PRAKTIKUM V

PENETAPAN BAKTERI KOLIFORM DENGAN

MOST PROBABLE NUMBER (MPN)

Disusun Oleh :
Nama : Muhammad Najib (17,71,018032)
Kelas : Farmasi B
Kelompok : Satu (1)

PROGRAM STUDI D-III FARMASI

FAKULTAS ILMU KESEHATAN
UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH PALANGKARAYA
TAHUN 2019
 PRAKTIKUM V
PENETAPAN BAKTERI KOLIFORM DENGAN
MOST PROBABLE NUMBER (MPN)
A. TUJUAN
Mahasiswa mampu melakukan percobaan untuk mengetahui kualitas sampel air minum yang diuji
berdasarkan nilai MPN Coliform.
B. PENDAHULUAN
Menurut BPOM RI, 2008 Analisis kuantitatif mikrobiologi pada bahan pangan
penting dilakukan untuk mengetahui mutu bahan pangan, dan proses yang akan diterapkan pada
bahan pangan tersebut. Ada beberapa cara untuk mengukur atau menghitung mikrobia yaitu dengan
perhitungan jumlah sel, perhitungan massa sel secara langsung, dan pendugaan massa sel secara tak
langsung. Perhitungan jumlah sel dapat dilakukan dengan 3 metode yaitu dengan hitungan
mikroskopik, MPN(Most Probable Number), dan hitungan cawan.
Menurut BPOM RI, 2009 Kualitas air dapat dilihat dari indikator mikrobiologi,
fisik dan kimia didalamnya. Kehadiran bakteri Coliform merupakan indikator biologi adanya
kontaminasi sampah atau feses terhadap sumber air. Kualitas mikrobiologi air dapat ditentukan
berdasarkan nilai MPN Coliform, nilai MPN Coliform fekal dan jumlah koloni
Escherichia coli Kontaminasi Coliform dapat menyebabkan penyakit infeksi saluran
pencernaan seperti diare dan gangguang pencernaan lain.Indikator kualitas fisik (kekeruhan, warna,
rasa dan aroma/bau air) dan indikator kualitas kimia (pH, kesadahan, nilai BOD dan COD)
air merupakan indikator kualitas air yang tidak secara langsung berhubungan dengan kesehatan.
demikian, kualitas fisik dan kimia berhubungan dengan penentuan kelayakan air untuk
dikonsumsi, sedangkan kontaminasi logam berat seperti Pb (timbal) dalam kondisi
minimum berdampak buruk bagi kesehatan.
Pemeriksaan derajat pencemaran air secara mikrobiologi umumnya ditunjukkan
dengan kehadiran bakteri indikator seperti Coliform dan Fecal coli Ciri-ciri Coliform yaitu bentuk
batang, merupakan bakteri gram negatif, tidak membentuk spora, aerobik atau anaerobik fakultatif
yang memfermentasikan laktosa dengan menghasilkan asam dan gas dalam waktu 48 jam dan suhu
35 derajat C(Ariyani, 2006).
Adanya bakteri coliform didalam makanan atau minuman menunjukkan adanya
mikroba yang bersifat enteropatogenik yang berbahaya bagi kesehatan.Bakteri Coliform dapat
dibedakan atas dua kelompok yaitu Coliform fecal misalnya Escherichia coli dan Coliform
nonfecal misalnya Enterobacter aerogenes. Escherichia coli merupakan bakteri yang berasal
dari kotoran hewan atau manusia, sedangkan Enterobacter aerogenes ditemukan pada
 hewan atau tumbuhan yang telah mati. Adanya Escherichia coli pada air minum menandakan
air tersebut telah terkontaminasi feses manusia dan mungkin juga mengandung patogen usus. Uji
kualitatif Coliform secara lengkap terdiri dari tiga tahap yaitu uji dugaan (Presumtive test),
uji penetapan (Confirmed test), dan uji pelengkap(Completed test) (Sahdan, 2010).
Bakteri Coliform adalah bakteri indikator keberadaan bakteri patogenik lain. Lebih
tepatnya sebenarnya, bakteri Coliform fekal adalah bakteri indicator dan yang pencemaran
bakteri patogen. Penentuan Coliform fekal menjadi indicator pencemaran dikarenakan
jumlah koloninya pasti berkorelasi positif dengan keberadaan bakteri patogen. Selain itu,
mendeteksi Coliform jauh lebih murah, cepat, dan sederhana daripada mendeteksi bakteri
patogenik lain.
Contoh bakteri Coliform adalah Escherichia coli dan Entereobacter aerogenes.
Jadi, Coliform adalah indikator kualitas air. Makin sedikit kandungan Coliform,
artinya, kualitasair semakin baik (Hartini, 2011).
C. ALAT DAN BAHAN
Alat
1. Timbangan analitik
2. Cawan petri berdiameter 15 cm dan 20 cm
3. Rak tabung
4. Ose bulat
5. Hot plate
6. Batang pengaduk
7. Tabung Erlenmeyer 250 ml
8. Beaker glass
9. Gelas ukur
10. Oven
11. Autoklaf
12. Bunsen
13. Laminar air flow (BSC)
Bahan
1. Es jeruk SMA Muhammadiyah P. Raya
2. BGLB
3. LBSS
4. LBDS
D. CARA KERJA
1. Tes perkiraan (presumtive test)
Tes penegasan ini merupakan test yang minimal harus dikerjakan untuk
pemeriksaan bakteriologi makanan/minuman.
Bahan yang digunakan adalah laktosa broth
Cara pemeriksaan :
Siapkan 7 tabung reaksi yang masing masing berisi LB sebanyak 10 ml. Tabung
disusun pad arak yang masing masing tabung dikasih nomor urut.

