Filemon Dimas A

OPTIMASI KOMPOSISI ETANOL DAN AIR DALAM PROSES
MASERASI DAUN SINGKONG (Manihotis Folium) DENGAN APLIKASI

SIMPLEX LATTICE DESIGN
SKRIPSI
Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat

Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S. Farm.)
Program Studi Ilmu Farmasi
Oleh :
Veronika Yuni Candra Sari
NIM : 068114051
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS SANATA DHARMA
YOGYAKARTA
2010
OPTIMASI KOMPOSISI ETANOL DAN AIR DALAM PROSES
MASERASI DAUN SINGKONG (Manihotis Folium) DENGAN APLIKASI
SIMPLEX LATTICE DESIGN
SKRIPSI
Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat

Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S. Farm.)
Program Studi Ilmu Farmasi
Oleh :
NIM : 068114051
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS SANATA DHARMA
YOGYAKARTA
2010
ii
iii
iv
gâ{tÇ `xÇ|à|Ñ~tÇ ^xÄxu|{tÇ Ñtwt fxà|tÑ
^x~âÜtÇztÇ wtÇ`xÇ}tw|~tÇÇçt
SEMPURNA
Dan kini aku bisa terbang bebas seperti merpati yang dilepas
olehNya untuk mengepakkan sayapku,
mengembangkan dan mengamalkan ilmu yang telah aku peroleh
untuk melayani sesamaku.

sesamaku
I am a pharmacist,
this is my calling, this is my pride
(Howard C. Ansel)
Aku persembahkan kepada:

Bapa Allah dan PuteraNya Yesus di Surga
Bapak Budi Yuwono dan Ibu Sri Rahayu, atas cinta, doa,
semangat, kesabaran, dan restunya.
M’vevi, d’tria, d’ vita, d’vicky, Saudara2ku, Sahabatku, dan Teman2 ku
atas dukungan, doa,kebersamaan, dan keceriaan.

Almamaterku FST 06 Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta.
v
LEMBAR PERNYATAAN PERSETUJUAN PUBLIKASI KARYA ILMIAH
UNTUK KEPENTINGAN AKADEMIS
Yang bertanda tangan di bawah ini, saya mahasiswa Unversitas Sanata Dharma :
Nama : Veronika Yuni Candra Sari
NIM : 068114051
Demi pengembangan ilmu pengetahuan, saya memberikan kepada Perpustakaan
Universitas Sanata Dharma karya ilmiah saya yang berjudul:
OPTIMASI KOMPOSISI ETANOL DAN AIR DALAM
PROSES MASERASI DAUN SINGKONG (Manihotis Folium)
DENGAN APLIKASI SIMPLEX LATTICE DESIGN
beserta perangkat yang diperlukan (bila ada). Dengan demikian saya memberikan
kepada Perpustakaan Universitas Sanata Dharma hak untuk menyimpan,
mengalihkan dalam bentuk media lain, mengelolanya dalam bentuk pangkalan
data, mendistribusikan secara terbatas, dan mempublikasikannya di Internet atau
media lain untuk kepentingan akademis tanpa perlu meminta izin dari saya
maupun memberikan royalti kepada saya selama tetap mencantumkan nama saya
sebagai penulis.
Demikian pernyataan ini yang saya buat dengan sebenarnya.
Dibuat di Yogyakarta
Pada tanggal : 21 April 2010
Yang menyatakan
vi
KATA PENGANTAR
Puji syukur kepada Tuhan Yang Maha Esa atas berkat dan karunia-Nya
penulis dapat menyelesaikan skripsi yang berjudul “ Optimasi Komposisi Etanol
dan Air dalam Proses Maserasi Daun Singkong (Manihotis Folium) dengan
Aplikasi Simplex Lattice Design” sebagai salah satu syarat untuk mencapai gelar
sarjana pada Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta.
Skripsi ini merupakan bagian dari penelitian ”Optimasi Formula dan
Kontrol Kualitas Sediaan Tablet Effervescent Ekstrak Centelae asiatica Herba
dan Manihotis Folium” yang dibiayai Hibah Bersaing Dikti tahun 2009. Dalam
penulisan skripsi ini, penulis mendapatkan bantuan dari banyak pihak. Pada
kesempatan ini penulis ingin menyampaikan penghargaan dan ucapan terima
kasih kepada :
1. Bapak Albertus Budi Yuwono dan Ibu Christina Sri Rahayu yang selalu
menyertai saya dengan kasih sayang, doa, restu, dan dukungannya yang
menguatkan saya.
2. Rita Suhadi, M.Si. Apt., selaku dekan Fakultas Farmasi yang telah
mendukung penelitian ini.
3. Yohanes Dwiatmaka, M.Si. selaku dosen pembimbing atas bimbingan dan
pengarahannya baik selama penelitian maupun penyusunan skripsi ini.
4. Agatha Budi Susiana Lestari, M.Si., Apt selaku dosen Ketua Penelitian ini
dan dosen penguji, memberikan saya kesempatan untuk bergabung dalam
tim penelitian dan masukan yang telah diberikan kepada peneliti.
vii
5. Reny Kusumastuti, M.P., atas bimbingan dan masukan yang telah diberikan
kepada para peneliti.
6. Jeffry Julianus, M.Si., selaku dosen penguji yang telah memberikan banyak
masukan kepada peneliti.
5. Mas Wagiran, Mas Sigit, Mas Andri, dan Mas Sarwanto, Mas Kunto, Mas
Bimo, Mas Parlan, Mas Kayat, Pak Iswandi, Mas Ottok, Mas Agung, dan
seluruh laboran atas bantuannya selama peneliti bekerja di laboratorium
Fakultas Farmasi.
6. Laurensia Utami Susanti, Bernadeta Ardy Puspitarini, Alvonsus Rudianto,
atas kerjasamanya dalam penelitian ini, suka dan duka yang telah kita lalui
bersama.
7. Valentina Vevi Yuwana Sari, Cornelius Fivtria Yuwana Putra, Cornelia
Omega Pravita Sari, dan Laurensia Vicky Yuwana Sari, atas dukungan, doa
dan semangatnya.
8. Elfrieda Ignatine, Danie ”Nduty”, Antonius Tri Kresmianto yang dengan
setia mendengarkan keluhan saya dan memberikan masukan serta dukungan
yang membangun kembali semangat saya.
9. Maria Yolanda, Gayatri Kusuma Wardani, Pius Perwita, Aditya Eka
Prasetya, Robertus Satrio, Oktavianus Rico, dan teman-teman FST 06, yang
selalu saling mendukung untuk mengerjakan skripsi dan terus berjuang
untuk mengejar cita-cita. Bersama kita bisa kawan. God bless us...
10. Endang Nurdianti, Martina Tri Handayani, Sisilia Novie, dan Mas Koko,
atas dukungan dan bantuannya dalam menyelesaikan skrispi ini.
viii
11. Kakak Emil, Sekar, Siska, Dewati, Nisa, Nita, teman-teman KKNku yang
selalu mendukung dan menyemangati untuk mengerjakan skripsi ini.
12. Segenap rekan dan pihak-pihak yang telah membantu dan mendukung saya,
namun tidak dapat disebutkan satu persatu. Terima kasih.
Akhir kata penulis menyadari bahwa karya penulisan skripsi ini jauh dari
sempurna mengingat keterbatasan kemampuan dan pengalaman yang dimiliki.
Oleh karena itu, saran dan kritik yang sifatnya membangun sangat diperlukan oleh
penulis demi kesempurnaan skripsi ini. Semoga skripsi ini dapat memberikan
sumbangsih yang bermanfaat pada perkembangan ilmu pendidikan.
Yogyakarta, April 2010
Penulis
ix
PERNYATAAN KEASLIAN KARYA
Saya menyatakan dengan sesungguhnya bahwa skripsi yang saya tulis ini
tidak memuat karya atau bagian karya orang lain, kecuali yang telah disebutkan
dalam kutipan dan daftar pustaka, sebagaimana karya ilmiah.
Yogyakarta, April 2010
x
INTISARI
Pada penelitian ini dilakukan optimasi komposisi etanol dan air sebagai
penyari dalam proses maserasi Manihotis utillissima. Metode optimasi yang
digunakan adalah Simplex Lattice Design. Tujuan penelitian ini untuk mengetahui
perbandingan pelarut antara etanol 96% dengan air yang optimum untuk
mendapatkan ekstrak dengan kadar rutin yang tertinggi dan apakah suhu pada
proses maserasi berpengaruh dalam mendapatkan kadar rutin yang tertinggi.
Penelitian ini termasuk penelitian eksperimental murni dengan
menggunakan aplikasi Simplex Lattice Design yang menggunakan dua faktor
yaitu perbandingan etanol dan air. Penelitian ini diawali dengan melakukan
determinasi tanaman, pembuatan simplisia, pembuatan serbuk, penyarian dengan
cara maserasi pada tiga suhu yang berbeda, yaitu 30oC, 40oC, dan 50oC. Analisa
kualitatif dilakukan dengan menggunakan KLT lempeng selulosa dengan fase
gerak butanol:asam asetat:air (4:1:5) v/v, dan deteksi bercak menggunakan uap
amonia dan sinar UV pada panjang gelombang 254 nm. Penetapan kadar rutin
dengan menentukan luas area bawah kurva (AUC) menggunakan program Image
J.
Hasil analisa menunjukkan bahwa komposisi etanol pelarut yang
menghasilkan kadar rutin tertinggi adalah 100% etanol 96% tanpa ditambah
dengan air, dengan rata-rata kadar rutin 5,9664µg/µl ± 2.4718. Suhu yang
menghasilkan rata-rata kadar rutin tertinggi adalah suhu 30oC.
Kata kunci: rutin, Manihotis Folium, maserasi, Simplex Lattice Design, Image J
xi
ABSTRACT
The research is going to see the composition of ethanol and water as a

solvent in the process of Manihotis Folium maseration. Optimation method that
used simplex lattice design. The aim of the research is going to find out the
optimum ratio between ethanol and water in order to obtain the extract with the
highest of rutin concentratrion and to see whether the temperatur of the
maseration process may cause getting the highest level of rutin concentration.
The research was a pure experimental research using simplex lattice design
application. Simplex lattice design application used two factors of ethanol and
water ratio. The research began by plants determination, making of simplisia,
making of powder, extration of maserasi on the three level of different temperatur,
they were 30 celcius degree, 40 celcius degree, and 50 celcius degree. Qualitative
analyze used cellulose TLC plat with mobile phase of butanol, acetic acid, water
(4:1:5 ), and spot detection used amonia fume and UV light on wave length of 254
nm. Determination of rutin concentration by determining AUC used Image J
program.
The result showed that solvent composition produce the highest rutin
concentration was 100 % ethanol, with the means of rutin concentration was
5.9664/µl ± 2.4718. The temperature on maseration was procude higher means of
the rutin concentration is 30 celcius degree.
Key words: rutin, Manihotis Folium, maseration, Simplex Lattice design, Image J
xii
DAFTAR ISI
HALAMAN SAMPUL ......................................................................................... i

HALAMAN JUDUL............................................................................................. ii
HALAMAN PERSETUJUAN PEMBIMBING ................................................... iii
HALAMAN PENGESAHAN............................................................................... iv
HALAMAN PERSEMBAHAN ........................................................................... v
HALAMAN PENYATAAN PERSETUJUAN PUBLIKASI .............................. vi
PRAKATA ............................................................................................................ vii
PERNYATAAN KEASLIAN KARYA ............................................................ . x
INTISARI ............................................................................................................ xi
ABSTRAK ............................................................................................................ xii
DAFTAR ISI …………………………………………………………………... xiii
DAFTAR TABEL ………………………………………………………………xvi
DAFTAR GAMBAR …………………………………………………………..xvii
DAFTAR LAMPIRAN ………………………………………………………..xix
BAB I PENDAHULUAN ..................................................................................... 1
A. Latar Belakang ............................................................................................... 1

1. Perumusan Masalah .................................................................................. 4
2. Keaslian Penelitian .................................................................................... 4
3. Manfaat Penelitian .................................................................................... 4
B. Tujuan Penelitian ........................................................................................... 5
BAB II TINJAUAN PUSTAKA........................................................................... 6

A. Tanaman Singkong ………………… ........................................................... 6
1. Keterangan botani ....................................................................................... 6
2. Nama Daerah .............................................................................................. 7
3. Kandungan Kimia ...................................................................................... 7
B. Rutin ........................................................................................................ 7
C. Maserasi …………………………………………………………………… 9
xiii
D. Ekstrak …………………………………………………………………….. 10
E. Kromatografi Lapis Tipis ............................................................................. 11
F. Image J ....................................................................................................... 14
G. Simplex Lattice Design ................................................................................. 14
H. Landasan Teori .............................................................................................. 16
I. Hipotesis ....................................................................................................... 17
BAB III METODE PENELITIAN........................................................................ 18

A. Jenis dan Rancangan Penelitian ..................................................................... 18
B. Variabel Penelitian ....................................................................................... 18
C. Definisi Operasional ...................................................................................... 18
D. Bahan Penelitian ............................................................................................ 19
E. Alat Penelitian ............................................................................................... 19
F. Tata Cara Penelitian....................................................................................... 20
1. Determinasi tanaman Manihotis escullenta Crantz .................................. 20
2. Pengumpulan daun singkong ................................................................... 20
3. Pembuatan simplisia Manihotis Folium ................................................... 20
4. Pengumpulan serbuk Manihotis Folium ................................................... 20
5. Pembuatan ekstrak Manihotis Folium ...................................................... 20
6. Validasi metode......................................................................................... 21
7. Analisis kualitatif ekstrak.......................................................................... 22
8. Analisis kuantitatif ekstrak. ...................................................................... 23
BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN

A. Determinasi tanaman ..................................................................................... 25
B. Pengumpulan daun singkong ......................................................................... 26
C. Pembuatan simplisia ...................................................................................... 26
D. Pembuatan serbuk .......................................................................................... 27
E. Pembuatan ekstrak ......................................................................................... 27
F. Validasi metode ............................................................................................. 29
G. Analisis kualitatif ekstrak .............................................................................. 33
xiv
H. Analisis kualitas ekstrak ................................................................................ 36
BAB V KESIMPULAN DAN SARAN............................................................... 43

A. Kesimpulan .................................................................................................... 43
B. Saran ............................................................................................................. 43
DAFTAR PUSTAKA ........................................................................................... 44

