UNIVERSIDAD CONTINENTAL
Tema: ESPECTROFOTOMETRO
PARESENTADO POR:
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HUANCAYO PERÚ 2018
INTRODUCCION
Cada compuesto químico absorbe, transmite o refleja luz (radiación electromagnética) a lo largo
de un cierto rango de longitud de onda. La espectrofotometría es una medida de la cantidad que
una sustancia química absorbe o transmite.
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INDICE
INTRODUCCION 2
1.ESPECTROSCOPÍA DE ABSORCIÓN 4
2.PRINCIPIOS ESPECTROFOMETRICOS 5
2.1-Caracteristicas de la luz 5
2.2 .-Caracteristicas de la longitud de onda 5
3.Espectro electromagnético 5
4.ESPECTROFOTÓMETRO 7
5 MANTENIMIENTO DE EL ESPECTOFOTROMETRO 14
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1. ESPECTROSCOPÍA DE ABSORCIÓN
¿El color de las cosas se mantiene cuando hay oscuridad total? ¿El color es dependiente de una
fuente externa de energía luminosa?
Si observamos una disolución acuosa de Cu2+ a trasluz percibimos un color azulado. Esta
coloración se debe a la interacción de los iones cobre con la radiación lumínica que atraviesa la
disolución. Más concretamente, se debe a la absorción de algunas radiaciones lumínicas que
corresponden al “color complementario” (en este caso el amarillo). Las radiaciones no absorbidas
son las que atraviesan la disolución sin obstáculo alguno y llegan a nuestro ojo. En nuestro
ejemplo, estas radiaciones “transmitidas” corresponden al color azul. Una solución roja absorbe la
luz verde y transmite o refleja la luz roja. En ausencia de luz, las sustancias no tienen color.
La espectroscopia de absorción, está relacionada con el hecho de que una sustancia absorbe la luz,
provocando que los electrones “salten” de un nivel de energía a otro mayor; este fenómeno
permite explicar por qué algunas sustancias son coloreadas como el I2 y el CrO4 2-, mientras que
otras como el agua y el NaCl no.
En los años sesentas y setentas esta técnica se volvió muy utilizada que fue una continuación de la
colorimetría. En estas décadas se hacían análisis de sustancias inorgánicas, principalmente metales
a niveles de traza. En combinación con la extracción líquido-líquido, se conseguían
determinaciones de compuestos de interés.
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Las longitudes de onda utilizadas en el laboratorio comprenden a la luz visible y ultravioleta. Para
entender mejor cómo se lleva a cabo el fenómeno de la espectroscopia, es necesario entender lo
que es la radiación electromagnética y la Ley de Lambert-Beer.
2. PRINCIPIOS ESPECTROFOMETRICOS
2.1 -Caracteristicas de la luz
La luz como toda radiación electromagnética, está formada de fotones o paquetes de energía que
viajan en ondas. El espectro electromagnético se describe en términos de longitud de onda (ʎ),
número de onda (𝑐𝑚−1), y electrón volts.
3. Espectro electromagnético
La radiación electromagnética consta de rayos gamma, rayos X, ultravioleta (UV), visible, infrarrojo
(IR), microondas de radio.
-La región infrarroja cercana (780-3000 nm), medio (3000-20000 nm), lejano (30000-300000 nm).
En la mayor parte de los instrumentos del laboratorio de química clínica se emplea la radiación
electromagnética UV y visible. Ocasionalmente se utiliza la espectroscopia de infrarrojo en el
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laboratorio de toxicología para identificar y confirmar fármacos o productos químicos tóxicos. Los
rayos gamma se usan en contadores de ensayo radio inmunológico.
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4. ESPECTROFOTÓMETRO
Las aplicaciones de la espectrofotometría son amplias y variadas. En este trabajo se revisarán los
conceptos ya enumerados con más detalle.
Como principio básico se considera que la luz es una forma de energía electromagnética, que en el
vacío tiene una velocidad constante [C] y universal de aproximadamente 3 x 108 m/s. En cualquier
otro medio (transparente) por el que pase la luz, su velocidad será ligeramente inferior y podrá
calcularse mediante la siguiente ecuación:
v0 =C
n
Dónde:
n = índice de refracción del medio, cuyo valor oscila, por lo general, entre 1,0 y 2,5
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La luz, al pasar o interactuar con diversos medios, presenta una serie de fenómenos, entre los que
destacan la reflexión, refracción, difracción, absorción, difusión, polarización y otros que son
utilizados en diversos instrumentos y dispositivos. La siguiente tabla muestra los rangos de
longitud de onda en donde se utiliza el espectro luminoso para realizar pruebas de
espectrofotometría.
