CENTRO DE BIOTECNOLOGIA INDUSTRIAL CBI – SENA Palmira

Programa de Tecnicos en Produccion de Biocombustibles y

Tecnologos en Procesos Biotecnologicos.
Instructor: Jorge Alberto Vasquez.

Ejercicios de estequeometría.

1. Completar la siguiente ecuación estequeométrica de un microorganismo que utiliza

como fuente de carbono y energía un carbohidrato en aerobiosis. En este caso el
nitrógeno no esta presente en el balance aunque representa un promedio del 10.85 %
de la composición mínima del microorganismo mientras que las cenizas representan
un 5%. La composición del microorganismo es C 3.92 H6.5 O1.94 y el rendimiento en
biomasa (gr X/ gr sustrato) es de 0.5.

CH2O + O2 → C3.92 H6.5 O1.94 + CO2 + H2O

2. Igual que en 1 pero con hidrocarburos como fuente de carbono y energía.

Rendimiento en biomasa (gr X/ gr sustrato) es de 1.00.

CH 2 + O2 → C3.92 H6.5 O1.94 + CO2 + H2O

3. Completar la siguiente ecuación estequeométrica de un microorganismo que utiliza

como fuente de carbono y energía glucosa en aerobiosis. Las cenizas representan un
5% de la composición del organismo. La composición del microorganismo es
C4.4H7.3O1.2 N0.86 y el rendimiento en biomasa (gr X/ gr sustrato) es de 0.66.

C6H12O6 + O2 + NH3 → C4.4H7.3O1.2 N0.86 + CO2 + H2O

4. Igual que en 1 pero con hexadecano como fuente de carbono y energía. Rendimiento
en biomasa (gr X/ gr sustrato) es de 0.66.

C 16H34 + O2 + NH3 → C4.4H7.3O1.2 N0.86 + CO2 + H2O

5. Candida utilis convierte glucosa a CO2 y H2O durante el crecimiento. La

composición mínima es CH1.84O0.55 N0.2 más 5% de cenizas. El rendimiento de YXS es
0.5 g/g. Amonio fue usado como fuente de nitrógeno.

Cual es la demanda de oxígeno con crecimiento comparada con la reacción sin

crecimiento? . Sabiendo que la ecuación de oxidación de la glucosa es:

C6H12O6 + 6 O2 → 6 CO2 + 6 H2O

C. utilis es también capaz con de crecer usando como sustrato al etanol produciendo
células con la misma composición mínima anterior. Cual es el rendimiento de
biomasa máximo en etanol comparado con el de glucosa.

6. Klebsiella aerogenes consume glicerol para producir biomasa en aerobiosis. La

biomasa contiene 8% de cenizas, y el rendimiento es de 0.4 g de biomasa por gr de

1
 glicerol y no se forman otros productos del metabolismo. Cual es el requerimiento de
oxígeno en términos de masa?

7. Methylophilus metylotrophus es usado como fuente de proteína unicelular. Este

organismo es producido aerobicamente a partir de metanol y con amonio como
fuente de nitrógeno. . La fórmula molecular de la biomasa es CH 1.68O0.36N0.22 más 6%
de cenizas.
Si el rendimiento de biomasa en metanol es 42% del rendimiento termodinámico
máximo?. Cual es la demanda máxima de oxígeno.

8. La levadura Saccharomyces cereviseae y la bacteria Zymomonas mobilis produce

etanol a partir de glucosa bajo condiciones de anaerobiosis sin otro aceptor de
electrones externo. El rendimiento de biomasa a partir de glucosa es de 0.11 g/g
para la levadura y de 0.05 g/g para la bacteria. La fuente de nitrógeno es amonio y
ambos casos la fórmula molecular de la biomasa es CH1.8O0.5N0.2 .
cual es el rendimiento de etanol en glucosa en ambos casos?
como son los rendimientos comparados con el máximo?

9. En un sistema cultivo continuo de levadura se producen 0.37 g de biomasa por gr de

glucosa y se consumen 088 g deO 2 por gr de biomasa formada. La fuente de
nitrógeno es amonio y la fórmula molecular de la biomasa es CH 1.79O0.56N0.17. Se
produce algún otro producto?.