Lampiran .............................................................................................................. 46
Biografi Penulis ..................................................................................................... 79
xv
DAFTAR TABEL
Tabel I. Perbandingan pelarut maserasi .......................................................... 21
Tabel II. Seri kurva baku .................................................................................. 30
Tabel III. Nilai recovery .................................................................................... 32
Tabel IV. Nilai presisi ........................................................................................ 33
Tabel V. Harga Rf dan warna bercak baku rutin dan sampel ekstrak rutin di
deteksi dengan uap ammonia ............................................................ 36
Tabel VI. Kadar rutin dari tiap replikasi dari tiga peringkat
suhu proses maserasi ......................................................................... 37
Tabel VII. Hasil analisis anova suhu maserasi ..................................................... 38
xvi
DAFTAR GAMBAR
Gambar 1. Tanaman singkong ............................................................................. 6
Gambar 2. Struktur rutin...................................................................................... 8
Gambar 3. Serbuk Manihotis Folium .................................................................. 27
Gambar 4. Ekstrak kental Manihotis Folium ...................................................... 29
Gambar 5. Kurva baku 1 ..................................................................................... 31
Gambar 8. Kromatogram baku rutin dan sampel ekstrak rutin dideteksi dengan
uap ammonia...................................................................................... 35
Gambar 9. Kurva validitas persamaan SLD suhu 30oC ...................................... 40
Gambar 12. Grafik kadar rutin tertinggi pada suhu 30oC ...................................... 42
xvii
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran 1. Surat determinasi simplisia............................................................... 46
Lampiran 2. Penetapan bobot konstan ekstrak Manihotis Folium ....................... 47
Lampiran 3. Penimbangan ekstrak Manihotis Folium ......................................... 54
Lampiran 4. Penimbangan standar rutin ............................................................... 56
Lampiran 5. Validasi metode ................................................................................ 57
Lampiran 6. Penetapan kadar rutin dengan Image J ............................................. 59
Lampiran 7. Rendemen kadar rutin terhadap berat ekstrak .................................. 68
Lampiran 8. Analisis persamaan SLD .................................................................. 72
Lampiran 9. Uji validitas persamaan SLD ............................................................ 75
Lampiran 10. Uji anova berdasarkan suhu ........................................................... 78
xviii
1
BAB I
PENDAHULUAN
A. Latar Belakang
Saat ini penyakit degeneratif menjadi salah satu penyakit yang berbahaya,
karena berimbas pada kualitas dan produktivitas seseorang. Jika penyakit tidak
ditangani dengan tepat dapat menyebabkan kondisi komplikatif yang lebih parah.
Maka dibutuhkan tindakan preventif maupun pengobatan sejak dini.
Penyakit degeneratif biasanya muncul karena pola makan dan gaya hidup
yang tidak sehat. Penurunan kondisi kesehatan ini sering ditandai dengan
munculnya berbagai gejala awal yang apabila tidak segera ditangani dengan benar
dapat memicu ke kondisi yang lebih parah. Gejala dari penyakit degeneratif seperti
menurunnya daya ingat, mudah stress, sulit tidur, penuaan dini, dan meningkatnya
tekanan darah.
Masyarakat saat ini telah melakukan tindakan preventif untuk mencegah
penyakit degeneratif atau meminimalkan resiko penyakit degeneratif. Tindakan
preventif yang dilakukan masyarakat adalah dengan mengkonsumsi obat dan food
supplement (Anonim, 2007). Obat merupakan zat kimia yang oleh tubuh dianggap
sebagai zat asing dan memiliki resiko efek samping terhadap kesehatan.
Masyarakat cenderung lebih memiliki food supplement yang berasal dari bahan
alam. Selain itu, saat ini juga sedang marak tren back to nature, karena bahan alam
memiliki banyak manfaat dan efek samping yang lebih rendah dibandingkan
dengan obat dari bahan kimia sintetis

2
Bahan alam yang digunakan sebagai food supplement biasanya berasal
dari tanaman yang ada disekitar kita. Salah satunya adalah daun singkong yang
biasanya dikenal oleh masyarakat sebagai sayuran ternyata mempunyai kandungan
glikosida flavonoid yaitu rutin, yang berkhasiat sebagai antioksidan. Menurut
Wijayakusuma (2008), efek farmakologis dari singkong adalah sebagai
antioksidan, antikanker, antitumor, dan menambah nafsu makan. Bagian yang
umum digunakan oleh masyarakat pada singkong adalah daun dan umbi. Selain
sebagai makanan, tanaman singkong memiliki berbagai khasiat sebagai obat,
seperti obat rematik, sakit kepala, demam, luka, diare, cacingan, disentri, rabun
senja, beri-beri, dan bisa meningkatkan stamina. Selain itu daun singkong
(Manihotis Folium) juga mengandung vitamin A, B1 dan C, kalsium, kalori, fosfor,
protein, lemak, hidrat arang, dan zat besi (Anonim, 2008).
Rutin selain sebagai antioksidan juga mempunyai efek menghambat
terjadinya penggumpalan trombosit, sehingga darah lebih encer dan sirkulasi darah
lancar, serta menjaga elastisitas kapiler pembuluh darah. Rutin yang terdapat dalam
daun singkong tersebut disari dengan menggunakan metode maserasi, dengan
pelarut etanol 96% dan air. Digunakan pelarut etanol 96% dan air karena rutin
mempunyai kelarutan yang baik terhadap etanol dan air (Anonim, 2007), sehingga
dari campuran pelarut tersebut dapat mengoptimalkan tersarinya rutin dari serbuk
Manihotis Folium. Bila pelarut yang digunakan seluruhnya etanol 96% maka
klorofil juga akan tersari dan ekstrak akan menjadi sangat kental dan sulit
dikeringkan.
3
Proses ekstraksi yang digunakan maserasi karena maserasi merupakan
proses ekstraksi yang paling mudah dan sederhana. Peredaman dan penggojogan
dalam proses maserasi menyebabkan adanya perbedaan konsentrasi rutin di dalam
serbuk Manihotis Folium dengan di pelarut, maka rutin yang larut dalan pelarut
akan berdifusi keluar ke pelarutnya.
Optimasi komposisi pelarut campuran ini dilakukan karena sampai saat ini
belum diketahui komposisi etanol dan air yang menghasilkan kadar rutin tertinggi
pada proses maserasi Manihotis Folium. Komposisi optimum pelarut campuran
etanol dan air dapat diketahui dengan aplikasi Simplex Lattice Design, untuk
mengurangi trial and error. Berdasarkan metode aplikasi Simplex Lattice Design,
akan diperoleh lima perbandingan pelarut campuran yang akan menghasilkan
ekstrak dengan kenampakan fisik dan kandungan rutin yang berbeda. Ekstrak yang
dihasilkan dari kelima perbandingan tersebut ditetapkan kadar rutin secara KLT
dengan analisis Image J. Dari hasil penetapan kadar tersebut akan diketahui
komposisi pelarut yang bisa menghasilkan kadar rutin tertinggi.
Suhu dalam proses maserasi biasanya kurang diperhatikan. Dalam proses
maserasi suhu perlu dikendalikan, karena berdasarkan hukun Arrhenius, setiap
kenaikan suhu 10oC akan meningkatkan kecepatan reaksi dua kali lebih besar.
Maka dalam penelitian ini digunakan tiga peringkat suhu dalam proses maserasi
untuk mengetahui pengaruh suhu terhadap kadar rutin di dalam ekstrak Manihotis
Folium.
4
1. Perumusan Masalah
Berdasarkan latar belakang, masalah yang muncul dapat dirumuskan
sebagai berikut:
a. Berapakah kadar rutin di masing-masing peringkat suhu yang digunakan
dalam proses maserasi yaitu suhu 30oC, 40 oC, dan 50 oC?
b. Berapakah komposisi optimum antara etanol 96% dengan air, untuk
mendapatkan kadar rutin yang tertinggi?
2. Keaslian Penelitian
Sejauh penelusuran pustaka yang dilakukan oleh penulis, penelitian
tentang optimasi komposisi etanol dan air pada proses maserasi dengan 3
peringkat suhu 30oC, 40 oC, dan 50 oC dari daun singkong untuk mendapatkan
kadar rutin yang tertinggi dengan aplikasi Simplex Lattice Design belum pernah
dilakukan.
3. Manfaat Penelitian
a. Manfaat Teoritis
Penelitian ini diharapkan dapat menambah khasanah ilmu
pengetahuan, khususnya dalam bidang kefarmasian sains teknologi mengenai
aplikasi Simplex Lattice Design pada optimasi komposisi etanol dan air dalam
proses maserasi ekstrak daun singkong.

5
b. Manfaat Praktis
Hasil penelitian ini diharapkan dapat memberikan data mengenai
pengaruh komposisi etanol dan air dalam proses maserasi daun singkong
serta komposisi cairan penyari etanol 96% dan air paling optimal untuk
mendapatkan ekstrak dengan kadar rutin tertinggi.
B. Tujuan
1. Mengetahui suhu maserasi yang dapat menghasilkan kadar rutin tertinggi dari
peringkat suhu yang digunakan dalam proses maserasi yaitu 30oC, 40 oC, dan
50 oC.
2. Mengetahui komposisi etanol 96% dan air sebagai pelarut dalam proses
maserasi Manihotis Folium untuk mendapatkan kadar rutin yang tertinggi
dengan metode Simplex Lattice Design.

6
BAB II
TINJAUAN PUSTAKA
A. Tanaman Singkong
1. Keterangan Botani
Gambar 1. Tanaman Singkong
Tanaman singkong (Manihot utillissima Pohl, familia Euphorbiaceae)
berasal dari Brazilia. Tanaman ini termasuk jenis perdu yang mempunyai
karakteristik bergetah dan bunganya berwarna putih (Steenis, 1992).
Perdu tidak bercabang atau bercabang sedikit, tinggi 2-7 meter. Batang
dengan tanda berkas daun yang bertonjolan. Umbi akar besar, memanjang, dengan
kulit berwarna coklat suram. Tangkai daun 6-35 cm, helaian daun sampai dekat
pangkal menjari 3-9 cm (daun yang tertinggi kerapkali tertepi rata). Daun
penumpu kecil dan mudah rontok. Tumbuh pada ketinggian 5 sampai 1300 meter
dari permukaan air laut (Steenis, 1992).

7
2. Nama daerah tanaman singkong
Sumatera : ketela, ubi kayu, gadung hau of garung kau
Jawa : ubi singkong, bodin, bolet, kasawe, kaspa
Sulawesi : batata kayu
Maluku : ubi prancis
Kalimantan : peti kayu
Irian : nota, amberphone, timuria
3. Kandungan kimiawi tanaman singkong
Jaringan floem tanaman singkong mengandung asam fenolat dan tiga
glikosida flavonoid utama yaitu rutin dan dua isomer mengandung kemferol. Juga
terkandung glukosida sianogen (linamarin dan lautostralin) dalam jumlah besar,
hampir lima kali lipat kadar total asam amino (Leru dan Calatayud, 1994).
Duke (1999) menyampaikan bahwa daun singkong yang masih muda
mengandung cukup banyak vitamin B sehingga bagus untuk pengobatan beri-beri.
Metabolit sekunder lain yang ada antara lain beta-carotene equivalent (0,16
mg/100 g).
B. Rutin
Rutin adalah suatu flavonoid yang terdistribusi luas di alam. Flavonoid
rutin adalah suatu glikosida flavonol terdiri dari flavonol dan disakarida rutinosa
(Anonim, 2007). Rutin adalah suatu substansi padatan, berwarna kuning pucat dan
sedikit larut dalam air. Rutin lebih larut dalam air dibandingkan aglikonnya,
quersetin. Rumus molekul rutin adalah C27H30O16.

8
Gambar 2. Struktur Rutin
(Anonim, 2007).
Rutin mempunyai aktivitas antioksidan, antiinflamasi, antikanker,
antitrombotik, sitoprotektif, dan vasoprotektif (Anonim, 2007). Rutin yang juga
terdapat di dalam daun singkong, dapat menekan tumor yang mengarah pada
kanker usus dan menunda perkembangan hiperkolesterinemia dan sindrom
peroksidasi, juga pada atherosclerosis aorta. Bioflavonoid memiliki efek
antibakteri dan meningkatkan sirkulasi, memacu produksi empedu dan mencegah
katarak. Konsumsi bioflavonoid bersama vitamin C dapat pula mengurangi gejala
pada herpes oral. Daun singkong juga mengandung vitamin C dan A dalam
jumlah besar. Kekurangan konsumsi bioflavonoid dapat mengakibatkan
kerapuhan kapiler, gusi berdarah, dan memar (Anonim, 2007).
Dosis umum untuk rutin dan hesperidin adalah 100 mg tiga kali sehari.
Untuk mengatasi alergi, arthritis atau peradangan digunakan dosis yang terbagi
dalam satu hari antara 600-1200 mg pada perut kosong. Untuk menjaga atau
melawan penyakit hati dan kanker, 300-600 mg per hari, sedangkan pada kanker
agresif minimum dimulai dengan 1500 mg per hari (Anonim, 2007).

9
C. Maserasi
Maserasi merupakan cara penyarian yang sederhana dan digunakan untuk
simplisia yang mengandung zat aktif yang mudah larut dalam cairan penyari.
Maserasi dilakukan dengan cara merendam serbuk simplisia atau daun segar
dalam cairan penyari. Cairan penyari akan menembus dinding sel dan masuk ke
dalam rongga sel yang mengandung zat aktif. Zat aktif akan larut dan karena
adanya perbedaaan konsentrasi antara larutan zat aktif di dalam sel dengan di luar
sel, maka larutan yang pekat akan terdesak keluar. Peristiwa tersebut berulang
sehingga terjadi kesetimbangan konsentrasi antara larutan di luar dan di dalam sel
(Anonim, 1986).
Maserasi adalah proses ekstraksi simplisia menggunakan pelarut dengan
beberapa kali pengojogan atau pengadukan pada suhu ruangan (kamar). Secara
teknologi termasuk ekstraksi dengan prinsip metode pencapaian konsentrasi pada
keseimbangan. Maserasi kinetik berarti dilakukan pengadukan yang terus-
menerus. Remaserasi berarti dilakukan pengulangan penambahan pelarut setelah
dilakukan penyaringan maserat pertama, dan seterusnya (Anonim, 2000).
Maserasi merupakan proses penyarian yang paling baik digunakan untuk
bahan simplisia yang halus, memungkinkan direndam dalam menstruum, sampai
meresap dan melemahkan susunan sel sehingga zat-zat yang mudah larut segera
akan larut. Dalam proses maserasi, bahan yang berupa serbuk simplisia yang biasa
disari, biasanya ditempatkan pada wadah atau bejana yang bermulut lebar, ditutup
rapat, dan isinya digojog berulang-ulang selama 1-4 hari. Penggojogan yang
10
berulang-ulang ini memungkinkan pelarut masuk ke seluruh permukaan dari
bahan serbuk simplisia (Ansel, 1990).
Keuntungan cara penyarian dengan maserasi adalah cara pengerjaan, dan
peralatan yang digunakan sederhana, dan mudah dilakukan. Adapun kerugian cara
maserasi adalah waktu pengerjaan yang lama dan penyarian kurang sempurna.
Cara maserasi ini dapat dipercepat dengan menggunakan mesin pengaduk yang
terus-menerus berputar sehingga mempersingkat waktu maserasi menjadi 6-24
jam (Anonim, 1986).
D. Ekstrak
Ekstrak merupakan sediaan kering, kental atau cair dibuat dengan menyari
simplisia nabati atau hewani menurut cara yang cocok, di luar pengaruh cahaya
matahari langsung. Ekstrak kering harus mudah digerus menjadi serbuk. Sebagai
cairan penyari digunakan air, eter, atau campuran etanol dan air. Penyarian
simplisia dengan air dilakukan dengan cara maserasi, perkolasi, atau penyeduhan
dengan air mendidih. Penyarian dengan campuran etanol dan air dilakukan
dengan cara maserasi atau perkolasi. Penyarian dengan eter dilakukan dengan cara
perkolasi (Anonim, 1979).
Ekstrak merupakan sediaan sari pekat tumbuh-tumbuhan atau hewan yang
diperoleh dengan cara melepaskan zat aktif dari masing-masing bahan,
menggunakan cairan penyari (menstruum) yang cocok, lalu diuapkan semua atau
hampir semua dari pelarutnya. Ekstrak merupakan sediaan yang biasanya
mempunyai potensi 2 – 6 kali berat bahan mentah (Ansel, 1989).

