Campus Quetzaltenango

Facultad de Ciencias Ambientales y Agrícolas

Ingeniero Agrónomo con Énfasis en Gerencia Agrícola
Ingeniero: José Eliú Lima Pérez

Nombre: Carnet:
Franco Alexander de León Barrios 16298-16
Jhony Eduardo Barrios Aguilar 16457-13
Pablo Roberto Brito Santiago 16557-16
Jorge Ignacio Rosal Girón 16812-16
Kevin Mario Maldonado Barrios 24293-15

Quetzaltenango, 13 de abril de 2,019

 Resumen
Existen en la naturaleza una gran diversidad de aminoácidos que superan las 300 unidades,
pero la mayoría de estos son productos o modificaciones de 20 aminoácidos esenciales de las
proteínas de animales y plantas. Las proteínas de cualquier ser vivo están formadas por estos
20 aminoácidos esenciales. Entre estos compuestos encontramos enzimas, hormonas, el hilo
de las arañas, el veneno de algunos hongos, el caparazón de las tortugas, etc. Existe un valor
importante en los aminoácidos que refleja el pH característico al cual está ionizado, pero no
posee carga neta, a este se le conoce como punto isoeléctrico. Si el pH de la solución es
mayor al punto isoeléctrico entonces el aminoácido tendrá carga negativa; si la relación
anterior es opuesta entonces el aminoácido tendrá carga positiva

En la presente práctica, se elaborará un gráfico en función del pH y el volumen del titulante

agregado para la determinación del punto isoeléctrico del ácido glutámico.

Los aminoácidos son compuestos anfóteros, ya que pueden comportarse como ácido o como
bases, debido a que contienen al menos un grupo carboxilo (-COOH) y un grupo amino (-
NH2) en su estructura. En esta práctica se realizó la titulación del ácido glutámico, un
aminoácido ácido, que es uno de los 20 aminoácidos que forman parte de las proteínas.

Casi todos los procesos biológicos son dependientes del pH; un pequeño cambio en el pH
produce un gran cambio en la velocidad del proceso y es por esta razón la importancia de
conocer la composición y rangos en las que actúan los sistemas de tamponamiento. Los
grupos amino protonado y carboxilo, delos aminoácidos funcionan como ácidos débiles
formando también sistemas buffers, el cual su estado iónico depende del pH de la solución
en la que están disueltos.

Para obtener la curva completa de la valoración es necesario utilizar un ácido titulante (HCl
1 M) y una base (NaOH 1 M). A partir de la curva de titulación se determinó los valores pK
y K de cada uno de los grupos ionizables, así como las zonas tapón y la posible importancia
fisiológica de estos equilibrios.
 Introducción:
Las proteínas son macromoléculas compuestas por unidades más pequeñas conocidas como
aminoácidos. En las proteínas se encuentra básicamente veinte aminoácidos diferentes, los
cuales contienen un grupo carboxilo y un grupo amino unidos al mismo átomo de carbono
(carbono α) estos aminoácidos difieren unos de otros solo por la naturaleza de sus cadenas
laterales, o grupos “R” que varían tanto en estructura, como en tamaño y carga eléctrica e
influyen en la solubilidad en agua.

Los grupos carboxilo y amino de los aminoácidos funcionan como ácidos y bases débiles,
respectivamente, y como tales, se ionizan cuando están en solución. Los aminoácidos tienen
almenas dos pc, por lo que tienen mayor capacidad amortiguadora, ya que presentan de tres
a cuatro formas iónicas diferentes. Cuando la forma iónica tiene una carga neta de cero se
dice que se encuentra en su punto isoeléctrico. Al variar de pH, cambia la proporción de las
formas iónicas y es posible ver la capacidad amortiguadora de los aminoácidos. Cada
aminoácido tiene sus propios pc, puesto que presenta diferentes sustituyentes en sus cadenas
laterales. Mediante una titulación, se puede determinar el pc de un aminoácido. (Pacheco,
2006)

La titulación no es más que la adición sucesiva de cantidades de una base o de un ácido fuerte,
a una solución/disolución de ácido o de base a titular, con la medición simultánea de su pH,
hasta el punto de equivalencia en el cual los equivalentes de ácido y de base se igualan.