10. Se desea producir proteína unicelular para alimentación animal a partir de

Pseudomonas 5401. El sustrato es fuel-oil y la fórmula molecular de la biomasa es
CH1.83O0.55N0.25. si la concentración final de biomasa es 25 g/l cual es la mínima
concentración de (NH)2SO4 que debe contener el medio de cultivo si es la única
fuente de nitrógeno disponible.

11. La producción de proteína recombinante en E. coli es proporcional al crecimiento

celular. Amonio es la única fuente de nitrógeno para el consumo aeróbico de glucosa.
La proteína recombinante tiene una fórmula general de CH1.55O0.31N0.25 . El
rendimiento de biomasa es de 048 g/g y el rendimiento de proteína a partir de
glucosa es del 22% respecto del celular.
cuánto amonio se requiere?
cual es la demanda de oxígeno?
Si el rendimiento de biomasa es de 0.48 g/g para una cepa no recombinante, cual es
la diferencia en el requerimiento de amonio y de oxígeno.

12. La ecuación de la reacción química de conversión de etanol en ácido acético es:

C2H12O + O2 → C2H4O2 + H2O

El ácido acético es producido a partir de etanol por la bacteria Acetobacter aceti, que
tiene una fórmula molecular de biomasa de CH 1.8O0.5N0.2.El rendimiento de biomasa a
partir del sustrato es de 0.14 g/g y el de producto de 0.92 g/g. Amonio es la fuente de
nitrógeno. Como afecta el crecimiento la demanda de oxígeno para la producción de
ácido acético?

2
 Problemas Biotecnología I. Sistemas de Cultivo
1. Se estudió la producción de acético y ac. butírico por Clostridium acetobutylicum
utilizando glucosa como fuente de carbono y energía en cultivos de tipo continuo. Al
trabajar a diferentes velocidades de dilución (D) . Se obtuvieron los siguientes resultados
para el rendimiento de biomasa en función del sustrato (Yx/s).

-1
D(h ) Y x/s (g peso seco /mol glucosa)
0.14 40

0.236 42.5

0.332 43.9

0.426 44.8

0.475 45

0.6 46

0.72 46.5

* Estimar el coeficiente de mantenimiento (m) y el rendimiento Y x/s verdadero

-4
Respuesta: Yxs = 48; m = 5. 96 10 mol gluc/X h.

2. Bordetella pertussis es el agente causal de al Tos convulsa o coqueluche. Para obtener

vacunas acelulares se desarrollan cultivos en fermentadores para la producción de
antigenos como la toxina pertussis (PT) y lipopolisacaridos (LPS) que luego serán
utilizados para la vacunación
a) se inició un sistema continuo de -Bordetella pertussis y se trabajo a distintas
velocidades de dilución (D), siendo la fuente de carbono y energía el glutamato,
obteniéndose distintos - Y x/s experimentales que se muestran en la siguiente tabla:

-1
D (h ) Y x/s (c-mol biomasa/c-mol glucosa)
0.03 0.18

0.04 .2

3
0.05 .22

0.06 .24

* calcular el coeficiente de mantenimiento (m) y el Y x/s verdadero.

b) se hicieron cultivos en batch y continuo y se obtuvieron los siguientes resultados

-1
sist. de X0 (g/l) Xf (g/l) PT (mg/l) LPS (µg/l) µ (h )
cultivo

Batch 0.11 1.1 1.2 4.87 0.093

Continuo 2.1 2.46 6.49 0.06

* calcular la productividad para biomasa, PT y LPS para los dos sistemas de cultivo.
tener en cuenta que para el cultivo en batch el tiempo lag = 6 hs. y el tiempo muerto= 24
hs.Y considerar que el tiempo en que setarda en establecer el estado estacionario es de
de 40 hs y el tiempo total que duró el sistema en estado estacionario fue de 720 hs.

c) en le siguiente experimento se trabajó con distintos sustratos limitantes(glutamato,

hierro, cistina y fósforo) y se determinó la conversión de sustrato a biomasa (Y x/s ) y los
rendimientos de producto en función de la biomasa ( Y PT / X e Y LPS / X).. los resultados se
muestran en la siguiente tabla:

