sampel, filter jarum suntik tipe nilon, 0,45um, ​25mm ​dengan diameterdigunakan.
PEG yang digunakan dalam percobaan ini berasal dari: Panreac, 08110
Barcelona, ​Spanyol (PEG-200, PEG-300, PEG-400 dan PEG-1500) dan
Merck-Schuchardt, 8011 Hohenbrunn bei Miinchen, Jerman (PEG-600 dan PEG- 1000).
Suatu sistem HPLC Gilson digunakan (Gilson Medical Electronics,
Middelton, ​WI ​53562 ​USA) yang dilengkapi dengan: Pump 305 (A) dan 306 (B), Modul
Manometrik 805, Pengaduk Dinamik 8llC dan Injector 20ul (Reodyne, Cotati POB
996, California 94931, AS).
A Dinamax UV-1 Absorbance Detector (Instrumen Rainin ​CO, M
​ ack Road,
Woburn, MA 101801, AS)
1636 ​MOLDOVAN ​ET ​AL.

dilengkapi dengan flowcell dual-pathlength (lightpath 9mm dan lmm) yang diset
pada 19Onm. Keluaran detektor dipantau oleh Macinntosh Classic I1 Computer
(Aplle Computer, Inc. California USA).
Analisis dibuat menggunakan15cm, ​4,6mm ​, Nucleosil 5u, ​C-18, ​kolom120A
(Tecnocroma, 08190 Barcelona, ​Spanyol) pada suhu kamar. Asetonitril dalam
gradien air digunakan, seperti yang ditunjukkan pada Tabel ​1. ​Sebagai ​penyamaan
​ 90 ​nm kami menggunakan asam nitrat 3ppm.
absorbansi air untuk 1

HASIL DAN PEMBAHASAN

Resolusi. Dalam Gambar ​1 ​pemisahan polimer PEGS dengan n antara 1 dan ​50
ditunjukkan. Sampel ini diperoleh dengan campuran PEG-200, ​300, ​400, ​600, ​1000 ​dan
1500, 5​ 0 ​masing-masingmolar. Kondisi kerja seperti dalam Eksperimental. Hanya
untuk Ethyleneglycol (EG) yang dielusi pada ​1 ​menit, sangat dekat dengan waktu
​ 0,7 ​menit), faktor retensi (faktor kapasitas) lebih rendah dari ​1. ​Semua
mati (
lainnya lebih tinggi, yang merupakan kondisi penting untuk kemampuan reproduksi
yang baik ( ​ 20) ​Seperti y​ ang ​ditunjukkan (21,22), faktor retensi untuk oligomer
yang berdekatan menurun dengan m ​ eningkatnya ​kekuatan fase gerak yang setara dengan
resolusi menurun.
​ ilai ​II ​sesuai
​ asing-masing, kisaran ​n, n
Pada Tabel 2, kolom ​2, ​3 ​dan ​4 m
dengan polimer utama ​(m) ​untuk setiap PEG dan resolusi yang dihitung dekat nm

(m) d​ itunjukkan. Kisaran ​g ​dihitung dengan memperhitungkan

​ semua puncak

dengan luas lebih tinggi dari ​5% ​dari polimer utama.

Hingga PEG-600, resolusi lebih baik dari 1,5, yang merupakan nilai
minimum untuk pemisahan penuh dari puncak yang berdekatan ​(23). ​Untuk PEG-1000
lembah hight (yang
ANAEROBIK ​DEGRADASI ​polietilen glikol ​1637
waktu (min) ​A (%)
0 96
10 ​70
41 ​28

B (%) ​4 ​30 ​72

rn
P
h
'W

0,1 ​auf5
 -.. ​ Ii
N​

​8​
P​
menit 9​ ​ - *​
mM GAMBAR
​ ​dalam ​PEG-200, Eksperimental

1. ​300, pemisahan
​ ​400, ​600, dari
​ ​1000 PEG
​ ​dan polimer,
​ ​1500). Ketentuan n
​ ​= ​1-50. (50

as
1638 ​MOLDOVAN ​ET ​AL.

Tabel ​2. ​Rentang ​II, ​untuk polimer utama (nm) ​, ​Resolusi ​mendekati nm (Rm) dan Estimasi

Batas Deteksi untuk puncak pertama (DL) 1 dan untuk enam puncak pertama (DL) 6.

rasio tingkat lembah dengan ketinggian puncak relatif terhadap garis dasar) lebih
kecil dari 15% dan untuk PEG-1500, itu adalah sekitar 50%. Oleh karena itu, studi ​-
masingmasing polimer dapat dilakukan dengan presisi yang baik, hingga PEG-1000, dan
dengan presisi sedang untuk PEG-1500.
Dalam Gambar ​2 ​kromatogram yang diperoleh untuk PEG-1000 ​ ​ditampilkan.

