CANCER CHEMOPREVENTION RESEARCH CENTER Hal.

1 dari 4
FAKULTAS FARMASI UGM

Dokumen nomor : CCRC-02-008-00 Tanggal :

Mengganti nomor : - Tanggal : -

URAIAN DIBUAT OLEH DIPERIKSA OLEH DIPERIKSA OLEH DISETUJU OLEH

Jabatan Staf CCRC Staf CCRC Supervisor CCRC Pimpinan CCRC
Paraf

Nama Sendy Junedi Adam Hermawan Muthi’ Ikawati Edy Meiyanto

Tanggal

PROSEDUR TETAP

PERHITUNGAN SEL

DAFTAR ISI

HALAMAN
DAFTAR ISI 1
A. RIWAYAT REVISI DOKUMEN 2
B. TUJUAN 2
C. PENDAHULUAN 2
D. OPERASIONAL 2
I. Alat 2
II. Bahan 2
III. Prosedur Kerja 3
IV. Cara Perhitungan 4
 CANCER CHEMOPREVENTION RESEARCH CENTER Hal. 2 dari 4
FAKULTAS FARMASI UGM

Dokumen nomor : CCRC-02-008-00 Tanggal :

Mengganti nomor : - Tanggal : -

A. RIWAYAT REVISI DOKUMEN

No Tanggal Dibuat oleh Diperiksa oleh Diperiksa oleh Disetujui oleh

Dokumen
- Endah P Septi Riris Istighfari J Edy Meiyanto
Staff Supervisor Pimpinan
CCRC CCRC CCRC
Isi Menggunakan format lama
Belum ada penomoran dokumen
No Tanggal Dibuat oleh Diperiksa oleh Diperiksa oleh Disetujui oleh
Dokumen
CCRC-02- Adam Aditya Muthi’ Edy Meiyanto
008-00 Hermawan Fitriasari Ikawati
Staff Staff Supervisor Pimpinan
CCRC CCRC CCRC CCRC
Isi Menggunakan format baru
Sudah ada penomoran dokumen

B. TUJUAN
Memberikan panduan secara bertahap dan detail mengenai cara perhitungan sel.

C. PENDAHULUAN
Sel yang akan digunakan untuk uji dengan out put data melibatkan jumlah sel (misal uji sitotoksik,
flowcytometri dan doubling time) harus memiliki jumlah tertentu dan antar kelompok perlakuan
harus homogen. Perhitungan sel tersebut dapat dilakukan dengan hemositometer dibawah
mikroskop. Syarat penghitungan sel dengan metode hemositometri adalah sel harus ”berdiri”
sendiri-sendiri/ tidak menggerombol.

D. OPERASIONAL
I. Alat
1. Pipet Pasteur steril
2. Mikropipet 1 ml, 200 µL
3. Blue tip steril
4. Yellow tip steril
5. White tip
6. Conical tube 14 mL
7. Mikroskop inverted/cahaya
8. Hemositometer
9. Counter

II. Bahan
1. Phosphat Buffer Saline 1x
2. Tripsin-EDTA 1x (Tripsin 0,25%)
3. Media Kultur (DMEM/RPMI)
 CANCER CHEMOPREVENTION RESEARCH CENTER Hal. 3 dari 4
FAKULTAS FARMASI UGM

Dokumen nomor : CCRC-02-008-00 Tanggal :

Mengganti nomor : - Tanggal : -

III. Prosedur Kerja

No Prosedur Kerja Perhatian

1. Ambil sel dari inkubator CO2, amati kondisi sel. Pastikan panen sel dilakukan setelah
sel 80% konfluen.
2. Buang media dengan menggunakan pipet pasteur Lakukan secara aseptis dan hati-hati
steril.
3. Cuci sel 2 kali dengan PBS 1x (volume PBS + ½ Misal volume media 7 ml, maka PBS
volume media awal). yang dibutuhkan adalah 3,5 ml
4. Tambahkan tripsin-EDTA 1x (tripsin 0,25%) Untuk dish diameter 10 cm, tripsin-
secara merata dan inkubasi di dalam inkubator EDTA 1x = 450 µl, untuk flask= 300
selama 3 menit. µl; dekantir tripsin yang
berlebih. Tripsin-EDTA digunakan
untuk melepaskan sel dari matrik.
5. Tambahkan media kurang lebih 2-3 ml untuk Pastikan sel sudah terlepas satu-satu
menginaktifkan tripsin. Resuspensi sel dengan (tidak menggerombol).
pipet sampai sel terlepas satu-satu (tidak
menggerombol).
6. Amati keadaan sel di mikroskop. Resuspensi -
kembali jika masih ada sel yang menggerombol.
7. Transfer sel yang telah lepas satu-satu ke dalam Pastikan conical yang digunakan sudah
conical steril baru. Tambahkan MK kurang lebih steril.
2-3 ml. Resuspensi sel.
8. Ambil 10 µl panenan sel dan pipetkan ke
hemasitometer.

Hemositmeter
9. Hitung sel di bawah mikroskop (inverted atau
mikroskop cahaya) dengan counter.
Lihat prosedur penghitungan sel dibawah.

counter
10. Sisa sel pada conical (no 7) dilakukan
cryopreservation, atau dilakukan sub kultur.
11. Untuk sel yang akan ditanam (untuk perlakuan) Lihat cara perhitungan sel
lakukan transfer sejumlah sel yang diperlukan ke
dalam conical yang lain dan tambahkan MK
sesuai dengan konsentrasi yang dikehendaki.
 CANCER CHEMOPREVENTION RESEARCH CENTER Hal. 4 dari 4
FAKULTAS FARMASI UGM

Dokumen nomor : CCRC-02-008-00 Tanggal :

Mengganti nomor : - Tanggal : -

IV. Cara Perhitungan

Hemositometer terdiri dari 4 kamar hitung. Setiap kamar hitung terdiri dari 16 kotak.

1. Hitung sel pada 4 kamar hemositometer. Sel yang gelap (mati) dan sel yang berada dibatas
luar di sebelah atas dan di sebelah kanan tidak ikut dihitung. Sel di batas kiri dan batas bawah
ikut dihitung.
2. Hitung jumlah sel per mL dengan rumus dibawah.

∑ sel kamar A + ∑ sel kamar B + ∑ sel kamar C + ∑ sel kamar D

Jumlah sel terhitung /mL= x 104
4

3. Hitung jumlah total sel yang diperlukan.

Misal untuk menanam sel pada tiap sumuran 96-well plate maka jumlah total sel yang
diperlukan adalah 5x103/sumuran x 100 sumuran (dibuat lebih) = 5x 105

4. Hitung volume panenan sel yang diperlukan (dalam mL) dengan rumus seperti di bawah ini

Jumlah total sel yang diperlukan

Volume panenan sel yang ditransfer =
Jumlah sel terhitung /mL

5. Ambil volume panenan sel transfer ke conical tube baru kemudian tambahkan MK sampai
total volume yang diperlukan.
Perhitungan volume yang diperlukan adalah setiap sumuran akan diisi 100 µl MK berisi sel,
maka total volume yang diperlukan untuk menanam sel = 100 µl x 100 sumuran = 10 mL.