-1
sust. Y x/s Y PT / X Y LPS / X D (h )
limitante (c-mol X/ (mg / g X) (µg/g)
c-mol glut.)
glutamato 0.22 1.12 2.9 0.05

hierro 0.17 2.02 5.01 0.05

cistina 0.14 0.77 2.59 0.05

fósforo 0.2 0.28 .72 0.05

* siendo lodatos de c-mol de glutamato= 29.40; c-mol de biomasa= 22.84 y c-mol de

PT= 22.9 y la concentración de glutamato inicial fue de 10.7 g/l. Calcularlas

4
productividades de biomasa y Pt en cada caso, considerando los datos de c-mol y
explique el efecto de cada factor limitante sobre la biomasa y la producción de PT.
(cosiderar la concentración de sustrato en le fermentador despreciable)

Respuesta: a) Yxs = 0.34; m = 0.86 c-mol gluc/ c-mol X h.

b) P Batch PT = 0.022mg/l h, P batch LPS = 0.089 ug/l h; P continuo PT = 0.139 mg/l
h, P continuo LPS = 0.366 ug/l h;

3. Con el objeto de optimizar un medio de cultivo para producir biomasa de una cepa de
Pseudomonas spp. se desarrolló un sistema de cultivo continuo. Como sustrato limitante
-1
se utlizó metanol y la velocidad de dilución fue de 0.32 h , el pH=7,
0
T = 37 C, agitación= 800 rpm. La concentración de metanol inicial (S0) se fue de 1 g/l.
En el experimento se fue incrementando la concentración del mismo hasta 7 g/l
paralelamente se fueron agregando otros sustratos, a concentraciones que se indican en
la tabla. Se determinó la concentración de biomasa, de sustrato en el fermentador y la
formación de un polisacárido. Los resultados se muestran en la siguiente tabla:

S0 (g/l) X (g /l) S residual Y x/s Adición de polisac

(g/l) nutrientes árido
1 0.5256 0.048 - -

2 0.48 1.28 +

2 1.07 0.047 CuSO4 -

(70 µg)

3 1.61 0.048 -

4 1.74 0.046 (NH4)2SO4 (1.5 g/l) -

5 1.06 2.67 +

5 2.64 0.045 MgSO4 (0.2 g/l) -

6 2.9 0.048 KCl (0.02 g/l) -

6 2.99 0.046 Na2HPO4 (0.15 g/l) -

6 3.07 0.043 -

5
7 1.41 7.2 -

7 3.18 520 FeSO4 (1 mg/l) +

7 3.61 0.044 MnSO4 ( 10 µg/l) +

* Explique brevemente los resultados analizando que pasa con el sustrato limitante en
cada caso y estime el rendimiento en cada caso

4. Se realizó un cultivo de levaduras en un bioreactor en condiciones similares a las

empleadas en el trabajo práctico, los resultados obtenidos en esta experiencia pueden
verse en la siguiente tabla:

tiempo (h) biomasa (g/l) glucosa en el medio etanol (g/l)

(g/L)
0 3.4 42.39 0.51

1 4.04 33.72 1.9

2 5.76 22.21 3.6

3 7.05 8.91 8.88

4 10.44 1.01 9.4

Calcular los siguientes parámetros: µ, tiempo de duplicación (td) , Yx/s, qs y qp

Respuesta: µ = 0.28 h-1; td = 2.39 h; Yxs = 0.17; qs= 1.63 g/ gX h ; qp = 0.44 g etanol/ g
X h.

5. Se tiene una cepa recombinante de la levadura Hansenula polimorfa a la cual se le

ha insertado el gen del interferon humano con el objeto de producirlo industrialmente,
para evaluar cuales son las mejores condiciones para la producción se realizó un sistema
de cultivo continuo, donde se trabajo a distintas velocidades de dilución obteniéndose los
siguientes resultados:

-1
D (h ) biomasa (g/l) glucosa (g/l) Interferon (g/l)

6
 0.05 24.4 0.05 15

0.08 24.8 0.12 6

0.10 25.1 0.15 5

0.15 25.3 0.20 13

0.22 25.4 0.20 5

Considere que la concentración de sustrato limitante (glucosa) en el reservorio fue de 50

g/l.

b1) calcule el rendimiento (Yx/s) verdadero

b2) se desea realizar un cultivo en batch-alimentado con alimentación exponencial, en
base a los resultados de la tabla elija la velocidad de crecimiento apropiada y justifique su
elección.
Calcule el tiempo total de duración de cultivo si las condiciones iniciales son:
Xo= 5 g/l; Xf= 35 g/l; Vo= 10 l; Vf= 55 l.
b3) si la concentración concentración en el reservorio de glucosa es de 300 g/l calcule el
Flujo inicial (Fo).

