HALAMAN PENGESAHAN

Laporan resmi praktikum Bioproses yang berjudul Isolasi Enzim yang disusun oleh:
Kelompok : 2 / Selasa
Anggota :
1. Dhyeta Ulzana Zizi Rahma 21030115130203
2. Emiwati Simanjuntak 21030115120084
3. Hafid Rizki Adinursetya 21030115130146
4. Yuda Kurniawan Argoyuwono 21030115120062

Telah disahkan pada,

Hari :
Tanggal :

Semarang, 2017
Dosen Pengampu

Dr. Ir. Abdullah, M.S.

NIP 131286285

ii
 RINGKASAN
Enzim adalah senyawa protein yang dapat mempercepat atau mengkatalis reaksi
kimia. Enzim berperan dalam mengubah hasil reaksi, sehingga kecepatan reaksi yang
dihasilkan dapat dijadikan parameter keaktifan enzim. Enzim hanya dapat bereaksi pada pH
dan temperatur tertentu. Tujuan dari percobaan ini adalah mengisolasi enzim dari serbuk
kayu, menghitung parameter kinetik enzimatik, dan membandingkan aktivitas enzim selulosa.
Bahan yang dibutuhkan pada percobaan ini adalah serbuk kayu, NaOH, Aspergillus
niger, glukosa, MgSO4, KH2PO4, CaCl2, NaCl, Urea, Aquadest, Inducer enzim.. Langkah
kerja yang dilakukan adalah yang pertama adalah penyiapan bahan baku dengan
menggunakan serbuk kayu, yang telah direndam kedalam larutan NaOH sesuai variabel,
kemudain dipanskan dan dikeringkan menggunakan oven pada suhu 110 C selama 1 malam.
Berikutnya adalah pembuatan starter, dengan media inokulum basis 200 ml. Tambahkan
beberapa nutrient sesuai dengan variebel dan aspergillus niger. Lalu dinkubasi pada suhu
kamar selama 1 malam. Selanjutnya adalah fermentasi, sampel dicampur dengan air dengan
perbadingan rasio bahan-air sesuai variabel, lalu atur PH, dan tambahkan juga larutan starter
yang telah dinkubasi. Dan lakukan fermentasi secara anaerob selama 1 hari. Yang berikutnya
adalah menganalisa hasil fermentasi menggunakan analisa kadar glukosa.

iii
 PRAKATA

Puji syukur kehadirat Tuhan Yang Maha Esa yang telah memberikan rahmat dan
hidayah-Nya sehingga laporan resmi Praktikum Bioproses dapat diselesaikan dengan lancar
dan sesuai dengan harapan.
Laporan resmi ini diperuntukkan untuk memenuhi salah satu tugas mata kuliah
Praktikum Bioproses. Adapun isi laporan ini adalah pembahasan mengenai hasil percobaan
dari praktikum Alkohol.
Berbagai dukungan dan doa sehingga penyusun dapat menyelesaikan laporan ini. Untuk
itu penyusun mengucapkan terimakasih kepada:
1. Dr. Ing. Silviana, S.T., M.T. selaku Penanggung jawab Laboratorium Mikrobiologi
Industri,
2. Dr. Ir. Abdullah, M.S. selaku Dosen Pengampu materi Isolasi enzim,
3. Jufriyah, S.T. selaku PLP Laboratorium Mikrobiologi Industri,
4. Iqbal Ryan R. selaku koordinator asisten Laboratorium Mikrobiologi Industri,
5. Asisten-asisten Laboratorium Mikrobiologi Industri,
6. Christyowati P. Sagita selaku Asisten Pengampu materi Isolasi Enzim, dan
7. Teman-teman yang telah membantu baik dalam segi waktu maupun motivasi.
Laporan resmi ini merupakan laporan yang saat ini dapat diajukan. Namun, pasti masih
banyak kekurangan yang mendasar pada laporan resmi ini dan perlu diperbaiki. Oleh karena
itu, kritik dari pembaca sangat diharapkan untuk penyempurnaan laporan resmi ini. Semoga
laporan resmi ini dapat bermanfaat.