11
Berdasarkan sifatnya, ekstrak dibagi menjadi:
1. Ekstrak kental
Ekstrak kental merupakan hasil penguapan ekstrak cair pada tekanan rendah
dan suhu tidak lebih dari 50oC hingga konsistensi yang dikehendaki (Anonim,
1986). Menurut Voigt (1994) ekstrak ini liat dalam keadaan dingin dan tidak
dapat dituang. Kandungan airnya berjumlah hingga 30%.
2. Ekstrak kering
Ekstrak kering memiliki konsistensi kering. Melalui penguapan cairan
pengekstraksi dan pengeringan sisanya akan terbentuk suatu produk, yang
sebaiknya memiliki kandungan lembab tidak lebih dari 5% (Voigt, 1994)
3. Ekstrak cair
Sediaan cair simplisia nabati, yang mengandung etanol sebagai pelarut atau
sebagai pengawet. Jika tidak dinyatakan lain pada pada masing-masimg
monografi setiap 1 ml ekstrak mengandung bahan aktif dari 1 gram simplisia
yang memuhi syarat. Ekstrak cair cenderung membentuk endapan yang dapat
diendapkan dan disaring (Anonim, 1995).
E. Kromatografi Lapis Tipis
Kromatografi lapis tipis menurut Hardjono (1983) merupakan metode
fisikokimia, yang artinya pada saat pendeteksian lokasi bercak dari komponen
yang terpisah yang tidak berwarna umumnya dilakukan dengan cara fisika dan
kimia. Cara fisika yaitu dengan melihat senyawa beRfluoresensi di bawah lampu
UV atau melihat senyawa tidak berfluoresensi dengan latar belakang

12
berfluoresensi. Adapun cara kimia yaitu dilakukan penyemprotan dengan
substansi kimia yang akan memberikan noda atau bercak baik yang terlihat pada
cahaya tampak ataupun sebagai noda yang tampak pada lampu ultraviolet
(Hardjono, 1983).
Menurut Stahl (1985) zat yang akan dipisahkan dengan kromatografi lapis
tipis biasanya berupa larutan dan ditotolkan pada fase diam menjadi sebuah
bercak. Fase diam dibuat dari salah satu penjerap yang khusus digunakan untuk
KLT yang biasanya ditopang dengan logam atau kaca. Panjang lapisan tersebut
200 mm dengan lebar 200 atau 100 mm. Untuk analisis, tebalnya 0,1-0,3 mm,
biasanya 0,2 mm. Sebelum digunakan, lapisan disimpan dalam lingkungan yang
tidak lembab atau bebas dari uap. Silika gel merupakan fase diam yang paling
banyak digunakan dalam KLT. Material ini dapat langsung digunakan atau
dicampur dengan pengikat misalnya kalsium sulfat untuk membuat lapisan yang
lebih kohesif. Bila digunakan pengikat CaSO4 maka pada namanya diberi tanda
G, misalnya silika gel G, dan bila dicampur dengan indikator fluoresensi diberi
tanda F, misalnya silika gel GF (Stahl,1985).
Fase gerak ialah medium angkut dan terdiri atas satu atau beberapa
pelarut. Pelarut bergerak di dalam fase diam yang berupa lapisan berpori karena
ada gaya kapiler. Kecepatan perambatan tergantung viskositas pelarut dan struktur
lapisan. Fase gerak dapat berupa hampir segala macam pelarut atau campuran
pelarut (Stahl, 1985).
Sistem pelarut untuk KLT dapat dipilih dari pustaka, tapi lebih sering kita
mencoba-coba saja karena waktu yang diperlukan sebentar. Sistem yang paling
13
sederhana adalah campuran pelarut organik yang dipakai untuk memisahkan
molekul yang mempunyai satu dan atau dua gugus fungsi. Faktor yang harus
diingat dalam mencampur pelarut untuk membuat larutan pengembang (fase
gerak) adalah pelarut yang mempunyai kepolaran yang serupa yang dapat
dicampur dimana kepolaran campuran tidak merupakan fungsi linier dari susunan
campuran tetapi merupakan fungsi logaritma (Gritter, Bobit, Scharting, 1991).
Penotolan dimulai 1,5 cm dari tepi lempeng bagian bawah, jarak antara 2
totolan 1cm dan diameter totolan 2-5mm. Sampel ditotolkan pada lempeng yang
sudah dilapisi dengan menggunakan mikropipet atau syringe dengan volume
penotolan 1-5µl (Gritter et al., 1991).
Menurut (Gritter et al., 1991) proses pengembangan merupakan proses
pemisahan campuran cuplikan karena larutan pengembang merambat naik dalam
lapisan. Jarak pengembangan normal yaitu jarak antara mulai penotolan dan
hingga batas perambatan adalah 10 cm.
Deteksi paling sederhana adalah jika senyawa menunjukkan penyerapan di
daerah UV gelombang pendek (radiasi utama kira-kira 254 nm) atau jika senyawa
ini dapat dieksitasi ke fluoresensi radiasi UV gelombang pendek dan atau
gelombang panjang (365 nm). Jika dengan kedua cara ini senyawa tidak dapat
dideteksi maka harus dicoba dengan reaksi kimia. Pertama tanpa pemanasan lalu
bila perlu dengan pemanasan (Stahl, 1985).
Jarak pengembangan pada senyawa pada kromatogram biasanya
dinyatakan dengan angka Rf atau hRf

14
Angka Rf berjarak antara 0,00 dan 1,00 dan hanya dapat ditentukan dua
desimal. hRf ialah angka Rf dikalikan faktor 100 (Stahl, 1985).
F. Image J
Image J adalah suatu software java yang digunakan untuk memproses dan
menganalisa suatu gambar, seperti gambar sel secara 3 dimensi, rambar
radiological, atau system multi gambar perbandingan system hemologi. Image J
dirancang dan dibuat menjadi program yang lebih mudah dipahami dan digunakan
untuk proses mempelajari suatu gambar. Image J dapat digunakan untuk
menghitung area, statistic, nilai pixel, dan intesitas dari suatu obyek gambar,
seperti penggunaan KLT-densitometer (Anonim, 2008). Lempeng KLT yang telah
dielusi kemudian dihitung intensitas bercaknya menggunakan program Image J
(Zeligz and Bradlow, 2006).
G. Simplex Lattice Design
Formula yang optimal seringkali dapat diperoleh dengan penerapan
Simplex Lattice Design. Penerapan Simplex Lattice Design digunakan untuk
menentukan optimasi formula pada berbagai perbedaan komposisi bahan (yang
dinyatakan dengan beberapa bagian) yang jumlah totalnya dibuat tetap yaitu sama
dengan satu bagian. Penerapan Simplex Lattice Design dapat digambarkan dalam
dua komponen pelarut pada berbagai komposisi yang berbeda. Dari hasil
percobaan dapat dibuat suatu profil yang menggambarkan hubungan antara
berbagai kombinasi pelarut dengan banyaknya zat yang terlarut. Dasar penerapan
15
Simplex Lattice Design adalah penelitian dasar terdiri dari berbagai kelarutan zat
pada pelarut A saja (100% - 1 bagian), pada pelarut B saja (100% - 1 bagian, dan
campuran pelarut A dan B masing-masing 50% (masing-masing 0,5 bagian).
Dalam pendekatan yang sederhana akan dihasilkan persamaan sebagai berikut:
Y = a (A) + b (B) + ab (A)(B),
Dengan keterangan sebagai berikut:
Y = respon (hasil penelitian)

(A) = kadar proporsi komponen A
(B) = kadar proporsi komponen B
a, b, ab = koefisien yang dihitung dari pengamatan penelitian
Untuk mendapatkan persamaan di atas diperlukan tiga formula. ketiga
formula tersebut adalah I menggunakan 100% pelarut A, II menggunakan 100%
pelarut B, dan III menggunakan 50% pelarut A dan 50% pelarut B. Contoh
penerapan Simplex Lattice Design adalah sebagai berikut, misalnya:
FI = Percobaan yang menggunakan pelarut 100% A, dari hasil percobaan
dapat melarutkan zat 10 mg/ml.
F II = Percobaan yang menggunakan pelarut 100% B, dari hasil percobaan
dapat melarutkan zat 15 mg/ml.
F III = Percobaan yang menggunakan pelarut campuran 50% A dan 50% B
dari hasil percobaan dapat melarutkan zat 20 mg/ml.
Contoh dari hasil percobaan tersebut diperoleh persamaan Y = 10 (A) + 15 (B) +
30 (A)(B), dari hasil persamaan tersebut dapat diperkirakan komposisi pelarut
yang dapat menghasilkan kadar tertinggi, sehingga dapat digambarkan profil
anatara campuran biner pelarut terhadap jumlah zat yang terlarut. Dari profil
16
tersebut dapat secara teoritis diketahui diprediksi campuran pelarut A dan
beberapa bagian pelarut B yang dapat menghasilkan jumlah zat yang terlarut
secara optimum. Hasil teoritis ini perlu dicek dengan percobaan (Bolton, 1997).
H. Landasan Teori
Berdasarkan literatur, ekstraksi rutin dari Manihotis Folium menggunakan
metode maserasi. Ekstraksi dengan metode maserasi biasanya menggunakan
pelarut campuran etanol dan air. Perbandingan antara jumlah etanol dan air yang
digunakan tergantung dari pada bahan yang akan diekstraksi.
Keuntungan metode maserasi dibandingkan metode ekstraksi yang lain
adalah alatnya sederhana, mudah dilakukan, dan murah. Adanya proses
perendaman dan penggojogan akan meningkatkan ekstraksi rutin dari Manihotis
Folium karena adanya perbedaan konsentrasi antara di dalam sel dan di luar sel,
sehingga rutin akan terekstrak karena larut dalam pelarut.
Rutin merupakan senyawa golongan flavonoid glikosida yang menjadi
kandungan dari Manihotis Folium. Rutin adalah senyawa flavonoid yang larut
dalam etanol dan air.
Proses ekstraksi rutin secara maserasi dengan menggunakan campuran
etanol dan air ini diharapkan akan meningkatkan kadar rutin yang terekstraksi.
Digunakan variasi komposisi etanol dan air dalam proses ekstraksi melalui
metode aplikasi Simplex Lattice Design diperoleh formula optimum yang akan
menghasilkan kadar rutin tertinggi.

17
Suhu menjadi salah satu faktor yang perlu diperhatikan dalam proses
maserasi. Berdasarkan Hukum Arrhenius bahwa adanya kenaikan suhu 10oC akan
meningkatkan kecepatan reaksi dua kali lebih besar, maka adanya kenaikan suhu
dalam proses maserasi akan meningkatkan ekstraksi rutin dari Manihotis Folium.
I. Hipotesis
1. Dari peringkat suhu maserasi yang digunakan yaitu 30oC, 40oC, dan 50oC,
diperoleh suhu maserasi yang menghasilkan kadar rutin yang tertinggi, yaitu
pada suhu 50oC.
2. Pelarut campuran etanol dan air pada berbagai perbandingan komposisi dapat
menghasilkan ekstrak Manihotis Folium dengan kadar rutin yang berbeda.
Pada komposisi tertentu dapat digunakan sebagai pelarut campuran optimum
untuk menghasilkan ekstrak Manihotis Folium dengan kadar rutin yang tinggi.
18
BAB III
METODELOGI PENELITIAN
A. Jenis dan Rancangan Penelitian
Penelitian ini termasuk dalam penelitian eksperimental murni karena
adanya intervensi atau perlakuan terhadap subjek uji, dengan rancangan penelitian
secara Simplex Lattice Design.
B. Variabel Penelitian
1. Variabel Bebas
Komposisi etanol dan air yang dibuat berdasarkan formula dari metode
Simplex Lattice Design dan suhu shaker untuk penyarian diatur pada 30, 40,
dan 50 oC.
2. Variabel Tergantung
Kadar rutin yang tersari dari Manihotis Folium.
C. Definisi Operasional
a. Maserasi dalam penelitian ini menggunakan perbandingan volume etanol 96%
dan akuades dengan maserator yang bisa diatur suhunya, yaitu 30oC, 40oC,
dan 50oC.
b. Ekstrak Manihotis Folium merupakan ekstrak kental yang diperoleh secara
maserasi dengan perbandingan volume etanol dan akuades yang berasal dari
serbuk Manihotis Folium.

19
c. Ekstrak kental adalah ekstrak dengan kadar air kurang dari 30%.
d. Etanol yang dimaksud dalam penelitian ini adalah etanol 96%.
e. Air yang dimaksud dalam penelitian ini adalah akuades.
f. Respon dalam penelitian ini adalah kadar rata-rata rutin dari tiga replikasi.
g. Komposisi optimum adalah komposisi pelarut etanol dan air yang
menghasilkan rata-rata rutin tertinggi.
h. Penetapan kadar rutin dengan menghitung luas area bawah kurva (AUC) yang
dianalisa dengan menggunakan Image J.
D. Bahan Penelitian
Bahan yang digunakan dalam penelitian ini antara lain: simplisia Manihotis
Folium dan lempeng KLT selulosa p.a. Merck. Bahan kimia kualitas teknis berupa
etanol 96%, air, dan ammonia 25%. Bahan kimia kualitas analitik meliputi asam
asetat p.a, butanol p.a, standar rutin p.a, methanol p.a, etanol p.a.
E. Alat Penelitian
Alat-alat yang digunakan dalam penelitian ini berupa Grinder, Shaker Inkubator
Zhicheng ZHWY-100C, TLC set, neraca elektrik (Mettler Toledo GB 3002),
vaccum rotary evaporator (Buchi Rotavapor No.105108, Switzerland), Waterbath
Memmert, Oven Memmert, Krus silikat, Pipet Mikro Volume, dan alat-alat gelas.
20
F. Tata Cara Penelitian
1. Determinasi tanaman Singkong
Determinasi tanaman singkong dilakukan di Laboratorium Kebun Tanaman
Obat Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma berdasarkan Steenis
(1992).
2. Pengumpulan daun singkong
Daun singkong muda dipetik dari tanaman singkong yang berumur delapan
bulan dan dipisahkan dari batangnya sehingga hanya daunnya saja.
3. Pembuatan Simplisia
Daun singkong yang telah dipisahkan dari batangnya, dikeringkan.
Pengeringan tidak langsung di bawah sinar matahari, tetapi cukup diangin-
anginkan saja. Setelah cukup kering kemudian dijemur di bawah matahari
langsung dengan ditutup menggunakan kain hitam sampai kering.
Pengeringan dilanjutkan di dalam oven pada suhu 36oC sampai dapat
dihancurkan dengan tangan.
4. Pembuatan serbuk simplisia daun singkong
Daun singkong yang sudah kering diserbuk menggunakan mesin serbuk
dengan menggunakan ayakan nomor mesh 50.
5. Pembuatan ekstrak daun singkong
Timbang serbuk daun singkong sebanyak 5,0 gram kemudian dimasukkan
dalam Erlenmeyer dan ditambahkan kurang lebih 50 ml pelarut campuran
etanol dan air berdasarkan perbandingan. Erlenmeyer ditutup dan maserasi
diaduk dalam shaker incubator yang telah diatur suhunya, yaitu 30oC, 40oC,
21
dan 50oC selama 2 X 24 jam. Maserat ditampung, dan serbuk di maserasi
ulang dengan pelarut campuran yang baru. Setelah diperoleh maserat, pelarut
diuapkan dengan alat vacuum rotary evaporator sampai volume ekstrak
kurang lebih 10 ml. Dilanjutkan dengan proses penguapan sampai seluruh
pelarutnya menguap di atas waterbath pada suhu 50oC. Dimasukkan dalam
oven pada suhu 50oC untuk mendapatkan berat ekstrak yang konstan, yaitu
selisih penimbangan tiap jamnya tidak lebih dari 0,25%. Timbang ekstrak
kering yang diperoleh.
Tabel I. Perbandingan pelarut maserasi
Volume pelarut (ml)