Con respecto a la interacción de la luz con la materia, el siguiente esquema ayuda a entender la
complejidad de los fenómenos que ocurren:
El esquema muestra que la radiación incidente [Io] sufre una serie de transformaciones. Parte de
la misma se refleja [Ir], parte se transmite [It], parte se difunde [Id] y parte se absorbe e incide
directamente en fenómenos como la fluorescencia [If]. Los fenómenos en los que se basa la
espectrofotometría son principalmente la absorción y la transmisión. Para entender cómo se
utilizan, es necesario adicionalmente tener en cuenta la ley de Beer Lambert.
Ley de Beer Lambert. Se conoce también como ley de Beer o de Beer Lambert Bouguer e identifica
la relación existente entre la concentración de la muestra y la intensidad de la luz transmitida a
través de la misma. Con relación a la ley en mención hay implícitos dos conceptos: transmitancia
[T] y absorbancia [A].
La transmitancia [T] es la fracción de la luz incidente que a una determinada longitud de onda pasa
a través de la muestra. Se define por la siguiente relación:
T = It
Io
Dónde:
It = intensidad de la radiación transmitida
Io = intensidad de la radiación incidente
El porcentaje de transmitancia [%T] puede expresarse por la siguiente ecuación:
A = x l x c
Dónde:
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A = absorbancia medida
ε = coeficiente de absortividad molar [litros/moles/cm]
l = distancia de la trayectoria recorrida por la luz dentro de la muestra
c = concentración de la muestra [moles/litros]
Fenómeno de Absorbancia
Las curvas que se presentan a continuación muestran cómo varía la absorbancia [A] y la
transmitancia [T] en función de la concentración [C], de acuerdo con la ley de Beer Lambert, en la
que se basa la espectrofotometría.
Grafica de transmitancia
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Grafica de Absorbancia
Como conclusión puede inferirse que, a medida que aumenta la concentración de una sustancia, la
tramitación disminuye y que, al aumentar la concentración de la sustancia, aumenta la
absorbancia.
6.-Radiacion monocromática.
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4.3 COMPONENTES DEL ESPECTROFOTOMETRO
Se muestra un espectrofotómetro con detector simple y con un simple rayo. Un filtro del
monocromador selecciona un rango de longitudes de onda de la fuente de radiación para ser
enviada a la muestra en el mismo compartimento. La radiación trasmitida es detectada con un
fotodiodo y convertido a una señal por un procesador de señales.
1.-Fuente Luminosa
2.-El Monocromador
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4.3.1 FUENTE LUMINOSA
Dependiendo del tipo de espectrofotometría, la fuente luminosa puede ser una lámpara con
filamento de tungsteno para luz visible, o una lámpara de arco de deuterio para luz ultravioleta.
4.3.2 MONOCROMADOR
Está compuesto por un conjunto de elementos. En general, dispone de una rendija o ranura de
entrada que limita la radiación lumínica producida por la fuente y la confina en un área
determinada, un conjunto de espejos para pasar la luz a través del sistema óptico, un elemento
para separar las longitudes de onda de la radiación lumínica, que puede ser un prisma o una rejilla
de difracción, y una rendija de salida para seleccionar la longitud de onda con la cual se desea
iluminar la muestra. Las rejillas de difracción tienen la ventaja de eliminar la dispersión no lineal y
son insensibles a los cambios de temperatura.
Está diseñado para sostener la muestra que se quiere analizar dentro del rayo de luz de longitud
de onda determinada por el monocromador. El elemento que contiene la muestra es una celda o
cubeta se fabrican de vidrio, si se requieren efectuar estudios en el rango de los 340 a los 1000nm
y de sílice, si el análisis está en el rango comprendido entre los 220 y 340 nm. También hay celdas
de materiales plásticos como estireno o poliestireno. El portador de muestras lo diseñan los
fabricantes de acuerdo al tipo de espectrofotómetro y de muestra a analizar, por ello se
encuentran portadores de muestra con microceldas, aunque también tubos de ensayo y otras
variantes como las celdas de flujo continuo.
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Tabla de ventajas y desventajas de dispositivos de deteccion
La señal que sale del detector recibe diversas transformaciones. Se amplifica y se transforma para
que su intensidad resulte proporcional al porcentaje de transmitancia/absorbancia. Existen
sistemas de lectura de tipo análogo (muestra la magnitud leída sobre una escala de lectura) o
digital (muestra la magnitud leída en una pantalla).
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5 MANTENIMIENTO DE EL ESPECTOFOTROMETRO
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6 BUENAS PRÁCTICAS DE USO DEL ESPECTROFOTÓMETRO
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8 CONCLUSION:
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