Semarang, 21 Maret 2017

Penyusun

iv
 DAFTAR ISI

HALAMAN JUDUL............. ...................................................................................................... i

HALAMAN PENGESAHAN .................................................................................................... ii
RINGKASAN ............................................................................................................................. iii
PRAKATA.................................................................................................................................. iv
DAFTAR ISI .. ........................................................................................................................... v
DAFTAR GAMBAR ................................................................................................................ vii
DAFTAR TABEL............. ........................................................................................................ viii
BAB I PENDAHULUAN
I.1 Latar Belakang ............................................................................................................ 1
I.2 Rumusan Masalah ......................................................................................................1
I.2 Tujuan Percobaan ........................................................................................................ 1
I.3 Manfaat Percobaan ...................................................................................................... 2
BAB II TINJAUAN PUSTAKA
II.1 Pengertian Umum ....................................................................................................... 3
II.2 Sifat-Sifat Enzim..........................................................................................................3
II.3 Sifat-Sifat Protein ....................................................................................................... 4
II.4 Penggolongan Enzim .................................................................................................. 4
II.5 Metode Isolasi Enzim ................................................................................................. 4
II.6 Kandungan dalam Serbuk Kayu ................................................................................. 4
II.7 Kinetika Reaksi Kinemaik ........................................................................................... 6
II.8 Kegunaan Enzim ......................................................................................................... 4
II.9 Faktor-Faktor yang Mempengaruhi Enzim................................................................. 7
II.10 Mekanisme Cara Kerja Enzim ................................................................................... 6
II.11 Proses Delignifikasi .................................................................................................. 4
II.12 Metode yang Digunakan ........................................................................................... 4
II.13 Analisa Aktivitas Enzim ........................................................................................... 4
BAB III METODE PERCOBAAN
III.1 Rancangan Percobaan ................................................................................................. 9
III.1.1 Skema Rancangan Praktikum ............................................................................. 9
III.1.2 Variabel Operasi ................................................................................................ 10
III.2 Alat dan Bahan yang Digunakan ................................................................................ 9
III.2.1 Alat............. ........................................................................................................ 9
III.2.2 Bahan .................................................................................................................. 9
III.3. Gambar Rangkaian Alat ........................................................................................... 10
III.4. Prosedur Praktikum .................................................................................................. 10
III.4.1 Penyiapan Bahan baku............. ........................................................................... 9

v
 III.4.2 Pembuatan Starter ............................................................................................... 9
III.4.3 Fermentasi........................................................................................................... 9
III.4.4 Analisa Bahan ..................................................................................................... 9
DAFTAR PUSTAKA .................................................................................................................. 1

vi
 DAFTAR TABEL
Tabel 2.1. Klasifikasi Enzim Secara Internasional.......... ............................................................. 4
Tabel 2.2. Pemakaian Enzim Dalam Industri...............................................................................4

vii
 DAFTAR GAMBAR
Gambar 2.1 Grafik Pemetaan Kebalikan Ganda (Lineweaver-Burk) ......................................... 10
Gambar 2.2 Grafik Hubungan Substrat terhadap Kecepatan Reaksi Enzimatis ......................... 10
Gambar 3.1 Skema Rancangan Percobaan .................................................................................. 9
Gambar 3.2 Alat yang Dibutuhkan ............................................................................................. 10

viii
 BAB I
PENDAHULUAN

I.1. Latar Belakang

Enzim adalah senyawa protein yang dapat mempercepat atau mengkatalis reaksi
kimia. Enzim berperan dalam mengubah hasil reaksi, sehingga kecepatan reaksi yang
dihasilkan dapat dijadikan parameter keaktifan enzim. Enzim hanya dapat bereaksi pada
pH dan temperatur tertentu. Ciri khas enzim ditandai oleh adanya spesifikasi untuk
substrat yang mirip secara biologis. Cara kerja enzim tergantung dari suhu serta lamanya
waktu yang diberikan.
Enzim merupakan unit fungsional dan metabolisme sel. Enzim bekerja dengan
urutan yang diatur dan mengkatalis ratusan reaksi dari reaksi yang sederhana seperti
replikasi kromosom. Enzim pengatur mengkoordinasikan system enzim dengan baik
sehingga menghasilkan hubungan harmonis diantara sejumlah aktivitas metabolism.
Pada keadaan abnormal atau aktivitas berlebihan, enzim dapat menghasilkan penyakit
sehingga diperlukan analisis enzim.
Enzim sangat penting dalam kehidupan, karena semua reaksi metabolisme
dikatalis oleh enzim. Jika tidak ada enzim atau aktivitas enzim terganggu maka maka
metabolisme sel akan terhambat sehingga pertumbuhan sel juga terganggu. Reaski
enzimatik dibutuhkan agar bakteri dapat memperoleh makanan atau nutrient dalam
keadaan terlarut yang dapat diserap ke dalam sel, memperoleh energi kimia yang
digunakan untuk biosintesis perkembangbiakan, pergerakan, dan lain-lain. Enzim dapat
diperoleh dengan mengisolasi dari sumbernya. Enzim yang telah diisolasi ini
dapatdimanfaatkan lebih lanjut dalam bidang industri maupun kesehatan. Untuk
mengeluarkan enzim dari sumbernya perlu dilakukan isolasi. Pada percobaan ini, metode
yang digunakan untuk mengisolasi enzim adalah ekstraksi, sentrifugasi, dan presipitasi.
I.2. Rumusan Maslah
Enzim meruakan hal yang penting pada berbagai industri, khususny industri
dengan produk utama makanan. Enzim dapat diproduksi oleh mikroba atau bahan
lainyaseperti hewan atau tumbuhan. Karena kegunaan dan pentingnya enzim, maka
sebagai sarjana teknik kimia harus mampu mengisolasi enzim dari bahan yang terbaik
dari segi ekonomi maupun kualitas misalnya serbuk kayu, mampu memahami apa saja
yang perlu dilakukan unutk memaksimalkan hasil dari isolasi enzim.
I.2. Tujuan Percobaan
1. Mengisolasi enzim dari serbuk kayu dengan cara fermentasi padatan.
2. Menghitung parameter kinetik enzimatik.
3. Mengetahui aktivitas enzim dari serbuk kayu terhadap konsentrasi NaOh dan pH
sesuai variabel percobaan.

