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U.C.S.M. E.P. Ing.

Biotecnológica I Semestre
Prácticas de Introducción a la Ing. Biotecnológica

TALLER Nº 3.
REVISIÓ N DE ARTICULÓS CIENTI FICÓS

DNA EXTRACTION FROM HUMAN SALIVA DEPOSITED ON SKIN AND ITS USE
IN FORENSIC IDENTIFICATION PROCEDURES
*Anzai-Kanto E, *Hirata MH, *Hirata RDC, **Nunes FD, **Melani RFH, **Oliveira RN.
*Department of Clinical and Toxicological Analysis, School of Pharmaceutical Sciences,
**Department of Stomatology, School of Dentistry, Department of Social Dentistry.
University of São Paulo.

CUESTIONARIO:

1. ¿Dónde y cuándo se realizó el presente trabajo de investigación?


El presente trabajo de investigación se realizó en la Universidad de Sao Paulo, Brasil en el
año 2005.

2. ¿Qué pretende realizar el presente trabajo de investigación?

Este trabajo de investigación pretende realizar el uso de los procedimientos estandarizados


con el fin de extraer y recolectar ADN de la saliva depositada en la piel para recuperar ADN
salival específicamente en casos criminales.

3. Formule el Objetivo general y tres Objetivos específicos para el presente Artículo


científico.

El objetivo general de este artículo es contribuir a la investigación forense mediante


métodos de recuperación de ADN salival depositada en la piel. Como objetivos específicos se
pueden considerar los siguientes:
 Recolectar la saliva de la piel con el método del hisopado doble.
 Usar la técnica de fenol-cloroformo para extraer el ADN de la saliva depositada
en la piel.
 Amplificar las muestras de ADN mediante PCR.

4. ¿En qué tipo de muestras puede encontrarse saliva?


La saliva se puede encontrar en diferentes muestras como en mordidas, colillas de
cigarrillos, estampillas postales, sobres y otros objetos que se encuentre en la escena del
crimen.

5. ¿En qué consiste el ensayo que permite identificar una muestra de saliva?
Consiste en un ensayo de amilasa.

6. Explica ¿Cómo se realiza la toma de muestra?


La toma de muestra se realizo pidiendo a 20 voluntarios que escupan en un tubo de plástico
estéril.
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7. ¿En qué consiste la técnica del doble hisopado?


Con la técnica del doble hisopado se extrajo de la piel la saliva seca que consiste en la
utilización de un hisopo de algodón húmedo seguido de un hisopo de algodón seco y asi el
ADN se extrajo inmediatamente.

8. Explica el fundamento del método de extracción de DNA utilizado en el presente trabajo


de investigación.

El fundamento del método de extracción de DNA consiste en la centrifugación de las


muestras de saliva para quedarse con los pellets de células y como método de extracción de
ADN se utilizó el fenol-cloroformo.

9. ¿Qué método se utilizó para tipificar el DNA?


 Separación de la electroforesis
 Análisis de fragmentos
 Amplificación mediante PCR.

10. Describe el programa que se utilizó en el termociclador para las etapas de la PCR.
El programa que se utilizó en el termociclador fue la desnaturalización previa a 98 ° C
durante 5 min, 35 ciclos de 94 ° C durante 1 min, 56 ° C durante 1 minuto, y 72ºC durante 2
minutos; y extensión final de 72 ° C durante 10 min. Estas condiciones de PCR se usaron para
todos los 15 STR.

11. ¿Cuál fue el propósito de utilizar la electroforesis? y ¿Cuáles fueron sus condiciones?
El propósito fue para determinar el tamaño alélico de los STR. Las condiciones de utilizar la
electroforesis fueron a 1.500 voltios, 60 mA, a 55 ° C, durante 2 h utilizando el sistema ALF
Express

12. ¿Qué cantidad de DNA se obtuvo de la muestra de saliva?


Se obtuvo un resultado de promedio de 4,2 ± 0,9 μg.

13. ¿Qué significa la relación A260/A280 de las muestras?


La relación A260 / 280 nos muestra la proporción de ADN extraído de muestras de saliva
recolectadas de la piel.

14. Determine que muestras de saliva (1-20) coincidieron con las depositadas sobre la piel (A –
E) ¿Porque?

Se hicieron coincidir los alelos de estos marcadores genéticos en las 20 muestras de saliva, A
con 5, B con 6, C con 7, E con 3 o 13 o 20. Las razones de probabilidad basadas en datos de la
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población brasileña fueron A 1: 500; B 1: 153.700.123; C 1: 159.140; y E 1:11. Ya que la


recuperación de ADN de la saliva depositada en la piel no es proporcionalmente equivalente
a la cantidad de ADN encontrada en las 20 muestras de saliva. La deposición de saliva, la
recolección de células salivales y los procedimientos de extracción de ADN probablemente
redujeron la cantidad de ADN.

15. Formule tres conclusiones obtenidas en el estudio.

 En este estudio, es importante considerar que no hay contacto entre los labios y los
dientes y la piel, como ocurre en un caso real, donde las células bucales se
impregnan en la piel, lo que puede aumentar la cantidad de células. En un caso real,
hay una invasión de tejido, con la posibilidad de mezclar el ADN de la víctima y del
agresor.

 El análisis de STR en muestras de ADN de saliva depositada en la piel puede usarse


como evidencia sólida para ayudar al proceso criminal por exclusión o inclusión de
sospechosos.

 Se llega a la conclusión que los procedimientos que se realizaron en este estudio


para la recolección y extracción de ADN de la saliva depositada en la piel pueden ser
muy útiles para ayudar a resolver casos criminales. La solución de un caso forense
requiere otros estudios importantes, como la marca de mordedura física y otras
evidencias encontradas en la escena del crimen