Ambil dengan pipet steril bahan pemeriksaan yang sudah disiapkan.

Masukan kedalam 1 sampai 5 tabung masing masing 10 ml.
Tabung ke 6 sebanyak 1 ml.
Tabung ke 7 sebanyak 0,1 ml
Masing masing tabung di goyang goyang agar bahan pemeriksaan dan media
bercampur rata.

Inkubasi pada suhu 35-37 derajat C selama 24 jam.

Setelah 24 jam amati ada tidaknya gas pada tabung durham, apabila ada gas pada
tabung durham maka pada tes pendahuluan positif(+) dan dilanjutakan dengan test
penegasan.
2. Test Penegasan (confirmativ test)
Media yang digunakan : BGLB broth
Tes ini untuk menegaskan hasil positif dari tes perkiraan.
Cara pemeriksaan :
Dari tiap tiap tabung yang positif, dipindahkan 1-2 ose kedalam tabung
konfirmative yang berisi 10 ml BGLB. Dari masing masing tabung yang positif di
inokulasikan kedalam 2 tabung BGLB.

Satu seri tabung BGLB diinkubasi pada suhu 35-37 derajat C selama 24-48 jam
(untuk memastian adanya coliform) dan satu seri tabung BGLB diinkubasikan
pada suhu 44 derajat C selama 24-48 jam (untuk memastikan adanya coli tinja).

Pembacaan dilakukan setelah 24-48 jam dengan melihat jumlah tabung BGLB
yang menunjukkan positif gas.
E. HASIL PENGAMATAN
Alat dan bahan. Pemasukan sample pada media.

Pengerjaan secara aseptis. Selesai pemasukkan sampel.

F. PEMBAHASAN
Adanya bakteri coliform didalam makanan atau minuman menunjukkan adanya
mikroba yang bersifat enteropatogenik yang berbahaya bagi kesehatan.Bakteri Coliform dapat
dibedakan atas dua kelompok yaitu Coliform fecal misalnya Escherichia coli dan Coliform
nonfecal misalnya Enterobacter aerogenes. Escherichia coli merupakan bakteri yang berasal
dari kotoran hewan atau manusia, sedangkan Enterobacter aerogenes ditemukan pada hewan
atau tumbuhan yang telah mati. Adanya Escherichia coli pada air minum menandakan air
tersebut telah terkontaminasi feses manusia dan mungkin juga mengandung patogen usus. Uji
kualitatif Coliform secara lengkap terdiri dari tiga tahap yaitu uji penduga (Presumtive test),
uji penguat (Confirmed test), dan uji pelengkap(Completed test)
Bakteri Coliform adalah bakteri indikator keberadaan bakteri patogenik lain. Lebih
tepatnya sebenarnya, bakteri Coliform fekal adalah bakteri indicator dan yang pencemaran
bakteri patogen. Penentuan Coliform fekal menjadi indicator pencemaran dikarenakan
 jumlah koloninya pasti berkorelasi positif dengan keberadaan bakteri patogen. Selain itu,
mendeteksi Coliform jauh lebih murah, cepat, dan sederhana daripada mendeteksi bakteri
patogenik lain.
Adapun hasil yang didapatkan pada uji penduga semua sampelnya
menunjukkan positif dengan ciri ciri yang terdapat pada sampel adalah sebagai
berikut: warna sampel berubah menjadi keruh, terdapat gelembung yang naik, dan
terdapat gas pada semua tabung durham.
G. KESIMPULAN
Dapat diambil kesimpulan pada praktikum kali ini adalah bahwa Es Jeruk
yang di jual di kantin Matahari SMA Muhammadiyah Palangkaraya positif tercemar
dengan bakteri Coliform dan coli tinja
H. DAFTAR PUSTAKA
- BPOM RI. Info POM Badan Pengawas Obat dan Makanan.
Jakarta: Badan POM RI.Vol. 9, No. 2, Maret 2008.ISSN 1829-9334, 2008.
- BPOM RI. Penetapan Batas Maksimum Cemaran Mikroba Dan Kimia Dalam Makanan.
Peraturan Kepala Badan Pengawas Obat Dan Makanan Republik
Indonesia Nomor HK.00.06.1.52.4011. Jakarta: BPOM, 2009.
- Ariyani D. dan Faisal A. Mutu Mikrobiologis Minuman Jajanan di Sekolah Dasar
Wilayah Bogor Tengah. Jurnal Gizi dan Pangan 1 (1). 2006 : 44-50, 2006.
- Hartini, P. B.Studi Keamanan Mikrobiologi Makanan jajanan Di Kantin Falesa
IPB. Bogor: IPB, 2011.
- Sahdan, Nona. Analisis Bakteri Coliform Pada Jajanan Anak Sekolah SD Inpres
Bontomanai Makassar. Skripsi. Jurusan Biologi UIN Alauddin Makassar:
Tidak diterbitkan, 2010.