Respuesta: Yxs G = 0.52; tiempo = 24 hs.; F = 0.049 l/h.

6. Los datos presentados en la siguiente tabla corresponden a la curva de crecimiento de

una cepa de E. coli, en base a los mismos determine los siguientes parámetros: µ, td
(tiempo de duplicación), rendimiento de biomasa en función del producto , qs (tasa
específica de consumo de sustrato) y explique:

a-A que puede deberse que no se observa fase lag.?

b-Determine el qp del producto del metabolismo celular (en este caso ácido acético)
X0= 0.15 g/l
Xf= 4.54 g/l
S0= 15 g/l
Sf= 4.93

tiempo biomasa glucosa (g/l) glucosa ac. acético

(hs) (g/l) consumida (g/l)
(g/l)
0 0.15 15 0 0.2
1 0.21 14.67 0.33 0.25

7
 2 0.3 14.53 0.47 0.23
3 0.42 14.34 0.66 0.31
4 0.58 14.08 0.92 0.32
5 0.82 13.7 1.3 0.35
6 1.15 13.18 1.82 0.28
7 1.62 12.44 2.56 0.45
8 2.28 11.4 3.6 0.42
9 3.2 9.94 5.06 0.51
10 4.49 7.89 7.11 1.2
11 4.53 5.01 9.99 2.8
12 4.55 4.93 10.07 4.1

Respuesta: µ = 0.34 h-1; td = 2 h; Yxs = 0.44; qs= 0.77 g/ gX h ; Ypx = 0.90 g etanol/ g
X.

7. Grafique µ (velocidad de crecimiento) en función del tiempo en un proceso en batch

hasta muerte celular inclusive

8. a . Se estudio el efecto de distintas concentraciones de fuente de nitrógeno (sulfato de

amonio) sobre el crecimiento y la producción de etanol en S. cereviceae creciendo en
aerobiosis. La concentración inicial de glucosa en el reservorio (S R) fue de 20 g/l. Se
trabajo con tres concentraciones de sulfato de amonio alta , intermedia y baja. En la
siguiente tabla se muestran los resultados de la concentración de etanol en estado
estacionario a distintas D:

Alta Intermedia Baja

D etanol (mM) D etanol (mM) D etanol (mM)

0.05 0.00 0.05 0.00 0.05 0.00

0.10 0.00 0.10 0.00 0.10 30

0.15 0.00 0.15 10 0.15 65

0.20 25 0.20 60 0.20 150

0.25 65 0.25 90 0.25 100

8
0.30 100 0.30 134 0.30 70

0.35 120 0.35 90 0.35 55

• Si tuviera que elegir entre estos cultivos continuos para la producción de etanol,
cual usaría?. Justifique su respuesta.
• Si la glucosa se consume produciendo biomasa, etanol y CO2, como sería el perfil de
YXS y de biomasa en un gráfico vs. D. (elija solo un de los tres como representativo)

8. b. En otro estudio en sistema continuo de S. cereviceae se estudio el efecto de la

velocidad de dilución vs. biomasa y producción de etanol en aerobiosis. La
concentración de sustrato limitante, glucosa, en el reservorio fue de 30 g/l. Para cada
estado estacionario se observaron los siguientes resultados.

D Biomasa (g/l) s (g/l) etanol (g/l)

0.10 14.2 0.01 0.00

0.20 14.3 0.02 0.00

0.29 14.2 0.01 0.00

0.32 8.5 0.8 6.1

0.36 5.7 2.8 9

0.41 3.4 8.0 10.1

En base a este estudio se decidió realizar un sistema en batch-alimentado con el objetivo

de obtener biomasa, partiendo de X0 = 5 g/l y V0 = 5 l y con flujo constante de glucosa
de F = 300 ml/ h y SR = 250 g/l. Se desea llegar a un volumen final VF = 30 l.
Sin embargo se observó producción de etanol en detrimento de la producción de
biomasa, podría indicar las razones y como las corregiría. Justifique.