Pelarut Formula 1 Formula 2 Formula 3 Formula 4 Formula 5
Etanol 96% 50 37.5 25 12.5 0
Air 0 12.5 25 37.5 50
6. Validasi Metode
a. Pembuatan larutan baku rutin
Lima miligram standar rutin ditimbang lebih kurang seksama, dan
dilarutkan dengan 5 mililiter metanol p.a, sehingga diperoleh larutan baku
rutin dengan kadar 1 mg/ml.
b. Pembuatan seri kurva baku rutin
Sebanyak 1.5µl, 2.5µl, 3.5µl, 4.5µl, dan 5.5µl ditotolkan pada lempeng
selulosa yang telah diaktifkan sebelumnya pada oven dengan suhu 60oC
selama 30 menit. Dikembangkan pada chamber yang telah jenuh dengan
fase gerak butanol : asam asetat : air (4:1:5) v/v, dengan jarak
22
pengembangan 10 cm. Bercak yang telah diperoleh dideteksi dengan sinar
UV 254 nm dan dimasukkan dalam bejana yang jenuh dengan uap
ammonia. Scan plat dan kemudian gambar ktomatogram dikur nilai areanya
dengan menggunakan program Image J.
c. Penetapan nilai recovery
Dibuat tiga seri volume penotolan yaitu 1.5 µl; 3,5 µl; dan 5.5µl ditotolkan
pada lempeng selulosa yang telah diaktifkan sebelumnya pada oven dengan
suhu 60oC selama 30 menit. Penotolan dilakukan secara triplo. Lalu
dikembangkan pada chamber yang telah jenuh dengan fase gerak butanol :
asam asetat : air (4:1:5) v/v, dengan jarak pengembangan 10 cm. Bercak
yang telah diperoleh dideteksi dengan sinar UV pada panjang gelombang
254 nm dan dimasukkan dalam bejana yang jenuh dengan uap ammonia.
Ukur nilai area dengan menggunakan program Image J. Hitung kadar
terukur menggunakan persamaan kurva baku. Recovery dihitung dari kadar
terukur pada kurva baku dibandingkan dengan kadar yang telah diketahui
dikalikan dengan 100%. Kemudian dilanjutkan dengan penetapan nilai
presisi.
7. Pemeriksaan kualitatif ekstrak Manihotis Folium
Sebanyak 1,5 µl; 2,5 µl; 3,5 µl; 4,5 µl; dan 5,5 µl seri baku rutin dan 0,5 µl
untuk formula 1, 2, dan 3,serta 1 µl untuk formula 4 dan 5 ditotolkan pada
lempeng selulosa yang telah diaktifkan sebelumnya pada oven dengan suhu
60oC selama 30 menit. Bercak yang telah diperoleh dideteksi dengan sinar UV
23
dengan panjang gelombang 254 nm dan dimasukkan dalam bejana yang jenuh
dengan uap ammonia. Hitung nilai Rf.
8. Pemeriksaan kualitas ekstrak Manihotis Folium
a. Pemeriksaan organoleptis
Pemeriksaan organoleptis meliputi warna, bau, rasa, dan konsistensi ekstrak
daun singkong.
b. Preparasi sampel
Ekstrak kental Manihotis Folium dengan lima formula perbandingan
pelarut etanol dan air masing-masing ditimbang lebih kurang seksama 0,1
gram, dan dimasukkan dalam flakon dan dilarutkan dengan 1 ml metanol
p.a.
c. Penetapan kadar rutin
Sebanyak 0,5 µl untuk ekstrak formula 1, 2, 3, dan 1µl untuk ekstrak
formula 4 dan 5 ditotolkan pada lempeng selulosa yang telah diaktifkan
sebelumnya pada oven dengan suhu 60oC selama 30 menit. Bercak yang
telah diperoleh dideteksi dengan sinar UV pada panjang gelombang 254 nm
dan dimasukkan dalam bejana yang jenuh dengan uap ammonia. Scan plat
dan kemudian gambar ktomatogram dikur nilai areanya dengan
menggunakan program Image J. Replikasi dilakukan sebanyak 3 kali untuk
masing-masing suhu maserasi.
d. Cara analisis
Data kadar rutin yang diperoleh dari percobaan dianalisis sehingga
mendapatkan persamaan Simplex Lattice Design. Kemudian dianalisa

24
secara statistik dengan uji F untuk melihat validitas dari persamaan yang
diperoleh. Jika persamaan yang diperoleh valid, maka dapat diketahui
komposisi optimum yang menghasilkan kadar rutin tertinggi.

25
BAB IV
HASIL DAN PEMBAHASAN
A. Determinasi Tanaman
Determinasi tanaman bertujuan untuk mendapatkan kepastian akan
kebenaran tanaman yang diselidiki sesuai dengan yang dimaksud dalam
penelitian. Determinasi dilakukan dengan mencocokkan ciri-ciri yang terdapat
pada tanaman sesuai dengan kunci determinasi yang terdapat pada buku acuan.
Determinasi tanaman singkong ini dilakukan di Laboratorium Kebun Tanaman
Obat Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma menurut Steenis (1992).
Berdasarkan hasil dari determinasi ketahui bahwa tanaman yang
digunakan dalam penelitian ini adalah Manihot utillissima Pohl (Lampiran I).
B. Pengumpulan daun
Penelitian ini menggunakan simplisia Manihotis Folium yang diperoleh
dari perkebunan singkong di Wonosari. Daun singkong yang digunakan adalah
daun singkong dari tanaman singkong yang berumur delapan bulan yang telah
siap untuk panen. Daun singkong diambil tiga ruas dari atas dan empat ruas dari
bawah untuk mendapatkan daun singkong yang tidak terlalu muda maupun terlalu
tua. Menurut Bahruddin, Sirait, Moesdarsono (1990) kadar rutin yang ditetapkan
secara KLT dan dianalisa dengan densitometer yang terdapat pada daun singkong
muda adalah 0,71 % (b/b), daun singkong tua 0,35% (b/b), dan daun singkong
kuning 0,16% (b/b). Berdasarkan penelitian Bahruddin et al (1990) maka

26
digunakan daun singkong yang masih muda untuk mendapatkan kadar rutin yang
tinggi.
C. Pembuatan simplisia
Simplisia dibuat dari daun singkong yang diangin-anginkan terlebih
dahulu, kemudian dikeringkan di bawah matahari dengan ditutup kain hitam.
Tujuan penutupan kain ini juga untuk menghindari kontaminasi dari luar, baik
berupa debu dan kerikil. Selain itu supaya panas matahari merata di seluruh
permukaan daun singkong dan tidak merusak rutin. Pengeringan dilanjutkan di
dalam oven pada suhu 400C–500C sampai daun benar-benar kering dan bisa
dihancurkan dengan tangan, dengan asumsi bahwa kadar air yang ada di dalam
simplisia kurang dari 10%. Simplisia dengan kadar air lebih dari 10% bisa
mengalami reaksi enzimatis yang dapat menguraikan zat aktif, yang akan
menyebabkan rusaknya simplisia dan penurunan mutu dari simplisia. Simplisa
yang rusak dan pengalami penurunan mutu akan diketahui pada saat penetapan
kadar zat aktifnya yang tidak sesuai dengan standar yang sudah ada. Suhu
pengeringan simplisia berdasarkan Anonim (1985) berkisar antara 30-90oC, tetapi
lebih baik pada suhu kurang dari 60oC, maka dalam penelitian ini suhu
pengeringan di dalam oven berkisar antara 40-50oC.
Pada saat pengeringan di dalam oven tumpukan daun tidak boleh terlalu
tinggi supaya mendapatkan simplisia dengan kadar air yang sama. Faktor-faktor
yang mempengaruhi pengeringan adalah suhu pengeringan, kelembaban udara,
aliran udara, waktu pengeringan dan luas permukaan bahan.

27
D. Pembuatan serbuk
Simplisia daun singkong yang sudah kering diserbuk menggunakan mesin
penyerbuk. Tujuan penyerbukan ini untuk mendapatkan luas permukaan total
yang besar sehingga kontak dengan pelarutnya akan semakin besar sehingga
proses ekstraksi akan bertambah baik dan dan kadar rutin yang diperoleh juga
akan semakin besar.
Serbuk yang dihasilkan adalah serbuk halus yang berwarna hijau. Serbuk
yang halus mempunyai keuntungan bisa meningkatkan kadar rutin yang
terekstraksi karena luasnya area kontak pelarut dengan serbuk, tetapi dalam
penyimpanan serbuk ini mudah menyerap lembab, maka selama penyimpanan
ditambahkan silika gel untuk menyerap lembab.
Gambar 3. Serbuk daun singkong
E. Pembuatan ekstrak
Serbuk yang telah ditimbang sebanyak 5 gram diekstraksi dengan 50 ml
pelarut campuran antara etanol dan air berdasarkan perbandingan. Campuran

28
pelarut ini bertujuan untuk mendapatkan perbandingan pelarut yang menghasilkan
kadar rutin paling besar. Kemudian di maserasi pada shaker inkubator pada suhu
30oC, 40oC, dan 50oC. Perbedaaan suhu ini untuk mengetahui perbedaan kadar
rutin pada masing-masing suhu tersebut. Berdasarkan hukum Arrhenius, setiap
peningkatan suhu 10oC akan meningkatkan kecepatan reaksi dua kali lebih besar
(Petruci dan Suminar, 1985). Rentang suhu pada proses maserasi yang digunakan
berada di bawah 60oC karena rutin rusak pada suhu di atas 60oC.
Proses maserasi dilakukan dengan dua kali ekstraksi yang sesuai kaidah
ekstraksi berulang yang akan meningkatkan kadar rutin yang terekstraksi. Setelah
proses maserasi, maserat yang telah ditampung dipisahkan dari pelarutnya dengan
menggunakan vaccum rotary evaporator sampai diperoleh sisa ekstrak kurang
lebih 10 ml. Prinsip dari vaccum rotary evaporator adalah ekstrak diputar di atas
air hangat, sehingga pelarut dari ekstrak akan menguap, adanya sistem vakum
akan menyebabkan tekanan pada sistem turun mencapai tekanan yang telah diatur
sehingga pelarut yang menguap bisa menetes di tempat tampungan. Ekstrak yang
telah dipisahkan dari pelarutnya, diuapkan di atas waterbath pada suhu 50oC, hal
ini bertujuan untuk menghilangkan residu etanol yang masih ada di dalam ekstrak.
Kemudian dikeringkan di dalam oven dengan suhu 50oC dan ditimbang setiap
satu jam sampai diperoleh ekstrak dengan berat konstan. Berat konstan ekstrak
diperoleh dari perbedaan berat setiap penimbangan tiap jamnya tidak lebih dari
0,25 %. Bila dilanjutkan pengeringan di dalam oven tidak akan ada perbedaan
berat yang berarti dan kadar air yang ada di dalam ekstrak sudah seimbang dengan
kadar air yang ada di lingkungan, tetapi jika terus dilakukan pengeringan maka
29
akan merusak ekstrak yang akan ditetapkan kadar rutinnya. Penetapan bobot
konstan ini merupakan salah satu tahap standarisasi ekstrak, yaitu susut
pengeringan karena menghilangkan kandungan air yang ada di dalam ekstrak dan
bisa menetapkan kadar airnya.
Gambar 4. Ekstrak Manihotis Folium
Keterangan gambar:
T1 = pelarut 100% etanol 96%
T2 = pelarut 75% etanol 96% dan 25% air
T5 = pelarut 100% air
F. Validasi metode
a. Pembuatan kurva baku rutin
Kurva baku diperoleh dengan melakukan pengukuran luas area
menggunakan Image J dari lima seri konsentrasi larutan baku rutin dengan
tiga kali pembuatan kurva baku. Tujuan pembuatan kurva baku ini adalah
untuk mengetahui linearitas antara volume totolan dengan nilai area yang
dihasilkan dari standar rutin. Pada kurva baku dengan nilai linearitas yang
bagus digunakan untuk menetapkan kadar rutin. Hasil pengukuran kurva baku
yang diperoleh :
30
Tabel II. Pembuatan Kurva baku
Kurva baku 1 Kurva baku 2 Kurva baku 3

Volume Volume Volume
totolan (µl) AUC totolan (µl) AUC totolan (µl) AUC
1.5 1.5 1.5
27102.05 15562.6 26001.2
2.5 2.5 2.5
41606.51 24546.3 37012.1
3.5 3.5 3.5
49238.86 33224.7 38070.7
4.5 4.5 4.5
43686.28 36493.8 39413.8
5.5 5.5 5.5
43330.11 35951 38491.5
A = 28905.2005 A = 10702.1750 A = 26214.055
B = 3320.7587 B = 5069.6442 B = 26329.9135
Persamaan kurva baku: Persamaan kurva baku: Persamaan kurva baku:

y = 28905.2005x + y = 5069.6442x + y = 26329.9135x +
3320.7587 10702.1750 26214.055
r = 0.6597 r = 0.9283 r = 0.7809
Linearitas menyatakan hubungan korelasi antara kadar rutin dengan luas
area yang dihasilkan. Linearitas dinyatakan sebagai koefisien korelasi (r).
Persyaratan APVMA (Australian Pestisides and Veterinary Medicines Authority)
tahun 2004 menyatakan bahwa nilai korelasi (r) yang baik adalah lebih dari 0.99.
Berdasarkan tabel II diketahui bahwa ketiga persamaan kurva baku tidak ada yang
memenuhi persyaratan karena nilai r yang lebih kecil dari 0.99.