1
I.3. Manfaat Percobaan
1. Mahasiswa mampu memanfaatkan serbuk kayu yang merupakan limbah
daripengolahan kayu.
𝑑𝐶𝑎
2. Mahasiswa mampu mengetahui lecepatan laju reaksi, berdasarkan reaksi− =
𝑑𝑡

𝑘. 𝐶𝑎. 𝑉, sehingga kita mengetahui spesifikasi reaktor yang dibutuhkan.

4. Mahasiswa mampu mengetahui aktivitas enzim dari serbuk kayu terhadap konsentrasi
NaOH dan pH sesuai variabel percobaan.

2
 BAB II
TINJAUAN PUSTAKA
II.1. Pengertian Umum
Kata enzim berasal dari bahasa Yunani “enzyme” yang berarti didalam sel.
Enzim merupakan sejenis protein kompleks yang unik dan merupakan bahan antara
yang penting untuk metabolisme dan berbagai perubahan kimia dalam tubuh. Enzim
dapat diproduksi oleh mikroba atau bahan lainnnya seperti hewan dan tumbuhan.
Enzim juga dapat diisolasi dalam bentuk murni (Winarno, 1986).
II.2. Sifat-sifat Enzim
1. Enzim sebagai katalisator
Enzim merupakan senyawa protein yang dapat mengkatalisis seluruh reaksi
kimia dalam sistem biologis. Aktivitas katalitiknya bergantung kepada integritas
strukturnya sebagai protein. Enzim dapat mempercepat reaksi biologis, dari reaksi
yang sederhana, sampai ke reaksi yang sangat rumit. (Kurnia, 2010).
2. Bereaksi optimum pada 40oC dan tekanan normal
Umumnya, semakin tinggi temperatur, semakin naik laju reaksi baik yang
tidak dikatalisis maupun yang dikatalisis oleh enzim. Namun demikian, enzim
merupakan senyawa protein yang sangat peka terhadap perubahan temperatur.
Semakin tinggi temperatur akan terjadi perubahan struktur enzim yang diikuti oleh
hilangnya aktivitas katalitik dari enzim tersebut. Pada temperatur rendah, laju
inaktivasi enzim berjalan lambat dan sangat kecil, sehingga boleh diabaikan. Di
Indonesia, temperatur optimum bagi proses enzimatis dilakukan pada temperatur
kamar. Hampir semua enzim memiliki aktivitas optimum pada temperatur sekitar
30oC dan denaturasi dimulai pada temperatur 45oC (Kurnia, 2010).
3. Reaksi enzimatis berlangsung pada pH netral
Pada umumnya enzim menunjukkan aktivitas maksimum pada suatu kisaran
pH yang disebut pH optimum, yang umumnya antara pH 4,5-8,0 (Winarno, 1986).
Enzim tertentu mempunyai kisaran pH optimum yang sangat sempit. Di sekitar pH
optimum enzim mempunyai stabilitas yang tinggi. Dalam hal ini, enzim yang sama
seringkali pH optimumnya berbeda tergantung dari sumber enzim tersebut (Kurnia,
2010).
4. Enzim bersifat khusus
Enzim mempunyai kekhususan aktivitas, yaitu peranannya sebagai katalis
hanya terhadap satu reaksi atau beberapa reaksi yang sejenis saja. Jadi dapat
melibatkan beberapa jenis substrat (Winarno, 1986). Sifat spesifik (spesifisitas
enzim) didefinisikan sebagai kemampuan suatu enzim untuk mendiskriminasikan
substratnya berdasarkan perbedaan afinitas substrat-substrat untuk mencapai sisi
aktif enzim. Sifat spesifinitas ini dapat dimanfaatkan untuk tujuan reaksi atau jenis