La curva de titulación siempre tiene que ser bifásica. Habrá dos porciones separada
inflexiones en la curva de titulación. El punto medio de la primera inflexión es donde el
aminoácido está mitad informa ácida y mitad en forma Zwitterion. EL punto de inflexión C
ocurre cuando todo el aminoácido original ya está informa de zwitterion. El pH al cual esto
ocurre se denomina el pH isoeléctrico (punto isoeléctrico) y se le da el símbolo Pi. En la
titulación de pH de un aminoácido con un grupo no ionizable”, el punto de equivalencia
ocurre en el Pi del aminoácido. En el punto medio dela segunda inflexión, la mitad del
aminoácido está en forma de zwitterion y la otra mitad está en forma básica.
Las curvas de titulación proporcionan la siguiente información la cual puede ser de gran
relevancia dependiendo lo que se desee determinar:

Medida del pK de los grupos ionizables: se localizan en el punto medio de la zona

tampón.
Regiones de capacidad tampón: mesetas donde se localizan los pKs; dichas regiones
se encuentran en el intervalo pc ± 1 unidad de pH.
pI: se localiza en el intervalo de viraje. En donde: pI = (pk1+pk2) / 2.
Formas ionizables del aminoácido encada rango de pH.
Carga eléctrica del aminoácido encada rango del pH.
Solubilidad relativa del aminoácido encada rango de pH.

Marco Teórico:
Ácido glutámico:
El ácido glutámico, o en su forma ionizada, el glutamato (abreviado Glu o E) es uno de los
20 aminoácidos que forman parte de las proteínas. El ácido glutámico es crítico para la
función celular y no es nutriente esencial porque en el hombre puede sintetizarse a partir de
otros compuestos. Pertenece al grupo de los llamados aminoácidos ácidos, o con carga
negativa a pH fisiológico, debido a que presenta un segundo grupo carboxilo en su cadena
secundaria. Sus pK son 2.19; 4.25; 9.67 para sus grupos alfa-carboxilo, gamma-carboxilo y
alfa-amino

Es el neurotransmisor excitatorio por excelencia de la corteza cerebral humana. Su papel

como neurotransmisor está mediado por la estimulación de receptores específicos,
denominados receptores de glutamato, que se clasifican en: ionotrópicos (canales iónicos) y
receptores metabotrópicos (En total de siete dominios transmembrana y acoplados a
proteínas G) de ácido glutámico. Todas las neuronas contienen glutamato, pero sólo unas
pocas lo usan como neurotransmisor. Es potencialmente excitotóxico, por lo que existe una
compleja maquinaria para que los niveles de esta sustancia estén siempre regulados.

Aminoácidos y proteínas:
La característica más llamativa de los aminoácidos (AA) es la existencia en una misma
molécula de grupos ácidos (capaces de ceder H+) y grupos básicos (capaces de captar H+).
Por lo tanto, en medio ácido se comportan como bases, y en medio básico se comportan como
ácidos. Las moléculas que presentan esta característica se dice que son anfóteros o anfolitos.

Los grupos ácidos y básicos pueden neutralizarse mutuamente, constituyendo una sal interna
formada por un ión híbrido (carga positiva y carga negativa), que se llama zwitterión.

Si consideramos un AA sencillo, éste puede adoptar tres formas iónicas diferentes:

El primer grupo que se disocia es el carboxilo (pK1= 2,22). Por la proximidad del grupo
NH3+, el COOH se comporta como un ácido moderadamente fuerte. Si aplicamos la
ecuación de Henderson-Hasselbalch al primer equilibrio de disociación, resulta que a pH
fisiológico (7,4), la concentración de la forma catiónica es prácticamente despreciable (una
de cada 151.000 moléculas en la forma zwitterión).