31
Gambar 5. Kurva baku 1

32
Berdasarkan gambar 5, 6, dan 7 diketahui bahwa semakin besar volume
totolan maka area yang diperoleh juga semakin besar.
b. Penetapan nilai recovery
Perolehan kembali kadar merupakan parameter yang menunjukkan derajat
kedekatan hasil analisis dengan kadar analit yang sebenarnya, akurasi dari suatu
metode.
Tabel III. Nilai recovery

Variabel Massa Massa Recovery Rata-rata
sebenarnya terukur (%) recovery (%)
(µg) (µg)
Volume 1.56 3.2349 207.3654 154.0897
totolan 1.56 0.9587 61.4551
1.5µl 1.56 3.0178 193.4487
Volume 3.64 6.1232 168.2199 146.1932
totolan 3.64 4.4426 122.0495
3.5µl 3.64 5.3985 148.3104
Volume 5.72 6.4361 112.5192 98.4732
totolan 5.72 4.9804 87.0699
5.5µl 5.72 5.4815 95.8304
33
Nilai recovery yang baik pada kurva baku adalah 98-102% (Mulja dan Hanwar,
2003), maka berdasarkan nilai tersebut hanya larutan uji konsentrasi 3 (5.5 µl)
yang memenuhi persyaratan akurasi.
Presisi merupakan parameter yang menunjukkan derajat kesesuaian antara
hasil uji individual, diukur melalui penyebaran hasil individu dan rata-rata dari
campuran yang homogen. Diukur dengan nilai coefisien of variancy (CV)
dengan nilai CV yang baik adalah < 2 % (Mulja dan Hanwar, 2003).
Tabel IV. Nilai presisi

Rata-rata massa SD SE KV
Variabel terukur (µg) (%)
Volume totolan 2.4038 1.2562 0.7253 30.1717
1.5µl
Volume totolan 5.3214 0.8429 0.4866 9.1451
3.5µl
Volume totolan 5.6327 0.7395 0.4269 7.5799
5.5µl
Hasil penelitian menunjukkan bahwa tidak ada volume totolan yang memenuhi
persyaratan presisi kurang dari 2%. Berdasarkan analisis tersebut, bisa dikatakan
bahwa metode ini tidak menghasilkan presisi yang memenuhi syarat.
G. Analisis kualitatif ekstrak Manihotis Folium
Analisis kualitatif yang dilakukan dengan menggunakan kromatografi
lapis tipis (KLT). Analisis kualitatif ini untuk memastikan bahwa ekstrak yang
dihasilkan benar mengandung rutin.
Digunakan fase diam selulosa karena sifatnya yang non polar sehingga
bisa memisahkan rutin dari ekstrak yang bersifat polar. Pemisahan senyawa
flavonoid lebih cocok menggunakan selulosa dibandingkan menggunakan silika

34
gel berdasarkan dari hasil orientasi. Berdasarkan hasil orientasi, pemisahan
senyawa rutin menggunakan silika gel menghasilkan bercak yang tidak memisah
dan mengekor.
Fase gerak yang digunakan diperoleh dari hasil orientasi dengan
mendapatkan bercak yang terpisah baik dari ekstrak yang ditotolan dan tidak
mengekor. Fase gerak yang digunakan adalah butanol:asam asetat:air (4:1:5) v/v.
Butanol dan asam asetat yang bersifat non polar akan menurunkan kepolaran dari
air sehingga perambatan dari fase gerak menjadi lambat dan bisa memisahkan
rutin dari zat-zat lain yang terdapat dalam ekstrak Manihotis Folium. Jika hanya
menggunakan air maka perambatan dari fase gerak akan sangat cepat dan tidak
memisahkan rutin dari senyawa lain yang terdapat dalam ekstrak Manihotis
Folium.
Analisis kualitatif rutin dilakukan dengan menotolkan sampel ekstrak dan
baku rutin pada lempeng selolusa, lalu dielusi dalam bejana yang telah dijenuhkan
dengan fase gerak butanol:asam asetat:air (4:1:5) v/v dengan jarak pengembangan
10 cm. Bercak dideteksi secara fisika dengan lampu UV pada panjang gelombang
254 nm dan diketahui warna bercak kekuning-kuningan, kemudian dilakukan
deteksi kimia dengan uap ammonia dengan meletakkan lempeng yang telah
dielusi ke dalam bejana yang telah jenuh dengan uap ammonia sampai bercak
berwarna kekuning-kuningan, kemudian dihitung nilai Rf dari masing-masing
bercak untuk mengetahui kedekatan hasil antara nilai Rf baku dengan nilai Rf
sampel.
35
Gambar 8. Kromatogram baku rutin dan sampel ekstrak rutin di deteksi dengan
uap amonia
Keterangan:
Konsentrasi baku rutin : 1,04 µg/µl
Fase diam: selulosa
Fase gerak : n-butanol : asam asetat : air (4:1:5) % v/v
Deteksi : uap amonia
Volume totolan:
a. Baku 1 (1.5 µl), massa rutin (1.56 µg)
b. Baku 2 (2.5 µl), massa rutin (2.60 µg)
c. Baku 3 (3.5 µl), massa rutin (3.64 µg)
d. Baku 4 (4.5 µl), massa rutin (4.68 µg)
e. Baku 5 (5.5 µl), massa rutin (5.72 µg)
f. Sampel 5 (formula 100% air) : 0.5 µl
g. Sampel 4 (formula 75% air dan 25% etanol) : 0.5 µl
h. Sampel 3 (formula 50% air dan 50% etanol) : 0.5 µl
i. Sampel 2 (formula 25% air dan 75% etanol) : 1 µl
j. Sampel 1 (formula 100% etanol) : 1 µl
36
Tabel V. Harga Rf dan warna bercak baku rutin dan rutin dalam sampel ekstrak di
deteksi dengan uap amonia.
Baku Sampel
Bercak a B c D e f g h i j
Rf 0.60 0.59 0.60 0.60 0.60 0.60 0.60 0.61 0.61 0.61
Warna kuni Kun kuni Kun Kun kuni kuni kuni kuni Kuni
bercak ng ing ng ing ing ng ng ng ng ng
Berdasarkan hasil yang diperoleh dari KLT (gambar 11 dan tabel V), diketahui
bahwa sampel ekstrak mengandung rutin. Hal ini ditunjukkan dari kelima bercak
sampel ekstrak yang mempunyai harga Rf mirip dengan Rf baku rutin yaitu 0.60
dan intensitas warna bercak yang menyerupai bercak baku.
H. Pemeriksaan kualitas ekstrak daun singkong
a. Pemeriksaan organoleptis
Tujuan dari pemeriksaan organoleptis adalah untuk membantu identifikasi
ekstrak dengan menggunakan pancaindera. Menurut Arifin, Anggraini,
Handayani, Rasyid (2006), pemeriksaan organoleptis bertujuan untuk
pengenalan awal secara sederhana dan subyektif. Hasil dari pemeriksaan
organoleptis berupa bau yang ciri khas singkong, warna hitam, rasa agak
pahit, dan konsistensi ekstrak yang liat.
b. Penetapan kadar rutin dalam ekstrak Manihotis Folium
Sampel yang akan ditetapkan kadar rutinnya dilarutkan menggunakan metanol
p.a karena dari hasil percobaan kelarutan rutin lebih baik dalam metanol p.a
dibandingkan dalam air dan etanol p.a. Sehingga dengan dilarutkan dengan
37
metanol p.a banyak rutin yang terlarut. Volume totolan untuk setiap
formulanya berbeda karena pengaruh dari kekentalan ekstraknya berbeda dari
tiap formula, campuran pelarut yang banyak mengandung etanol 96%
memiliki sifat ekstrak yang semakin pekat sehingga saat dielusi tidak bisa
terpisah sempurna. Lempeng yang digunakan adalah lempeng selulosa p.a
yang bersifat nonpolar dengan fase gerak yang bersifat cenderung polar,
sehingga bisa memisahkan rutin dari ekstrak karena rutin akan terelusi oleh
fase gerak. Setelah mencapai batas pengembangan yaitu 10 cm dari titik
penotolan lempeng dimasukkan dalam bejana yang telah jenuh dengan uap
ammonia 25% untuk mendapatkan bercak rutin yang berwarna kekuning-
kuningan. Penetapan nilai area diperoleh dari analisis menggunakan program
Image J menggunakan gambar dari lempeng yang telah discan. Nilai area
tersebut digunakan untuk mengetahui kadar rutin yang terdapat pada sampel
ekstrak Manihotis Folium menggunakan persamaan kurva baku.
Tabel VI. Kadar rutin (µg/µl) dari tiap replikasi dari tiga peringkat suhu
proses maserasi
Suhu 30oC Suhu 40oC Suhu 50oC
Sampel Rep 1 Rep 2 Rep 3 Rep 1 Rep 2 Rep 3 Rep 1 Rep 2 Rep 3
1 8.2777 8.5953 1.0261 7.8025 4.1364 1.2038 -0.3822 5.3142 -0.5367
2 3.2311 4.0761 1.3604 2.019 -0.0266 -2.1951 0.8525 7.0142 0.0401
3 2.4965 4.708 1.5168 5.1832 4.0329 -0.1369 0.7426 2.1789 -0.5367
4 2.545 2.6023 -0.2667 -5.0864 -4.2777 -1.6804 -1.5843 11.5653 -1.4151
5 -2.5538 1.9954 -0.4061 -7.67 -4.2926 -4.2594 -5.0700 -0.3170 -2.6271
Keterangan:
Sampel 1 = etanol 100%
Sampel 2 = etanol 75% dan air 25%
Sampel 5 = air 100%
38
Berdasarkan tabel VI, diketahui bahwa adanya kenaikan suhu maserasi
tidak meningkatkan kadar rutin yang terekstraksi dari Manihotis Folium.
Hukum Arrhenius menyatakan bahwa adanya kenaikan suhu 10oC akan
meningkatkan kecepatan reaksi dua kali lebih besar, tetapi kelarutan rutin
tertinggi pada suhu 30oC, ditunjukkan dengan kadar yang lebih tinggi di setiap
replikasinya. Maka perlu dilakukan uji untuk mengetahui perbedaan kadar dari
setiap suhu maserasi.
Tabel VII. Hasil analisis menggunakan Anova
Sources of SS dF MS Fhitung Ftabel

Error
Between 24.4018 2 12.2009
Within 104.3043 12 8.69203
Total 128.7061 1.4037 3.68
Berdasarkan tabel VII, diketahui bahwa kadar rutin dari setiap suhu maserasi,
yaitu suhu 30oC, 40oC, 50oC berbeda tidak bermakna. Perbedaaan kadar rutin
yang diperoleh pada masing-masing suhu maserasi tidak menunjukkan bahwa
kadar rutin yang dihasilkan pada setiap suhunya berbeda.
Adanya nilai kadar yang minus (-), secara analisis dapat disimpulkan
bahwa sampel tidak mengandung zat yang akan ditetapkan kadarnya, yaitu
rutin. Sampel lima adalah sampel yang sebagian besar kadarnya bernilai
minus, dengan komposisi pelarut 100% air. Meskipun rutin larut dalam air,
tidak menjadi jaminan bahwa rutin akan terekstraksi dengan pelarut air. Nilai
minus juga disebabkan karena konsistensi dari ekstrak yang sangat liat
sehingga ekstrak sulit untuk dilarutkan dalam metanol, sehingga rutin yang
39
terlarut dalam metanol sangat kecil, sehingga nilai area saat dianalisis dengan
Image J sangat kecil dan kadarnya menjadi minus.
c. Analisis Kadar berdasarkan Simplex Lattice Design
Simplex Lattice Design adalah suatu metode aplikasi untuk mengetahui
komposisi terbaik dari suatu pelarut campuran untuk mendapatkan kadar rutin
tertinggi. Berdasarkan metode Simplex Lattice Design diperoleh lima formula
larutan penyari rutin yang akan diekstraksi pada tiga peringkat suhu yang
digunakan untuk mengetahui kadar rutin dihasilkan dari masing-masing
peringkat suhu, lalu dibandingkan bagaimana kadar rutin di setiap suhunya,
suhu mana yang menghasilkan kadar rutin tertinggi. Suhu yang digunakan
adalah 30oC, 40oC, dan 50oC. Dalam metode ini ada lima perbandingan
campuran pelarut yang akan menghasilkan ekstrak dan akan diukur kadar
rutinnya. Berdasarkan metode ini diharapkan mendapatkan perbandingan
volume pelarut etanol 96% dan air yang paling optimum untuk mengekstraksi
rutin dari Manihotis Folium dengan cara maserasi. Dari data yang diperoleh.
maka dihasilkan persamaan SLD sebagai berikut:
Persamaan umum :
Y = a (X1) + b (X2) + ab (X1)(X2)
Persamaan SLD suhu 30oC:

Y = 5.9664 (X1) - 0.3215 (X2) + 0.3386 (X1)(X2)
Persamaan SLD suhu 40oC
Y = 3.5784 (X1) – 5.4073 (X2) + 15.7634 (X1)(X2)
Persamaan SLD suhu 50oC
Y = 0.7964 (X1) - 2.6714 (X2) + 5.5910 (X1)(X2)
40
Berdasarkan hasil analisis, persamaan yang valid adalah persamaan suhu
30oC, sedangkan untuk suhu 40oC dan 50oC tidak valid.
Gambar 9. Kurva validitas persamaan SLD suhu 30oC

41
Berdasarkan gambar 9, 10, dan 11 diketahui bahwa validitas persamaan
ditunjukkan dengan kedekatan hasil percobaan dengan persamaan SLD. Suhu
maserasi 30oC menunjukkan kadar rutin dari hasil percobaan yang terletak di
daerah persamaan SLD. Menurut Bahrudin et al., (1990), rendemen rutin dari
Manihotis Folium yang diperoleh dari proses maserasi adalah 0.71% (b/b),
dari gambar 9 diketahui bahwa rendemen rutin tertinggi diperoleh dari suhu
30% pada formula 1 dengan nilai rendemen 0.7311% (b/b).
Penetapan perbandingan komposisi pelarut dari sampel 1, 2, 3, 4, dan 5,
dari suhu 30oC yang menghasilkan rendemen terbesar dari ekstrak Manihotis
Folium dilihat dari grafik yang persamaan SLD suhu 30oC. Dari gambar 9
diketahui bahwa semakin besar komposisi etanol sebagai pelarut dalam proses
maserasi menghasilkan rendemen rutin yang semakin besar.

42
Gambar 12. Grafik kadar rutin dan rata-rata kadar rutin pada tiap replikasinya
Berdasarkan gambar 12, diketahui bahwa pelarut optimum yang
digunakan dalam proses maserasi Manihotis Folium untuk mendapatkan kadar
rutin tertinggi adalah pelarut dengan komposisi 100% etanol 96%, dengan kadar
rutin 5.9664 µg/µl ± 2.4718.

43
BAB V
KESIMPULAN DAN SARAN
A. Kesimpulan
1. Diantara kadar rutin yang dihasilkan pada peringkat suhu maserasi, suhu 300C
menghasilkan kadar rutin yang paling tinggi dibandingkan 400C dan 500C.
2. Komposisi pelarut 100% etanol 96% menghasilkan kadar rutin tertinggi dari
ekstrak Manihotis Folium dengan proses maserasi.
B. Saran
1. Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut tentang cara ekstraksi rutin yang lain
dari Manihotis Folium untuk mendapatkan cara ekstraksi yang lebih tepat
untuk ekstraksi rutin dan mendapatkan kadar rutin yang lebih tinggi.
2. Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut cara penetapan kadar rutin dengan
menggunakan metode yang lebih sensitif, seperti HPLC.