3
 produk yang diharapkan. Sifat ini sangat menguntungkan karena tidak akan
dijumpai reaksi-reaksi samping, sehingga lebih ramah lingkungan. (Kurnia, 2010)
II.3. Sifat-sifat Protein
Protein mempunyai struktur yang unik dan beraat moleku yang spesifikasi
meskipun demikian, protein suka dimurnikan karena protein terdapat dalam bentuk
lipida dan karbohidrat, juga bersama campuran dengan protein lain. Faktor tambahan
lain yang membuat protein sukar dimurnikan adlaah karena bentuknya yang mudah
sama sekali rusak ooleh panas, asam,basadan pelarut organik, bila suatu protein bentuk
alamiahnya sudah rusak, dikatakan bahwa protein yang terdenaturasi masih
mengandung urutan asam amino yang asli, tapi kehilangan struktur 3 dimensinya yang
unik, dimana kerap kali terletak aktivitas biologisnya, beberapa protein dapat
dikembalikan ke bentuk aslinya apabila lingkungan aslanya dikembalikan, namun tidak
smeua protein mempunyai sifat seperti ini (Fessenden, 1997 hal 610)
II. 4. Penggolongan Enzim
Berdasarkan tempat bekerjanya enzim dapat dibedakan dalam dua golongan
yaitu endoenzim (enzim intraseluler) dan eksoenzim (enzim ekstraseluler). Endoenzim
merupakan enzim yang dihasilkan didalam sel yaitu pada bagian membran sitoplasma
dan melakukan metabolisme didalam sel sedangkan eksoenzim merupakan enzim yang
dihasilkan sel kemudian dikeluarkan melalui dinding sel dan bereaksi memecah bahan
organik tanpa tergantung pada sel yang melepaskannya (Soedigdo,1988).
Berdasarkan jenis reaksi yang dikatalisis, enzim dapat diklasifikasikan sebagai
berikut:
Tabel 2.1. Klasifikasi Enzim Secara Internasional

No Nama Enzim Tipe Reaksi yang Dikatalisis Contoh

1 Oksidoreduktase Transfer electron Alcohol
dehidrogenase
2 Transferase Transfer gugus fungsi Heksokinase
3 Hidrolase Reaksi hidrolisis Tripsin
4 Liase Pemutusan ikatan C-C, C-O, C-N, Piruvat
membentuk ikatan rangkap dekarboksilase
5 Isomerase Pemindahan gugus di dalam Maleat
molekul, membentuk isomer isomerase
6 Ligase Pembentukan ikatan Piruvat
(sintetase) karboksilase

II.5. Metode Isolasi Enzim

Untuk mengisolasi enzim dari tanaman dilakukan 3 proses pemisahan :
a. Ekstraksi padat cair
Merupakan salah satu metode pemisahan cair–padatan. Pada proses ini,
komponen yang tidak larut dipisahkan dari bahan padatan dengan bantuan solvent.

4
 Ketika solvent dicampur dengan sampel, maka solvent akan melarutkan ekstrak
dengan difusi sampai terjadi keseimbangan konsentrasi.
b. Sentrifugasi
Merupakan cara memisahkan bagian seperti partikel dalam medan gaya
sentrifugal partikel yang berukuran berbeda dalam berbagai ukuran. Densitas dan
bentuk akan mengendap searah sentrifugal dengan kepentingan berbeda.
c. Presipitasi
Merupakan proses pemisahan partikel non enzim yang tercampur dengan enzim
dengan cara pengendapan. Partikel non enzim berasal dari penambahan buffer, air
atau cairan fisiologis pada proses pemecahan dinding sel, atau molekul-molekul
kompleks yang berikatan dengan enzim (Julianti, 2012). Presipitasi adalah metode
yang sudah digunakan untuk pemulihan protein dan sudah banyak dipakai dalam
skala kecil maupun besar. Presipitasi memiliki lima metode yang sudah
dikembangkan dalam skala besar yaitu:
1. Salting Out
Metode ini menggunakan penambahan garam ke larutan. Konsentrasi
garam mempengaruhi keseimbangan antara gaya elektrostatik untuk
menjaga protein dalam larutan dan gaya hidrofobik yang menyebabkan
protein menggumpal (K. Cliffe., 1988).
2. Presipitasi Pelarut Organik
Dalam proses ini, pelarut organic yang harus larut dalam air
ditambahkan kedalam larutan encer yang mengandung protein terlarut (K.
Cliffe, 1988).
3. Presipitasi Isoelektrik
Metode ini menggunakan sifat protein yang mereduksi kelarutan pada
titik isoelektrik yang sudah ditetapkan pH pada muatan bernilai nol (K.
Cliffe, 1988).
4. Presipitasi Polimer Non-ionik
Berat molekul yang tinggi seperti polyethylene glikol, polyvinyl,
alcohol, methyl sellulose, atau dextron saat ditambahkan larutan encer yang
mengandung protein, menghasilkan 2 lapisan (K. Cliffe, 1988).
5. Presipitasi Polyelectrolyte
Polielektrolit seperti asam poliaknilik, polisaccharida, dan
polyphosphate sudah digunakan untuk protein dalam skala kecil
pemurniannya tetapi belum sampai skala besar (K. Cliffe, 1988).