9. Se estudio el efecto de aumentar la producción de etanol causada por stress salino.

Para esto se trabajó con una concentración de NaCl de 1 M. Se realizaron por lo tanto
dos sistemas continuos uno en anaerobiosis y otro en anaerobiosis + 1 M de NaCl. Se
midieron las concentraciones de biomasa y etanol en estado estacionario a distintas
velocidades de dilución. Para el caso de anaerobiosis el gráfico de 1/D vs. 1/Y XS arrojo
una pendiente de 0.036 y la inversa de la ordenada al origen de 0.138. Para el caso del
cultivo en presencia de NaCl el valor de la pendiente fue de 0.36 y la inversa de la

9
ordenada al origen de 0.065. Para el cultivo en anaerobiosis los otros datos fueron: µMAX
-1
= 0.35 h , KS = 0.15 g/l,
-1
YPX =3.1 g/g , YPS = 0.429 g/g , qP = 0.62 g/g h y Dcritica = 0.33 h .
-1
Para el cultivo en anaerobiosis + 1 M NaCl los otros datos fueron: µMAX = 0.30 h , KS =
-1
0.15 g/l, YPX = 8.0 g/g , YPS = 0.48 g/g , qP = 1.6 g/g h y Dcritica = 0.28 h .
• calcule para ambos sistemas la concentración de biomasa y de producto en estado
-1
estacionario si se trabaja a una D de 0.20 h y si la concentración de glucosa en el
reservorio fue de 20 g/l y la concentración de la misma en estado estacionario fue de
0.2 g/l para ambos sistemas.
• que sistema usaría para producir etanol Justifique. En base a su respuesta mencione
que otras variables modificaría para aumentar la productividad.
• Si tuviera que producir etanol pero con un sistema de batch-alimentado para el caso
de anaerobiosis en presencia de 1 M de NaCl y tuviera que elegir un sustrato limitante
del crecimiento cual usaría glucosa o NaCl?.
• se desea producir etanol por un sistema de batch-alimentado para esto se parte de los
siguientes parámetros X0 = 5 g/l, V0 = 5 l , VF = 25 l, XF= 20 g/l. Calcule el tiempo
total del proceso. Como haría para a disminuir el tiempo del proceso o lo que es lo
mismo aumentar la productividad. Considerar para los cálculos el coeficiente de
mantenimiento.

10. Lipomyces starkey es una levadura capaz de producir una gran cantidad de lípidos
que pueden ser utilizados en la industria alimentaria. Se realizaron estudios sobre el
efecto del sustrato que es fuente de carbono y energía, en este caso el etanol. En un
sistema continuo se estudió la influencia de distintas concentraciones de etanol en el
reservorio de alimentación determinándose la µ máxima y la producción de lípidos
totales. El resultado obtenido se muestra en el siguiente gráfico:

a) Si se desea obtener una biomasa final de aproximadamente 50 g peso seco/ l y se sabe

que el Yx/s (g biomasa/ g etanol) es de 0.475 g/g, que tipo de cultivo realizaría Ud.
tomando en cuenta el gráfico anterior. Justifique la respuesta.

b) Se desea realizar un cultivo en batch-alimentado con alimentación constante ( flujo y

sustrato) con el fin de producir lípidos. Diseñe el proceso partiendo de una concentración
inicial X0 = 4 g/l y un volumen inicial V 0 = 2 l. De acuerdo a su interpretación del
gráfico elija la concentración de sustrato en el reservorio (Sr) y calcule el flujo, el tiempo

10
total que durará el proceso paa alcanzar una biomasa final de 50 g peso seco. Tenga en
cuenta siempre el gráfico anterior.

c) Como haría para reducir el tiempo del proceso? haciendo una alimentación
exponencial o aumentando la concentración de sustrato en el reservorio?. Justifique.

D (h-1) biomasa (g/l) lípidos (mg/g Yx/s (g biomasa/ g

biomasa) etanol)
0.04 45.5 15.0 0.48

0.08 44.0 25.0 0.50

0.12 43.0 55.0 0.52

0.20 41.0 41.0 0.54

d) En base a los resultados de la tabla con que velocidad de dilución trabajaría para
obtener mayor cantidad de lípidos. Justifique brevemente

e) Como calcularía el coeficiente de mantenimiento y el rendimiento verdadero (YG x/s).