44
DAFTAR PUSTAKA
Anonim, 1979, Farmakope Indonesia, edisi III, 9, Departemen Kesehatan

Republik Indonesia, Jakarta
Anonim, 1986, Sediaan Galenika, 5-20, Departemen Kesehatan RI, Jakarta
Anonim, 1995, Farmakope Indonesia, edisi IV, 7 Departemen Kesehatan

Republik Indonesia, Jakarta
Anonim, 2000, Standar Umum Ekstrak Tumbuhan Obat, cetakan 1, 1-12,

Departemen Kesehatan Republik Indonesia, Indonesia
Anonim, 2004, Guidelines For The Validation of Analytical Methods For Active
Constituent, Agricultural And Veterinary Chemical Products,
http://www.apvma.gov.au, diakses tanggal 22 Maret 2010
Anonim, 2007, Supplement: Bioflavonoid, Wellfx,com, Inc
Anonim, 2008, Manfaat Singkong, http://cafepojok,org/forum/showthread,php,

diakses tanggal 12 April 2009
Ansel, H., C,, 1989, Pengantar Bentuk Sediaan Farmasi, Edisi 4, 615, UI Press,
Jakarta
Ansel, H., C,, 1990, Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems,
407-408, Lea and Febiger Press, London
Arifin, H., Anggaraini, D., Handayani,. D., Rasyid, R., 2006, Standarisasi Ekstrak
Etanol Daun Eugena cumini Merr., Jurnal Sains dan Teknologi Fakultas
Farmasi, Universitas Andalas, Sumatra Barat
Bahruddin, S.M., Moedarsono, 1990, Pemeriksaan Kadar Rutin pada Daun

Singkong (Manihot utilissima Pohl,) Muda, Tua, dan Kuning, Skripsi, ITB,
Bandung
Bolton, S., 1997, Pharmaceutical Statistics: Practical and Clinical Application,

3rd, 611-614, Marcell Decker Inc, New York
Duke, J., A., 1999, Natural Product from Plants, 207, CRC Press, USA
45
Gritter, R,J., Bobit, J,M., Schwarting, A,E,, 1991, Introduction to

Chromatography, Cetakan II, 107-155, Penerbit ITB, Bandung
Hardjono, 1983, Kromatografi, 32-54, Gadjah Mada University Press, Yogyakarta
Leru, B, and Calatayud, P,A., 1994, Interactions Between Cassava And Arthropod
Pests, African Crop Science Journal, Vol, 2, No,4, pp, 385-390, Uganda
Mulja, H.M., Suharman, 2003, Prinsip-prinsip Cara Berlaboratorium Yang Baik,

Majalah Farmasi, Universitas Airlangga, Surabaya
Petruci, RH., dan Suminar, 1985, Kimia Dasar:Prinsip dan Terapan Modern,
166, Erlangga, Jakarta
Stahl, 1985, Drug Analysis by Chromatography and Microscopy : a practical

supplement to pharmacopeias, 205-207, ITB, Bandung
Steenis, C,G,G,J., 1992, Flora untuk Sekolah di Indonesia, 45, 47, 73, 258, 264,
PT, Pradnya Paramita, Jakarta Pusat
Voigt, R., 1994, Buku Pelajaran Teknologi Farmasi, 564, 565, 577, Gadjah Mada
University Press, Yogyakarta
Wijayakusuma, H., 2008, Efek Farmakologi Singkong,

http://anekaplanta,wordpress,org/2008/01/01/ubi-kayu-manihot-esculenta/,
diakses tanggal 2 Februari 2010
Zeligs, Michael A., and H. Leon Bradlow, 2006, Diindolymethane (DIM), formed
spontaneously from Indole-3-carbinol (I3C), is the dominant
antiproliferative indol in cell culture media after adding I3C,
http://www.aidic.it/IBIC2008/webpapers/86Alupuli.pdf, diakses tanggal 20
Maret 2010
LAMPIRAN
46
I. Surat Determinasi
47
II. Penetapan Bobot Konstan Ekstrak Manihotis Folium
a. suhu 30 oC
Replikasi 1
Bobot Formula 1 Formula 2 Formula 3 Formula 4 Formula 5
Kosong 16.3148 16.4829 20.0474 18.3996 25.4772
Awal 19.7049 27.3087 29.5333 29.3072 33.0781
1 Jam 17.8415 26.1942 28.0792 28.0562 32.3950
2 Jam 17.3485 24.7467 27.2335 26.9382 31.5548
3 Jam 17.1936 23.3297 26.3840 26.0704 30.7598
4 Jam 17.1464 21.8081 25.2642 24.6895 30.0970
5 Jam 17.1164 20.9943 24.5499 23.8255 29.2781
6 Jam 17.1015 19.7193 23.7500 22.4299 28.5325
7 Jam 17.0776 18.1874 22.8369 21.6030 27.7307
8 Jam 17.5682 22.0963 20.8969 26.7561
9 Jam 17.2474 21.1602 19.8960 26.2078
10 Jam 17.2025 20.9501 19.4817 26.1480
11 Jam 17.1883 20.9083 19.4166
12 Jam 19.3908
Replikasi 2
Formula
Bobot Formula 1 2 Formula 3 Formula 4 Formula 5
Kosong 17.9372 17.8586 19.5584 18.8865 24.8335
Awal 32.5896 20.0060 30.0739 25.7251 33.3449
1 Jam 31.6857 18.7958 28.6271 25.7040 32.5232
2 Jam 30.7068 18.4331 27.1774 31.6678
3 Jam 29.5705 18.3975 25.8683 30.9066
4 Jam 28.7628 25.1127 30.2690
5 Jam 27.6138 24.0028 29.4910
6 Jam 26.5380 23.0753 28.7424
48
7 Jam 25.3881 21.7659 26.8644

8 Jam 23.9577 21.0963 26.0407
9 Jam 22.9929 20.5849 25.6571
10 Jam 22.0815 20.4478 25.3990
11 Jam 21.2395 20.4108 25.3513
12 Jam 20.4747
13 Jam 19.1002
14 Jam 18.9226
15 Jam 18.8692
16 Jam 18.8518
Replikasi 3
Formula
Bobot Formula 1 2 Formula 3 Formula 4 Formula 5
Kosong 17.9451 22.1989 16.9063 17.4876 17.9552
Awal 19.5729 33.5248 27.6494 25.9024 27.3613
1 Jam 19.0596 33.1225 27.2556 25.5147 26.6427
2 Jam 18.6697 32.6734 26.8491 25.0987 25.7600
3 Jam 18.5850 32.0731 26.4249 24.4810 24.9380
4 Jam 18.5543 31.2294 26.0178 24.2113 24.0158
5 Jam 30.7365 25.4559 23.7637 23.1284
6 Jam 30.2417 25.0531 23.3857 22.3491
7 Jam 29.7867 24.6707 23.0581 21.5674
8 Jam 28.9351 23.8603 22.1432 20.7177
9 Jam 28.0084 22.5043 21.0984 19.8984
10 Jam 27.0037 21.3485 20.1956 19.3469
11 Jam 26.0460 20.5463 19.5465 18.8161
12 Jam 25.1887 19.8119 18.9156 18.6087
13 Jam 24.3221 18.8965 18.4530 18.5827
14 Jam 23.4810 17.7961 18.2981
15 Jam 22.8932 17.5335 18.2528
49
16 Jam 22.6978 17.5152 18.2433

17 Jam 22.6772
Nilai rendemen
S Replikasi 1 Replikasi 2 Replikasi 3
A
M
Lama Rendemen Lama Rendemen Lama Rendemen
P
pengeringan (%) pengeringan (%) pengeringan (%)
E
(jam) (jam) (jam)
L
1 7 13.3334 16 42.1539 4 5.2041
2 11 37.0592 3 8.0401 17 32.3569
3 11 29.2043 11 4.8994 16 36.6525
4 12 33.8360 1 0.0820 16 29.5691
5 10 20.9507 11 23.9725 13 32.0841
50
b. suhu 40 oC
Replikasi 1
Kosong 17.9934 17.9378 18.3589 17.9565 24.3793
Awal 18.5556 25.2573 23.4776 26.2127 29.418
1 Jam 18.5252 23.9341 22.3955 25.0491 28.5793
2 Jam 23.0936 21.5099 23.9175 27.9884
3 Jam 21.9673 20.8765 23.0788 26.733
4 Jam 21.3106 20.1084 21.7187 26.0625
5 Jam 19.9954 19.4521 20.869 25.4907
6 Jam 19.3897 19.28 20.3045 25.2795
7 Jam 18.8856 19.2273 19.2953 25.2354
8 Jam 18.76 19.2032 18.8459
9 Jam 18.7365 18.7801
10 Jam 18.7563
Replikasi 2
Kosong 18.228 24.3792 16.314 16.7569 17.9929
Awal 19.6296 29.9946 20.0518 20.6941 24.0813
1 Jam 19.3333 29.5516 19.5619 20.3472 23.6906
2 Jam 19.0754 29.1609 19.2008 20.0352 23.3865
3 Jam 18.9855 28.7238 18.7731 19.7443 233.0891
4 Jam 18.9398 28.2664 18.3763 19.4412 22.7199
5 Jam 27.9912 18.0265 19.1379 22.3317
6 Jam 27.4916 17.7568 18.8078 21.8475
7 Jam 26.987 17.4415 18.4481 21.3682
8 Jam 26.7163 17.2525 18.2535 20.9751
9 Jam 26.2523 17.1777 17.98 20.621
10 Jam 25.7956 17.1522 17.7679 20.2535
51
11 Jam 25.3092 17.644 19.6859

12 Jam 25.0867 17.6122 19.308
13 Jam 25.0585 19.0232
14 Jam 18.9262
15 Jam 18.8836
Replikasi 3
Kosong 19.8158 16.5599 18.8871 16.3146 16.5162
Awal 20.535 18.4952 21.715 20.3792 18.3836
1 Jam 20.4438 17.764 20.9976 19.3323 17.8865
2 Jam 20.4179 17.5668 20.3327 18.5311 17.7558
3 Jam 17.5236 20.1024 17.7853 17.6813
4 Jam 20.0475 17.6318 17.6435
5 Jam 20.0252 17.5837
6 Jam 17.5514
Nilai rendemen
A
M
P
E
(jam) (jam) (jam)
L
1 1 0.1638 4 3.5140 2 0.5702
2 9 25.8175 13 16.4566 3 5.2532
3 8 18.2063 10 14.4605 5 7.7817
4 10 28.4458 12 14.8927 6 13.8759
5 7 14.2178 15 21.5840 4 4.0259
52
c. suhu 50 oC
Replikasi 1
Kosong 20.4086 18.5446 17.1596 20.3587 19.4361
Awal 20.9714 21.4896 22.3806 23.7959 21.0933
1 Jam 20.8919 20.6449 21.6701 22.7936 20.6277
2 Jam 20.8583 19.9016 20.3694 21.0757 20.486
3 Jam 19.2208 19.6947 22.4259 20.4284
4 Jam 19.1883 19.0289 22.0504 20.4085
5 Jam 19.1771 18.608 21.6571
6 Jam 19.1701 18.2826 21.2305
7 Jam 17.9874 20.8934
8 Jam 19.952 20.8665
9 Jam 20.857
Replikasi 2
Kosong 19.9576 20.4123 17.7740 20.3811 18.7611
Awal 20.4261 20.8843 20.4293 21.1109 19.6385
1 Jam 20.3306 20.8462 19.7858 21.0818 19.5845
2 Jam 20.3093 19.1305 21.0757 19.5653
3 Jam 18.8122
4 Jam 18.6041
5 Jam 18.5273
6 Jam 18.5022
Replikasi 3
Kosong 19.8632 20.2954 19.2929 17.8319 19.4762
Awal 20.1953 20.7964 20.1662 18.6604 21.2472
1 Jam 20.1858 20.7793 20.1174 18.5937 20.7133
2 Jam 18.5717 20.463
53
3 Jam 20.3629
4 Jam 20.331
Nilai rendemen
A
M
P
E
(jam) (jam) (jam)
L
1 2 0.5393 2 0.5718 1 0.0470
2 6 10.7936 1 0.1824 1 0.0822
3 8 10.8514 6 9.4330 1 0.2420
4 9 12.3504 2 0.1667 2 0.4754
5 4 3.2465 2 0.3727 4 4.3121
54
III. Penimbangan Ekstrak Manihotis Folium

a. suhu 30 oC
Replikasi 1
Berat formula 1 formula 2 formula 3 formula 4 formula 5
Cawan kosong 14.3954 13.5890 13.6303 14.2795 14.3957
cawan+zat 14.4959 13.6918 13.7375 14.3835 14.5065
cawan+sisa 14.3957 13.6015 13.6422 14.2832 14.3970
Zat 0.1002 0.0903 0.0953 0.1003 0.1093
Replikasi 2
cawan kosong 13.5892 13.6301 13.5893 14.2795 14.3393
cawan+zat 13.6924 13.6836 13.6971 14.3836 14.4448
cawan+sisa 13.5944 13.6303 13.5941 14.2946 14.3466
Zat 0.0980 0.0533 0.1030 0.0922 0.0982
Replikasi 3
cawan kosong 14.3393 14.3960 13.6307 14.3962 14.3393
cawan+zat 14.4448 14.5013 13.7397 14.5015 14.4432
cawan+sisa 14.3500 14.4193 13.6341 14.4023 14.3420
Zat 0.0948 0.0900 0.1056 0.0992 0.1012
b. suhu 40 oC
Replikasi 1
cawan kosong 13.5893 14.3955 13.6303 14.3957 14.2796
cawan+zat 13.7052 14.4996 13.7519 14.5004 14.3882
cawan+sisa 13.5933 14.3993 13.6365 14.4004 14.2857
Zat 0.1119 0.1003 0.1154 0.1000 0.1025
Replikasi 2
55
cawan kosong 14.2794 13.6300 14.2797 13.6305 13.5894

cawan+zat 14.3907 13.7415 14.3866 13.7605 13.7454
cawan+sisa 14.2812 13.6352 14.2870 13.6581 13.3401
Zat 0.1095 0.1063 0.0996 0.1024 0.1053
Replikasi 3
cawan kosong 13.6305 14.2797 13.6304 13.5892 14.3959
Cawan+zat 13.7327 14.4077 13.7624 13.6954 14.6236
cawan+sisa 13.6314 14.2995 13.3622 13.5900 14.5110
Zat 0.1012 0.1082 0.1102 0.1054 0.1126
c. suhu 50 oC
replikasi 1
cawan kosong 14.0907 13.6422 14.2981 15.3449 14.1962
Cawan+zat 14.1965 13.7445 14.4008 15.4471 14.3013
cawan+sisa 14.0985 13.6444 14.3027 15.3502 14.2015
Zat 0.0980 0.1001 0.0981 0.0969 0.0998
Replikasi 2
cawan kosong 15.3447 14.2981 13.6423 14.0907 14.1963
Cawan+zat 15.4513 14.4005 13.7448 14.1964 14.3137
cawan+sisa 15.3507 14.3008 13.3473 14.0972 14.2110
Zat 0.1006 0.0997 0.0975 0.0992 0.1027
Replikasi 3
cawan kosong 15.3448 14.1963 14.0906 13.6424 15.3448
Cawan+zat 15.4590 14.2983 14.1918 13.8151 15.4464
cawan+sisa 15.3584 14.1970 14.0910 13.7135 15.3450
Zat 0.1006 0.1013 0.1008 0.1016 0.1014
56
IV. Penimbangan kurva baku

Penimbangan baku
Berat kertas kosong = 0.3640 gram
Berat kertas + zat = 0.3698 gram
Berat kertas + sisa = 0.3646 gram
Berat zat = 0.0052 gram
Konsentrasi baku = 0.0052 gram / 5 ml
= 5.2 mg / 5 ml
= 5200 µg/ 5000 µl
= 1.04 µg/ µl
57
V. Validasi Metode
a. Uji linearitas
• Kurva Baku 1
Baku Jumlah totolan (µl) Jumlah rutin (µg) Area
1 1.5 1.56 27102.05
2 2.5 2.6 41606.51
3 3.5 3.64 49238.86
4 4.5 4.68 43686.28
5 5.5 5.72 43330.11
r = 0.6597; a= 28905.2005; b = 3320.5787
Y = 3320x + 28905.2005
• Kurva Baku 2
Baku Jumlah totolan (µl) Massa totolan (µg) Area
1 1.5 1.56 15562.6
2 2.5 2.6 24546.3
3 3.5 3.64 33224.7
4 4.5 4.68 36493.8
5 5.5 5.72 35951
r = 0.9283. a= 10702.1750. b = 5069.6442
Y = 5069.6442x + 10702.1750
• Kurva Baku 3
Baku Jumlah totolan (µl) Massa totolan (µg) Area
1 1.5 1.56 26001.2
2 2.5 2.6 37012.1
3 3.5 3.64 38070.7
4 4.5 4.68 39413.8
5 5.5 5.72 38491.5
r = 0.7809; a= 26214.055; b = 26329.9135
Y = 26329.9135x + 26214.055
58
b. Recovery
Variabel Massa Massa Recovery Rata-rata
sebenarnya terukur (%) recovery (%)
(µg) (µg)
Volume 1.56 3.2349 207.3654 154.0897
totolan 1.56 0.9587 61.4551
1.5µl 1.56 3.0178 193.4487
Volume 3.64 6.1232 168.2199 146.1932
totolan 3.64 4.4426 122.0495
3.5µl 3.64 5.3985 148.3104
Volume 5.72 6.4361 112.5192 98.4732
totolan 5.72 4.9804 87.0699
5.5µl 5.72 5.4815 95.8304
c. Presisi
Rata-rata massa SD SE KV
Variabel terukur (µg) (%)
Volume totolan 2.4038 1.2562 0.7253 30.1717
1.5µl
Volume totolan 5.3214 0.8429 0.4866 9.1451
3.5µl
Volume totolan 5.6327 0.7395 0.4269 7.5799
5.5µl
SE = SD / √n
KV = SE / rata-rata kadar X 100%
59
VI. Penetapan kadar rutin dengan Image J

a. Suhu 30oC
• Replikasi 1
Kurva baku standar rutin
Keterangan Volume totolan Jumlah totolan (µg) AUC
(µl)
Baku 1 1.5 1.56 26977.87
Baku 2 2.5 2.6 36072.6
Baku 3 3.5 3.64 37027.21
Baku 4 4.5 4.68 38436.96
Baku 5 5.5 5.72 41491.15
r = 0.9117
a = 25014.336
b = 3018.3677
Persamaan kurva baku
y = 3018.3677x +25014.336
Penetapan kadar sampel ekstrak Manihotis Folium

Volume Massa Kadar rutin
Formula AUC Kadar rutin (µg)
totolan (µl) totolan (µg) (µg/ µl)
1 0.5 50.1 74984.26 16.5553 8.2777
2 0.5 45.15 44519.17 6.4621 3.2311
3 0.5 47.65 40085.00 4.9930 2.4965
4 1 100.3 32696.12 2.5450 2.5450
5 1 109.3 17305.93 -2.5538 -2.5538
60
• Replikasi 2
Keterangan Volume totolan Jumlah totolan AUC
(µl) (µg)
Baku 1 1.5 1.56 16427.48
Baku 2 2.5 2.6 25669.09
Baku 3 3.5 3.64 28101.64
Baku 4 4.5 4.68 29147.46
Baku 5 5.5 5.72 31808.5
r = 0.9166
a = 14246.6905
b = 3292.3471
y= 3292.3471x +14246.6905

1 0.5 49 70843.73 17.1905 8.5953
2 0.5 26.65 41086.14 8.1521 4.0761
3 0.5 51.5 45247.11 9.4159 4.7080
4 1 92.2 22814.4 2.6023 2.6023
5 1 98.2 20816.19 1.9954 1.9954
61
• Replikasi 3
Keterangan Volume totolan (µl) Jumlah totolan AUC
(µg)
Baku 1 1.5 1.56 12868.6
Baku 2 2.5 2.6 18800.9
Baku 3 3.5 3.64 27675.7
Baku 4 4.5 4.68 34078.7
Baku 5 5.5 5.72 37430.4
r = 0.9904
a = 3630.37
b = 6192.4423
y= 6192.4423 x + 3630.37

1 0.5 47.4 16338.2 2.0522 1.0261
2 0.5 45 20478.6 2.7208 1.3604
3 0.5 52.8 22415.5 3.0336 1.5168
4 1 99.2 1978.77 -0.2667 -0.2667
5 1 5101.2 1115.89 -0.4061 -0.4061
62
b. Suhu 40oC
• Replikasi 1
Keterangan Volume totolan (µl) Jumlah totolan AUC
(µg)
Baku 1 1.5 1.56 26950.5
Baku 2 2.5 2.6 35167.7
Baku 3 3.5 3.64 37648.8
Baku 4 4.5 4.68 38639.6
Baku 5 5.5 5.72 41506.9
r = 0.9306
a = 24578.055
b = 3133.1442
Y= 3133.1442 x +24578.055

1 0.5 55.95 73470.37 15.6049 7.8025
2 0.5 50.15 37229.42 4.0379 2.0190
3 0.5 57.7 57057.23 10.3663 5.1832
4 1 100 8641.777 -5.0864 -5.0864
5 1 102.5 546.87 -7.6700 -7.6700
63
• Replikasi 2
Keterangan Volume totolan (µl) Jumlah totolan (µg) AUC
Baku 1 1.5 1.56 21933.3710
Baku 2 2.5 2.6 25858.9900
Baku 3 3.5 3.64 35363.4420
Baku 4 4.5 4.68 36143.3420
Baku 5 5.5 5.72 37231.3920
r = 0.9305
a =16931.1353
b = 3940.5077
y=3940.5077 x + 16931.13553

1 0.5 54.75 49529.740 8.2727 4.1364
2 0.5 53.15 16721.4630 -0.0532 -0.0266
3 0.5 49.8 48714.590 8.0658 4.0329
4 1 102.4 74.8990 -4.2777 -4.2777
5 1 105.3 16.2430 -4.2926 -4.2926
64
• Replikasi 3
Keterangan Volume totolan Jumlah totolan AUC
(µl) (µg)
Baku 1 1.5 1.56 17718.6430
Baku 2 2.5 2.6 27378.5630
Baku 3 3.5 3.64 31390.5130
Baku 4 4.5 4.68 32315.3920
Baku 5 5.5 5.72 32740.2910
r = 0.8795
a =16065.6367
b = 3363.4736
y = 3363.4736x +16065.6367

1 0.5 50.6 79676.220 -2.4076 -1.2038
2 0.5 54.1 12990.4720 -4.3902 -2.1951
3 0.5 55.1 15144.5930 -0.2738 -0.1369
4 1 105.4 10413.7850 -1.6804 -1.6804
5 1 112.6 1739.1370 -4.2594 -4.2594
65
c. Suhu 50oC
• Replikasi 1
Baku 1 1.5 1.56 17818.865
Baku 2 2.5 2.6 27894.798
Baku 3 3.5 3.64 31175.170
Baku 4 4.5 4.68 31511.735
Baku 5 5.5 5.72 32661.978
r = 0.8669
a = 16556.4869
b = 3202.1789
y = 32020.1789x +16556.4869

1 0.5 49 14108.919 -07643 -0.3822
2 0.5 50.05 22015.780 1.7049 0.8525
3 0.5 49.05 21312.345 1.4852 0.7426
4 1 96.9 11483.416 -1.5843 -1.5843
5 1 99.8 321.456 -5.0700 -5.0700
66
• Replikasi 2
Baku 1 1.5 1.56 11341.856
Baku 2 2.5 2.6 25968.191
Baku 3 3.5 3.64 41869.902
Baku 4 4.5 4.68 28050.061
Baku 5 5.5 5.72 22047.647
r = 0.3368
a = 17632.8232
b = 2258.9858
y = 2258.9858x + 17632.8232

1 0.5 50.3 41641.926 10.6283 5.3142
2 0.5 49.85 49322.881 14.0384 7.0142
3 0.5 48.75 27476.960 4.3578 2.1789
4 1 99.2 43758.588 11.5653 11.5653
5 1 102.7 16916.739 -0.3170 -0.3170
67
• Replikasi 3
Baku 1 1.5 1.56 15103.5300
Baku 2 2.5 2.6 26885.0490
Baku 3 3.5 3.64 36128.7260
Baku 4 4.5 4.68 34228.2410
Baku 5 5.5 5.72 36037.3210
r = 0.8659
a = 12452.8025
b = 4731.8052

y = 4731.8052x +12452.8025
Penetapan kadar sampel rutin ekstrak Manihotis Folium

1 0.5 50.3 7373.5600 -1.0734 -0.5367
2 0.5 50.65 12832.5220 0.0802 0.0401
3 0.5 50.4 7365.1160 -1.0752 -0.5276
4 1 101.6 5756.6760 -1.4151 -1.4151
5 1 101.4 21.8280 -2.6271 -2.6271
68
VII. Rendemen kadar rutin terhadap berat ekstrak

Suhu 30oC
a. Replikasi 1
Formula 1 2 3 4 5
Kadar 8.2777 3.2311 2.4965 2.5450 -2.5538
rutin (µg)
Berat 0.7628 0.7054 0.8609 0.9912 0.6708
ekstrak
(mg)
Rendemen 1.0852 0.4581 0.2900 0.2568 -0.3807
(% b/b)
b. Replikasi 2
Formula 1 2 3 4 5
Kadar 8.5953 4.0761 4.7080 2.6023 1.9954
rutin (µg)
Berat 0.9146 0.5389 0.8524 6.8175 0.5178
ekstrak
(mg)
Rendemen 0.9398 0.7564 0.5523 0.0382 0.3854
(% b/b)
c. Replikasi 3
Formula 1 2 3 4 5
Kadar 1.0261 1.3604 1.5168 -0.2667 -0.4061
rutin (µg)
Berat 0.6092 0.4783 0.6089 0.7557 0.6275
ekstrak
(mg)
Rendemen 0.1684 0.2844 0.2491 -0.0353 -0.0647
(% b/b)
69
Formula Replikasi 1 Replikasi 2 Replikasi 3 Means

1 1.0852 0.9398 0.1684 0.7311
2 0.4581 -.7564 0.2844 0.4996
3 0.2900 0.5523 0.2491 0.3638
4 0.2568 0.0382 -0.0353 0.0866
5 -0.3807 0.3854 -0.0647 -0.02
Suhu 40oC
a. Replikasi 1
Formula 1 2 3 4 5
Kadar 7.8025 2.0190 5.1832 -5.0864 -7.6700
rutin (µg)
Berat 0.5318 0.7987 0.8443 0.7998 0.8561
ekstrak
(mg)
Rendemen 1.4672 0.2528 0.6139 -0.6360 -0.8959
(% b/b)
b. Replikasi 2
Formula 1 2 3 4 5
Kadar 4.1364 -0.0266 4.0329 -4.2777 -4.2926
rutin (µg)
Berat 0.7118 0.6793 0.8382 0.8553 0.8907
ekstrak
(mg)
Rendemen 0.5811 - 0.4811 -0.5001 -0.4819
(% b/b) 3.9157.10-
3
70
c. Replikasi 3
Formula 1 2 3 4 5
Kadar -1.2038 -2.1951 -0.1369 -1.6804 4.2594
rutin (µg)
Berat 0.6021 0.9637 1.1381 1.2368 1.1273
ekstrak
(mg)
Rendemen -0.1999 -0.2278 -0.0120 -0.1359 -0.3778
(% b/b)

1 1.4672 0.5811 -0.1999 0.6161
2 0.2528 -3.9157.10-3 -0.2278 9.6386.10-3
3 0.6139 0.4811 -0.0120 0.3610
4 -0.6360 -0.5001 -0.1359 0
5 -0.8959 -0.4819 -0.3778 -0.5852
Suhu 50oC
a. Replikasi 1
Formula 1 2 3 4 5
Kadar -0.3822 0.8525 0.7426 -1.5843 -5.0700
rutin (µg)
Berat 0.4497 0.6255 2.7924 0.4983 0.9724
ekstrak
(mg)
Rendemen -0.0850 0.1363 0.0266 -0.3179 -0.5214
(% b/b)
71
b. Replikasi 2
Formula 1 2 3 4 5
Kadar 5.3142 7.0142 2.1789 11.5653 -0.3170
rutin (µg)
Berat 0.3517 0.4339 0.7282 0.6946 0.8042
ekstrak
(mg)
Rendemen 1.5110 1.6165 0.2992 1.6650 0.0394
(% b/b)
c. Replikasi 3
Formula 1 2 3 4 5
Kadar -0.5367 0.0401 -0.5376 -1.4151 -2.6271
rutin (µg)
Berat 0.3226 0.4839 0.8245 0.7398 0.8548
ekstrak
(mg)
Rendemen -0.1664 8.2868.10- -0.0652 -0.1913 -0.3073
3
(% b/b)

1 -0.0850 1.5110 -0.1664 0.4199
2 0.1363 1.6165 8.2868.10-3 0.5870
3 0.0266 0.2992 -0.0652 0.0869
4 -0.3179 1.6650 -0.1913 0.3853
5 -0.5214 0.0394 -0.3073 -0.2661
72
VIII. Analisis Persamaan SLD
Persamaan Simplex Lattice Design

Persamaan umum :
Y = a (X1) + b (X2) + ab (X1)(X2)
Y : respon (hasil) percobaan
X1 : proporsi etanol 96%
X2 : proporsi air
a, b, ab : koefisien yang dihitung dari percobaan
Formula 1 2 3 4 5
Etanol 96% (X1) 100 75 50 25 0
Air (X2) 0 25 50 75 100
a. Singkong suhu 30 OC
Formula 1
X1 = 1 X2 = 0
Y = a (X1) + b (X2) + ab (X1)(X2)
5.9664 = a.1 + b.0 + ab.1.0
5.9664= a
Formula 5
X1 = 0 X2 = 1
Y = a (X1) + b (X2) + ab (X1)(X2)
-0.3215= a.0 + b.1 + ab.0.1
-0.3215= b
Formula 3
X1 = 0.5 X2 = 0.5
Y = a (X1) + b (X2) + ab (X1)(X2)
2.9017= 5.9664 (0.5) – 0.3215 (0.5) + ab (0.5)(0.5)
ab = 0.3386
Persamaan yang diperoleh