5
II. 6. Kandungan Dalam Serbuk Kayu
Serbuk gergajian kayu adalah salah satu jenis bahan limbah yang bersifat
organik yang merupakan limbah yang terdapat pada lingkungan industri penggergajian
kayu atau pengrajin furniture yang saat ini belum optimal pemanfaatannya.
Kayu merupakan hasil hutan dari sumber kekayaan alam, juga merupakan bahan
mentah yang mudah diproses untuk dijadikan barang sesuai dengan kemajuan
teknologi. Pengertian kayu di sini adalah suatu bahan yang diperoleh dari hasil
pemungutan pohon–pohon di hutan, yang merupakan bagian dari pohon tersebut, serta
diperhitungkan bagian mana yang lebih banyak dapat dimanfaatkan untuk sesuatu
tujuan penggunaan. Demikian halnya dengan serbuk kayu pengergajian merupakan
salah satu jenis partikel kayu yang berukuran 0,25 mm – 2,00 mm, bobotnya sangat
ringan dalam keadaan kering dan mudah diterbangkan oleh angin. (Dumanauw, J. F,
1990).
Kayu mengandung campuran sellulosa dan lignin, terdiri dari polimer yang
terbentuk dari hasil oksidasi koniferil alkohol(konifer) atau hasil dari oksidasi campran
konifer alkohol dan siringenin. Sellulosa daalah struktur poliskarida utama dalam
tanamanan.
Polimer sellulosa terdiri dari rantai glukosa tidak bercabang. Polimer adalah
campuran dari molekul bermacam-macam rumus berat. (Fessenden, 1997 hal 610)
II. 7. Kinetika Rekasi Kinematik
Konsentrasi substrat mempengaruhi kecepatan reaksi yang dikatalisis oleh
enzim. Pengaruh berbagai konsentrasi substrat terhadap kecepatan reaksi awal jika
enzim dijaga konstan dapat dilihat pada gambar berikut:

Gambar 2.1. Grafik Hubungan Konsentrasi Substrat Terhadap Kecepatan Reaksi

Enzimatis
Pada konsentrasi substrat yang amat rendah, kecepatan reaksi juga amat rendah,
tetapi kecepatan ini akan meningkat dengan meningkatnya konsentrasi substrat. Laju
reaksi enzimatis akan terus meningkat dengan nilai yang semakin kecil hingga tercapai
titik batas. Setelah melampaui titik ini, kecepatan reaksi hanya akan meningkat dalam
jumlah yang sangat kecil dengan bertambahnya konsentrasi substrat. Sebanyak apapun

6
 konsentrasi substrat yang ditambahkan, kecepatan reaksi tidak akan pernah mencapai
garis maksimum. Pada batas ini, yang disebut sebagai kecepatan maksimum (v max)
adalah ketika enzim menjadi jenuh dan tidak dapat berfungsi lebih cepat.
Michaelis-Menten mendefinisikan suatu tetapan yang dinyatakan sebagai km
(konsentrasi substrat tertentu pada saat enzim mencapai kecepatan maksimumnya).
Persamaan Michaelis-Menten secata matematika dapat dinyatakan dalam persamaan:
Vmax [S]
Vo =
Km + [S]
dengan:
Vo = kecepatan awal pada konsentrasi substrat [S]
Vmaks = kecepatan maksimum
Km = tetapan Michaelis-Menten enzim bagi substrat tertentu
Persamaan Michaelis-Menten dapat ditransformasikan secara aljabar menjadi
bentuk lain yang lebih umum digunakan untuk memetakan data percobaan, yaitu:

Gambar 2.2 Grafik Pemetaan Kebalikan Ganda (Lineweaver-Burk)