11
 Ejercicios resueltos de estequeometría
13. En un sistema cultivo continuo de levadura se producen 0.37 g de biomasa por gr de
glucosa y se consumen 0.88 g de O2 por gr de biomasa formada. La fuente de
nitrógeno es amonio y la fórmula molecular de la biomasa es CH 1.79O0.56N0.17. Se
produce algún otro producto?.

Biomasa
C-mol = 12 + (1.79*1) + (16*0.5) +
(14*0.17)
0.95

C-mol de biomasa = 26.45

Rendimiento de biomasa en función de sustrato.

y X/S = 0.37 g X * c-mol de glucosa = 0.37 * 30 = 0.42 c-mol X

g S c-mol de biomasa 26.45 c-mol S

γX = 4 + (1.79*1 ) – (2*0.56) – (3*0.17) = 4.16

Se produjeron 0.37 g de biomasa que equivalen a 0.014 c-moles, mientras que por cada
g de biomasa, es decir 0.038 c-moles, se consumieron 0.88 g de O2. Por lo tanto se
consumieron 0.32 g de O2 es decir 0.01 moles de O2.

De acuerdo al balance de energía:

y X/S γX + y P/S γP + 4b = 1
γS γS γS

y donde b es el consumo de moles de oxígeno

0.42*4.16 + y P/S γP + 4 * 0.01 = 1

4 γS 4

Como el balance de energía, es decir la suma de los términos de energía dirigidos a

biomasa y a oxígeno es 0.45 ≠ 1 implica que se formó un producto

2. La levadura Saccharomyces cereviseae y la bacteria Zymomonas mobilis produce

etanol a partir de glucosa bajo condiciones de anaerobiosis sin otro aceptor de
electrones externo. El rendimiento de biomasa a partir de glucosa es de 0.11 g/g para la
levadura y de 0.05 g/g para la bacteria. La fuente de nitrógeno es amonio y ambos casos
la fórmula molecular de la biomasa es CH1.8O0.5N0.2 .
a) cual es el rendimiento de etanol en glucosa en ambos casos?
b) como son los rendimientos comparados con el máximo?

12
a)

Según la ecuación de balance energético:

y X/S γ X + y P/S γ P + 4 b = 1
γS γS γS
Dado que es un proceso anaeróbico el término 4b/ γS se elimina, entonces queda:

y X/S γX + y P/S γP = 1
γ S γ S

Convertir unidades a c-mol

Biomasa
C-mol = 12 + (1.8*1) + (16*0.5) + (14*0.2)
0.95
C-mol de biomasa = 25.9

Glucosa C6H12O6 ⇒ fórmula mínima CH2O

C-mol Glucosa = 12 + (2*1) + 16 = 30

Etanol C2H6O ⇒ fórmula mínima CH3O0.5

C-mol Etanol = 12 + (3*1) + (16*0.5) = 23

El rendimiento de biomasa para Saccharomyces cereviseae expresados en c-mol será

igual a:

y X/S = 0.11 g X * c-mol de glucosa = 0.11 * 30 = 0.127 c-mol X

g S c-mol de biomasa 25.9 c-mol S

El rendimiento de biomasa para Zymomonas mobilis expresados en c-mol será igual a:

y X/S = 0.11 g X * c-mol de glucosa = 0.0.5 * 30 = 0.058 c-mol X

g S c-mol de biomasa 25.9 c-mol S

Ahora hay que calcular el grado de reductancia de la biomasa , la glucosa y el etanol:

Recordar que el grado de reductancia es igual a:

γ= 4 + a - 2b – 3c

γX = 4 + (1.8*1 ) – (2*0.5) – (3*0.2) = 4.2

γS = 4 + (2*1 ) – (2*0.5) = 4

13
 γS = 4 + (3*1 ) – (2*0.5) = 6

Para S. cereviseae el yP/S será

y X/S γX + y P/S γP = 1
γS γS

yP/S = 0.58 c-mol X c-mol S

0.127*4.2 + y P/S * 6 = 1
4 4

Para Zymomonas mobilis el yP/S será

yP/S = 0.62 c-mol X c-mol S

b) El rendimiento teórico máximo debe calcularse como si toda la energía del

metabolismo de sustrato fuera dirigido hacia la formación de producto, por lo tanto:

y P/S γP = 1
γS

Rendimiento teórico máximo yP/S = 0.67 c-mol X c-mol S.

