LISIS EN LA MEMBRANA CELULAR

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Es la destrucción de una célula, normalmente por rotura de la

membrana celular mediante un agente específico o un
proceso físico.

❑ Permite la separación de los componentes

intracelulares.

❑ Es un proceso delicado

❑ Es una parte común de la preparación de muestras

diarias en los laboratorios de biotecnología.

❑ Portadores de genes plásmido ensayos de receptores,

proteínas, ADN, ARN.

Desintegración celular o lisis es una parte común de la

preparación de muestras diarias en los laboratorios de
biotecnología. El objetivo de lisis es alterar las partes de la
pared celular o la célula completa para liberar las moléculas
biológicas. El supuesto lisado puede consistir en e.g.
plásmido, ensayos de receptores, proteínas, DNA, RNA etc.

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PASOS DE LA LISIS

Son fraccionamiento, aislamiento del organelo o / y extracción

de proteínas y purificación. El material extraído (= lisado)
tiene que ser separado y está sujeto a más investigaciones o
aplicaciones, por ejemplo, para investigaciones proteómicas.
Homogeneizadores ultrasónicos son una herramienta común
para la lisis celular exitoso. Como la intensidad ultrasónica
puede nivelarse ajustando los parámetros de proceso, la
intensidad óptima sonicación de muy suave a muy duro
puede ajustarse individualmente para que cada sustancia y
medio para cumplir el requisito de aplicación específica.

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Propósito

Las células son unidades básicas estructurales y funcionales

del cuerpo humano. Ellas contienen diferentes partes,
llamadas orgánulos, que contribuyen a la capacidad de ésta
para funcionar. La energía es proporcionada por las
mitocondrias, las proteínas son sintetizadas en los ribosomas,
el ADN está contenido en el núcleo y así sucesivamente.

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TIPOS DE LISIS

LISIS TRADICIONAL

• Homogeneización líquida​. Las células se rompen al ser

forzadas a pasar por espacios muy pequeños.

• Zonificación​. Ondas de alta frecuencia rompen las

células.

• Congelamiento​. Ciclos de congelación continuos

rompen la célula induciendo la formación de ​cristales​.

• Lisis celular por medio de detergentes​ es una manera

más suave de romper la membrana celular. Los
 detergentes rompen la barrera lipídica solubilizando las
proteínas e interrumpiendo la interacción lípido-lípido,
lípido-proteína y proteína-proteína. Los detergentes, al
igual que los lípidos, se asocian entre ellos y se unen a
superficies hidrofobias.

• Fraccionamiento subcelular Una vez que las células

fueron lisadas, es necesario separar el orgánulo o
proteína de interés del resto de los componentes.

• PURIFICACION​: Una vez que la fracción de interés se

ha obtenido, debe ser purificada. Ésta elimina los
contaminantes mediante la explotación de las diferencias
en las características moleculares, como la carga, la
forma o el tamaño.

La lisis celular se utiliza también para estudiar la enfermedad

de Alzheimer, trastornos metabólicos y mucho más.

Se considera que no todas las células son iguales y por eso

es importante personalizar el protocolo utilizado para la lisis
dependiendo las características de la célula en particular. Es
igualmente importante tener en cuenta exactamente cómo
vas a estudiar el componente de interés.

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Métodos

Existen varios métodos para células lisados, que se pueden

dividir en métodos mecánicos y químicos, que incluyen el uso
de detergentes o solventes, la aplicación de alta presión, o el
uso de un molino de bolas o de una prensa francesa. La
desventaja de estos métodos más problemática es el difícil
control y ajuste de los parámetros de proceso y tal modo
impacto.

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Lisis es un proceso delicado. Durante la lisis de que la

protección de la membrana celular se destruye, sin embargo
la inactivación, la desnaturalización y la degradación de las
proteínas extraídas por un ambiente unphysiological
(desviación del valor de pH) deben evitarse. Por lo tanto, en
general lisis se llevaron a cabo en una solución tampón. Más
dificultades de alteración celular incontrolado resultando en
una liberación no focalizada de material todo intracelular o / y
la desnaturalización del producto objetivo. Homogeneizador
ultrasónico potente Fig. 1:200 vatios UP200Ht con control
digital y automática de datos de grabación para la lisis celular
fiables y reproducibles. Lisis ultrasónico Generalmente, la lisis
de las muestras en el laboratorio llevará entre 15 segundos y
2 minutos. Como la intensidad de la sonicación es muy fácil
de ajustar por amplitud ajuste hora sonicación así como
eligiendo el equipo adecuado, es posible interrumpir la célula
menbranes muy suavemente o muy abruptamente,
dependiendo de la estructura celular y en el propósito de lisis
(por ejemplo la extracción de ADN requiere más suave
sonicación, proteína completa extracción de bacterias
requiere un tratamiento más intenso de ultrasonido). La
temperatura durante el proceso puede ser supervisada por un
sensor de temperatura integrado y puede ser controlada
fácilmente por enfriamiento (hielo baño o flujo de células con
camisa de enfriamiento) o por sonicación en modo pulsado.
Durante la sonicación pulso, sonicación breve ráfaga ciclos
de duración de 1 a 15 segundos permiten para la disipación
de calor y refrescarse durante los períodos intermitentes ya.
Todos los procesos impulsada por ultrasonido son totalmente
reproducibles y linealmente escalables.