II.8. Kegunaan Enzim
Enzim paling banyak digunakan di industri makanan. Selain itu, enzim juga
digunakan untuk detergen, produk-produk obat farmasi, dan tekstil.
Tabel 2.2. Pemakaian Enzim dalam Industri
Industri Bidang Enzim Asal Penggunaan
α-amilase Jamur Pertumbuhan yeast (gula)
Roti
Reduksi protein untuk
Protease Jamur
biscuit
Makanan
α-amilase Gabah Pertumbuhan yeast (gula)
Bir
Protease Bakteri Degradasi protein (peptida)
β-glukonase Jamur Mengurangi viskositas
Tanama
Daging Papain Melunakkan
Makanan n
Glu-Iso Bakteri High Fructose Syrup
Pemanis
α-amilase Bakteri Sirup pati

7
 Sayuran Selulase Jamur Bau dan pelunak
Protease, α-
Detergen Biological Bakteri Menghilangkan sisa protein
amilase
Farmasi Diagnosa Lipase Mikroba Hidrolisa lemak
(Fowler, M.W., 1988)

II. 9. Faktor yang Mempengaruhi Aktivitas Enzim

Aktivitas enzim dipengaruhi beberapa faktor, antara lain:
a. Suhu
Kerja suatu enzim sangat dipengaruhi suhu lingkungannya. Setiap
kenaikan suhu 100 C, kecepatan enzim akan menjadi dua kali lipat, sampai
batas suhu tertentu. Enzim dan protein pada umumnya dinonaktifkan oleh
suhu tinggi. (Suhara, 2009)
b. Derajat Keasaman (pH)
Semua enzim peka terhadap perubahan pH, dan nonaktif pada
lingkungan pH sangat rendah (asam kuat) dan pH tinggi (basa kuat). (Suhara,
2009)
c. Konsentrasi Enzim, Substrat dan Kofaktor
Jika pH dan suhu suatu enzim adalah konstan, dan jumlah substrat
berlebihan, maka laju reaksi sebanding dengan jumlah enzim yang ada.
Sebaliknya jika pH, suhu dan konsentrasi enzim konstan, maka laju reaksi
sebanding dengan jumlah substrat. (Suhara, 2009)
d. Inhibitor
Aktivitas enzim dapat dihambat oleh suatu senyawa yang dikenal
dengan inhibitor. Inhibitor digolongkan menjadi dua jenis utama yaitu
inhibitor yang bekerja secara irreversible dan inhibitor yang bekerja secara
reversible. (Suhara, 2009)
II.10. Mekanisme Kerja Enzim
Enzim dapat mempercepat reaksi biologis, dari reaksi yang sederhana sampai
reaksi yang sangat rumit. Enzim bekerja dengan cara menempel pada permukaan
molekul zat-zat yang bereaksi sehingga mempercepat proses reaksi. Percepatan reaksi
terjadi karena enzim menurunkan energi pengaktifan yang dengan sendirinya akan
mempermudah terjadinya reaksi. Enzim mengikat molekul substrat membentuk
kompleks enzim substrat yang bersifat sementara dan lalu terurai membentuk enzim
bebas dan produknya (Lehninger,1995).
Mekanismenya adalah sebagai berikut :
a. Enzim menyesuaikan diri di sekitar substrat untuk membentuk suatu
kompleks enzim substrat.
b. Karena adanya gaya tarik antara enzim dan substrat, ikatan substrat
menjadi tegang. Ikatan tegang ini mempunyai energi tinggi dan lebih

8
 c. mudah terpatahkan, sehingga reaksi lebih mudah dan membentuk
kompleks enzim–produk.
d. Karena produk dan substrat tidak sama, maka kesesuaian antara produk
dan enzim tidak sempurna.
e. Bentuk produk menyebabkan kompleks berdisosiasi dan permukaan
enzim siap untuk menerima substrat lain. Teori aktivitas enzim ini
disebut teori kesesuaian terimbas (Inducedfit Theory).