El segundo grupo en disociarse es el NH3+. Como el pK2 es 9,86, la concentración de la

forma aniónica es muy pequeña en comparación con la forma zwitterión (1 molécula en
forma aniónica por cada 300 en forma zwitteriónica). El AA se comporta a pH fisiológico
como un ácido débil que está disociado al 0,35%.

Existe un pH para el cual la carga eléctrica media de las moléculas es cero. Este pH se
llama punto isoeléctrico (pI). La pI es el pH en el que la molécula se disocia por igual en
ambos sentidos, y como equidista de los dos valores de pK, puede obtenerse por su semisuma:
Determinación de los pKa de un aminoácido ácido: el ácido glutámico:
Del mismo modo que ocurre con la histidina, el ácido glutámico, y en general los
aminoácidos ácidos, presentan un grupo ionizable adicional en la cadena lateral. En este caso
se trata de otro grupo carboxilo, -COOH, como se puede ver en la estructura química de dicho
aminoácido:

Esto hace que la valoración permita determinar tres valores de pKa, 2,19 para el grupo
carboxilo principal, 4,25 para el de la cadena lateral (rotulado como pKR) y de 9,67 para el
grupo amino, -NH2. La cercanía de los dos valores hace que en la curva de valoración no
estén tan claros los puntos medios para su cálculo:
Curva obtenida en la titulación ácido base del aminoácido ácido glutámico

Objetivos:

1- Conocer las diferentes formas en que pueden existir los aminoácidos.

2- Determinar el punto isoeléctrico de un aminoácido a partir de una gráfica.

Metodología:
Material implementado en la práctica de Titulación de Ácido Glutámico:
 1- Soporte universal.
2- Potenciómetro.
3- Pinza para bureta.
4- 2 buretas de 50 mL.
5- 2 vasos de precipitados de 400 mL.
6- 1 pipeta volumétrica de 10 mL.
7- 2 Erlenmeyer de 250 mL.
8- 1 varilla de agitación.
9- 1 probeta de 10 mL.
10- Agua destilada.
11- 50 mL de HCl 1M.
12- 50 mL de NaOH 1M.
13- 20 mL de Glutamato Mono sódico 1M.
14- Cinta de Masking tape

Procedimiento:
Paso 1: Tome dos muestras de 10 ml de solución de glutamato, y colóquelas en los
Erlenmeyer.
Paso 2: Llene una bureta con NaOH 1M.
Paso 3: Al primer Erlenmeyer adicione NaOH 1M hasta llegar a pH 11. Anote el volumen
agregado. Guarde este para el paso 7.
Paso 4: Al segundo Erlenmeyer, adicione agua destilada igual al volumen de NaOH del paso
2. Identifique y anote el pH.
Paso 5: Llene la otra bureta con HCl 1 M.
Paso 6: Titule la solución del paso 4 agregando HCl, debe medir el pH cada 0.5 ml agregado
(3 mL de HCl hasta tener un total de 15 mL).
7. Titule la solución del paso 3 con HCl 1M, debe medir el pH cada 0.5 ml agregado (3 ml
de HCl hasta tener un total de 15 mL).

Discusión de Resultados:
El objetivo del laboratorio de titulación de Ácido Glutámico es lograr identificar los pK’s del
mismo ácido por medio de la neutralización completa del ácido glutámico con hidróxido de
sodio (NaOH 1M). Posteriormente se realizó una retro valoración utilizando ácido
clorhídrico (HCl 1M). Para obtener las curvas de titulaciones de pH se determinó titulando
en intervalos de 0.5 mL y posteriormente en 3 mL y de último en 15 mL de ácido clorhídrico,
utilizando el potenciómetro para medir los cambios del pH en los distintos intervalos
agregados de ácidos. (dichas medidas de HCl fue de 3mL)

Un aminoácido puede existir en varias formas iónicas, dependiendo del pH del medio en
donde se encuentre disuelto. Esta propiedad se describe mejor utilizando la ecuación de
Henderson-Hasselbach. Los aminoácidos tienen al menos dos grupos disociables, el amino y
el carboxilo; pueden tener más si el grupo R tiene a su vez grupos que se puedan ionizar. Para
cada uno de estos grupos existen un pK, el del carboxilo se le llamará pKCOOH y pKNH2 al del
amino. El ácido glutámico tiene un grupo amino, y un grupo ácido, en concreto, un grupo
carboxilo; esto hace que tengan un comportamiento anfótero, y que se comporte como
aminoácido ácido.