Batas Deteksi IDL). Batas Deteksi diuji dengan Tetraethyleneglycol (TEEG) ​, ​n ​=

sinyal rasio / noise 3.5 kami menemukan nilai ​0,5 ​ug / injeksi setara
​ ​194. ​Untuk
4, ​M =
dengan ​25 ​ppm (b / v) TEEG dalam air (Injeksi ​= ​20 u
​ l).

Mempertimbangkan distribusi polimer sebagai fungsi ​- ​n, Batas Deteksi untuk PEG
komersial sebagai Batas Deteksi untuk polimer utama, fDL) l, dan sebagai Batas
Deteksi untuk enam polimer pertama, IDL) 6, dievaluasi (Tabel ​2, ​kolom ​5 ​dan ​6
masing-masing). Dibandingkan dengan awal melaporkan hasil, (DL) 6 adalah lebih baik
​ 40 ​ug, PEG-
daripada menggunakan detektor indeks bias (
ANAEROBIK ​ ​DEGRADASI ​polietilen glikol ​1639
 0,0 r​ nDalam. ​32,0

GAMBAR ​ ​2. ​PEG-1000 ​(10 ​mM) ​kromatogram. Kondisi ​seperti dalam Eksperimental

400) ​(10, ll) ​tetapi kurang (tetapi sebanding) daripada menggunakan metode yang

melibatkan derivasi sampel ​(1 ​ul PEG-600) (16). ​Linearitas. Karena digestor

pakan dibuat dengan

​ pasak ​dari ​1% ​(b / v) ​konsentrasi, ​berbagai ​polimer

​ -0,1% ​(w / v) dan sesuai dengan ​ ​

individu adalah ​ ​ 0 ​0-20 ​ug / injeksi. Oleh karena
​ EEG ​(n ​= 4) ​pada kisaran ​0-24 ​ug /
itu, kami telah menguji linieritas dengan T
injeksi. Kurva kalibrasi ditunjukkan pada Gambar ​3.
Hubungan antara respon (area puncak) dan kuantitas yang disuntikkan
diberikan ​oleh ​persamaan:

A ​= 7790,94 ​xq ​+ ​375,05 ​(1) di

mana: ​A ​adalah area puncak (uV x detik) dan ​q ​adalah ​kuantitas TEEG yang
diinjeksi ​(ug).
Koefisien korelasi (r2) adalah ​0,9982. m
​ edium ​RSD ​untuk konsentrasi yang
berbeda yang dihitung dengan kurva kalibrasi ini adalah sekitar ​3,00%
1640 ​MOLDOVAN ​ET A
​ L.
L "" ​
180
160
140
120
h​

m​ FZ ​Q
80 ​60 40 20

01 ​0 ​5 10 ​15 20 ​25
​ g ​1 i​ nj.
Saya u
 M GAMBAR
​ ​= 194) 3.
​ ​Kurva kalibrasi diperoleh untuk TEEG (n ​= ​4, ​The

dearadation ​dari ​PEG dalam diaester anaerobik. Kami telah ​ mempelajari

degradasi ​PEG sebagai satu-satunya sumber karbon dan energi dalam
anaerobik digestor pengadukan laboratorium dengan pakan semikontinu
(harian) dengan PEG-200 dan PEG-300 masing-masing ​1 ​konsentrasi%(b / v).
bakteri anaerob adalah budaya metanogen diperoleh dari lumpur digester
kota. volume digester a​ dalah 1
​ ​liter dan dipertahankan pada suhu constante
(36 ​C).
dalam rangka untuk menentukan proses degradasi, sebuah assesement terbuat
dari distribusi molekul PEG untuk sampel digestor, ​24 ​jam setelah makan,
dan kemudian dibandingkan dengan konfigurasi awal.
degradasi rate ​( r) ​untuk setiap polimer calculed sebagai:
r (%) =​ ​(Qi-Qf) xlOO / Qi ( ​ 2)
ANAEROBIK ​DEGRADASI POLYETHYLENE glikol ​1641

2 ​6

t
b) ​0,05 ​aufs ​5 ​I

6. ​0,0 .​ . . . . . ​min. .​ . . . . . . ​15.0

anaerobic GAMBAR
​ ​4. ​Digester PEG-200 ​. kromatogram.
​ ​Kondisi sebagai (a)
​ ​di

awal, ​Eksperimental (b)