II.10 Proses Deliginifikasi

Pada Tahapan awal yang dilakukan dalam produksi bioetanol adalah proses
delignifikasi. Delignifikasi merupakan suatu proses pembebasan lignin dari suatu
senyawa kompleks atau material berlignoselulosa sehingga hasil dari proses ini sudah
berupa selulosa dengan kemurnian yang cukup besar. Selulosa merupakan polisakarida
yang didalamnya mengandung zat - zat gula. Dalam pembuatan bioetanol yang
digunakan adalah selulosanya sehingga lignin dalam TKKS harus dihilangkan. Lignin
dapat membentuk ikatan kovalen dengan beberapa komponen hemiselulosa. Oleh
karena itu lignin sangat sulit untuk didegradasi. Sehingga keberadaannya memberikan
bentuk lignoselulosa yang kompleks dan menghambat degradasi selulosa oleh mikroba
ataupun bahan kimia lainnya.
Proses delignifikasi terdiri dari proses mekanis, semi kimia, kimia (alkali,
sulfat/kraft, sulfit) dan proses konvensional yang lebih berwawasan lingkungan. Pada
kenyataannya, proses delignifikasi secara konvensional tersebut memiliki beberapa
kelemahan, yaitu biaya produksi tinggi, laju delignifikasi rendah dan pencemaran
lingkungan karena adanya limbah larutan pemasak. Lignin umumnya tidak larut dalam
pelarut sederhana, namun lignin larut dalam alkali encer, larutan garam dan buffer.
Lignin larut dalam pelarut organik didasarkan pada perbedaan kelarutan komponen
kimia bahan baku, dimana lignin dan ekstraktif larut dalam pelarut organik,
karbohidrat dengan bobot molekul rendah dapat larut dalam air sedangkan selulosa
tidk larut dalam kedua larutan tersebut. Cairan ionik adalah garam yang berwujud cair
pada suhu kamar atau di bawah suhu kamar, terdiri dari kation organik dan anion
organik atau anorganik. Delignifikasi menggunakan cairan ionik choline chloride
(ChCl) disebabkan oleh interaksi pengikatan radikal bebas serat antara Cl- dengan grup
hidroksil pada lignin, sehingga ikatan lignin terputus dan menyebabkan kadar selulosa
meningkat.(Shinta,2016).

II.11 Metode yang Digunakan

Metode yang digunakan adalah solid state fermentation (SSF), metode ini
dilakukan dengan fermentasi menggunakan substrat yang tidak larut tetapi mengandung

9
 air yang cukup untuk pertumbuhan danperkembangan mikroorganisme yang
diinokulasikan ke dalam subtrat. Keberadaan air ini mempengerauhi pertumubuhan
Aspergillus Niger untuk menghasilkan enzim sellulosa. (Anggarwati,2012)

II.12 Analisa Aktivitas Enzim

Aktivitas enzim yang digunakan dalam V/mL. 1 unit adalah jumlah enzim yang
dibutuhkan untuk mengurai selullosa menjadi 1 mol gula tereduksi per menit. (Amriani,
2013)

10
 BAB III
METODE PERCOBAAN
III.1 Rancangan Praktikum
III1.1 Skema Rancangan Percobaan

Bahan baku Penghalusan Bahan Baku

substrat
Konsentrasi NaOH 0,2 M
untuk variabel 1,2,3;
0.8 M untuk variabel 4
Perendaman dalam larutan T = 90oC
NaOH t= 1 jam

T= 110oC
t = 1 malam Pengeringan

Glukosa 10 gr/L, NaCl 1 gr/L,

KH2PO4 2 gr/L, CaCl2 0,2
Pembuatan Starter
gr/L, MgSO4 1,7 gr/L
Fermentasi Aspergillus niger
t inkubasi = 1 malam
Rasio sampel-air 6% b/v
pH 7 untuk variabel 1; pH 4 Fermentasi Aerob
untuk variabel 2,34;
Larutan starter 20%V
t = 1 malam
t = 20 menit
Pemisahan dengan Sentrifugasi ω = 2500 rpm

Pemisahan dengan Filtrasi

Endapan dibuang
Perbandingan filtrat 7,5 ml Filtrat crude enzim
dan CMC 7,5 ml untuk
variabel 1,3,4 Pencampuran dengan CMC
Perbandingan filtrat 3,75 ml
dan CMC 11,25 ml untuk
variabel 2 Uji Kadar Glukosa
Sebelum Inkubasi
t = 10, 20, 30, 40 menit Inkubasi

Uji Kadar Glukosa

Sesudah Inkubasi

Gambar 3.3 Skema Rancangan Percobaan

III.1.2 Variabel Operasi

Variabel tetap
Volume starter = 20%V
Urea = 0,6 gram
Kecepatan sentrifugasi = 2500 rpm
Variabel bebas
Ph = 7 (variabel 1), 4 (variabel 2,3,4)
t uji kadar glukosa setelah inkubasi = 10, 20, 30, 40 menit

11
III.2 Bahan dan Alat yang Digunakan
III.2.1 Bahan yang Digunakan
1. Sekam padi
2. NaOH
3. Aspergillus niger
4. Glukosa
5. MgSO4
6. KH2PO4
7. CaCl2
8. NaCl
9. Urea
10. Aquadest
11. Induserenzim

III.2.1 Alat yang Digunakan

a. Beaker Glass h. Termometer

b. Centrifuge i. Gelas Ukur
c. Cuvet j. Pengaduk
d. Kertas Saring k. Stopwatch
e. Magnetic Stirer l. Timbangan
f. Tabung Reaksi m. Indikator pH
g. Erlenmeyer Penghisap n. Kompor Listrik

III.3 Gambar Alat Praktikum

a. Beaker Glass b. Centrifuge c. Cuvet

d. Kertas saring e. Magnetic Stirer f. Tabung reaksi

12
g. Erlenmeyer penghisap h. Termometer i. Gelas ukur

j. Pengaduk k. Stopwatch l. Timbangan

m. Indikator pH n. Kompor listrik

Gambar 3.4 Alat-alat yang dibutuhkan

III.4 Prosedur Praktikum

III.4.1 Persiapan Bahan Baku
a. Haluskan bahan sumber enzim yang diperoleh dengan mortar, setelah halus timbang 7
gram, masukkan dalam beaker glass
b. Bahan direndam kedalam larutan NaOH 0,2 M dan 0,8 M, kemudian dipanaskan pada
suhu 90C selama 1 jam
c. Setelah itu keringkan menggunakan oven pada suhu 110C dan didiamkan selama 1
malam.
III.4.2 Pembuatan Starter
a. Media inokulum dibuat dengan cara menyiapkan 200 ml larutan media dalam
erlenmeyer. Media terdiri dari 10 gr/L glukosa, 1 gr/L NaCl, 2 gr/L KH2PO4, 0,2 gr/L
CaCl2, 1,7 gr/L MgSO4 dan Aspergillus Niger ditambahkan kedalam campuran.
b. Starter diinkubasi menggunakan shaker pada temperaturnya ruangan selama 1
malam.
III.4.3 Fermentasi
a. Sampel dicampur menggunakan air dengan rasio sampel-air 6% b/v, 6% b/v, 6% b/v,
6% b/v kemudian diaduk.
b. Atur pH larutan yaitu 7 dan 4
c. Tambahkan kedalam larutan starter sebanyak 20 % v dan urea sebanyak 0,6 gr
d. Fermentasi dilakukan secara aerob selama 1 malam pada shaker.
III.4.4 Analisa Hasil

13
 a. Hasil dari fermentasi di sentrifugasi pada kecepatan 2500 rpm sealam 20 menit.
b. Kemudian disaring menggunakan pompa vakum dan diperoleh filtratnya (Crude
enzim).
c. Filtrat yang diperoleh sebaanyak 15 ml dicampur dengan CMC sebanyak 15 ml dan
15 ml filtrat dicampur dengan CMC 45 ml.
d. Kemudian campuran tersebut diinkubasi selama 1 malam
e. Sebelum dan setelah inkubasi lakukan uji kadar glukosa pada sampel
III.3.5 Uji Kadar Glukosa
a. Membuat larutan glukosa standar dengan melarutkan 2,5 gram glukosa dalam 1 liter
aquadest. Standardisasi glukosan standar dengan mencampur 5 ml glukosa standar
dengan 5 ml fehling A dan 5 ml fehling B. Campuran ini kemudian dipanaskan
sampai 70oC dan dititrasi dengan larutan glukosa standar sampai warna biru hampir
hilang. Kemudian ditambah 2 tetes MB (methylen blue) dan dilanjutkan titrasinya
sampai warna merah bata. Mencatat kebutuhan titran (F).
b. Kemudian sebanyak 5 ml sampel diambil, ditambahkan 5 ml fehling A, 5 ml fehling
B, dan 5 ml glukosa standar. Campuran ini kemudian dipanaskan sampai 70oC dan
dititrasi dengan larutan glukosa standar sampai warna biru hampir hilang. Kemudian
ditambah 2 tetes MB dan dilanjutkan titrasinya sampai warna merah bata. Mencatat
kebutuhan titran (M) dan kadar glukosa dihitung dengan persamaan berikut :

dimana:
C = Konsentrasi glukosa per mL ekstrak enzim
T = Waktu inkubasi (menit)
1 unit enzim = besarnya aktivitas enzim yang dibutuhkan untuk membebaskan 1 µmol
glukosa per menit per mL enzim

14
 DAFTAR PUSTAKA

Kurnia, DRD. 2010. Studi Aktivitas Enzim Lipase dari Aspergillus Niger sebagai Biokatalis
Pada Proses Gliserolisis untuk Menghasilkan Monoasilgliserol. Lehninger. 1995.
Dasar-dasar Biokimia. Jakarta:Erlangga.
Michael L Shuler dan Kargi Fikret. 1992. Bioprocess Engineering Basic Concepts. New
Jersey:Prentice Hall
Scragg, A.H,. 1988. Biotechnology for Engineers. New York: E. Horwood
Winarno, F. 1986. Enzim Pangan. Jakarta: Gramedia.

15