El rendimiento de producto en sustrato para S. cereviseae es un 86.6% respecto del

máximo mientras que para Z. mobilis es de un 92.5% del máximo teórico

Ejercicios Resueltos de Sistemas de Cultivo

1. Se estudió la producción de acético y ac. butírico por Clostridium acetobutylicum
utilizando glucosa como fuente de carbono y energía en cultivos de tipo continuo. Al
trabajar a diferentes velocidades de dilución (D) . Se obtuvieron los siguientes resultados
para el rendimiento de biomasa en función del sustrato (Yx/s).

-1
D(h ) Y x/s (g peso seco /mol glucosa)
0.14 40
0.236 42.5
0.332 43.9
0.426 44.8
0.475 45
0.6 46
0.72 46.5

a) Estimar el coeficiente de mantenimiento (m) y el rendimiento Y x/s verdadero

De acuerdo a la ecuación

14
 1 = 1 + mS
Y obs YG µ
Si se gráfica la inversa de D vs. la inversa del Yx/s observado se obtiene el siguiente
gráfico.

0,0300
0,0250
0,0200
0,0150 y = 0,0006x + 0,0209
0,0100 R2 = 0,9872
0,0050
0,0000
-2,0 0,0 2,0 4,0 6,0 8,0

Por lo tanto la intersección en el eje y es = 1/ Y G o sea YG = 47.85 y la pendiente es el

mantenimiento mS = 0.006

2. Se tiene una cepa recombinante de la levadura Hansenula polimorfa a la cual se le ha

insertado el gen del interferon humano con el objeto de producirlo industrialmente, para
evaluar cuales son las mejores condiciones para la producción se realizó un sistema de
cultivo continuo, donde se trabajo a distintas velocidades de dilución obteniéndose los
siguientes resultados:

-1
D (h ) biomasa (g/l) glucosa (g/l) Interferon (g/l)
0.05 24.4 0.05 15
0.08 24.8 0.12 6
0.10 25.1 0.15 5
0.15 25.3 0.20 13
0.22 25.4 0.20 5

Considere que la concentración de sustrato limitante (glucosa) en el reservorio fue de 50

g/l.

a) se desea realizar un cultivo en batch-alimentado con alimentación exponencial, en

base a los resultados de la tabla elija la velocidad de crecimiento apropiada y
justifique su elección.
b) Calcule el tiempo total de duración de cultivo si las condiciones iniciales son:
c) Xo= 5 g/l; Xf= 35 g/l; Vo= 10 l; Vf= 55 l
d) si la concentración concentración en el reservorio de glucosa es de 300 g/l calcule el
Flujo inicial (Fo).

a) Para diseñar una alimentación exponencial en un sistema en batch alimentado es

necesario saber a que velocidad de crecimiento queremos que crezca el organismo en
el proceso. De acuerdo a la tabla que muestra los resultados de un sistema continuo
se elige la D o µ en la cual la productividad es máxima. En este caso se eligió la
velocidad de dilución 0.15

15
 Productividad = [P] * D ⇒ Prod. = 13 g/l * 0.15 = 1.95 g/l h interferon.

De esta manera podemos diseñar la alimentación de acuerdo a la ecuación:

F SR = Xo Vo e µ t  µ + mS 
 YXS 

Donde se fijan las condiciones iniciales del inóculo, vol inicial, etc

b) El tiempo total de cultivo para esas condiciones si la alimentación es exponencial

será:

t = ln X V - ln Xo Vo
µ

Por lo tanto

t = ln (35 g/l *55l) - ln ( 5g/l * 10 l)

0.15

El tiempo total del proceso será 24.34 hs.

c) Si diseñamos el proceso de tal manera que m = 0.15, Xo= 5 g/l, Vo= 10 l y el
Yx/s=0.51. además consideramos que el mantenimiento es despreciable queda que:

F0 SR = Xo Vo e µ t µ
YXS
Despejando F0

F0 = Xo Vo e µ t µ
YXS SR

F0 = 5 g/l 10 l e 0.15∗0t 0.15 h−1

0.51 300 g/l

Por lo tanto F0 = 49 ml /h

16
17