​ dari tempat Qi dan Qf adalah jumlah awal dan akhir
polimer dan dihitung dari daerah puncak. adalah laju degradasi ​untuk ​PEG
koresponden dan calculed dengan cara yang sama dari jumlah polimer.
Parameter lain yang diukur adalah volume hasil gas oleh degradasi
​ 02) ​yang juga merupakan indikator tentang laju degradasi. Ketika
anaerob ​(CH4 ​+ C
produksi gas lebih kecil dari ​0,5 ​1 ​kuantitas baru kultur bakteri diinokulasi.
Dalam Gambar ​4 ​kromatogram untuk awal PEG-200 (a) dan untuk sampel yang
dikumpulkan dari digestor anaerobik (b) di sepuluh hari setelah inokulasi
bakteri ​ ​ditampilkan.
Laju degradasi harian ​r ​produksidan gas untuk PEG-200 dari hari yang
berbeda disajikan pada
1642 ​MOLDOVAN ​ET ​AL.

Tabel ​3. ​Laju degradasi polimer, r,total ​Laju degradasi, ​R, ​dan produksi gas

(1) ​(setiap hari) untuk PEG-200

Tabel 4. Laju degradasi polimer, r,degradasi total ​laju, ​R, d

​ an produksi gas ​(1) ​(

setiap hari) untuk PEG-300.

ANAEROBIK ​DEGRADASI ​DARI ​polietilen glikol ​1643

0,0 m ​ 6.5
​ enit. 1
GAMBAR ​5. ​Kromatogram PEG-300. (a) awal, (b) dari ​pencernaan anaerob. Kondisi

seperti dalam Eksperimental

pada Tabel ​3. ​Data yang sama untuk PEG-300 ditunjukkan pada Tabel
4.

Pada Gambar ​5 ​kromatogram untuk PEG-300 awal (a) dan sampel yang
dikumpulkan dari pencernaan ​13 ​hari setelah inokulasi bakteri (b) ditunjukkan.
Sepuluh hari setelah inokulasi bakteri ​(100 ​ml, padatan suspensi 5 g /
l) rasio degradasi harian ​E ​untuk ​PEG- ​200 ​diubah dari ​68,71% ​menjadi ​95,49%.
Degradasi ​PEG-300 adalah sama tetapi dengan berbagai ​degradasi ​74.00% ​untuk Higer
dari ​98,5%. ​Dengan mempertimbangkan bahwa Higer laju degradasi dari ​98,5% ​adalah
dari ​batas deteksi, degradasi PEG-300 setelah ​10 ​hari bisa selesai.
Untuk setiap PEG, sebuah korelasi linear antara kuantitas ​dari ​PEG
terdegradasi dan ​ ​volume ​gas ​dihilangkan diamati (Tabel ​3 ​dan ​4).
​ OLDOVAN ​ET ​AL.
1644 M

Kami menemukan bahwa laju degradasi harian untuk PEG-ZOO dan PEG-300
tergantung pada panjang polimer. Waktu elusi untuk ​n ​= ​1, ​dalam sampel digestor
ditumpangkan dengan waktu elusi yang sesuai dengan asam asetat dan etil alchol
hadir sebagai produk degradasi ​(7). ​Oleh karena itu EG ​(n ​= ​1) ​tidak diukur. Untuk
n ​= ​2 n ​= ​3 ​degradasi sangat kuat, sekitar ​100%. ​Ini sesuai dengan data
​dan
Permintaan Oksigen Kimia (COD) yang dilaporkan untuk Diethyleneglicol (DEG),
Triethyleneglycol (TEG) dan PEG-400 ​(1). ​Untuk n ​= ​4, ​dalam kedua situasi kami
menemukan tingkat yang lebih rendah relatif terhadap polimer dengan n ​> ​4.
Sebagai ​akibatnya, distribusi polimer untuk sampel yang dikumpulkan dari
digestor sangat berbeda dibandingkan dengan PEG awal (Gambar 4 ​ ). ​dan 5
​ ).
Untuk PEG-200 laju degradasi polimer untuk ​n ​> 4 ​sangat mirip. Dalam
situasi PEG-300, polimer ​n ​= ​5 ​dan ​Q ​= ​6 ​memiliki tingkat degradasi lebih tinggi
dari ​n ​> ​7.