En solución acuosa y a pH fisiológico, el ácido glutámico se encuentra normalmente como

molécula ionizada, lo que se conoce como zwitterión, en el que el grupo amino gana un
protón y adquiere una carga positiva, mientras que el grupo carboxilo pierde el protón y
adquiere una carga negativa. El ácido glutámico presenta un grupo ionizable en la cadena
lateral, en este caso se trata de otro grupo carboxilo, -COOH. Esto hace que la valoración
permita determinar tres valores de pK.

Sabiendo todo ello se puede determinar lo siguiente:

- pKCOOH = 2.29 es para el grupo carboxilo principal.
- pKR = 5.98 para la cadena lateral.
- pKNH2 = 9.82 para el grupo amino.

De la gráfica IV, la forma A (totalmente protonada) tiene una carga neta positiva; la forma B
tiene carga neutra (una positiva y una negativa), la forma C tiene una carga negativa y la
forma D tiene dos cargas negativas. Determinando y conociendo todos estos datos se conoce
que el punto isoeléctrico del ácido glutámico es de 6.055.

2.29 + 9.82 12.011

𝑝𝐼 = → 𝑝𝐼 = → 𝑝𝐼 = 6.055 ≈ 6.06
2 2
En la gráfica se observan las formas iónicas en las que puede existir el ácido glutámico, están
determinadas por el pH del medio (en este caso el pH es igual al punto isoeléctrico) en el que
se encuentra disuelto, de tal manera que cuando el pH< pKCOOH se encontrará únicamente la
forma más protonada (ácida), del aminoácido, es decir la que se señala como Zona Tampón.

Conclusiones:
Está práctica, aunque su desarrollo fue sencillo, nos deja conocimientos amplios,
sobre todo las curvas de titulación, que son herramientas muy poderosas, ya que a
través de éstas se determinó los pK’s y el punto isoeléctrico del ácido glutámico.

El conocer el comportamiento del ácido glutámico ayudo a comprender las

propiedades de los aminoácidos, como su elevado punto de fusión, que podemos
atribuir a su estructura de ión dipolar.

El punto isoeléctrico del ácido glutámico en su retrovaloración equivale a pI=6.055≈

6.06

Recomendaciones:
- Utilizar el equipo de una forma adecuada y evitar que el pH tenga cambios abruptos
y dañen la curva de titulación.
- Al momento de que se trabaje con el ácido clorhídrico tener precaución de no tocarlo
o ingerirlo puesto que corrosivo.
- Es importante al aplicar el ácido clorhídrico a la sustancia que no se abra por completo
la válvula y ser lo más preciso posible al aplicar los 3 mL

Referencias bibliográficas:
Armstrong; Bradley; Bennet. (2001). Bioquímica. 6a ed. Reverté, Barcelona.

Koolman and Röhm. (2012). Bioquímica: Texto y atlas. 4a ed. Ed. Médica
Panamericana, México.

Mendoza, L. (2005). Química: Prácticas de laboratorio. 2a ed. INDEC, República

Dominicana.

Lehninger, Albert.; Nelson, David L.; Cox, Michael M., (1993) “Principios de
Bioquímica”. Segunda Edición, Ediciones Omega. Barcelona, España.

Gary D., Christian., (2009) “Química Analítica”. Sexta Edición. Editorial Mc Graw-
Hill. México. 219-234 págs.

Cuestionario:

1. Construya graficas de titulación

 2. Escriba la reacción de Ionización del ácido Glutámico.
Cabe mencionar que la ionización del ácido Glutámico se presenta en 4 formas

Si se ve los cuatro momentos de la ionización del ácido glutámico en la gráfica quedaría de

la siguiente forma:
Anexos: