||| gy ostrumentacion 9001 ‘SA Ov. Dunas 46 © Colonia Acueducto de Guadalupe C.P.07279 México, D.F. Tels.: 369-4102 389-8707 Fax: 388-2184 LIQUID CHROMATOG td fea ems) 8 Ty bee tel We INJECTOR RECORDER Cf eT Pe SISTEMA DE SOLVENTE: El primer componente importante por orden de aparicion en un Sistema de HPLC es el solvente o fase movil, cuyo propésito es el de transportar la muestra a través de todo el sistema, Los requisitos del solvente para obtener una buena separacién de los componentes son los siguientes: 1. Debe ser capaz.de disolver la muestra 2. Ser de alta pureza (grado HPLC), 3. La polaridad del solvente debe ser controlada para producir valores de k entre 2-10. 4. Algunos factores de importancia secundaria para la seleccién de los solventes, incluyen: costo, viscosidad, toxicidad y punto de ebullicién. En el caso de la técnica de Absorcién los solventes cominmente utilizados son; hexano, cloruro de metileno, cloroformo, metanol y acetonittilo, 8 MONITOREO AMBIENTAL ® AA @ ICP @ UV/VIS @ FTIR © HPLCapc (ay [gnsiumentacion 8001 OV. Dunas 46 © Colonia Acueducto de Guadalupe C.P.07279 México, D.F Tels.: 369-4102 389-8707 Fax: 388-2184 Para la técnica de fase reversa son metanol/agua y acetonitrilo/agua, En la técnica de intercambio iénico, las soluciones buffer y por tiltimo para la técnica de permeacién en gel, los solventes son, tetrahidrofurano y tolueno. Para disolver la muestra, se debe tomar en cuenta la viscosidad del solvente, la compatibilidad con el empaque de la columna y el detector usado. Factores secundarios como el costo, toxicidad y punto de ebullicién del solvente también deben ser considerados. La filtracién del solvente antes de la entrada al sistema de cromatografia es un punto al que se debe poner especial atencién pues esto podria provocar dafios en el funcionamiento de las vilvulas check, fugas del solvente; ademas del posible rayado permanente de los sellos, Para evitar esto se hace necesario filtrar por membrana el solvente antes de adicionarlo a los reservorios. También se debe colocar un filtro de metal poroso (2 jum) a la entrada al sistema e incluso filtrar la muestra por membrana con un tamafio de poro del orden de 0.5 um. VSMC RS olay meow Td 1 Ee AS 2um FILTER @BEREEBEEEEEEE EE@asc oa | gy ostrumentacion SL EEN _ Dunas 48 © Colonia Acueducto de Guadalupe C.P.07279 México, D.F Tels.: 369-4102 389-8707 Fax: 388-2184 MAS DE BOMBEO: . EI propésito de la bomba es generar la presién suficiente para transportar la fase mévil a través de todo el sistema cromatografico, SIS LOS REQUERIMENTOS PARA UNA BOMBA SON: Debe de ser quimicamente inerte, permitiendo el uso de una gran variedad de solventes. Debera generar altas presiones; 5000 PSI son suficientes para realizar la mayoria de las separaciones cromatogrificas con velocidades de flujo entre 0.5 y 10 ml/min. EI sistema de bombeo debe estar libre de pulsos o ser capaz de amortiguarlos, ya que de lo contrario provocaria ruido en la sefial del detector Reproducibilidad en la velocidad de flujo. Capacidad de la bomba para llevar a cabo un gradiente de elucién, 1. CHEMICALLY INERT PAC Ma or10) 51a Mt oy) 3. FLOW RATE (0.5—10 ML/MIN) 4. PULSE FREE OR DAMPED 5. FLOW REPRODUCIBILITY < 1% 6. GRADIENT; RECYCLE; RAPID CHANGE DY 10 MONITOREO AMBIENTAL® AA@ICP@UV/VIS@FTIR@ HPLC |