​ dalah:
Urutan tingkat kelulusan, ​L, ​diamati untuk nilai diferrent ​n a

PEG-200: ​2 ​= ​3 ​>> ​5,6,7,8,9 ​> ​4 ​PEG-300: ​2 ​= ​3 ​>> ​5,6 ​> ​7,8,9,10,11 ​> ​4

Hasil ini dapat didukung oleh keluarnya dua jenis bakteri saring, salah
satu oligomer pendek merendahkan (up TEG, n = 3) dan yang lainnya merendahkan
polimer yang lebih tinggi, dengan tindakan depolimerisasi keluar dari sel (2),
 berbeda dengan hipotesis mengenai ​penetrasi ​membran sitoplasma oleh polimer
lagi ke sel bakteri (8,24). Harus diperhatikan nilai r yang lebih kecil untuk n
= ​4 ​polimer. Eksperimen sedang berlangsung di laboratorium kami untuk memeriksa
degradasi PEG yang lebih tinggi.
1645
ANAEROBIK D​ EGRADASI polietilen glikol ​
UCAPAN TERIMA KASIH
Karya ini didukung secara finansial oleh European Community dan Spanyol
Ministerium Pendidikan dan Ilmiah Investigasi. ​REFERENSI
1. ​D. ​P. ​Cox, Adv. Appl. Microbiol., 4
​ 6: 173-194 (1978)
2. ​DF Dwyer, ​J. ​M. Tiedje, Appl. Mengepung. Mikrobiol. 5 ​ 2: 852-856 (1986)
3. ​J. ​R. Haines, ​M. ​Alexander, Appl. Microbiol., ​29: 621- ​625, (1975)
4. H​ F Schroder, ​J. ​Chromatogr., ​647: 219-234 (1993)
5. ​HF Schroder, ​J. ​Chromatogr., ​554: 251-266 (1991)
6. ​H. ​F. ​Schroder, Wat. Sci. Tech., ​25: 241-248 (1992)

7. ​DF Dwyer, ​J. ​M. ​Tiedje, Appl. Mengepung. Microbiol., ​46: 185-190 (1983)

8. ​B. ​Schink, M. Stieb, Appl. Mengepung. Microbiol., ​45: ​1905-1913 (1983)

Appl. ​9. ​M. Takeuchi, ​Microbiol. ​F. ​16: ​Kawai, ​227-238 Y.

​ Shimada, ​(1993) ​A.
Yokota, System. ​10. ​T. Delahunty, D. Hollander, Clin. Chem., ​32: 351-353
(1986)

Chem., 11.​ ​G. ​36: 0.

​ ​1800-1802 Young,
​ D. ​(1990) Ruttenberg,
​ ​J. ​P. W
​ right,
Clin. ​12. ​Sj. ​Van Der Val, LR Snyder, ​J. ​Chromatogr., ​255: 463- 474 (1983)
13. ​G. ​Barka, ​J. ​Chromatogr., ​389: 273-278 (1987)
14. ​REA Escott, N. Mortimer, ​J. ​Chromatogr., ​553: 425-432 (1991)

Chadwick, 15.
​ ​R. ​Murphy, ​J. ​Chromatogr., AC
​ Selden, ​211: M.Fisher,
​ ​160-165

E. ​(1981)
A. Fagan, V. ​S.
​ 6. ​I. ​M. ​Kinaham, M. ​R. ​Smyth, J.Chromatogr., ​565: ​297-307
MOLDOVAN ​1646 ​ET ​AL. 1
(1991)

Biomed. 17.
​ ​S. ​0. ​Anal ,, K.
​ ​Auriola, ​11: 1027-1032 K.
​ ​M. ​Ronkko, ​(1993) A.
​ ​Urtti, ​J.

Phar. ​D. 18.

​ ​Abraham, M.
​ ​Culea, ​P. N.
​ ​T. Palibroda,
​ ​Frangopol, M.
​ ​Biolog. chiriac,
​
​
Mass 2​ Spectrom., .​ ​Moldovan, A. ​20: 740-742
​ (1991)

19. ​S. ​Mori, ​T. ​Mori, ​Y. ​Mukoyama, J. Liq. Chromatogr., ​16: 2269-2279 (1993)

20. ​J. ​W. Dolan, LC-GC Int. ​7: 14-15 (1994)

21. ​V. ​V. ​Berry, J. Chromatogr. ​199: 219-238 (1980)

22. ​W. ​R. ​Melander, ​A. ​Nahum, C.Horvath, ​J. ​Chromatogr. ​185: 129-152 (1979)

High Inc., 23.

​ ​ . ​
J
- L​ ondon, Speed N.
​ ​Done, ​Liquid JH
​ ​Chromatography, Knox,
​ J.

Loheac, ​John Application

​ ​Willey &
​ ​Sons, tahun
​ ​1974

24. ​A. Schmid, ​R. ​Benz, B. Schink, ​J. ​Bacteriol., ​173: 4909-4913 (1991)

Diterima: 27 ​Juli ​1994 Diterima: 17 September 1994