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Homogeneizadores Ultrasónicos

Varios tipos de dispositivos ultrasónicos permiten para

coincidir con el objetivo de preparación de muestra y para
asegurar la comodidad de funcionamiento y facilidad de uso.
Ultrasonicators tipo sonda son los dispositivos más comunes
en el laboratorio. Son más adecuados para la preparación de
muestras pequeñas y de tamaño mediano con un volumen de
0,1 mL hasta 1000 mL. Sonotrodos y potencia diferentes
tamaños permiten adaptar el ultrasonicador para el volumen
de muestra y el recipiente para obtener resultados sonicating
más eficaces y eficientes. El dispositivo de sonda ultrasónica
es la mejor opción cuando las muestras individuales tienen
que estar preparados. Si más muestras tienen que estar
preparados, por ejemplo 8 frascos de solución móvil,
dispositivos tales como el VialTweeter o un cuphorn
ultrasónica son el homogeneizador más adecuado para la
lisis. Varios frascos son sonicados al mismo tiempo, en la
misma intensidad. Este ahorra no sólo tiempo, sino que
también asegura el mismo tratamiento de todas las muestras,
que hace que los resultados entre las muestras fiables y
comparables. Además, se evita contaminación cruzada
sumergiendo el ultrasónico sonotrodo (también conocido
como ultrasonido sonda, cuerno, punta o dedo). Puesto que
se utilizan frascos, limpiar desperdiciadora de tiempo y
muestra pérdida debido al trasiego de buques se omiten.
Para mayores volúmenes, por ejemplo para la producción
comercial de extractos celulares, sistemas de ultrasonidos
continuos con un reactor de la célula de flujo son más
convenientes. El flujo continuo y uniforme del material
procesado asegura una sonicación incluso. Todos los
parámetros del proceso de desintegración ultrasónica pueden
ser optimizados y ajustados a los requerimientos de la
aplicación y el material específico de la célula.

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Procedimiento ejemplar para ultrasonidos lisis de células

bacterianas:

1. Preparación de la suspensión celular: pelotillas de la

célula deben ser totalmente suspendidas en solución
amortiguadora de homogeneización (elegir su solución
tampón compatible con el siguiente análisis, método de
cromatografía por ejemplo específico). Añadir lisozimas
y / u otros aditivos, si es necesario (deben ser también
compatibles con separación / medios de purificación).
Mezclar / homogeneizar la solución suavemente bajo
sonicación suave hasta que se logre la suspensión
completa.  
  
2. Lisis ultrasónica: colocar la muestra en un baño de hielo.
Para la interrupción de la célula, someter a ultrasonidos
la suspensión en 60-90 segundos estalla (usando el
modo de pulso de tu ultrasonicador).  
 
3. Separación: Centrifugar el lisado (e.g. 10 min. en 10.000
x g; en 4degC). Separar el sobrenadante
cuidadosamente el sedimento celulares. El
sobrenadante es el lisado celular total. Después de la
filtración del sobrenadante, puede obtener un líquido
clarificado de la proteína soluble de la célula. Las
aplicaciones más comunes para ultrasonicators en la
biología y la biotecnología son: Preparación del extracto
celular Interrupción de levadura, bacterias, células de la
planta suave & tejido celular dura, material nucleico
Extracción de proteínas Preparación y el aislamiento de
las enzimas Producción de antígenos Extracción de ADN
y / o fragmentación dirigida Preparación de liposomas.

11 Diapositiva  

En la biología y la biotecnología son:

1. Preparación del extracto celular

2. Interrupción de levadura, bacterias, células de la planta
suave & tejido celular dura, material nucleico.
3. Extracción de proteínas.
 4. Preparación y el aislamiento de las enzimas.
5. Producción de antígenos.
6. Extracción de ADN y / o fragmentación dirigida.
7. Preparación de liposomas 
 

Orden de exposición  

Lo resaltado es a quien le toca cada uno esta con su color  

Minerva  

Marisol 

Mariuxi 

4.Andrea 

Aura  

Viviana