Y = a (X1) + b (X2) + ab (X1)(X2)
Y = 5.9664 (X1) + (- 0.3215) (X2) + 0.3386 (X1)(X2)
73
Formula 2
X1 = 0.75 X2 = 0.25
Y = 5.9664 (X1) - 0.3215 (X2) + 0.3386 (X1)(X2)
Y = 5.9664 (0.75) – 0.3215 (0.25) + 0.3386 (0.75)(0.25)
Y = 4.5383
Formula 4
X1 = 0.25 X2 = 0.75
Y = 5.9664 (X1) - 0.3215 (X2) + 0.3386 (X1)(X2)
Y = 5.9664 (0.25) – 0.32150.75) + 0.3886 (0.25)(0.75)
Y = 1.5551
b. Singkong Suhu 40°C

Formula 1
X1 = 1 X2 = 0
Y = a (X1) + b (X2) + ab (X1)(X2)
3.5784 = a.1 + b.0 + ab.1.0
3.5784 = a
Formula 5
X1 = 0 X2 = 1
Y = a (X1) + b (X2) + ab (X1)(X2)
-5.4073= a.0 + b.1 + ab.0.1
-5.4073 = b
Formula 3
X1 = 0.5 X2 = 0.5
Y = a (X1) + b (X2) + ab (X1)(X2)
3.0264 = 3.5784 (0.5) + (-5.4073) (0.5) + ab (0.5)(0.5)
15.7634 = ab

Y = a (X1) + b (X2) + ab (X1)(X2)
Y = 3.5784 (X1) – 5.4073 (X2) + 15.7634 (X1)(X2)
Formula 2
X1 = 0.75 X2 = 0.25
Y = 3.5784 (X1) - 5.4073 (X2) + 15.7634 (X1)(X2)
Y = 3.5784 (0.75) – 5.4073 (0.25) + 6.2224 (0.75)(0.25)
Y = 4.2876
Formula 4
X1 = 0.25 X2 = 0.75
Y = 3.5784 (X1) – 5.4073 (X2) + 15.7634 (X1)(X2)
74
Y = 3.5784 (0.25) – 5.4073 (0.75) + 15.7634 (0.25)(0.75)

Y = - 0.2052
c. Singkong Suhu 50°C

Formula 1
X1 = 1 X2 = 0
Y = a (X1) + b (X2) + ab (X1)(X2)
1.4651 = a.1 + b.0 + ab.1.0
1.4651= a
Formula 5
X1 = 0 X2 = 1
Y = a (X1) + b (X2) + ab (X1)(X2)
-2.6714 = a.0 + b.1 + ab.0.1
-2.6714= b
Formula 3
X1 = 0.5 X2 = 0.5
Y = a (X1) + b (X2) + ab (X1)(X2)
0.7964 = 1.4651 (0.5) + (-2.6714)(0.5) + ab (0.5)(0.5)
5.5910= ab

Y = a (X1) + b (X2) + ab (X1)(X2)
Y = 0.7964 (X1) - 2.6714 (X2) + 5.5910 (X1)(X2)
Formula 2
X1 = 0.75 X2 = 0.25
Y = 0.7964 (X1) - 2.6714 (X2) + 5.5910 (X1)(X2)
Y = 0.7964 (0.75) – 2.6714 (0.25) + 5.5910 (0.75)(0.25)
Y = 1.4793
Formula 4
X1 = 0.25 X2 = 0.75
Y = 0.7964 (X1) - 2.6714 (X2) + 5.5910 (X1)(X2)
Y = 0.7964 (0.25) - 2.6714 (0.75) + 5.5910 (0.25)(0.75)
Y = -0.5890
75
IX. Uji validitas persamaan SLD

Hipotesis:
Ho = persamaan regresi
Hi = persamaan tidak regresi
Ho ditolak bila nilai F hitung lebih besar dari F tabel
F tabel (2.12) = 3.89
a. Suhu 30oC
yij (yij)2 y y2
Formula 1 8.2777 68.5203 5.9664 35.5975
8.5953 73.8792 5.9664 35.5975
1.0261 1.0529 5.9664 35.5975
Formula 3 3.4965 12.2255 2.9071 8.4512
4.7080 22.1653 2.9071 8.4512
1.5168 2.3007 2.9071 8.4512
Formula 5 -2.5538 6.5219 -0.3215 0.1034
1.9954 3.9816 -0.3215 0.1034
-0.4061 0.1649 -0.3215 0.1034
Formula 2 3.2311 10.4400 2.8892 8.3475
4.0761 16.6146 2.8892 8.3475
1.3604 1.8507 2.8892 8.3475
Formula 4 2.5450 6.4770 1.6269 2.6468
2.6023 6.7720 1.6269 2.6468
-0.2667 0.0711 1.6269 2.6468
∑ 40.2041 233.0377 39.2042 1536.9693
Sources of F
error dF MS hitung F tabel
between 1434.5047 2 717.2523 -6.5741 3.89
within -1309.225 12 -109.102
total 125.2797
76
b. Suhu 40oC
yij (yij)2 y y2
Formula 1 7.8025 60.8790 3.5784 12.8047
4.1364 17.1098 3.5784 12.8047
-1.2038 1.4491 3.5784 12.8047
Formula 3 5.1832 26.8656 3.0264 9.1591
4.0329 16.2643 3.0264 9.1591
-0.1369 0.0187 3.0264 9.1591
Formula 5 -7.6700 58.8289 -5.4073 29.2389
-4.2926 18.4264 -5.4073 29.2389
-4.2594 18.1425 -5.4073 29.2389
Formula 2 2.0190 4.0764 -0.0676 0.0046
-0.0266 0.0007 -0.0676 0.0046
-2.1951 4.8185 -0.0676 0.0046
Formula 4 -5.0864 25.8715 -3.6815 13.5534
-4.2777 18.2987 -3.6815 13.5534
-1.6804 2.8237 -3.6815 13.5534
∑ -7.6549 273.8738 -7.6549 194.2821
Sources of F
between 190.3756 2 95.1878 14.3514 3.89
within 79.5917 12 6.6326
total 269.9673
77
c. Suhu 50oC
yij (yij)2 y y2
Formula 1 -0.3822 0.1461 1.4651 2.1465
5.3142 28.2407 1.4651 2.1465
-0.5367 0.2880 1.4651 2.1465
Formula 3 0.7426 0.5515 0.7964 0.6343
2.1789 4.7476 0.7964 0.6343
-0.5376 0.2890 0.7964 0.6343
Formula 5 -5.0700 25.7049 -2.6714 7.1364
-0.3170 0.1005 -2.6714 7.1364
-2.6271 6.9017 -2.6714 7.1364
Formula 2 0.8525 0.7268 2.6356 6.9464
7.0142 49.1990 2.6356 6.9464
0.0401 0.0016 2.6356 6.9464
Formula 4 -1.5843 2.5100 2.8553 8.1527
11.5653 133.7562 2.8553 8.1527
-1.4151 2.0025 2.8553 8.1527
∑ 15.2378 255.1660 15.2430 75.0488
Sources of F
between 59.5589 2 29.7794 1.9839 3.89
within 180.1278 12 15.0106
total 239.6866
78
X. Uji Anova Berdasarkan Suhu

H1 = Mean a. b. dan c berbeda
H0 = Mean a. b. dan c tidak berbeda
Keterangan :
a : kadar rutin hasil ekstraksi pada suhu 30°C
b : kadar rutin hasil ekstraksi pada suhu 40°C
c : kadar rutin hasil ekstraksi pada suhu 50°C
sampel Xa Xb Xc Xa^ Xb^ Xc^

1 5.9664 3.5784 1.465135.597929 12.8049 2.14652
2 2.8892 -0.0676 2.6356
8.34747664 0.00457 6.94639
3 2.9071 3.0264 0.7946
8.45123041 9.1591 0.63139
4 1.6269 -3.6815 2.8553
2.64680361 13.5534 8.15274
5 -0.3215 -5.4073 -2.6714
0.10336225 29.2389 7.13638
jumlah 13.0681 -2.5516 5.0792 55.1468019 64.7609 25.0134
kuadrat jumlah 170.7752 6.51066 25.7982726 3041.16976 4193.98 625.671
kuadrat
julmah/5 34.1550 1.30213 5.15965453 608.233951 838.796 125.134
Mean 2.61362 -0.5103 1.01584 11.0293604 12.9522 5.00268
Sources of SS dF MS Fhitung Ftabel

Error
Between 24.4018 2 12.2009
Within 104.3043 12 8.69203
Total 128.7061 1.4037 3.68
Fhitung < Ftabel → H0 diterima. Jadi. mean a. b. dan c tidak berbeda.

79
BIOGRAFI PENULIS
Penulis yang bernama lengkap Veronika Yuni Candra

Sari, lahir di Tulang Bawang 21 Juni 1989 adalah anak
kedua dari lima bersaudara pasangan Bapak Albertus
Budi Yuwono dan Ibu Christina Sri Rahayu. Penulis
menyelesaikan pendidikan di SD Negeri 2 Bogatama
Tulang Bawang Lampung pada tahun 1994-2000, SLTP
Negeri 2 Depok Yogyakarta pada tahun 2000-2003, dan
dilanjutkan di SMU Negeri 6 Yogyakarta pada tahun
2003-2006. Selepas SMA penulis masuk ke Fakultas Farmasi Universitas Sanata
Dharma Yogyakarta dan menyelesaikan studinya sampai tahun 2010. Selama
kuliah, penulis pernah menjadi Asisten Praktikum Mikrobiologi, Biokimia, FST
Semi Solid Liquid, Analisis Sediaan Obat Tradisional Selain itu, penulis juga aktif
di berbagai kepanitiaan seperti Inisiasi Fakultas Farmasi TITRASI 2007
(Pendamping Kelompok), Inisiasi Fakultas Farmasi TITRASI 2008 (Koordinator
Pendamping Kelompok), Pekan Budaya Universitas Sanata Dharma 2007
(Konsumsi), Pengobatan Gratis JKMI 2007 (Perlengkapan), Pharmacy
Performance and Event Cup 2008 (Koordinator Keamanan), Pelepasan Wisuda
2008 (Koordinator Kesekretariatan), Panitia Dies Natalies Fakultas Farmasi
Universitas Sanata Dharma 2007 dan 2008 (Publikasi, Dekorasi, dan
Dokumentasi). Mengikuti Kegiatan Pengabdian Masyarakat 2008 dan Pekan
Kreatifitas Mahasiswa 2009, dan menjadi anggota Badan Perwakilan Mahasiswa
Farmasi Universitas Sanata Dharma 2007/2008 (Divisi Penelitian dan
Pengembangan) dan Badan Eksekutif Mahasiswa Fakultas Farmasi Universitas
Sanata Dharma 2008/2009 ( Koordinator Divisi Kesejahteraan Mahasiswa).

Filemon Dimas A

Diunggah oleh

Informasi Dokumen

Hak Cipta

Format Tersedia

Bagikan dokumen Ini

Bagikan atau Tanam Dokumen

Opsi Berbagi

Apakah menurut Anda dokumen ini bermanfaat?

Apakah konten ini tidak pantas?

Hak Cipta:

Format Tersedia

Filemon Dimas A

Diunggah oleh

Hak Cipta:

Format Tersedia

OPTIMASI KOMPOSISI ETANOL DAN AIR DALAM PROSES

MASERASI DAUN SINGKONG (Manihotis Folium) DENGAN APLIKASI

Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat

Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat

olehNya untuk mengepakkan sayapku,

mengembangkan dan mengamalkan ilmu yang telah aku peroleh

untuk melayani sesamaku.

Aku persembahkan kepada:

semangat, kesabaran, dan restunya.

M’vevi, d’tria, d’ vita, d’vicky, Saudara2ku, Sahabatku, dan Teman2 ku

atas dukungan, doa,kebersamaan, dan keceriaan.

Demikian pernyataan ini yang saya buat dengan sebenarnya.

Veronika Yuni Candra Sari

penulis dapat menyelesaikan skripsi yang berjudul “ Optimasi Komposisi Etanol

sarjana pada Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta.

Skripsi ini merupakan bagian dari penelitian ”Optimasi Formula dan

Kontrol Kualitas Sediaan Tablet Effervescent Ekstrak Centelae asiatica Herba

kesempatan ini penulis ingin menyampaikan penghargaan dan ucapan terima

mendukung penelitian ini.

3. Yohanes Dwiatmaka, M.Si. selaku dosen pembimbing atas bimbingan dan

pengarahannya baik selama penelitian maupun penyusunan skripsi ini.

dan dosen penguji, memberikan saya kesempatan untuk bergabung dalam

tim penelitian dan masukan yang telah diberikan kepada peneliti.

kepada para peneliti.

masukan kepada peneliti.

seluruh laboran atas bantuannya selama peneliti bekerja di laboratorium

6. Laurensia Utami Susanti, Bernadeta Ardy Puspitarini, Alvonsus Rudianto,

7. Valentina Vevi Yuwana Sari, Cornelius Fivtria Yuwana Putra, Cornelia

8. Elfrieda Ignatine, Danie ”Nduty”, Antonius Tri Kresmianto yang dengan

setia mendengarkan keluhan saya dan memberikan masukan serta dukungan

yang membangun kembali semangat saya.

9. Maria Yolanda, Gayatri Kusuma Wardani, Pius Perwita, Aditya Eka

selalu saling mendukung untuk mengerjakan skripsi dan terus berjuang

atas dukungan dan bantuannya dalam menyelesaikan skrispi ini.

selalu mendukung dan menyemangati untuk mengerjakan skripsi ini.

namun tidak dapat disebutkan satu persatu. Terima kasih.

sempurna mengingat keterbatasan kemampuan dan pengalaman yang dimiliki.

sumbangsih yang bermanfaat pada perkembangan ilmu pendidikan.

Yogyakarta, April 2010

dalam kutipan dan daftar pustaka, sebagaimana karya ilmiah.

Yogyakarta, April 2010

Veronika Yuni Candra Sari

The research is going to see the composition of ethanol and water as a

HALAMAN SAMPUL ......................................................................................... i

A. Latar Belakang ............................................................................................... 1

BAB II TINJAUAN PUSTAKA........................................................................... 6

BAB III METODE PENELITIAN........................................................................ 18

BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN

BAB V KESIMPULAN DAN SARAN............................................................... 43

DAFTAR PUSTAKA ........................................................................................... 44

Tabel I. Perbandingan pelarut maserasi .......................................................... 21

Tabel II. Seri kurva baku .................................................................................. 30

Tabel III. Nilai recovery .................................................................................... 32

Tabel IV. Nilai presisi ........................................................................................ 33

deteksi dengan uap ammonia ............................................................ 36

suhu proses maserasi ......................................................................... 37

Tabel VII. Hasil analisis anova suhu maserasi ..................................................... 38

Gambar 1. Tanaman singkong ............................................................................. 6

Gambar 2. Struktur rutin...................................................................................... 8

Gambar 3. Serbuk Manihotis Folium .................................................................. 27

Gambar 4. Ekstrak kental Manihotis Folium ...................................................... 29

Gambar 5. Kurva baku 1 ..................................................................................... 31

Gambar 6. Kurva baku 2 ..................................................................................... 31

Gambar 7. Kurva baku 3 ..................................................................................... 32